한의학 시스탄체 화학성분 및 체내성분 분석 Ⅲ

Chapter 3 RPLC-HILIC-MS/MS를 기반으로 한 Cistanche Deserticola의 다성분 성분 정량 분석

한의학의 화학적 구성은 복잡하며 1차 대사산물과 2차 대사산물[55-561) 등 다양한 화합물을 포함하고 있습니다. 한약의 화학 성분(친수성 및 소수성 성분 포함)에 대한 포괄적이고 신뢰할 수 있는 분석을 달성하는 것은 여전히 ​​중요한 기술적 문제입니다. 더욱이, 한약의 각 성분의 함량은 매우 다양하며, 기존의 액체 질량 분석법은 주성분과 미량 성분을 동시에 정확하게 정량하기가 어렵습니다. 1571 전통적인 단일 컬럼 분리로는 충분하지 않으며 한약의 미량 화합물 분석은 상수에 의해 제한됩니다. 화합물의 간섭으로 인해 피크 중첩 현상이 심각합니다. 코어-쉘 및 서브미크론 입자 크로마토그래피 컬럼, 친수성 상호작용 크로마토그래피 컬럼 등과 같은 복잡한 매트릭스의 분리를 개선하기 위해 다양한 고급 크로마토그래피 기술이 사용되었지만, 여전히 다양한 화합물을 포괄적으로 분리하는 것은 어려운 일입니다. 단일 열 [58 -59. 2차원 LC, 컬럼 전환 LC, 직렬 2컬럼 LC와 같은 두 가지 이상의 직교 크로마토그래피 메커니즘을 결합한 다중 컬럼 크로마토그래피는 대사산물 범위를 크게 확장할 수 있는 실행 가능한 도구로 간주되어 왔습니다. 2차원 LC와 컬럼 전환 LC 모두 피크 용량을 크게 증가시킬 수 있다는 점에는 의심의 여지가 없습니다. 그러나 두 방법 모두 밸브에 따라 다르며 계측이 복잡하고 시간이 많이 걸리며 연결 튜브와 조절기가 설치하기 쉽습니다. 잔여물이 존재하며, 이 두 가지 방법은 정량적 재현 불가능성을 초래하는 일련의 불확실성 요인을 도입하는 경향이 있습니다1571. 역상 친수성 상호작용 크로마토그래피-탠덤(RPLC-HILIC)은 피크 용량을 크게 늘릴 수 없지만 장비 장비가 간단하고 튜브와 조절기를 연결하는 데 잔류물이 없으며 여전히 친수성에서 소수성으로의 변화를 실현할 수 있습니다. 광범위한 극성 화합물 [61-66을 광범위하게 보유합니다. 또한 삼중 사중극자(QgQ) 질량 분석기 고유의 다중 반응 모니터링(MRM) 모드를 또 다른 분리 차원으로 사용하여 RPLC-HILIC의 분리 성능을 더욱 향상시킬 수 있습니다. 즉, RPLC-HILIC-MRM은 RPLC, HILIC 및 MRM의 고유한 장점을 통합하여 신뢰할 수 있는 분석 방법이 될 것으로 기대됩니다.

CISTANCHE가 작동하는 데 얼마나 걸리나요?

한의학의 각 성분의 함량은 매우 다양합니다. 주요 구성 요소와 비교하여 사람들은 이러한 미량 또는 초미량 화합물의 검출을 완료하기 위해 보다 민감한 방법의 개발에 더 많은 관심을 기울입니다. MRM 모드는 탁월한 감도와 우수한 선형 동적 범위167 때문에 종종 권장됩니다. 그러나 QqQ 질량 분석기의 Q3 챔버의 말단 전자 곱셈의 포화로 인해 선형 범위는 일반적으로 좁아지고 정량 상한(ULOQ)은 안정적으로 모니터링하지 않으면 일부 주요 화합물의 함량을 완전히 포괄할 수 없습니다. 이러한 추적 구성 요소. 따라서 생성 이온의 생성을 억제하면 ULOO가 확장될 수 있습니다. 이온쌍과 같은 약화된 화합물 매개변수를 사용하여전위적인(DP) 및충돌 에너지(CE)는 목표 생성물 이온의 수를 줄여 ULOQ[68-69]를 확장할 수 있습니다.

한의학시스탄체스 허바비늘 모양의 잎이 달린 말린 다육 줄기입니다.시스탄체스 공장. 그것은 일반적으로 사용되는 전통 한약 중 하나이며 "사막 인삼"으로 알려져 있습니다. 페닐에타노이드 배당체는 Cistanche Deserticola에서 항상 뜨거운 연구 주제였지만 최근에는 만니톨과 같은 다른 친수성 성분의 약리학적 효과도 잘 인정되고 있습니다! 70-721. 그러나 일상적인 CH 정량 분석에서는 다음과 같은 주요 구성 요소의 함량이에키네시아사이드,베르바스코사이드, 만니톨은 때때로 UV 검출기 또는 증발 광산란 검출기(ELSD)의 측정 범위를 초과하기에는 너무 높았습니다. 따라서 전반적인 품질평가 관점에서 친수성 성분과 소수성 성분을 동시에 모니터링하고, 주성분과 미량성분을 모두 정확하게 정량할 수 있는 분석법을 확립하는 것이 중요합니다.

이 장의 실험에서는 복잡한 매트릭스 분석에 적합한 신뢰할 수 있는 방법인 RPLC-HILIC-MS/MS 액체 질량 분석법(직렬 결합 역상-친수성 상호작용 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법)을 확립했으며, 이를 통해 Cistanche Deserticola의 23개 극성을 검출할 수 있었습니다. . 광범위한 화합물(친수성 및 소수성 성분 포함)의 동시 분리, 분석 및 함량 측정 이 방법의 재현성을 보장하기 위해 SMRM 모드를 사용하는 동안 적절한 CE 값과 다양한 이온 쌍을 사용하여 솔방울을 확장합니다. 이눌린 및 베르바스코사이드와 같은 주요 구성 요소의 ULOQ를 통해 Cistanche Deserticola의 주요 구성 요소와 미량 구성 요소를 동시에 정량할 수 있습니다. Cistanche Deserticola의 품질 관리를 개선하고 식물의 광범위한 표적 대사를 달성하는 데 도움이 되는 실행 가능한 도구입니다. 유전체학.

섹션 1 실험 재료

1. 악기

HPLC-Qtap-MS 액체 질량 분석기에는 Shimadzu HPLC(2개의 LC-20ADxR 펌프, SIL-20ACxR 자동 샘플러, SPD-M20A UV 검출기, CTO-20AC 장착)가 장착되어 있습니다. 온도 조절 장치, DGU-20A3R 온라인 탈기 장치, CBM-20컨트롤러, Shimadzu Corporation, 일본) 및 SCIEX5500 Qtrap 질량 분석기(ESI 이온 소스, SCIEX, Foster City, CA, USA)로 구성됩니다. . 데이터 수집 및 계산은 Analyst Software1.6.2 소프트웨어로 완료되었습니다. Mili-Q 초순수 정수 시스템(Milipore Company, 미국), Mettler ME204 전자 분석 저울(스위스 Mettler Toledo Company), 초음파 추출기(230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, USA).

2. 재료 및 시약

Waters Acquity UPLC HSS T3 컬럼(2.1 x 100mm, 1.8μm), Waters XBridge Amide 컬럼(4.6mmx150mm, 3.5μm).폴리에테르에테르케톤(PEEK) 파이프라인(미국 Agilent Company). 크로마토그래피 등급과 질량분석 등급의 메탄올, 아세토니트릴, 질량분석 등급의 포름산은 ThermoFisher(Pittsburgh, PA, USA)에서 구입하였고, 물은 실험실에서 만든 Milli-Q 초순수(Millipore, Bedford, MA, USA)를 사용하였습니다. . 니아신(니코틴산, cLogP, 0.799), 숙신산(cLogP, -0.526)은 Sigma-Aldrich Company(미국 미주리주 세인트루이스)에서 구입했습니다. 우리딘(cLogP, -2.219), 아데노이드 아데노신(cLogP, -2.158), 이노신(cLogP, {{10}}.106) 및 구아노신(cLogP) , -3.326)은 Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd.에서 구입했습니다. Salidroside(cLogP -0.296), 6-deoxycatalpol(cLogP, -3.071), 페닐알라닌(cLogP, -1.556), 8-에피로간산(cLogP, -2.366), 만니톨(cLogP, -2.046), 자당(cLogP) , -3.087), 글루로사이드(cLogP, -1.757), 알라스카니오사이드 A(alaschanioside A, cLogP -0.971 ), 에키나코사이드(echinacoside, cLogP, -1 .811), 페룰산(cLogP, 1.421), 액티오사이드(cLogP, -0.890), 이소액티오사이드(cLogP, -0.057) 및 피노레시놀- -D-글루코피라노사이드(cLogP, -0.384)는 Peking University 천연 및 생체 모방 약물 핵심 연구소에서 제공한 cistanoside F(cistanoside F, cLogP, -2.211) Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.에서 구입, cistanoside A(cistanoside A, cLogP, -1.365), 2'-아세틸액티오사이드(cLogP, -0.040) 및 liquiritin apioside(cLogP, -0.267)는 상하이에서 구입했습니다. Shidande Biotechnology Co., Ltd. 및 Tubuloside A(tubulosideA, cLogP, 0.287)는 Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd.에서 구입했습니다. 모든 참고 물질의 순도는 HPLC-DAD-IT-TOF-MS로 테스트되었으며, 순도는 98% 이상이었습니다. 모든 대조 물질 cLogP 값은 ChemBioDraw Ultra14.0 소프트웨어(CambridgeSoftCambridge, MA, USA)에 의해 계산되었습니다.