Aristolochic 산은 쥐의 신장 섬유증과 노화를 유도합니다
Mar 23, 2022
추상적인:신장은 노화와 관련된 손상에 가장 취약한 기관 중 하나입니다. 일반적으로 신장의 노화는 신장섬유화증을 동반하는데, 이는 만성신부전증의 최종 공통경로입니다.신장 질환. 신독성 물질인 Aristolochic acid(AA)는 진행성 신장 섬유화 및 기능 저하를 특징으로 하는 AA 신병증(AAN)을 유발합니다. 신장 섬유증은 신장 노화와 관련이 있지만 AA가 신장 노화를 유도하는지 여부는 아직 불분명합니다. 현재 연구의 목적은 AAN을 신장 노화의 모델로 사용할 수 있는 가능성을 조사하는 것입니다. 여기에서 우리는 C57BL/6 마우스에 AA를 만성적으로 투여하여 AAN 모델에서 노화 관련 요인을 조사했습니다. 대조군과 비교하여 AA 그룹은 노화를 나타냈습니다.신장신장 위축, 신장 기능 저하 및 세뇨관 간질 섬유증과 같은 표현형. 또한, AA는 특히 다음에서 세포 노화를 촉진했습니다.신장및 증가된 신장 p16 mRNA 발현 및 노화 관련 -갈락토시다제 활성. 또한, AA 처리된 마우스는 근위 세뇨관 미토콘드리아 이상과 활성 산소 종 축적을 나타냈다. 노화방지 유전자인 클로토(Klotho)도신장AA 처리된 마우스. 종합하면, 본 연구의 결과는 AA가 노화 관련 인자를 변경하고 신장 섬유증이 신장 노화와 밀접한 관련이 있음을 나타냅니다.
키워드:만성 신장 질환; 신장 섬유증; 아리스토로크산; 노화; 세포노화
소개인간의 수명이 지속적으로 증가함에 따라 더 많은 사람들이 노화 관련 장애로 고통 받고 있습니다.신장일반적으로 연령 관련 조직 손상의 영향을 받고 만성신장병나이가 들면서 증가한다[1]. 신장 노화는 전반적인 노화를 가속화하여 수명을 단축시킵니다. 따라서 적절한 동물 모델이 완전히 개발되지 않았지만 신장 노화에 대한 연구가 필요합니다. 신장의 노화는 신장위축, 사구체경화증, 세뇨관간질섬유화증 등 다양한 병리학적 변화를 동반한다[2]. 신세뇨관간질섬유화증은 대부분의 진행성 신질환에서 최종 공통경로이며, 이는 신세뇨관간질섬유증이 노인성 질환과 밀접한 관련이 있음을 시사합니다.신장. 노화 연구에서 마우스는 인간과 유전적으로 근접하고, 게놈을 유전적으로 조작할 수 있는 능력이 있으며, 수명 동안 인간과 유사한 노화 관련 표현형을 나타낸다는 사실 때문에 신뢰할 수 있는 도구입니다[3]. 근친 교배 생쥐를 사용한 세로 관찰은 생쥐의 전체 수명을 추적하는 데 시간이 많이 걸리지만 노화 모델로 이상적입니다. 또한 노화에 대한 유전자 변형 마우스 모델이 여러 개 있습니다. 클로토 결핍 마우스는 노화 연구에 사용되는 조기 노화 모델입니다. 그러나 이 모델에서 신장 기능은 영향을 받지 않고 신장 이외의 여러 장기가 손상됩니다[4]. 따라서, 이 마우스 모델은 신장 노화에 대한 연구에 부적절할 수 있습니다.Aristolochic acid(AA) 투여는 광범위한 간질 섬유증을 특징으로 하는 AA 신병증(AAN)으로 알려진 특정 유형의 신장 손상을 유발합니다[5,6]. AA는 신장 조직에서 DNA 부가물의 형성을 촉진하기 때문에 신장 세뇨관 상피에 독성이 있습니다[7]. AA는 비뇨기계 이외의 기관에 영향을 미치지 않으며 다음 평가에 유용할 수 있습니다.신장-특정 변경. 따라서 AA는 일반적으로 생쥐의 신장 섬유화 모델을 확립하는 데 사용됩니다[8,9]. 그러나 AA에 의해 유발된 변화가 노화와 관련이 있는지 여부는 불분명합니다.신장. 이 연구에서 우리는 생쥐에서 AAN의 연령 관련 표현형과 분자 인자를 조사했습니다.
결과 2.1. AA 투여로 인한 상당한 체중 감소, 신장 위축 및 신장 기능 저하기준 체중(BW)과 수축기 혈압(BP)은 비히클 대조군과 AA 그룹 간에 동일했습니다. 비히클 대조군의 BW는 8주 동안 지속적으로 증가했습니다. 그러나, 체중 증가는 AA 투여에 의해 억제되었으며, AA 투여 시작 후 4주 및 8주에 AA 그룹의 BW가 유의하게 낮았습니다(그림 1A). 차량 제어 그룹과 AA 그룹 사이의 수축기 혈압 또는 심박수에는 유의한 차이가 없었습니다(그림 1B,C). 심장 무게/BW 비율은 AA 투여 시작 후 8주에 그룹 간에 차이를 나타내지 않은 반면(그림 1D),신장체중/BW 비율은 AA 투여 시작 후 8주에 AA 그룹에서 유의하게 낮았습니다(그림 1E). 우리는 다음으로 비히클 대조군과 AA 그룹에서 신장 기능을 조사했습니다. 혈장 크레아티닌 및 요소 질소(UN) 농도는 AA 투여 개시 후 8주에 비히클 대조군보다 AA 그룹에서 유의하게 더 높았다. 또한, AA 처리는 AA 투여 시작 후 8주에 비히클 대조군과 비교하여 크레아티닌 청소율을 유의하게 감소시켰습니다(그림 1F-H).
2.2. AA 투여 유도된 명백한 세뇨관 간질 섬유증 및 신장에서 섬유증 관련 유전자 발현의 상당한 상향 조절과요오드산-쉬프(PAS) 염색을 사용한 조직학적 검사는 사구체 영역이 비히클 대조군과 비교하여 AA 그룹에서 유의하게 감소된 것으로 나타났습니다(그림 2A). Masson's trichrome(MT) 염색을 사용하여 평가한 광범위한 세뇨관 간질 섬유증은 AA 그룹(그림 2B)뿐만 아니라 신장 섬유증 관련 유전자, 콜라겐 I 및 III, 형질전환 성장 인자의 mRNA 수준의 상향 조절과 함께 관찰되었습니다. TGF)-(그림 2C–E).
2.3.AA 투여 가속화된 세포 노화, 미토콘드리아 기능 장애 및 신장에서의 반응 산소/유전자 종(ROS) 축적세포 노화를 평가하기 위해 우리는 p53, p21, p16 및 글루타미나아제(GLS)의 신장 mRNA 발현을 조사했습니다.신장(그림 3A-D). 또한 senescence-associated -galactosidase(SA- -gal) 염색 강도는신장AA 그룹에서는 증가되었고 비히클 대조군에서는 거의 없었습니다(그림 3E). AA 그룹에서 전자 현미경 검사는 근위 세뇨관 세포에서 미토콘드리아 크리스타, 미토콘드리아 단편화, 세포질 공포화 및 자가용해소체의 소실을 보여주었습니다. BCL2/아데노바이러스 E1B 19-kDa 상호작용 단백질 3(Bnip3), 미토콘드리아 관련 유전자의 하향조절(그림 3FG). Nox2의 신장 mRNA 발현. 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트(NADPH) 산화효소의 성분은 비히클 대조군과 비교하여 AA 그룹에서 유의하게 증가했습니다(그림 3H). 또한 웨스턴 블롯 분석에서 신장의 4-하이드록시{11}}공칭({12}}HNE) 수준이 AA 그룹에서 유의하게 증가했음을 보여주었습니다(그림 3I). 이러한 결과는 AA 투여가 세포 노화, 미토콘드리아 기능 장애 및 ROS 축적을 유도했음을 나타냅니다.신장.
2.4. AA 감소된 신장 클로토 단백질 발현우리는 비히클 대조군과 AA 그룹에서 노화 방지 단백질의 신장 발현을 조사했습니다. Klotho 발현은 비히클 대조군에 비해 AA 그룹에서 유의하게 감소된 반면(그림 4A), 니코틴아미드 포스포리보실트랜스퍼라제(NAMPT) 및 시르투인1(SIRT1)의 신장 발현은 그룹 간에 유사했습니다(그림 4B,C).
3. 토론우리가 아는 한, 본 연구는 p16 및 SA{2}}gal 활성과 같은 노화 마커를 사용하여 AAN의 신장 노화 관련 변경 평가에 초점을 맞춘 최초의 연구입니다. AA 처리는 신장 p16 mRNA의 상향 조절 및 SA{4}}gal-양성 염색을 동반한 신장 위축, 세뇨관간질 섬유증 및 신장 기능 저하를 촉진했습니다. 또한, AA 그룹은 미토콘드리아 이상, 산화 스트레스 증가 및 노화 방지 유전자인 클로토(Klotho)의 하향 조절과 같은 신장 노화 관련 기전의 특징을 입증했습니다. 종합하면, 우리의 관찰은 만성 AA 투여가 부분적으로 신장 노화를 모방함을 시사합니다.
세포 노화는 DNA 손상과 같은 다양한 스트레스 요인에 반응하여 세포 증식이 영구적으로 정지되는 것으로 노화 및 노화 관련 질병에 기여합니다. Cyclin-dependent kinase inhibitor인 p16의 발현은 신장을 포함한 다양한 장기의 노화와 관련이 있습니다. 칼로리 제한은 pl6 발현[1{15}}]을 억제하여 수명을 연장합니다. 또한, FK 결합 단백질 이량체[11]인 AP20187을 주입하여 INK-ATTAC 마우스에서 p{5}발현 노화 세포를 제거하면 사구체 경화증 및 신장과 같은 신장 노화 표현형이 약화됩니다. 기능 저하. 따라서 p16은 가장 중요한 노화 관련 요인 중 하나입니다. 노화 세포는 pH 6.0에서 증가된 -갈락토시다제 활성을 나타내는 SA{12}}gal 염색을 사용하여 검출할 수 있으며[12], 노화 및 노화 세포의 널리 사용되는 바이오마커입니다. p116의 신장 mRNA 발현은 늙은 쥐에서 증가신장신장 상피에서 증가된 SA{0}gal 활성을 동반합니다[13I. 본 연구에서 우리는 신장 p16 mRNA 발현 증가와 SA{3}}gal 염색을 보여 AA가 신장 노화를 유도함을 나타냅니다. GLS는 강화된 글루타민분해 및 세포내 pH 중화를 통해 노화 세포의 생존에 필수적인 것으로 최근 보고되었습니다[14]. 노화된 마우스에서 GLS 의존성 글루타민분해의 억제는 노화 세포를 제거하고 노화 관련 기관 기능 장애를 개선하는 것으로 나타났습니다. 본 연구에서, 신장 GLS mRNA의 상향 조절은 그룹에서 노화 세포의 신장 축적을 나타냈다. 따라서, 만성 AA 투여는 신장에서 세포 노화를 야기하였다.
CISTANCHE는 신장/신장 기능을 향상시킵니다.
세포 노화 외에도 미토콘드리아 기능 장애는 노화 관련 조직 손상의 기본 메커니즘이며 ROS 축적을 동반합니다[15,16. 미토콘드리아 기능 장애는 세포 노화를 유도하고 유지하는 반면[17], 세포 노화는 미토콘드리아 기능 장애에 직접적으로 기여합니다[18]. 주로 외부 미토콘드리아 막에 위치한 Bnip3은 산화 스트레스와 저산소증에 대한 반응으로 배양된 신장 근위 세뇨관 세포에서 미토파지를 조절하는 역할을 할 수 있습니다. 노화된 마우스에서 칼로리 제한은 Bnip3의 상향 조절을 통해 관상 세포에서 자가포식을 증가시키고 신장 기능의 노화로 인한 퇴행을 개선합니다[19]. 본 연구에서 전자현미경은 신장 Bnip3 발현 감소 또는 세포 노화에 의해 영향을 받을 수 있는 미토콘드리아 이상의 특징을 밝혀냈습니다. 미토콘드리아는 ROS의 주요 세포 내 공급원입니다. 신장 ROS에 대한 미토콘드리아 이상이 미치는 영향을 평가하기 위해 4-HINE의 신장 축적을 조사하고 AA에 의해 유도된 ROS 축적이신장.NADPH 산화효소는 ROS의 주요 공급원입니다. 마우스에서 AAN의 급성기 동안 Nox2의 신장 mRNA 발현이 증가하고 산화질소 이용도가 감소하여 지속적인 저산소증 및 허혈을 초래하였다[20. 늙은 쥐에서신장, ROS의 축적은 Nox2의 발현 증가를 동반한다[21]. 이러한 발견은 AA가 미토콘드리아 기능 장애 및 NADPH 산화효소의 상향 조절로 인한 ROS 축적을 통해 연령 관련 표현형을 유도할 수 있음을 시사합니다.
Renal Klotho 유전자 발현은 AA 그룹에서 감소한 반면, NAMPT 및 SIRT1의 발현은 그룹 간에 유사하였다. 클로토(Klotho)는 노화 억제제 역할을 하는 단일 통과 막횡단 단백질을 암호화하는 노화 방지 유전자입니다. 클로토 결핍 마우스의 노화 과정은 수명 단축, 불임, 동맥경화, 피부 위축, 골다공증, 폐기종을 포함하여 인간과 유사합니다[22]. Hypomorphic 돌연변이 Klotho 생쥐는 또한 p16 절제에 의해 회복되는 가속화된 노화의 표현형을 나타냈다[23]. 클로토는 노화의 중요한 인자이기 때문에 클로토 유전자 변형 마우스는 노화 연구에 널리 이용되어 왔다. 그러나 Klotho 유전자 변형 마우스는 이러한 마우스의 전신 노화 관련 손상과 신장 기능이 입증되지 않았다는 사실(즉, 크레아티닌 수준) 때문에 신장 노화 연구에 부적절할 수 있습니다. 대조적으로, AAN 마우스 모델은 상대적으로 시행이 용이하고 신장 기능 저하에 대한 중재의 효과를 추정할 수 있는 능력과 같은 몇 가지 장점이 있기 때문에 연구 목적으로 약물 유도된 신장 노화 모델로 사용될 수 있습니다. .
본 연구는 몇 가지 제한점이 있었다. 우리는 주로 세포 노화, 미토콘드리아 형태 및 노화 관련 유전자 발현에 초점을 맞춰 신장 노화를 평가했습니다. 그러나 노화의 메커니즘은 복잡하고 제대로 이해되지 않고 있습니다. 또한, AA에 반응하여 Klotho 유전자 발현이 감소했지만 AAN의 병리학 적 변화와 인과 관계를 입증 할 수 없었습니다. AAN 개발에 관련된 다양한 분자의 역할을 결정하기 위해서는 추가 연구가 필요합니다. 그럼에도 불구하고, 본 연구는 Avan을 신장 노화의 모델로 사용하는 것에 대한 새로운 통찰력을 제공합니다. 표현형의 변화에 주목하는 것이 중요합니다.신장수명과 밀접한 관련이 있습니다. 비록신장노화 관련 변화에 쉽게 영향을 받으므로 신장 노화를 억제하면 전체 수명이 연장될 수 있습니다. 따라서 AAN 모델을 사용하여 신장 노화에 대한 추가 연구는 미래에 수명 연장으로 이어질 수 있습니다.
4. 재료 및 방법4.1. 동물본 연구는 실험동물 사용에 관한 국립보건원 지침에 따라 수행되었습니다. 모든 동물 실험은 요코하마 시립 대학의 동물 연구 위원회(승인 번호: FA{0}})의 승인을 받았으며 ARRIVE 지침에 따라 수행되었습니다. 사용되는 동물의 수와 고통을 최소화하기 위해 노력했습니다. 마우스는 25℃의 온도에서 12-시간 명/{2}}시간 암주기 하에 통제된 환경에 수용되었습니다. 마우스는 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있었습니다.
CISTANCHE는 신장/신장 감염을 개선할 것입니다
8주령 수컷 C57BL/6 마우스를 Charles River Laboratories(Wilmington, MA, USA)에서 구입하고 1주일의 순응 후 비히클 대조군 또는 AA 그룹으로 할당하고, 마우스에 비히클 또는 AA(Sigma)를 복강 내 투여했습니다. - Aldrich, St.Louis, MO, USA), 소량의 디메틸 설폭사이드에 용해됨. 본 연구에 앞서 우리는 여러 프로토콜을 사용하여 예비 연구를 수행했습니다. 첫 번째 프로토콜에는 리모델링 시간 없이 4주 동안 일주일에 두 번 C57BL/6 마우스에 AA(3mg/kg)를 복강 내로 투여하는 것이 포함되었습니다. 이 프로토콜에서 AA는 브러시 경계가 손실된 확장된 근위 세뇨관과 같은 명백한 급성 신장 병변을 일으켰습니다(보충 그림 S1). 두 번째 프로토콜에서는 C57BL/6 마우스에 4주 동안 일주일에 한 번 AA(2.5mg/kg)를 복강 내 투여한 후 4주 동안 리모델링 시간을 가졌습니다. 이 마우스의 혈장 크레아티닌은 0.19 ± {{2{22}}}}였습니다.{24}}80 mg/dL 대 0.18 ± 0.010 mg/dL(각각 차량 대조군 대 AA; 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM), p= 0.{28}}, 짝을 이루지 않은 학생의 t-검정, 그룹당 n=4) 및 혈장 UN은 31.3 ± 5.95 mg/dL 대 30.4 ± 3.87 mg/dL(각각 차량 제어 대 AA, 평균 ± SEM, p=0.90, 짝을 이루지 않은 학생 t-검정, 그룹당 n=4). 따라서 우리는 AA가 상당한 신장 기능 저하를 유도하지 않았기 때문에 이 프로토콜이 신장 손상 모델에 적합하지 않다고 결정했습니다. 세 번째 프로토콜에서는 C57BL/6 마우스에 AA(3mg/kg)를 리모델링 시간 없이 10주 동안 일주일에 두 번 복강 내 투여했습니다. 이 마우스에서 AA 그룹의 사망률은 83%(n=6)인 반면 비히클 대조군의 마우스는 사망하지 않았습니다(n=4). 이 프로토콜에서는 사망률이 높기 때문에 AA에 의해 유도된 신장 표현형을 통계적으로 평가할 수 없었습니다. 네 번째 프로토콜에서 C57BL/6 마우스에 AA(3mg/kg)를 4주 동안 일주일에 두 번 복강 내 투여한 후 4주 동안 리모델링 시간을 투여했습니다. 세뇨관간질 섬유증과 같은 만성 신장 병변 및 신장 기능 저하가 이 마우스에서 관찰되었습니다[9]. 따라서 이러한 예비 조사의 결과를 바탕으로 본 연구의 실험을 수행하기 위해 네 번째 프로토콜을 채택했습니다.
4.2.혈압 측정수축기 혈압과 심박수는 이전에 설명된 tail-cuff method(BP-Monitor MK{2}}; Muromachi Kikai Co., Tokyo, Japan)를 사용하여 측정되었습니다[24,25]. 모든 측정은 9:00에서 14:00 사이에 수행되었습니다. 각 마우스에 대해 최소 10회 측정을 수행하고 평균값을 분석에 사용했습니다.
4.3. 실시간 정량화 역전사 PCR 분석 ISOGEN(Nippon Gene, Tokyo, Japan)을 사용하여 신장 조직에서 total RNA를 추출하고 SuperScript IⅢFirst-Strand System(Invitrogen, Waltham, MA, USA)을 사용하여 상보적 DNA(cDNA)를 합성했습니다. 실시간 정량 역전사 PCR 분석은 CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)을 사용하여 수행되었으며 역전사 산물은 TaqMan PCR Master Mix 및 맞춤형 TaqMan과 함께 인큐베이션되었습니다. 프로브(Applied Biosystems, Waltham, MA, USA), 이전에 설명한 대로 [26]. 콜라겐 I(Mm{8}}g1), 콜라겐 II(Mm{10}}m1), TGF-(Mm01178819 m1), p53(Mm00441964 g1), p21( Mm04205640 g1).p16(Mm00494449 m1)GLS(Mm01257297_m1), Bnip3(Mm{27}}g1) 및 Nox2(Mm{30}}m1).mRNA 수준은 다음의 수준으로 정규화되었습니다. 18S 리보솜 RNA.
4.4. 웨스턴 블롯 분석 단백질 발현은 이전에 기술된 방법을 사용하여 조직 균질물의 웨스턴 블롯 분석에 의해 분석되었습니다[27,28]. 소듐 도데실 설페이트 함유 샘플 완충액을 사용하여 조직으로부터 총 단백질 추출물을 제조하였다. 각 샘플의 단백질 농도는 Detergent-Compatible Protein Assay Kit(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) 및 NanoDrop One(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)을 사용하여 측정했으며, 이때 소 혈청 알부민을 기준. 조직 샘플에서 동일한 양의 단백질 추출물을 5-20% 폴리아크릴아미드 젤(ATTO Corp., Tokyo, Japan)에서 분획화했습니다. 그런 다음 분리된 단백질을 Semi-Dry Transfer System(ATTO Corp., Tokyo, Japan)을 사용하여 폴리비닐리덴 디플루오라이드 막으로 옮겼습니다. 멤브레인은 5% 탈지분유를 함유한 인산염 완충 식염수로 실온에서 1시간 동안 차단되었습니다. 막을 Klotho(ab{11}}:1000; Abcam, Cambridge, UK), NAMPT(sc{13}}:5000; Abcam), SIRT1({16}}:1000, MilliporeSigma , 미국 메사추세츠 벌링턴), 4-HINE(MHN-100P 1:1000; JaICA, Fukuroi, Japan) 및 글리세르알데히드{3}}인산 탈수소효소(GAPDH)(2118, 1:2000; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA). 막을 세척하고 2차 항체와 함께 실온에서 60분 동안 인큐베이션했습니다. 향상된 화학발광 기질(Merck, Kenilworth, NJ, USA)을 사용하여 항체-항원 반응 부위를 시각화했습니다. GAPDH를 로딩 대조군으로 사용했습니다. ChemiDoc Touch(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 사용하여 이미지를 정량적으로 분석했습니다.
4.5. 조직학적 분석 이전에 설명한 대로 수행되었습니다[29]. 마우스의 신장 조직을 4% 파라포름알데히드로 고정한 후 파라핀에 포매했습니다. 섹션(4 um 두께)은 PAS 및 MT 염색으로 염색되었습니다. 사구체 면적을 평가하기 위해 마우스당 50개의 사구체를 측정하고 평균하였다. 모든 이미지는 BZ{4}} 현미경(Keyence Corp., Osaka, Japan)을 사용하여 획득했습니다.
CISTANCHE는 신장/신장 투석을 개선할 것입니다
4.6. SA{2}}알 염색 마우스의 신장 조직을 급속 동결하고 Optimal Cutting Temperature 컴파운드(Sakura FinetekJapan, Co., Ltd., Tokyo, Japan)에 장착했습니다. 저온 유지 장치(HM{1}}VPD; Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 유리 슬라이드에 장착했습니다. SA{2}}gal 활성은 제조업체의 프로토콜에 따라 노화 감지 키트(Bio Vision Inc., Milpitas, CA, USA)를 사용하여 측정되었습니다. BZ{4}} 현미경(Keyence Corp.. 4.7.Electron Microscopy전자 현미경 분석은 이전에 설명된 대로 수행되었습니다[30]. 마우스를 이소플루란으로 마취하고 헤파린 처리된(5U/mL) 생리 식염수와 pH 7.4의 0.1mol/L 인산 완충액 중 2.5% 글루타르알데히드로 오른쪽 대동맥궁을 통해 관류했습니다. 투과전자현미경용 표본을 1% osmium tetroxide에 2시간 동안 담그고 에탄올에서 연속 탈수하고 Epon 혼합물에 포매했습니다. Ultrathin 섹션을 uranyl acetate와 lead citrate로 염색하고 80kV에서 작동하는 Hitachi H{10}} 투과 전자 현미경(Hitachi, Ltd., Tokyo, Japan)을 사용하여 검사했습니다. 단면을 x5000 배율로 관찰하고 전하 결합 장치 카메라를 사용하여 사진을 찍었습니다.
4.8.생화학적 분석혈액 샘플은 급식 상태에서 심장 천자에 의해 수집되었습니다. 전혈 샘플을 3000 rpm(MR{1}}; Tomy Seiko Co., Ltd., Tokyo, Japan)에서 4도에서 10분 동안 원심분리하여 혈장을 분리했습니다. 생성된 혈장 샘플은 -80도에서 보관되었습니다. 혈장 크레아티닌, UN 및 소변 크레아티닌 수치는 Hitachi 7180 autoanalyzer(Hitachi, Ltd., Tokyo, Japan)를 사용하여 측정되었습니다.
4.9. 통계 분석 GraphPad Prism 소프트웨어(GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA)를 사용하여 통계 분석을 수행했습니다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시됩니다. 짝을 이루지 않은 학생의 f-검정을 사용하여 비히클 대조군과 AA 그룹 간의 차이를 비교했습니다.p<0.05 was="" considered="" statistically="">
5. 결론AA 투여 원인신장세뇨관간질 섬유증 및 신장 위축과 함께 노화. 결과는 신장 섬유증이 신장 노화와 밀접한 관련이 있으며 AAN이 다음으로 유용할 수 있음을 시사합니다.신장-특정 노화 모델.
