열처리 감초(Wongam, Glycyrrhiza Glabra × G. Uralensis) 추출물의 항산화 및 항멜라닌 활성
Mar 26, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
강민혜1,2,장귀영1,지윤정1,이정훈1,최수지1,현태경2,*및김형돈1,*
추상적인:멜라닌은 자외선과 활성산소종(ROS)으로부터 피부를 보호하는 갈색 또는 검은색 색소입니다. 그러나 멜라닌의 과잉 생산은 흑색점, 기미, 주근깨 및 피부암과 관련이 있습니다.감초보여 주었다항산화제, 항종양, 항혈소판, 항염, 면역조절 작용을 하며 피부의 천연 치료제로 사용됩니다.희게 함.농촌진흥청(RDA)에서 개발한 감초 신품종인 원암의 잠재성을 확인하고자 하였다.희게 함화장품 에이전트. 또한 열처리가 감초의 생리활성에 미치는 영향을 비교하여 확인하였다.항산화제그리고항멜라닌 생성가열 전후(130℃) 감초 추출물의 활성. 열처리된 감초 추출물(WH-130)은 ABTS + (2,20-azino-bis-(3-에틸 벤조티아졸린-6-sulfonic 산) 디암모늄 염) 및 DPPH(2,{11}}디페닐{12}}피크릴히드라질) 분석 또한 WH{13}}는 가열하지 않은 것보다 B16F10 흑색종 세포에서 티로시나아제의 하향 조절로 인해 멜라닌 생성을 더 효과적으로 억제했습니다.감초발췌. 또한 열처리는 총 페놀 함량을 증가시켰습니다. 특히, isoliquiritigenin,항산화제그리고항멜라닌 생성감초 화합물은 열처리에 의해 생산되었습니다. 결론적으로 WH{0}}는 이소리퀴리티게닌과 같은 생리활성 페놀계 수치가 증가하여 새로운 피부로 발전할 가능성이 있습니다.희게 함화장품에 응용되는 재료.
키워드: 항멜라닌 생성활동; 열처리;감초; 쥐 흑색종 세포(B16F10)
1. 소개
감초(Glycyrrhiza 종)은 콩과에 약용으로 사용되는 다년생 허브로 중앙 아시아, 중국, 러시아, 만주, 몽골 및 유럽 전역에 널리 분포합니다[1]. 오랫동안 향미 및 감미료로 사용되었습니다. 감초의 생물학적 활성으로 인해 감기, 기침, 천식, 피로 및 호흡기 감염의 치료에 감초의 말린 뿌리와 자루가 사용되었습니다.항산화제,항미생물, 항종양, 항혈소판, 항염 및 면역조절 활성 [2,3]. Glycyrrhiza 속은 G. uralensisFisch, G. glabra L. 및 G. inflata Batal을 포함하여 약 22종의 감초로 구성됩니다.
감초의 새로운 종간 잡종 품종인 Wongam은 농촌진흥청에 의해 Glycyrrhiza glabra x G. uralensis(G. korshinskiGrig)의 잡종으로 개발되었습니다. 원암은 G. uralensis보다 수확량이 많고 내병성이 우수하다. G. uralensis의 생물학적 활성에 대한 많은 연구가 진행되고 있는 반면, 새로운 품종인 원암에 대한 기존 연구는 항알레르기, 면역조절 및 항궤양 활성에 국한되어 있다[1,2]. 따라서 원암의 광범위한 생리활성을 조사할 필요가 있다.
의 주요 생리 활성 성분감초뿌리는 liquiritin, liquiritigenin, isoliquiritigenin(ISL) 및 glycyrrhizin(또는 glycyrrhizicacid)을 포함한 플라보노이드 및 트리테르펜 사포닌입니다[4,5]. ISL은 감초에서 발견되는 플라보노이드로 항혈소판, 항알레르기, 항종양, 항염 및항산화제활동 [6–8]. ISL은 감초 뿌리에 있는 isoliquiritin의 가수분해 산물입니다. 그것은 세포 외 신호 조절 단백질 키나아제(ERK) 신호 전달 경로의 활성화에 의해 소안구 관련 전사 인자(MITF)의 분해를 통해 멜라닌 생성을 억제할 수 있습니다. 결과적으로, MITF 분해는 SK-MEL-2 세포에서 티로시나제(TYR) 및 티로시나제 관련 단백질(TRP-1 및 TRP-2) 유전자의 발현을 억제하였다[9,10].ISL 버섯 TYR의 모노 및 디페놀라제 활성과 멜라닌 세포의 멜라닌 생성을 억제할 수 있습니다[11].
피부색을 결정하는 주요 색소인 멜라닌은 표피 멜라닌 세포에서 합성되어 멜라노솜이라는 세포 내 소기관에 저장됩니다[12]. 멜라닌 색소는 갈색 또는 검은색 유멜라닌과 빨간색 또는 노란색 페오멜라닌의 두 가지 유형으로 구성됩니다. 멜라닌 생성은 자외선(UV) 방사선, 반응성 산소종(ROS) 및 멜라닌 세포 자극 호르몬(-MSH) 및 이소부틸메틸크산틴(IBMX)과 같은 화학 물질을 포함한 외부 자극에 의해 유도될 수 있으며, 이는 cAMP(환상 아데노신 일인산) 수준을 높입니다. 멜라닌은 이러한 자극으로부터 피부를 보호하는 반면 과잉 생산은 피부과색소침착을 유발하여 피부암과 같은 질병을 유발할 수 있습니다[13-17]. 피부희게 함TYR 억제제인 코직산(kojic acid), 하이드로퀴논(hydroquinone), 알부틴(arbutin), 아스코르브산(ascorbic acid)과 같은 제제는 여러 화장품의 과색소침착 치료에 사용되어 왔다[13,18]. 멜라닌 생성은 다양한 신호 경로를 통해 조절되며 이러한 신호는 MITF의 상향 조절과 연결됩니다. MITF의 활성화는 TYR 및 TRP(TRP-1, TRP-2)의 발현을 촉진합니다. 그런 다음, TYR은 L-티로신을 3,{6}}디히드록시-L-페닐알라닌(L-DOPA)으로 산화시키는 것을 촉매하고, 이는 후속적으로 DOPA퀴논으로 산화됩니다. TRP는 도파크롬을 5{12}디하이드록시인돌{13}카르복실산(DHICA) 또는 5{15}디하이드록시인돌(DHI)로 전환합니다. 마지막으로 DHICA와 DHI는 TRP{16}}에 의해 산화되어 멜라닌 생성을 유발합니다[19].
열 공정은 식물 추출물의 물리화학적 및 생물학적 특성에 영향을 미칩니다. 그들은 세포벽을 파괴하고 공유 결합을 절단하여 생물 활성 화합물을 방출합니다[20,21]. 양조업자의 소비 곡물 추출물을 130 ◦ 이상 열처리하면 총 페놀 함량(TPC) 및 총 플라보노이드 함량(TFC) 수준이 증가하고 이에 따라 항산화 활성도 증가합니다[16,20,21]. 감귤류 껍질을 가열하면 페놀 화합물이 방출되고항산화제활동 [17].
우리의 주요 목표는 천연 피부로서의 원암의 가능성을 확인하는 것입니다.희게 함화장품의 재료. 또한, 본 연구는 열처리가 항산화 및 항멜라닌 활성을 향상시킬 수 있는지 여부를 입증하는 것이기도 합니다.감초. 우리는 조사했다항산화제활성, 원암 추출물의 TPC와 함께.항멜라닌 생성원암 추출물의 효과는 TYR 억제 활성과 멜라닌 함량 흑색종 세포에 의해 검증되었습니다.
시탕슈는 천연피부희게 함 목초
2. 재료 및 방법
2.1. 샘플 준비
샘플은 이전에 보고된 방법에 따라 준비되었습니다[22].감초(Wongam, Glycyrrhiza glabra x G. uralensis, NIHHS, RDA의 이윤지 식별 및 한국 한약 자원 식물 표본관에 상품권 번호 MPS006326 등록)는 본초 작물 연구과(한국 충청북도 음성, 한국)에서 재배 및 수확되었습니다. ) 2018년, 60℃에서 20시간 건조. 10kg감초씻고 1kg을 빻았습니다. 이들을 혼합한 후, 각각 WC 또는 WH의 3개의 샘플을 얻었다. 가루로 만든 감초(5g)를 증류수 1mL가 담긴 유리 용기에 넣고 오토클레이브(Jisico, Seoul, Korea)에서 130℃(WH-130)에서 1시간 동안 처리하였다. 미처리 대조군 감초(WC) , 5g) 및 WH-130를 실온(RT)에서 24시간 동안 70% 에탄올(샘플: 용매, 1:50, v:v)을 사용하여 별도로 추출했습니다. 여과 후 추출물을 진공 증발시키고 동결 건조하여 -80℃에서 보관하였다. 모든 추출물은 디메틸 설폭사이드(DMSO)(Sigma, St. Louis, MO, USA) 및 메탄올(Sigma, St. Louis, MO, USA)에 용해시켰다.
2.2. 브라우닝의 결정
갈변 지수감초추출물(WC 및 WH{0}})은 마이크로플레이트 리더(BioTek, Winooski, VT, USA)를 사용하여 측정한 420nm(A420)에서의 흡광도 값을 기반으로 기록되었습니다. 420 nm에서 더 높은 흡광도 값은 더 높은 갈변 지수에 해당합니다[23,24].
2.3. 총 페놀 함량(TPC)
이전에 보고된 방법[25]에 따르면, TPC는 Folin-Ciocalteu 시약이 알칼리 조건과 페놀 화합물의 농도에 따라 아인텅스텐-인몰리브덴 착물로 구성된 청색 발색단으로 환원된다는 원리에 따라 측정되었다. 각 샘플(10μL)을 2% 탄산나트륨(200μL)과 혼합한 다음 Folin-Ciocalteu 시약(10μL)과 혼합했습니다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 활성화시켰다. 그런 다음 마이크로플레이트 리더(BioTek, Winooski, VT, USA)를 사용하여 750 nm에서 흡광도를 측정하였다. TPC는 갈산의 표준곡선으로부터 계산되었고 그 결과는 갈산 당량값, mg GAE g-1추출물로 표현되었다.
2.4. 항산화 능력 측정
라디칼 소거 활성은 2,20-azino-bis-(3-ethylbenzothiazolin 6-sulfonic acid) diammonium salt(ABTS)를 사용하여 이전에 기술된 방법에 따라 약간 변형하여 측정하였다[19, 26]. ABTS 라디칼 양이온 용액은 2.6mM 포타슘 퍼설페이트와 7.4mM ABTS를 혼합하여 실온에서 24시간 동안 반응시켜 제조하였다. 그런 다음 ABTS 용액을 증류수로 희석하여 흡광도를 1.{15}}–1.500 범위로 조정했습니다. 다음으로, 20 μL의 샘플을 180 μL의 ABTS plus 용액과 반응시켜 빛을 차단하고 샘플과 용액의 혼합물을 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 흡광도는 735 nm에서 마이크로플레이트 판독기(BioTek, Winooski, VT, USA)를 사용하여 측정되었습니다. Trolox 표준 곡선에서 Trolox 등가물항산화제용량(TEAC)을 계산하고 건조 샘플 g당 트롤록스 당량(TE) mg으로 표시했습니다.
2,2-디페닐-1-피크릴히드라질(DPPH) 라디칼 용액은0.2mM DPPH를 99% 에탄올에 용해시켜 제조했습니다. DPPH 용액은 520 nm에서 1000-1500의 흡광도까지 증류수로 희석되었습니다. 그런 다음 50 μL의 샘플을 200 μL의 DPPH 용액과 혼합하고 실온에서 30분 동안 반응시켰다. 반응 후, 혼합물의 흡광도는 520 nm에서 측정되었다. Trolox 표준 곡선에서 TEAC를 계산하고 건조 샘플 g당 mg TE로 표시했습니다.
2.5. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석
수정된 HPLC 방법이 적용되었습니다[22]. ISL 내용감초추출물은 UV-visible 검출기로 HPLC로 분석되었습니다(HPLC: 1200 시리즈, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA; 컬럼: SynergiTM, 25{11}} × 4.6 mm, 4 µm, Fusion-RP 8{{40}} Å, Phenomenex, Torrance, CA, USA). 이동상은 용매 A(0.1% 포름산 수용액) 및 용매 B(0.1% 포름산 in acetonitrile)로 구성되었습니다. 이동상에 대한 기울기 프로그램은 0-8분(20-20% B), 8-30분(20-38% B), 30-42분(38-50% B), 42~47분(50~90% B), 47~53분(90~90% B), 53~54분(90~20% B) 및 54~60분(20~20% B) . 유속, 검출 파장 및 주입 부피는 각각 1.0mL/min, 360nm 및 10μL로 설정되었습니다. ISL 표준 용액은 4가지 농도(0.05, 0.1, 0.2, 0.4 mg/mL)로 분석되었습니다. 보정 곡선(y=ax plus b)을 사용하여 ISL의 내용을 결정했습니다. 회귀 방정식에서 x는 ISL의 농도(mg mL-1)를 나타내고 y는 피크 면적을 의미합니다.
2.6. 버섯 티로시나제 억제 활성 분석
TYR 억제 활성 분석은 TYR 억제제 스크리닝 키트(BioVision, Milpitas, CA, USA)를 사용하여 수행하였다. 각 추출물(WC 및 WH{0}})을 DMSO에 최종 농도 250μg/mL로 용해했습니다. 양성 대조군으로 사용된 코직산도 DMSO에서 250㎍/mL로 희석하였다. 간단히 말해서, 20 μL의 추출물 또는 코직산을 50 μL의 TYR 효소 용액과 결합했습니다. 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후, 30 μL의 TYR 기질 용액을 각 웰에 첨가했습니다. 추출물과 코직산의 최종 농도는 50 µg/mL였다. 그런 다음 웰의 광학 밀도를 마이크로플레이트 판독기(BioTek, Winooski, VT, USA)를 사용하여 1시간 동안 운동 모드에서 510 nm에서 측정했습니다.
cistanche 분말: 항산화
2.7. 세포 배양
쥐 흑색종 B16F10 세포는 American Type Culture Collection(ATCC, Manassas, VA, USA)에서 얻었다. B16F10 세포는 10% 소태아혈청(FBS), 100unit/mL의 페니실린 및 100μg/mL의 스트렙토마이신(Gibco, Grand Island, NY, USA)이 보충된 Dulbecco의 변형된 Eagle 배지(DMEM)에서 5를 함유하는 가습 분위기에서 배양되었습니다. 37 ºC에서 CO2 백분율
2.8. 세포 생존력 분석
의 세포독성감초B16F10 세포에 대한 추출물(WC 및 WH{0}})은 MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,{{8 }}diphenyltetrazolium bromide] assay.B16F10 세포를 24시간 동안 {{13}웰 플레이트에서 4 × 103cells/well로 배양했습니다. 그 후, 추출물을 50, 100 및 200 μg/mL 농도로 세포에 첨가하고 37℃에서 48시간 동안 배양하였다. 그런 다음, MTT 용액을 각 웰(500 µg/mL)에 첨가하고 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 각 웰의 배지를 버리고 100 μL의 DMSO를 첨가했습니다. 30분 동안 흔든 후 마이크로플레이트 리더를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 모든 테스트는 삼중으로 수행되었습니다.
2.9. 세포 멜라닌 함량 측정
세포 내 멜라닌 함량은 이전에 설명된 방법의 약간 수정된 버전을 사용하여 측정되었습니다[27]. B16F10 흑색종 세포를 8 × 104cells/well의 밀도로 6-웰 플레이트에 파종하고 24시간 동안 배양했습니다. 세포를 48시간 동안 추출물(WC 및 WH-130, 100 µg/mL), 코직산(100 µg/mL) 또는 ISL(10 µM, Millipore Sigma, Burlington, MA, United States)에 노출시켰습니다. 100 µM 3-이소부틸{14}}메틸크산틴(IBMX)의 존재 처리 후, 세포를 Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS)로 세척하고 90℃에서 2시간 동안 1N NaOH 200μL에 용해시켰다. 405 nm에서의 흡광도는 마이크로플레이트 리더를 사용하여 측정하였다.
2.10. 세포성 티로시나제 활성 분석
세포내 TYR 활성은 이전에 기술된 방법의 약간 수정된 버전을 사용하여 측정되었습니다[27]. B16F10 흑색종 세포(8×104cells/well)를 100μM IBMX의 존재 하에 추출물(100μg/mL) 또는 코직산(100μg/mL)으로 48시간 동안 처리하고, 수집하고 DPBS로 세척하였다. 단백질 샘플을 인산나트륨 완충액(pH 6.8)을 사용하여 1% TrionX{10}}(MilliporeSigma, Burlington, MA, USA)에 용해한 다음 10분 동안 15,{14} rpm에서 원심분리했습니다. 상등액 분획을 수집하고 단백질 농도는 bicinchoninic acid(BCA) assay kit(Waltham, MA, USA)를 사용하여 결정하였다. 30µg의 단백질(1% Trion X-100로 100µL로 조정)과 100µL의 10mM L-DOPA로 구성된 반응 혼합물을 96-웰플레이트의 각 웰에 첨가했습니다. 37℃에서 1시간 동안 배양한 후 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 490nm에서 흡광도를 측정하여 도파크롬을 모니터링했습니다. TYR 활성은 다음 공식으로 계산되었습니다.
티로시나제 활성(%) =(샘플의 OD405/대조군의 OD405) × 100
2.11. 실시간 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)
MITF, TYR, TRP-1 및 TRP-2를 포함한 멜라닌 생성 관련 유전자의 mRNA 발현 수준은 변형된 RT-PCR 분석을 사용하여 결정되었습니다[28]. 간단히 말해서, B16F10세포를 웰당 8 × 104세포의 밀도로 6-웰 플레이트에 파종하고 24시간 동안 배양했습니다. 그런 다음 세포를 추출물(100μg/mL), 코직산(100μg/mL) 또는 ISL(10μM)로 48시간 동안 처리했습니다. TRIzol 시약(Ambion, Austin, TX, USA)을 사용하여 세포로부터 총 RNA를 분리한 후 마이크로플레이트리더를 사용하여 RNA의 농도를 정량하였다. Reverse Transcriptase Premix Kit(ElpisBiotech, Daejeon, Korea)를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 cDNA(2 µg)를 준비한 후 MITF, TYR, TRP{17}}, TRP{18}}를 사용하여 real-time PCR을 수행했습니다. 및 CFX96 실시간 PCRinstrument(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)에서 SYBR Green 키트(ProGEN, Heidelberg, Germany)가 있는 -액틴 프라이머(표 1, Bioneer, 대전, 한국). 모든 데이터는 참조 하우스키핑 유전자로서 -actinmRNA의 수준으로 정규화되었습니다.
2.12. 세포 용해물의 준비 및 웨스턴 블롯 분석
B16F10 세포를 6-웰 플레이트에 웰당 8 × 104세포의 밀도로 시딩하고 24시간 동안 배양한 다음 추출물(100µg/mL), 코직산(100µg/mL)에 노출시켰습니다. ) 또는 ISL(10 μM)에서 48시간 동안 DPBS로 세척한 후 세포를 수확하고 1% 프로테아제와 포스파타제 억제제 칵테일을 포함하는 Triton X{10}완충액(MilliporeSigma, Burlington, MA, USA)에서 용해했습니다. 전체 세포 용해물의 단백질 농도는 aBCA 분석 키트(Waltham, MA, USA)를 사용하여 측정되었습니다. 동일한 양의 단백질(20μg)을 10% 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔에 로딩하고, 이를 70V에서 4시간 동안 실행했습니다. 그런 다음, 단백질을 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF) 막으로 옮겼습니다. 막을 0.1% Tween 20(TBST)을 포함하는 Tris 완충 식염수[50mM Tris-HCl(pH 7.5), 150mM NaCl]로 3회 세척하고 2% 소 혈청 알부민(GenDEPOT)으로 1시간 동안 차단했습니다. 다음으로, 막을 실온에서 4시간 동안 1차 항체(희석액 1:1000)와 함께 4℃에서 밤새 배양하였다. MITF, TYR, TRP-1, TPR{34}} 및 -actin은 토끼 다클론 항-MITF 항체(Abcam, Cambridge, UK)로 검출되었습니다. 염소다중클론 항-TYR 항체(Santa Cruz, Dallas, TX, USA); 및 마우스 모노클로날 항TRP-1, 항-TRP-2 및 항{41}액틴 항체(Santa Cruz, Dallas, TX, USA). 그 후, 막을 TBST로 여러 번 세척했습니다. 1시간 동안 2차 항체(희석 1:2000), 즉 토끼 항-마우스 IgG, 마우스 항염소 IgG 및 염소 항-마우스 IgG(Santa Cruz, Dallas, TX, USA)와 함께 배양한 다음 TBST로 여러 번 세척합니다. 표적 단백질은 ChemiDoc Imaging System(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)과 함께 Enhanced chemiluminescence(ECL) 시약(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)을 사용하여 검출되었습니다. 단백질 밴드 정량은 ImageJ 소프트웨어(Windows용 버전 1.52a; NIH, Rockville, MD, USA)를 사용하여 수행되었습니다[28].
2.13. 통계 분석데이터는 Microsoft Excel 2016를 사용하여 분석되었으며 모든 실험 결과는 3개의 독립적인 측정값의 평균 ± 표준 편차(SD)로 표시됩니다. 학생의 2-표본 t-검정을 사용하여 대조군과 표본 간의 차이를 평가했습니다. Rsoftware(버전 3.6.3)를 사용하여 일원 분산 분석(ANOVA) 및 Duncan 검정을 수행하여 에서 각 비교의 유의성을 결정했습니다. 수준 p < 0.05(*),="" p="">< 0.01(**)="" 및="" p="">< 0.001(***).="" 상관="" 분석은="" prism5.02(graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca,="" usa)를="" 사용하여="">
3. 결과
3.1. 감초 추출물의 갈변 지수
갈변의 정도감초추출물은 그림 1a에 나와 있습니다. 이러한 결과는 열처리 추출물(WH-130, 0.965 ± 0.025 AU [흡광도 단위])이 비가열 추출물보다 훨씬 더 높은 갈변 지수 값을 가짐을 확인했습니다. 추출(WC, 0.758 ± 0.005 AU). 열처리는 WH{12}}에서 멜라노이딘 형성을 증가시키고 이러한 변화는 다양한 생물학적 활동과 관련될 수 있습니다.
3.2. 감초 추출물의 총 페놀 함량(TPC)
그림 1b는 TPC를 보여줍니다.감초추출물. WC의 TPC가 12.093 ± 0.061 mg GAE/g 추출물인 반면 WH-130는 14.098 ± 0.781 mg GAE/g 추출물의 TPC. 열처리는 감초 추출물의 TPC를 증가시켰습니다.
3.3. 감초 추출물의 라디칼 소거 활성
그만큼항산화제의 활동감초추출물은 그림 1c,d에 나와 있습니다. ABTS와 라디칼 소거능은 WC 추출물(3.542)보다 WH-130 추출물(6.086 ± 0.304 mg TEAC/gextract)에서 더 높았습니다. ± 0.093 mg TEAC/g 추출물). DPPH 분석에서 유사한 경향이 관찰되었습니다. WH{11}}(7.442 ± 0.292mg TEAC/g 추출물) 추출물은 WC 추출물(4.033 ± 0.160mg TEAC/g 추출물)보다 더 큰 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타냈습니다. 이러한 결과는 가열이 추출물의 항산화 활성을 증가시킬 수 있음을 나타냅니다.
3.4. 감초 추출물의 이소리퀴리티게닌 함량
결과는 열처리 후 WC의 ISL 함량이 현저하게 증가함을 보여주었으며(표 2, 그림 2), 이는 열처리가 WC의 함량에 영향을 줄 수 있음을 나타냅니다.항산화제그리고항멜라닌 생성화합물.
시스탄체 투볼로사
3.5. 세포 생존력
도 3에 도시된 바와 같이,감초추출물은 IBMX 처리 대조군에 비해 50 또는 100 µg/mL에서 세포 생존율에 영향을 미치지 않았습니다. 모든 추출물의 50 및 100 µg/mL 처리에서 세포 생존율은 100% 이상으로 유지되었습니다. 따라서 최대 100μg/mL의 감초 추출물 농도를 사용하여 추가 실험을 수행했습니다.
3.6. 감초 추출물이 B16F10 흑색종 세포에서 멜라닌 생성에 미치는 영향
B16F1{17}} 세포의 색소 침착 및 멜라닌 함량은 그림 4a,b에 나와 있습니다. B16F1{19}} 세포의 멜라닌 함량은 처리되지 않은 대조군에 비해 IBMX 처리로 최대 3.{6}}배 증가했습니다. WC 및 WH-130는 IBMX 처리군에 비해 색소 침착 및 멜라닌 함량이 유의하게 감소한 것으로 나타났습니다(그림 4a,b). WC 및 WH{{10}} 모두 KA 처리 세포보다 낮은 멜라닌 함량을 나타냈다. WH{14}}를 처리한 B16F1{26}} 세포에서 멜라닌 합성 억제 효과가 WC보다 컸습니다. 100 µg/mL WC 및 WH{16}}로 처리한 후 존재하는 멜라닌의 양이 IBMX 처리된 수준의 약 0.{18}}배 및 0.{20}}}배로 감소했습니다. group.ISL(10 µM) 및 KA(100 µg/mL)는 멜라닌 생성을 IBMX 처리 세포의 수준에 따라 각각 0.{25}}배 및 0.{27}}억제했습니다.
이 결과는 열처리가감초추출물(WH{0}})은 비가열 추출물(WC)보다 멜라닌 생성을 더 효율적으로 억제할 수 있습니다. 더욱이, 25, 50 및 100 µg/mL에서 WH{2}} 추출물로 처리한 결과(그림 4c) B16F10 흑색종 세포의 멜라닌 함량이 농도 의존적으로 감소한다는 것을 관찰했습니다. 함께, 이러한 결과는 난방이 향상되었음을 보여줍니다.항멜라닌 생성감초 추출물의 활성
3.7. 감초 추출물이 Tyrosinase 활성에 미치는 영향
3.7.1. 버섯 티로시나아제 활성
의 효과감초버섯 TYR 활성에 대한 추출물은 그림 5a에 나와 있습니다. 버섯 TYR에 의한 기질 산화에 대한 추출물(WC 및 WH{1}})의 영향이 무세포 조건에서 발생함을 확인했습니다. 50 µg/mL에서 WC 추출물은 효소 활성을 81.33%까지 억제한 반면 WH-130는 EC 수준의 65.95%까지 TYR 활성을 억제했습니다. 한편 TYR 억제제인 코직산(KA)은 효소 활성을 EC 수준의 47.09%까지 억제했다. TYR 활성 억제는 열처리되지 않은 감초(WC)보다 열처리된 감초(WH{12}})에서 더 컸다.
3.7.2. 세포성 티로시나아제 활성
도 5b에 나타낸 바와 같이, IBMX 처리 세포의 TYR 활성은 처리되지 않은 대조군(100%)에 비해 233%로 증가하였다. WC는 IBMX 처리군에 비해 TYR 활성을 82.17%로 감소시켰다. WH-130 추출물은 IBMX 처리 세포에 비해 세포 TYR 활성을 59.88% 억제했습니다. KA는 세포 TYR 활성을 IBMX 처리 세포의 수준의 74.07%로 감소시켰습니다. 이러한 결과는 감초 추출물(WC 및 WH{14}})이 TYR 활성을 억제하고 WH{15}}가 WC 및 KA보다 더 강력한 TYR 억제 활성을 갖는다는 것을 보여줍니다.
다음으로 TPC, ISL 함량,항산화제활성 및 항멜라닌 생성 활성(표 3). TPC는 ISL 함량(0.827) 뿐만 아니라 ABTS 플러스 및 DPPH 라디칼 소거 활성(각각 0.886 및 0.896)과 양의 상관관계가 있는 반면, TPC는 멜라닌 함량과 역 상관관계가 있었습니다(-0.859). ISL 함량은 ABTS plus 및 DPPH 라디칼 소거 활성(각각 0.977 및 0.985)과 양의 상관관계가 있는 반면 ISL 함량은 TYRactivity(-0)와 역의 상관관계가 있었습니다. 834) 및 멜라닌 함량(–{18}}.995). 항산화 활성(ABTS 플러스 및 DPPH)은 TYR 활성(각각 –{{20}}.879 및 –{24}}.856) 및 멜라닌 함량(–0)과 반비례했습니다. 974 및 -0.984). 이러한 결과는 감초의 ISL과 같은 페놀 화합물이 항산화제 및항멜라닌 생성감초 추출물의 활성
3.8. 감초 추출물이 멜라닌 생성 관련 유전자의 mRNA 발현에 미치는 영향
감초 추출물이 멜라닌 생성에 미치는 영향을 밝히기 위해 B16F1{9}} 세포에서 멜라닌 생성 관련 유전자의 발현을 조사했습니다. WC와 WH-130 모두 MITF, TYR, TRP-1 및 TRP-2의 mRNA 발현을 억제했습니다(그림 6). WC는 MITF, TYR, TRP-1 및 TRP{8}}의 mRNA 발현을 0.{{1{13}}}}fold, 0 수준으로 억제했습니다.{ {12}}fold, 0.{14}}fold 및 0.{16}}fold는 각각 IBMX 처리 세포에 있습니다. WH-130는 MITF, TYR, TRP{19}} 및 TRP{{2{25}}}}의 mRNA 발현을 0로 억제했습니다.43-fold, {{33 }}.60-fold, 0.62-fold 및 0.49-fold는 각각 IBMX 처리 그룹 수준입니다. WH{{30}} 추출물은 WC 추출물보다 mRNA 발현 억제 효과가 더 강했다. ISL은 MITF, TYR, TRP{31}} 및 TRP{32}}(0.42-fold, 0.59-fold, 0.{38}}fold의 표현도 억제했습니다. 및 0.{40}}각각 IBMX 처리 세포에 비해 배). WH{42}}처리군에서 WC 처리군보다 멜라닌 생성 관련 유전자의 mRNA 발현 감소 정도가 더 크게 나타났으며, 이는감초추출물은 멜라닌 생성 관련 유전자의 전사를 억제하여 멜라닌 생성을 억제하고 열처리를 통해 멜라닌 생성을 개선합니다.항멜라닌 생성감초 추출물의 활성
3.9. 감초 추출물이 멜라닌 생성 관련 유전자의 단백질 발현에 미치는 영향
그림 7b에서 볼 수 있듯이 WC 및 WH-130 처리는 MITF, TYR, TRP-1 및 TRP-2의 단백질 발현 수준을 유의하게 감소시켰습니다. MITF, TYR,TRP-1 및 TRP-2의 발현 수준은 WC로 처리된 세포에서 억제되었습니다(0.79-fold, 0.{9 }}접기, {{10}}.{11}}접기 및 0.67-접기, 각각 IBMX 처리 세포에 대해 상대적). WH-130는 MITF, TYR, TRP{16}} 및 TRP{17}}({{2{22}}}}.{19}}fold, {{24 }}.73-접기, 0.80-접기 및 {{30}}.48-접기, 각각 IBMX 처리된 세포에 상대적) . ISL은 MITF, TYR 및 TRP{27}}의 단백질 발현 수준을 감소시켰습니다(IBMX 처리에 비해 각각 0.{29}}배, 0.{31}}배 및 0.{33}}배) 세포). WH{35}}는 WC보다 멜라닌 생성 관련 유전자의 단백질 발현을 더 강력하게 억제하여 다음을 보여줍니다.감초추출물은 멜라닌 생성 관련 유전자의 번역을 억제하여 멜라닌 생성을 억제하고 열처리는 멜라닌 생성을 개선합니다.항멜라닌 생성감초 추출물의 활성
피부 미백 시스탄체 파우더
4. 토론
이 연구의 결과는 열처리가감초TPC, 항산화 활성에 영향을 미치며,항멜라닌 생성활동. WH-130는 WC보다 갈변 지수와 TPC 값이 더 높았습니다. 온도 및 압력을 포함한 처리 조건은 샘플 구성 요소에 영향을 미칩니다. [29]. 가열은 멜라노이딘 생성과 관련된 메일라드 반응을 촉진할 수 있습니다[23]. 멜라노이딘은 다음을 포함한 몇 가지 생물학적 효과가 있습니다.항산화제, 항종양 및 항고혈압 활성 및 혈당 조절 [30]. 이러한 화합물은 고온에서 당과 아미노산의 상호작용에 의해 Maillard 반응을 통해 형성된 고분자 갈색 고분자이다[21]. 따라서 가열된 추출물에 멜라노이딘이 많을수록 갈변 지수가 높아집니다. 가열하지 않은 감초 추출물(WC)의 색은 연한 갈색을 나타내었으나, 고온(130도)에서는 색이 점차 어두워졌다. 가열 과정은 또한 페놀 화합물의 화학 구조에 약간의 변화를 유도하고 식물의 세포벽을 파괴하여 페놀을 방출하여 항산화 활성을 유발할 수 있습니다[31]. 따라서 감초 추출물의 페놀 함량은 열처리로 증가할 수 있습니다[21]. 이전 보고서에 따르면 꿀의 열처리는 멜라노이딘 형성을 증가시켰고 갈변 정도는 항산화 활성의 증가와 일치했습니다[24]. 따라서 WH{8}}는 전자 또는 수소 원자를 전달하는 능력을 기반으로 샘플의 항라디칼 활성을 결정하는 데 널리 사용되는 ABTS plus 및 DPPH 라디칼 소거 분석에서 WC보다 높은 항산화 능력을 나타냈습니다[32].
가장 일반적인 자연항산화제항멜라닌 생성 화합물은 페놀계입니다. Tricin과 9-hydroxyoctadecadienoic acid는 수수 2색의 주요 페놀로 확인되었습니다. 또한 이들 성분은 tyrosinase 활성을 억제하여 항산화 및 항멜라닌 생성 효과를 나타냈다[19]. 또한 Sasa quelpaertensis Nakai의 활성 화합물인 p-coumaric acid는 이 화합물이 흑색종 세포에서 티로시나아제 활성을 강력하게 억제하고 멜라닌 생성을 감소시키는 것으로 입증되었습니다[27]. 이전 연구에 따르면 감초 뿌리의 가수분해산물로 잘 알려진 플라보노이드 화합물[6-8]인 ISL은 TYR 활성 억제, 멜라노솜 수송 및 멜라닌 분해 유도에 의해 항산화 및 항멜라닌 활성을 나타낸다[10,31] .그래서 우리는 추출물의 ISL 함량과 멜라닌 생성 관련 기전에서 ISL의 작용에 초점을 맞추었습니다. ISL은 항염, 항균, 항산화, 항암, 면역조절, 간보호 및 심장보호 효과를 포함한 수많은 생물학적 활성으로 인해 많은 질병의 치료제로 적용됩니다[33]. 이 연구에서는 WC보다 WH{16}}에서 더 높은 ISL 콘텐츠가 측정되었습니다. 피부 과색소침착은 산화 스트레스와 관련이 있습니다. 자유 라디칼 제거제는 과색소침착을 억제하는 중요한 역할을 하는 것으로 보고되었습니다[17,34]. 함께, 이러한 결과는 감초의 열처리가 라디칼 소거 활성 및항멜라닌 생성ISL과 같은 항산화 페놀 화합물의 수준 증가를 통한 활동. 이전 문헌에 따르면 감초(Glycyrrhiza uralensis, G. glabra)에는 glabrene, glabridin, glabrol, liquiritigenin이 있으며 tyrosinase 억제를 나타냅니다. 따라서 이러한 화합물은 항멜라닌 생성 활성에도 영향을 미칠 수 있습니다[10,11,15,35]. 감초의 항 멜라닌 생성 효과를 밝히기 위해서는 이에 대한 추가 연구가 중요합니다.
멜라닌 합성은 TYR, TRP{0}}, TRP{1}}(도파크롬 토토머라제) 및 MITF에 의해 조절됩니다(그림 8). 구리 함유 당단백질인 TYR은 속도 제한 효소로 작용하며 멜라닌 생성에 중요한 역할을 합니다. TYR은 티로신의 3,{6}}디히드록시페닐알라닌(DOPA)으로의 히드록실화를 촉매합니다. TYR은 또한 DOPA가 도파퀴논으로 산화되고 도파퀴논이 도파크롬으로 전환되는 것을 촉매합니다. 그런 다음 도파크롬은 디히드로-인돌리진(DHI) 또는 인돌 5,{9}}퀴논{10}}카르복실산(DHICA)으로 전환됩니다[36–38]. 이 경로에서 TRP{13}}는 도파크롬을 DHICA로 전환하는 것을 촉매합니다. 이 전환은 TRP{14}}에 의해 산화되어 유멜라닌을 형성합니다. MITF는 TYR, TRP{15}} 및 TRP{16}} 발현의 주요 조절자로서 멜라닌 생성에 중요한 역할을 하는 특정 전사인자입니다(그림 8)[28,37]. 멜라닌 생성의 화학적 유도제는{20}이소부틸{21}}메틸크산틴(IBMX)이며, 이는 cAMP 신호 전달 경로를 통해 TYR 활성을 증가시킵니다[13]. IBMX는 cAMP 포스포디에스테라제를 억제하여 세포내 cAMP 농도를 증가시킵니다. cAMP 수준의 증가는 protein kinase A(PKA)를 활성화시키고 활성화된 PKA는 cAMP-related binding protein(CREB)의 활성과 발현을 향상시킨다[39]. CREB는 MITF 프로모터에 결합하여 MITF 유전자 발현을 상향 조절합니다. MITF의 활성화는 TYR 및 TRP의 발현을 촉진합니다[13,19]. 따라서 MITF의 하향 조절은 저색소침착을 초래합니다.
가열된 감초 추출물(WH-130)은 가열되지 않은 감초 추출물(WC)보다 버섯 TYR 및 세포 TYR 활성을 더 효과적으로 억제했습니다. 감초 추출물의 세포 TYR 활성 억제는 TYR의 하향 조절로 인해 발생할 수 있습니다. 이러한 결과는 B16F10 흑색종 세포의 멜라닌 함량과 관련이 있습니다. B16F10 세포에서 WH{6}} 처리는 WC 처리보다 IBMX 유도 멜라닌 생성을 더 잘 억제했습니다. 또한 WH 130은 B16F10 세포에서 WC보다 더 큰 정도로 멜라닌 생성 관련 마커(MITF, TYR, TRP{10}}, TRP{11}})의 전사 및 번역을 하향조절했습니다. 이 마커는 종합적으로 전체에 기여할 수 있습니다.항멜라닌 생성활동 [40].
난방감초추출물은 ISL과 같은 항산화 페놀 화합물의 풍부함을 증가시켰고, 이러한 증가는항산화제활동(ABTS 플러스 및 DPPH). 가열된 감초 추출물(WH-130)도 TYR의 억제 활성을 증가시키고 멜라닌 합성을 감소시키는 것으로 나타났습니다. 안전성에 대한 잠재성 때문에 천연 소재의 개발에 새로운 추세가 있습니다. 감초는 과다색소침착을 위한 화장품 크림에 사용되었습니다[41]. 원암의 새로운 가능성을 보여주었습니다.피부 미백열 처리가 그 잠재력을 향상시킬 수 있음을 확인했습니다.
Glycyrrhiza uralensis Fischer(감초)는 인간 진피 섬유아세포에서 항산화 및 UV 광보호 활성을 가지고 있습니다[22]. 다만, 추후 원암과 다른 자생종과의 비교연구가 필요하다. 또한, 원암의 glabrene, glabridin과 같은 미확인 성분에 대한 항멜라닌 생성 효과와 관련된 추가 연구가 적절한 방법을 사용하여 수행되어야 합니다. 감초 추출물의 성분 분석 후 페놀계 화합물 간의 상승 작용 또는 길항 작용에 대한 조사가 필요하다[40]. 이러한 물질이 어떻게 작용하는지 조사하기 위해항산화제및 항멜라닌 생성 메커니즘, 수소 원자 전달 또는 단일 전자 전달 시스템 및 미토겐 활성화 단백질 키나아제 신호 전달 경로를 평가해야 합니다[32,37].
5. 결론
이 연구에서 우리는 새로운 품종인 원암 추출물의 잠재력을 조사했습니다.감초,희게 함화장품에 적용하기 위한 에이전트 및 열처리의 효과에 대한 생체 활성. Wongam 추출물(WC 및 WH-130)은 TYR의 활성을 억제하여 IBMX 유도 멜라닌 세포에서 높은 라디칼 소거 활성을 보였고 멜라닌 합성을 억제했습니다. 열처리 증가항산화제및 원암의 항멜라닌 활성. 그 결과 WH-130는 우수한 항산화 및항멜라닌 생성WC보다 활동 우리의 결과는 열처리된 원암 추출물(WH-130)이 갈색 반점, 주근깨 및 기미를 포함한 다양한 피부과적 색소 침착 장애에 적용할 수 있는 강력한 색소 환원제임을 시사하고 열처리가 개선을 위해 사용될 수 있음을 보여줍니다. 감초의 멜라닌 생성 억제 작용.
시스탄체 튜볼로사 효능: 피부 미백