양성 전립선 비대증의 진행에 대한 Cistanches Salsa의 항증식 효과
Oct 18, 2022
BPH 유발 쥐의 염증에 대한 CSE의 효과
산화질소와 COX 활성은 염증과 전립선 성장 사이의 연관성을 결정하는 데 중요한 역할을 할 수 있습니다(Sciarra et al.2008). 전립선 염증 세포에서 iNOS는 세포를 손상시킬 수 있는 반응성 질소 종을 활성화하는 주요 요인입니다. 산화질소는 또한 두 번째 요인인 COX 활성을 향상시킵니다. COX{1}} 활성은 인간 전립선 조직의 상피 및 간질 공간의 모든 염증 세포에서 검출되었으며 증식성 염증 병변에서 증가하여 전-염증성 프로스타글란딘을 생성합니다. CSE가 염증에 미치는 영향을 조사하기 위해 BPH로 유도된 쥐의 전립선 조직에서 iNOS와 COX{3}}의 단백질 발현을 조사했습니다. 그림 4와 같이 Western blot 분석 결과 대조군에 비해 BPH 유도군에서 iNOS 및 COX{6}} 단백질 발현이 증가하는 것으로 나타났다. 그러나 BPH로 유도된 그룹과 비교하여 finasteride 및 CSE 처리 그룹은 iNOS 및 COX{11}} 단백질 발현이 감소하여 BPH에서 항염증 효과를 나타냅니다.
그림 3. 시스탄체 살사 추출물(CSE) 투여가 전립선 세포 증식에 미치는 영향. 양성 전립선 비대증(BPH) 유발 쥐 모델(A) 및 전립선 상피 조직(TETP)(B)에서 전립선 조직의 헤마톡실린 및 에오신 염색; 원래 배율은 각각 40x(스케일 바∶200μm) 및 400x(스케일 바∶20μm)입니다. (C) 증식 세포 핵 항원(PCNA) 단백질 발현 수준은 특정 항체를 사용한 웨스턴 블롯팅에 의해 결정되었습니다. -액틴은 내부 대조군으로 사용되었습니다. Bio-rad Quantity One@ Software를 사용하여 밀도계 분석을 수행했습니다. 표시된 데이터는 그룹당 6마리 래트의 평균±SEM을 나타냅니다. ""피<0.01,><0.001 vs.con=""><><><0.001 vs.bph="">
BPH 유발 쥐에서 세포자멸사에 대한 CSE의 효과
Apoptosis는 유기체 성장의 정상적이고 통제된 부분으로 발생하는 세포 사멸을 나타냅니다. 세포 사멸의 교란은 BPH를 포함한 많은 인간 질병 및 상태와 관련이 있습니다(Sciarra et al.2007). 카스파제라고도 하는 아스파르테이트 특이적 시스테인 프로테아제의 활성화는 세포자멸사에서 중요한 생화학적 사건입니다(Fadeel and Orrenius 2005). 그림 5A에서 볼 수 있듯이 CSE 처리군은 프로카스파제의 단백질 발현이 감소했습니다{5}} 및 PARP-1(카스파아제-3의 내인성 기질)가 BPH 유도 그룹과 비교됩니다.
세포 사멸 사건은 Bcl{0}} 단백질 계열의 구성원에 의해 엄격하게 규제됩니다(Cory and Adams 2002). CSE가 BPH로 유도된 동물의 전립선 조직에서 Bcl{2}} 단백질과 Bax의 발현을 변화시켜 세포자멸사를 유도하는지 여부를 확인하기 위해 이들 단백질의 수준을 웨스턴 블롯 분석으로 조사하였다. 도 5B에 나타난 바와 같이 CSE 처리군은 BPH 유도군에 비해 항세포사멸 단백질 Bcl{7}} 및 Bcl-xL의 단백질 발현은 감소하였으나 pro-apoptotic 단백질 Bax의 발현은 증가하였다. . 따라서 Bcl{11}} 대 Bax의 비율은 CSE 처리 후 유의하게 감소하여 BPH 동안 CSE 유도 세포자멸사에서 단백질의 Bcl{12}} 계열이 관여함을 시사합니다(그림 5C).
이러한 발견은 CSE-유도된 세포자멸사가 BPH에 대한 이 화합물의 효과에서 역할을 하고 이러한 효과가 항- 및 전-세포자멸사 단백질 발현의 조절에 의해 매개됨을 시사하였다.
논의
BPH는 발달 기간과 진행이 긴 만성 질환입니다. BPH는 단순 소결절 증식증에서 거시적 부피 확대로 발전하여 임상 문제가 됩니다(Sciarra et al. 2007). BPH의 발병기전은 아직 많이 알려져 있지 않지만 높은 안드로겐 수치와 노화는 BPH의 발병과 관련된 것으로 추정되는 두 가지 결정적인 위험 요소로 간주됩니다(Botto et al.2005; Gann et al. 1995; Meigs et al.2001). . 여러 연구에서 테스토스테론과 DHT가 BPH에서 중요한 역할을 한다고 제안했습니다(Carson and Rittmaster 2003; Gittelman et al. 2006). 테스토스테론이 5α-리덕타제 유형 1 및 유형 2에 의해 DHT로 전환되고 DHT가 5a-리덕타제 유형 2(Bartsch et al. 2002a; Isaacs and Coffey 1989). 또한, 현재 연구의 대부분은 5a-리덕타제 유형 2가 전립선 조직에서 우세한 동종효소이며 순환 DHT의 2/3를 담당한다고 보고했습니다(Bartsch et al. al.2002b, Silver et al.1994a). 그러나 BPH의 발달에서 5o-리덕타아제 유형 1과 유형 2의 역할은 여전히 논란의 여지가 있습니다(Berman and Russell 1993; Bonnet et al. 1993; Shirakawa et al.2004; Silver et al.1994b; Thigpen et al.1993). ), 이 문제를 해결하기 위해서는 다양한 동물 모델에서 더 많은 생물학적 및 약리학적 연구가 필요합니다. 본 연구에서 CSE 처리는 BPH 유도군에 비해 5a-reductase type 1 및 type 2의 mRNA 발현을 억제하였다. 이러한 데이터는 CSE가 5a-리덕타제 유형 1 및 유형 2에 경쟁적으로 결합하고 테스토스테론이 DHT로 대사되는 것을 방지함을 시사합니다.
그림 4. Cistanche 살사 추출물(CSE) 투여가 양성 전립선 비대증(BPH) 유발 쥐 모델의 전립선 조직에서 유도성 산화질소 합성효소(iNOS) 및 사이클로옥시게나제(COX){1}} 발현에 미치는 영향. iNOS 및 COX{3}} 단백질의 발현 수준은 특정 항체를 사용하여 웨스턴 블롯팅으로 결정하였다. -액틴은 내부 대조군으로 사용되었습니다. Bio-rad Quantity One@ Software를 사용하여 밀도계 분석을 수행했습니다. 표시된 데이터는 그룹당 6마리 래트의 평균 ± SlEM을 나타냅니다.""p<0.01 vs.con=""><><0.01 vs.="" bph="">
BPH는 통제되지 않은 조직 성장을 동반하며, 이 과정에서 전립선 세포 주변의 염증성 미세 환경은 NO 합성 및 COX{0}} 활성의 결과입니다(Nelson et al. 2003). 전립선에 도달하는 모든 염증 세포에서, iNOS가 존재하며 세포를 손상시킬 수 있는 반응성 질소를 활성화할 수 있습니다(Baltaci et al.2001). 전립선 상피의 염증 세포는 이 효소를 발현합니다. NO는 또한 두 번째 염증 매개체인 COX-2 활성을 향상시킵니다. COX-2는 상피 및 간질의 모든 염증 세포에서 검출되었습니다.
공간, 증식성 염증성 병변에서 증가하여 전-염증성 프로스타글란딘을 생성합니다(Sciarra et al. 2008). 이러한 보고 때문에 우리는 또한 iNOS 및 COX{2}}의 발현이 증가했는지 여부와 CSE가 BPH의 쥐 모델에서 이들 단백질의 발현을 약화시키는지 여부를 조사했습니다. 본 연구에서 CSE는 iNOS 및 COX{3}}의 발현을 현저하게 억제하였으며, 이러한 데이터는 CSE가 염증 관련 단백질 발현의 조절을 통해 BPH의 약리학적 치료를 위한 강력한 약제가 될 수 있음을 시사한다.
그림 5. Cistanche salsa extract(CSE) 투여가 양성 전립선 비대증(BPH) 유발 쥐 모델의 전립선 조직에서 세포자멸사 관련 단백질 발현에 미치는 영향.(A) PARP-1 및 procaspase{{4 }} 단백질은 특이적 항체를 이용한 웨스턴 블로팅으로 측정하였다.(B) Bcl{5}} 계열 단백질의 발현 수준은 특이적 항체를 이용한 웨스턴 블로팅으로 측정하였다. -액틴은 내부 대조군으로 사용되었습니다. (C) Bax 및 Bcl{7}} 밴드의 밀도계 분석을 수행하고 데이터(-actin으로 정규화된 상대 밀도)를 Bcl-2/Bax 비율로 표시했습니다. Bio-rad Quantity One@ Software를 사용하여 밀도계 분석을 수행했습니다. 표시된 데이터는 그룹당 6마리 쥐의 평균 ± SEM을 나타냅니다." p.<><><0.001 vs.con="" group;=""><><0.001vs.bph>
BPH에서 COX{0}}를 발현하는 전립선 세포는 더 높은 증식률을 가지며 항세포자멸 유전자 Bcl{2}}이 상향조절되어(Wang et al.2004) 염증, 세포자멸사 및 전립선 성장 사이의 상관관계를 제공합니다. 불균형. Bcl-2 계열 단백질은 세포자멸사 반응의 핵심 매개체입니다. Bcl{5}} 계열의 구성원인 Bax 단백질은 동종이량체를 형성하고 스트레스에 대한 반응으로 미토콘드리아에서 시토크롬 c를 방출함으로써 세포자멸사를 촉진합니다(Walensky 2006). 많은 시스템에서 Bcl{{7} } 가족은 세포자멸사에 대한 세포 감수성의 지표 역할을 하는 Bcl-2/Bax 비율을 사용하여 세포자살을 조절합니다(Salakou et al. 2007). 이 연구에서 우리는 CSE가 항세포자멸사 Bcl의 수준을 현저히 감소시키는 것으로 나타났습니다 -2 랫트 BPH 모델에서 단백질 발현 및 증가된 Bax 단백질 발현 수준. 이러한 데이터는 BPH가 CSE 처리군에서 Bax에 대한 Bcl{13}}의 비율 감소를 포함하는 항세포사멸 기전에 의해 억제되었음을 나타내며, CSE가 미토콘드리아 경로를 통해 세포사멸을 유도했을 가능성이 가장 높음을 시사합니다.
본 연구에서 CSE 처리는 BPH로 유도된 그룹에서 caspase{0}}의 활성화와 기질인 PARP{1}}의 단백질 발현을 감소시켰습니다. 카스파제는 특정 아스파르테이트 잔기에서 표적 단백질을 절단하는 시스테인 프로테아제 계열이며, 이들이 세포자멸사 경로의 핵심 구성요소를 구성한다는 것은 잘 알려져 있습니다. 세포 사멸의 두 가지 뚜렷한 경로가 확인되었습니다. 즉, caspase를 통해 발생하는 mitochondria-initiated apoptosis{5}}와 caspase를 필요로 하는 죽음 수용체 매개 경로입니다-8(Mao et al. 2010). 카스파제{10}}는 카스파제 의존성 세포 사멸 경로의 핵심 효과기 분자로, 이 분자는 많은 세포 단백질을 절단하여 사멸적 변화를 일으킵니다. 따라서 카스파제의 효소 활성 활성화는{12}} 세포자멸사 프로그램을 시작하는 메커니즘을 제공할 수 있습니다(Potokar et al.2003). 이전에 o-아드레날린 수용체 길항제에 대한 새로운 작용 기전에 대한 연구는 Kyprianou et al.에 의해 개척되었습니다. (1998), doxazosin의 pro-apoptotic 효과를 최초로 보고한 사람입니다. 이 연구는 doxazosin 치료가 간질 세포의 세포 사멸 활성을 유의하게 증가 시켰음을 보여주었습니다. 같은 그룹은 세포 사멸에 대한 o-아드레날린 수용체 길항제(terazosin 및 doxazosin)의 효과가 TGF- 및 caspase 3의 증가된 발현에 의해 매개된다고 보고했습니다(Glassman et al.2001). 이 데이터는 Ilio et al.에 의해 재확인되었습니다. (2001) 전립선 암 세포에서도 사실로 나타났습니다(Benning and Kyprianou 2002). 또한 전립선 기질 및 상피 세포에서 테스토스테론을 디하이드로테스토스테론으로 전환시키는 5o-환원효소 억제제인 피나스테리드(finasteride)는 Bcl{25}} 및 Bcl-xL의 발현을 하향 조절하여 전립선 세포가 세포자멸사에 더 취약하게 만듭니다(Huynh 2002). 유사하게, Bcl{28}}과 Bcl-xL을 함께 결합하여 궁극적으로 pro-apoptotic 효과를 일으키는 Bad 단백질의 상향 조절이 발견되었습니다. 또 다른 연구에서는 피나스테리드에 의한 세포 사멸이 caspase의 활성화에 의해 매개되어 그 작용의 미세한 분자 메커니즘에 대한 추가 증거를 제공한다고 보고했습니다(Bozec et al. 2005). 이러한 연구와 마찬가지로 우리의 데이터는 CSE의 항증식 효과가 혈청 DHT 생성 억제뿐만 아니라 BPH로 유도된 쥐의 전립선 조직에서 염증성 미세환경 조절을 포함한 세포자멸사 유도와 관련이 있을 수 있음을 시사합니다.
현재 연구에 따르면 CSE는 BPH로 유도된 쥐에서 전립선 무게와 혈청 DHT 생성을 감소시키는 능력이 있습니다. CSE의 이러한 효과는 저하된 Bcl-2/Bax 비율과 caspase-3의 활성화로 인한 것일 수 있으며, 이는 iNOS 및 COX{3}} 발현의 하향 조절을 통해 세포자멸사를 유도합니다. 이 연구의 결과는 CSE가 BPH 치료를 위한 잠재적인 치료제가 될 수 있음을 시사합니다.
