Cistanche Tubulosa 페닐에타노이드 배당체는 외인성 및 내재적 신호전달 경로 모두를 통해 H22 간세포암종 세포에서 아폽토시스를 유도합니다.
Mar 15, 2022
더 많은 information:ali.ma@wecistanche.com 을 위해
펭페이 위안1외
추상적인
배경:Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight는 Tamarix 식물의 뿌리를 기생시키는 전통 중국 의학으로 남성 발기 부전, 불임, 신체 약화 및 강장제로 사용되었습니다. 그러나 간세포 암종에 대한 항암 효과는 여전히 어렵습니다. 여기에서, 우리는 항암 효과를 조사했다.Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 배당체H22 간세포 암종 세포 둘 다에 대한 (CTPG) 시험관내 및 생체내 및 그의 기전.
방법:형태학, 생존력,아폽토시스H22 세포의 세포 주기 및 미토콘드리아 막 전위(Δψm)를 각각 반전 현미경, MTT 분석법 및 유세포 분석기에 의해 분석하였다. 에서 단백질의 발현 및 활성화아폽토시스경로는 웨스턴 블롯에 의해 검출되었다. 생체내 항종양 효과를 수컷 쿤밍 마우스를 사용하여 확립된 종양 마우스 모델에서 평가하였다.
결과:CTPG 처리는 용량- 및 시간-의존적 방식으로 H22 세포 성장을 유의하게 억제하였고, 이는 증가된 것과 상관관계가 있었다.아폽토시스G0 / G1 및 G2 / M 단계에서 세포주기 정지. 더욱이, CTPG 처리된 H22 세포에서 염색체 축합이 관찰되었다. CTPG 처리는 Bax/Bcl-2 비율을 유의하게 증가시켰고, Δψm을 감소시켰으며, 시토크롬 c의 방출을 향상시켰다. 외인성 및 내재적 신호전달 경로 둘 다에서 절단된 카스파제-8 및 카스파제-9의 수준은 PARP를 절단하기 위해 순차적으로 활성화된 카스파제-7 및 카스파제-3을 유의하게 증가시켰다. 마지막으로, CTPG는 마우스에서 H22 세포의 성장을 억제하고 종양 마우스의 생존율을 개선시켰다.
결론: 이러한 결과는 CTPG가 외인성 및 내재적 모두를 통해 H22 세포 성장을 억제함을 시사하였다.아폽토시스경로.
키워드: Cistanche tubulosa,페닐에타노이드 배당체,아폽토시스, 신호전달 경로, 종양 마우스 모델
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배경
간암은 암 발생률에서 여섯 번째, 전 세계적으로 암 사망률에 대해 네 번째로 순위가 매겨졌습니다. 또한, 암 발생률에 대해 네 번째, 사회 인구 통계 학적 지수가 낮은 국가의 암 사망률에 대해 1 위를 차지했습니다 [1]. 중국에서 간암은 2015 년 암 관련 사망의 세 번째 주요 원인입니다 [2]. 원발성 간암의 90 % 이상이 세계에서 간세포 암종 (HCC)입니다 [3]. 현재, 간 절제술은 HCC 치료를위한 주요 옵션입니다. 그러나 HCC 환자의 30 % 미만이 완치 간 절제술의 기준을 충족했으며 전체 5 년 생존율은 높은 재발률로 인해 여전히 35-50 %만큼 낮습니다 [4, 5]. 중급 내지 고급 HCC 환자에 대한 치료 옵션의 가용성은 매우 제한적이다. 분자 표적 약물인 소라페닙(Sorafenib)은 FDA로부터 고급 HCC의 첫 번째 치료제로 승인되었습니다. 그러나 sorafenib은 생존율이 약 3 개월 밖에 연장되지 않으며 반응률은 4 % 미만입니다 [6, 7]. HCC에 대한 신약 또는 전략을 개발하는 것이 시급합니다.
중국 전통 의학 (TCM)을 단독으로 또는 다른 전략과 병용하여 HCC를 치료하고 연장 된 생존 시간, 향상된 삶의 질, 부작용 감소 등을 포함한 임상 적 이점을 보여주었습니다 [8, 9]. TCM의 일종인 Cistanche는 항산화, 항염증, 노화 방지 및 신경 보호와 같은 다양한 생물학적 기능을 가지고 있습니다 [10, 11].페닐에타노이드 배당체항산화, 항 염증, 간 보호 및 신경 보호를 포함한 다양한 활동을하는 Cistanche의 주요 활성 성분으로 간주되었습니다 [12-15]. 우리 그룹은Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 배당체(CTPG)는 유도할 수 있었다아폽토시스흑색종 B16-F10 세포에서 마우스에서 종양의 성장을 억제한다[16]. 이 연구에서, 우리는 시험관내 및 생체내 HCC H22 세포 둘 다에 대한 CTPG의 항암 효과를 측정하고 그 메카니즘을 조사하였다. 우리는 CTPG 발견(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)유도아폽토시스H22 세포에서 외인성 및 내재적 신호전달 경로 둘 다를 통해 마우스에서 H22 종양의 성장을 억제하였다.
방법
세포주
마우스 H22 간세포암종 세포를 신장대학교 생물자원 및 유전 공학의 신장 키 연구소(우루무치, 신장, 중국)로부터 수득하고, 100 U/ml 페니실린과 100 μg/ml 스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640 배지(Gibco)에서 배양하고, 5% CO2의 가습된 분위기에서 37°C에서 10% 열 불활성화된 태아 소 혈청(Gibco)에서 배양하였다.
MTT 분석
증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, China) 및 CTPG의 주요 화합물에서 구입했습니다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)고성능 액체 크로마토그래피에 의해 정량화되고 정량화되었다[16]. 세포 생존율은 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드(MTT)(시그마, 세인트루이스, 미주리주, 미국) 검정에 의해 평가하였다. H22 세포를 웰 당 100 μl 배지에 2 × 104 세포의 밀도로 96-웰 플레이트에 접종하고 37°C에서 배양하였다. 24시간 후, 세포를 각각 24, 48 및 72 h 동안 상이한 농도의 CTPG (0,100, 200, 300 및 400 μg/ml) 또는 0.3% DMSO (400 μg/ml CTPG에서와 동일함)로 처리하였다. 1000rpm에서 7분 동안 원심분리한 후, 상층액을 버리고 100μl의 MTT 용액(PBS 중 5mg/ml)을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37°C에서 4시간 동안 인큐베이션하고, 형성된 포르마잔 결정을 용해시키기 위해 DMSO 100 μl를 첨가하였다. OD490 값을 96-웰 마이크로플레이트 리더(Bio-Rad Laboratories, CA, USA)에 의해 검출하였다. 세포 생존율은 하기 화학식에 따라 계산되었다: 세포 생존율 (%) = (OD처리된/OD미처리) x 100%.
Cistanche tubulosa phenylethanoid glycoside
아폽토시스의 검출
H22 세포를 상이한 농도의 CTPG로 처리하였다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)(0, 100, 200, 300 및 400 μg/ml) 또는 0.3% DMSO를 24시간 동안 사용한 다음, 아넥신 VFITC/프로피듐 요오드화물(PI)로 염색하였다.아폽토시스검출 키트 (YEASEN, 중국) 제조 업체의 지침에 따라. 샘플을 유세포 분석기 (BD FACSCalibur, 미국)에 의해 분석하였다.
미토콘드리아 막 전위의 검출
H22 세포를 상이한 농도의 CTPG로 처리하였다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)(0, 200, 및 400 μg/ml) 24 h 동안, 이어서 막 투과성 JC-1 염료 (비요타임, 중국)로 37°C에서 20분 동안 염색하였다. JC-1 완충액으로 두 번 세척한 후, 샘플을 300 μl의 JC-1 완충액으로 재현탁시키고, 유세포 분석기 (BD FACSCalibur, 미국)에 의해 분석하였다.
세포 주기의 분석
H22 세포를 60mm 배양 접시에 접종하고 24시간 동안 CTPG(0, 100,200, 300 및 400 μg/ml) 또는 0.3% DMSO의 농도로 처리하였다. 모든 세포를 수집하고 PBS로 두 번 세척하였다. 세포를 -20°C에서 2시간 동안 70% 빙냉 에탄올에 고정시키고, PBS로 2회 세척한 다음, 300 μl 프로피듐 요오드화물/RNase 염색 완충액 (BD 바이오사이언스)에 재현탁시켰다. 실온에서 10분 후, 샘플을 유세포 분석기(BD FACSCalibur, 미국)에 의해 수집하고, 세포 주기 분포를 ModFit LT 3.0 소프트웨어로 분석하였다.
페닐에타노이드 배당체안으로Cistanche tubulosa
Hoechst 33,258 염색
H22 세포 핵의 형태학적 변화를 막 투과성 DNA 결합 염료 Hoechst 33,258 염색에 의해 분석하였다. H22 세포를 2 ml 배지에서 1 × 105 세포/웰의 농도로 6-웰 플레이트에 시딩하였다. 60%~70% 합류 후, 세포를 CTPG로 처리하였다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)(0, 100, 200, 300 및 400 μg/ml) 24 h. 세포를 수집하고, 4°C에서 10분 동안 4% 빙냉 파라포름알데히드로 고정시켰다. PBS로 세척한 후, 세포를 4°C에서 10분 동안 Hoechst 33,258 (Beyotime, China)로 염색하였다. 샘플을 반전된 형광 현미경(Nikon Eclipse Ti-E, 일본)으로 관찰하였다.
웨스턴 블롯
항-카스파제-3, 절단된 항-카스파제-3, 항-Bcl-2 및 항-Bax는 Beyotime Biotech Co., Ltd.(중국 상하이)로부터 구입하였다. 항-카스파제-7, 항-절단-카스파제-7, 항-카스파제-8, 항-절단-카스파제-8, 항-카스파제-9, 항-절단-카스파제-9, 항-PARP, 항-절단된 PARP, 항-마우스 IgG-HRP 및 항-토끼 IgG-HRP를 세포 신호전달 기술로부터 구입하였다. 안티-액틴β Beijing ComWin Biotech Co., Ltd.(중국 베이징)로부터 구입하였다.
H22 세포를 상이한 농도의 CTPG로 처리하였다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)(0, 100, 200, 300 및 400 μg/ml) 또는 24시간 동안 0.3% DMSO입니다. 세포를 수집하고, 얼음 상에서 30분 동안 세포 용해 용액 RIPA(베이징 컴윈 바이오텍 주식회사)와 함께 용해시켰다. 샘플을 회전시키고(4°C에서 15분 동안 12,000 g) 상청액을 수집하고, 단백질 농도를 BCA 키트(써모 피셔 사이언티픽, 미국)로 측정하였다. 각 샘플에서 동량의 단백질을 12% SDS-PAGE로 분리하고 PVDF 막(바이오샤프, 중국)으로 옮겼다. 5% 무지방 우유가 포함된 TBST 완충액으로 차단한 후, 멤브레인을 양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)에 접합된 상응하는 일차 항체 및 이차 항체와 함께 각각 인큐베이션하였다. TBST로 세척한 후, ECL 분석 키트(Beyotime, China)에 의해 표적 단백질을 검출하였다.
동물 및 윤리 선언문
6-8주령의 수컷 쿤밍 마우스는 신장의과대학 동물실험센터(우루무치, 신장, 중국)로부터 구입하였다. 마우스는 신장 대학의 표준 온도 조절, 광순환 동물 시설에 보관되었다. 모든 동물 연구는 신장 대학의 동물 관리 및 사용위원회의 지침에 따라 수행되었습니다. 이 프로토콜은 신장 대학 생물 자원 및 유전 공학 신강 핵심 연구소 (BRGE-AE001)의 동물 실험 윤리위원회에 의해 승인되었습니다.
종양 마우스 연구
종양 마우스 모델의 유도를 위해, 수컷 쿤밍 마우스를 100 μl PBS 중의 1 × 106 H22 세포를 오른쪽 옆구리에 피하 주사하였다. 3일 후, 마우스를 무작위로 3개의 그룹(7마리의 마우스/그룹)으로 나누었다. 대조군은 종양 주위에 0.1 ml DMSO를 피하 주사하였다. CTPG-200 및 CTPG-400 그룹은 200 또는 400 mg/kg CTPG를 피하 주사하였다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)종양 주위에 0.1 ml DMSO에서. 마우스를 최대 21일 동안 2일마다 처리하였다. 종양 크기는 25일까지 캘리퍼를 사용하여 측정하였고, 종양 부피는 다음식에 따라 계산하였다: 종양 부피 (mm3) = (길이×width2)/2. 25일 후, 종양 마우스의 생존을 본 연구가 끝날 때까지 매일 모니터링하였다.
통계 분석
통계적 유의성은 치료 및 대조군 간의 분산의 단방향 분석에 의해 계산되었다. 모든 데이터는 평균 ± 표준 편차(S.D.)로 표시하였다. p< 0.05="" was="" considered="" statistically="">
결과
증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)시험관 내에서 H22 세포의 생존력 감소
CTPG의 항 종양 효과를 탐구하기 위해(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)HCC 상에서, H22 세포를 시험관내에서 상이한 농도의 CTPG (0, 100, 200, 300, 및 400 μg/ml)로 처리하였다. 24시간 후, H22 세포의 형태학을 반전된 현미경을 사용하여 관찰하였다. 우리는 H22 세포의 형태가 CTPG 처리에 의해 극적으로 변화한다는 것을 발견했습니다. CTPG 농도가 증가함에 따라, 세포는 작고 둥글게 되었고, 세포 수 또한 크게 감소하였다(도 1a). MTT 분석은 각각 24, 48, 및 72 h 동안 CTPG 처리 후 H22 세포의 생존율을 분석하기 위해 사용되었다. 증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)H22 세포 생존율을 용량 의존적 및 시간-의존적 방식으로 유의하게 감소시켰다(도 1b). 증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)300 μg/ml에서 최상의 억제율에 도달하였다(도 1c). H22 세포에 대한 CTPG의 IC50 값은 24h에서 236μg/ml, 48h에서 169.8μg/ml입니다.
증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)H22 세포에서 유도된 아폽토시스
H22 세포의 감소된 생존력이 유도에 의해 매개되는지 여부를 조사하기 위해아폽토시스H22 세포를 24시간 동안 상이한 농도의 CTPG (0,100, 200, 300 및 400 μg/ml)로 처리하고 PI 및 아넥신 V로 염색하였다. 유세포 분석 결과는 CTPG 인 것으로 나타났습니다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)유의하게 유도된아폽토시스H22 세포 (초기 및 후기 포함)아폽토시스)를 용량 의존적 방식으로 (도 2a). CTPG의 높은 복용량이지만(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)또한 H22 세포의 괴사가 현저하게 증가하여, 괴사는 H22 세포 성장의 억제에 미미한 역할을 하는데, 이는 그의 낮은 비율(8.3%)에 비해아폽토시스(52.6%). 또한, CTPG 후 H22 세포의 총 단백질을 분리하였다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)처리 및 항세포자멸 B 세포 림프종 2 (Bcl-2) 및 프로아폽토시스 BCL-2-연관 X 단백질 (Bax)의 발현을 웨스턴 블롯에 의해 검출하였다. 그레이스케일 스캐닝 데이터는 Bax 및 Bcl-2의 발현 수준이 각각 증가 및 감소하였다는 것을 보여주었다. Bax/Bcl-2 비율이 유의하게 증가하였다(도 2b). 이러한 결과는 CTPG가 유도한다는 것을 시사한다.아폽토시스H22 세포에서.
증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)H22 세포에서 염색체 응축 및 세포 주기 정지를 유도한다.
약물에 의해 유발되는 DNA 손상 및 세포 주기 정지가 종양 세포 성장을 억제하고 원인이 될 수 있다고보고되었습니다.아폽토시스종양 세포에서 [17, 18]. CTPG 후 H22 세포에서 핵의 형태를 검출하기 위해(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)24시간 동안 처리한 H22 세포를 Hoechst 33,342로 염색하고 거꾸로 된 형광 현미경을 사용하여 관찰하였다. 증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)처리된 세포는 핵의 밝게 응축된 크로마틴의 용량 의존적 증가를 보인 반면, 처리되지 않은 세포는 균질하게 염색된 핵을 보였다(도 3a). H22 세포에서의 세포 주기 분포는 24시간 동안 CTPG 처리 후 PI 염색에 의해 추가로 분석되었다. 도 3b에 도시된 바와 같이, CTPG(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)치료는 G0 / G1- 및 G2 / M 상 세포의 비율을 상당히 증가시키고 S- 상 세포의 비율을 현저하게 감소시켜 CTPG가 있음을 시사한다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)H22 세포에서 G0/G1 및 G2/M 상 정지를 유도하였다. CTPG의 높은 투여량은 또한 서브 G1 세포의 비율을 유의하게 증가시켰다.
증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)미토콘드리아 막 전위를 감소시키고 시토크롬의 방출을 증가시켰다 c
미토콘드리아 의존성 경로는아폽토시스[19, 20]. 미토콘드리아 막 전위(Δψm)의 변화는
JC-1 응집체로 인한 JC-1 염색에 의해 모니터링(적색 형광)은 Δψm의 환원과 함께 단량체(녹색 형광)로 붕해될 수 있다[21]. CTPG 후(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)24시간 동안 처리한 H22 세포를 JC-1 염료로 염색하였다. 유세포 분석 데이터는 FL-2 채널에서의 적색 형광과 FL-1 채널에서의 녹색 형광이 CTPG시 유의하게 감소하고 증가한다는 것을 보여주었다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)치료. PE−FITC+세포의 비율이 유의하게 증가하였고(도 4a), 이는 CTPG(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)H22 세포에서 Δψm을 감소시켰다. 이것은 증가 된 Bax / Bcl-2 비율과 일치합니다. 결과적으로, 우리는 시토크롬 c의 방출이 CTPG시 유의하게 증가함을 관찰하였다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)치료(도 4b). 이러한 결과는 CTPG가 부분적으로 유도 할 수 있음을 나타냅니다.아폽토시스미토콘드리아 의존성 (내재적) 경로를 통한 H22 세포에서.
CTPG는 카스파제 경로를 활성화하고 DNA 복구를 방지했습니다.
다음으로, CTPG에 의해 유도된 카스파제의 활성화(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)외인성 및 내재적 신호전달 경로 둘 다를 통해 분석하였다. CTPG 후(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)24시간 동안 처리하여, 총 단백질을 H22 세포로부터 단리하고, 프로- 및 절단된-카스파제의 수준을 웨스턴 블롯에 의해 검출하였다. 미처리 또는 DMSO 대조군과 비교하여, CTPG(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)치료는 절단된 카스파제-8(외인성 경로)의 수준뿐만 아니라 절단된 카스파제-9(내재적 경로)의 수준도 유의하게 상향조절된다(도 5). 순차적으로, 활성화된 카스파제-8 및 -9는 하류 프로카스파제-3 및 -7을 절단하여 도 5에서 관찰하였다. 활성화된 카스파제-3은 도 3에서 관찰된 바와 같이 DNA 복구를 방지하고 DNA 손상을 축적하기 위해 폴리(ADP-리보스) 중합효소(PARP)의 DNA 복구 효소를 절단하였다. 3a. 이러한 결과는 CTPG(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)유도아폽토시스외인성 및 내재적 신호전달 경로 둘 다를 통해 H22 세포에서.
증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)생체 내에서 H22 HCC의 성장을 억제하고 종양 마우스의 생존율을 향상시킵니다.
마지막으로, CTPG의 항 종양 효과(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)HCC 상에서 종양 마우스 모델에서 평가하였고, 이는 H22 세포의 피하 주사에 의해 확립되었다. H22 세포 주사 3일 후, 종양 마우스를 CTPG로 처리하였다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)8 번. 마우스의 체중 및 종양 크기를 지시된 시점에서 모니터링하였다. 도 6a에 나타난 바와 같이, 각 그룹에서 마우스의 체중은 유의한 차이가 없으며, 이는 CTPG의 선택된 투여량이 있음을 시사한다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)명백한 부작용이 없습니다. 흥미롭게도, 200 mg/kg 및 400 mg/kg의 CTPG로 처리된 마우스에서 종양 성장이 유의하게 억제되었다(도 6b). 또한, CTPG의 두 가지 복용량(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)치료는 실험 말기에 대조군(0/7)에 비해 종양 마우스(3/7, 3/7)의 생존율을 크게 향상시켰다(도 6b). 우리는 또한 CTPG가 수컷 쿤밍 마우스로부터 분리된 비장세포의 증식을 용량 의존적 방식으로 유의하게 향상시킨다는 것을 발견하였고(도 6c), 이는 CTPG(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)면역 자극 효과가 있습니다.
토론
TCM은 오랜 역사 동안 암을 포함한 다양한 질병을 치료하는 데 사용되어 왔습니다. 한의학이 유도할 수 있다고 보고되었다.아폽토시스외인성 (사망 수용체 매개) 및 내재적 (미토콘드리아 의존성) 신호 전달 경로를 통해 다양한 유형의 종양 세포에서 항 종양 효과를 발휘합니다 [22-25]. 두 경로는 각각 카스파제-8 및 -9를 활성화시킬 수 있다[24, 26]. 여기, 우리는 CTPG 발견(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)세포자멸사 유도 및 세포 주기 정지를 통해 H22 세포 성장을 유의하게 억제하였다. 절단된 카스파제-8 및 -9의 수준은 CTPG에 의해 상당히 상향조절되었다.(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)치료, 외인성 및 내재적 신호전달 경로 둘 모두가 유도에 관여하였음을 시사한다.아폽토시스. 우리의 이전 연구는 CTPG(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)미토콘드리아 의존성 경로에 의해 흑색종 B16-F10 세포에서 아폽토시스를 유도하여 카스파제-9의 수준을 증가시켰으나 카스파제-8은 증가시키지 않았다[16]. 증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)다른 유형의 종양 세포에서 뚜렷한 신호 전달 경로를 활성화 할 수 있습니다.
미토콘드리아 막 완전성은 Bax 및 Bcl-2를 포함하는 BCL-2 단백질 패밀리의 구성원에 의해 엄격하게 조절된다[27, 28]. Bax와 Bcl-2의 비율은 미토콘드리아 의존에 중요한 역할을합니다.아폽토시스통로 [29]. CTPG로 처리된 H22 세포에서(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)Bax/Bcl-2 비는 상당히 상향 조절되었으며, 이는 Δψm의 감소와 본 연구에서 관찰된 시토크롬 c의 방출을 야기할 수 있다. 결과적으로, 프로-카스파제-9는 절단되고 활성화되었다. 마지막으로, 활성 카스파제-8 및 -9의 개시제는 DNA 복구를 방지하기 위해 PARP를 절단하기 위해 카스파제-3의 집행자를 활성화시켰다. 종합하면, 이러한 결과는 CTPG가 유도된다는 것을 시사한다.아폽토시스외인성 및 내재적 신호전달 경로 둘 다를 통해 H22 세포에서. 종양 마우스 모델에서, CTPG는 H22 HCC의 성장을 유의하게 억제하고 종양 마우스의 생존을 크게 개선시켰다. 흥미롭게도, CTPG(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)복용량 의존적으로 쿤밍 마우스에서 비장 세포의 증식을 촉진 시켰으며, 이는 우리의 이전 연구와 일치합니다 [16]. 이러한 결과는 CTPG가 직접적인 항암 효과와 간접적 인 면역 증진을 통해 마우스에서 H22 HCC의 성장을 억제 할 수 있음을 시사했다.
Cistanche tululosa제품
결론
증권 시세 표시기(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)시험관내 및 생체내 둘 다에서 H22 세포의 성장을 억제하고 유도하였다.아폽토시스외인성 및 내재적 신호전달 경로 둘 다를 통해 H22 세포에서. 이들 데이터는 CTPG(Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 글리코시드)HCC의 치료를 위한 잠재적인 후보일 수 있다.
약어
박스: BCL-2-관련 X 단백질; Bcl-2: B 세포 림프종 2; CTPG:Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 배당체; HCC: 간세포암종; HRP: 양고추냉이 퍼옥시다제; MTT: 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드; PARP: 폴리(ADP-리보스)폴리머라제의 DNA 복구 효소; 한의학: 중국 전통 의학; Δψm: 미토콘드리아 막 전위
자금
이 작업은 J.L.에 신장 위구르 자치구의 고급 인재 소개 프로젝트, J.L.에 중국 국립 자연 과학 재단 보조금 (31460241) 및 신장 대학의 박사 창업 기금 (BS160261에서 X.W.로, BS150236에서 Y.L.)에 의해 지원되었습니다.
데이터 및 자료의 가용성
이 연구의 원시 데이터는 해당 저자에게 합리적인 요청시 제공됩니다.
저자의 기여
JL과 JL은 실험을 설계했다. PY, JL, AA 및 YY가 실험을 수행했습니다. LX, XW 및 YL은 데이터를 분석하였다. PY, JL 및 JL이 원고를 썼습니다. 모든 저자는 최종 원고를 기고하고 승인했습니다.
윤리 승인
동물 연구는 신장 대학 생물 자원 및 유전 공학의 신장 핵심 연구소의 동물 실험 윤리위원회에 의해 승인되었다.
경쟁 관심사
저자들은 그들이 경쟁하는 이익이 없다고 선언합니다.
출판사 노트
Springer Nature는 출판 된지도 및 기관 제휴의 관할권 주장과 관련하여 중립적입니다.
저자 세부 정보
1생물 자원 및 유전 공학의 신장 핵심 실험실, 생명 과학 기술 대학, 신장 대학, 666 Shengli 도로, 우루무치, 신장 830046, 중국.2생명 과학 대학, 신장 사범 대학, 102 신이 도로, 우루무치 830054, 신장, 중국.3신장 의과 대학의 부속 종양 병원, 우루무치 830011, 중국.
Cistanche tululosa제품
보낸 사람: 'Cistanche tubulosa 페닐에타노이드 배당체유도아폽토시스H22 간세포 암종 세포에서 외인성 및 내재적 신호전달 경로를 모두 통해 ' by Pengfei Yuan1 et al.
---Yuan et al. BMC 보완 및 대체 의학 (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1
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