MiR-29b2/c의 결실은 MPTP로 유발된 파킨슨병 마우스에서 노화 가속화 및 신경 보호로 이어집니다.

추상적인

연구에 따르면 노화의 miR-29과 파킨슨병(PD) 사이의 연관성이 밝혀졌습니다. 여기서 우리는 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine(MPTP)에 의한 PD에서 miR-29s의 혈청 수준이 마우스는 동적 변화를 보였다. 노화 및 PD에서 miR-29b2/c의 역할은 miR-29b2/c 유전자 녹아웃 마우스(miR-29b2/c KO)를 사용하여 연구되었습니다. miR-29b2/c KO 생쥐는 야생형(WT) 생쥐와 비교했을 때 현저하게 가벼운 체중, 후만증, 근력 약화 및 비정상적인 보행을 특징으로 했습니다. WT는 또한 명백한 진피 비후 및 지방 조직 감소를 개발했습니다. 그러나 miR-29b2/c의 결핍은 MPTP에 의해 유도된 도파민 시스템의 손상과 흑질선조체 경로의 신경아교세포 활성화를 완화시켰고 결과적으로 MPTP 처리된 KO 생쥐의 운동 기능을 개선했습니다. miR-29b2/c의 녹아웃은 1-메틸-4-페닐 피리디늄(MPP 플러스 ) 처리된 혼합 신경교세포, 일차 성상세포 또는 LPS 처리된 일차 배양에서 염증 인자의 발현을 억제했습니다. 원발성 미세아교세포. 더욱이, miR-29b2/c 결핍은 AMPK의 활성을 강화시켰지만 아교세포에서 NF-κB p65 신호전달을 억제했습니다. 우리의 결과는 miR-29b2/c KO 마우스가 조로증과 같은 표현형을 나타낸다는 것을 보여줍니다. 덜 활성화된 아교세포와 억제된 신경염증은 miR- 29b2/c KO 마우스에서 도파민성 신경보호를 일으킬 수 있습니다. 결론적으로 miR-29b2/c는 노화 조절에 관여하며 파킨슨병에 해로운 역할을 합니다.

키워드

MiR-29b2/c; 신경보호; MPTP-유발 파킨슨병;Cistanche 혜택.

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소개

파킨슨병(PD)은 두 번째로 흔한 신경퇴행성 질환으로 중뇌의 흑색질 치밀부(substantia nigra par compacta, SNpc)에서 도파민성 뉴런의 진행성 손실과 증가된 신경교 활성화 및 신경염증을 특징으로 합니다[1-3]. MicroRNA는 전사 후 수준에서 유전자 발현을 조절하는 짧은 비암호화 RNA 분자입니다[4, 5]. MicroRNA는 신경계 발달, 신경 가소성 및 신경퇴행성 질환의 조절에 관여합니다. MicroRNA29 계열(miR- 29s)은 miR-29a/b1 및 miR-29b2/c의 두 유전자 클러스터로 구성되며 각각 염색체 6 및 염색체 1에 위치합니다. 마우스 게놈. miR-29a와 miR-29c는 하나의 뉴클레오티드 차이만 있는 반면, miR-29b1과 miR-29b2는 시퀀스에서 동일합니다[6]. miR-29은 여러 생물학적 과정에 관여합니다. Procell 생존 유전자 Bcl-2, Mcl-1, Cdc42 및 p85-를 포함하여 많은 miR-29 표적 유전자가 실험적으로 검증되었습니다. proapoptotic 유전자 Puma, Bim, Bak 및 Bmf; 및 전염증성 사이토카인 IFN- 및 IL-12 . 말초 시스템에서 miR-29이 조직 섬유화[7-9], 대사 및 면역 조절[10-13]에 관여한다는 연구 결과가 있습니다.

miR-29은 중추 신경계에서 광범위하게 발현되며 그 전사물은 뉴런과 신경아교세포 모두에 존재합니다[14, 15]. miR-29과 신경계 질환 사이의 연관성이 점점 더 많이 설명되고 있습니다. miR-29은 α-아밀로이드 생성 조절에 관여하며 AD 환자의 뇌에서 하향 조절됩니다[16, 17]. miR-29 수준은 또한 헌팅턴병(HD) 환자와 HD 모델 마우스[18, 19]에서 감소하는 반면 근위축성 측삭 경화증(ALS) 환자와 ALS 마우스 모델[16, 20]에서는 증가합니다. miR-29a/b-1- 결핍 마우스와 miR-29 하향 조절 마우스 모두 운동실조증과 같은 표현형을 나타냅니다[6, 21]. 허혈성 설치류 모델에서 miR-29 발현이 신경보호 및 신경세포 사멸 촉진에 미치는 영향에 대해 반대 결과가 보고되었다[22, 23]. 이전 연구에서 우리는 PD 환자의 혈청에서 miR-29s 수준이 현저하게 감소했으며, 더 심각한 파킨슨병과 관련된 감소 경향을 보였다[24]. 또한, miR-29s 수준은 PD 환자의 기억 성능과 관련이 있습니다[25]. 우리는 miR-29b2/c가 PD와 밀접하게 연관되어 있다고 결론지었지만 PD와 관련된 생리학적 기능 및 병리학적 메커니즘은 거의 알려져 있지 않습니다.

이 연구에서 MPTP 투여에 대한 마우스 혈청 수준의 miR-29s는 주입 후 최대 120일까지 측정되었습니다. miR-29b2/c 결핍이 말초 조직에 미치는 영향을 miR-29b2/c KO 마우스를 사용하여 연구했습니다. 도파민성 신경독소 MPTP는 PD의 마우스 모델을 유도하기 위해 추가로 사용되었다. 그런 다음 흑질선조체 도파민 시스템의 손상, 행동 수행 및 잠재적 메커니즘을 조사했습니다. 마우스 혈청의 miR-29s 수준이 MPTP 투여 후 동적 변화를 나타내는 것을 관찰했습니다. miR- 29b2/c KO 마우스는 더 가벼운 체중, 지방 조직 감소, 후만증, 피부 비후, 근육 약화 및 보행 이상으로 표시되는 가속 노화를 나타냈습니다. 그러나 miR-29b2/c의 결핍은 도파민성 손상 및 신경교 활성화를 완화시켰고 결과적으로 PD 유사 동물 모델에서 행동 수행을 개선했습니다.

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결과

1. miR-29b2/c KO 마우스의 조로증 유사 표현형

miR-29b2/c 녹아웃 마우스(miR-29b2/c KO)는 CRISPR-Cas9 기술을 사용하여 생성되었습니다. 유전자 표적화 및 돌연변이 마우스 유전자형 분석 전략은 보충 그림 1에 제시되어 있습니다. 4개월 및 16-개월 된 miR-29b2/c KO 마우스는 체중이 감소했습니다(그림 1A). 생후 3개월에 miR-29b2/c KO 마우스의 특징은 X선 마이크로 컴퓨터 단층 촬영(micro-CT) 스캔(보충 그림 2A)에서 입증된 바와 같이 변경되지 않았습니다. 13개월령의 miR-29b2/c KO 마우스와 WT 마우스 사이의 골밀도(BMD), 섬유주 평균 BMD, 섬유주 분리, 섬유주 두께 및 구조 모델 지수(SMI)에는 차이가 없었습니다( 보충 그림 2B). 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색을 통해 우리는 13-개월 된 miR-29b2/c KO 마우스가 주름이 증가하고 깊어지는 두꺼워진 진피를 나타냄을 발견했습니다(그림 1B, 1C). 그리고 후만증은 16-개월된 miR-29b2/c KO 마우스에서 명백했습니다(그림 1C). 어린 나이(3개월)의 miR-29b2/c KO 마우스는 정상적인 지방 조직을 가졌습니다(보충 그림 2C, 2D). 그러나 miR-29b2/c KO 마우스에서 WT 마우스에 비해 16개월에 복부 지방 조직(피하 지방과 내장 지방을 합친 것)과 갈색 지방 조직이 극적으로 감소했습니다(그림 1D). 또한, 뇌의 노화 표지자 p21 및 p53의 전사 수준을 분석하였다. 그들은 해마에서 현저하게 증가했지만 6개월령의 miR-29b2/c KO 생쥐의 피질에서는 그렇지 않았습니다. miR-29b2/c 결핍 해마의 p53 및 p16 단백질 수준은 WT 대조군과 다르지 않았습니다. 또한, 세포 노화의 알려진 특징인 α-갈락토시다아제 활성은 3개월 된 WT와 miR-29b2/c KO 마우스의 뇌 사이에 차이가 없었습니다.

miR- 29b2/c KO 생쥐의 근육 약화 및 보행 이상

miR-29b2/c 결핍 마우스의 행동을 평가했습니다. 근력은 와이어 행잉과 그리드 행잉 테스트로 측정하였다. miR-29b2/c KO 마우스는 Wire hanging test에서 대조군 마우스보다 점수가 낮았습니다(그림 2A). 그리고 그리드 행잉 테스트(그림 2B)에서 야생형 마우스와 비교했을 때 miR-29b2/c KO 마우스에서 떨어지는 대기 시간이 극적으로 짧았지만 WT 및 miR{{10} }b2/c KO 마우스는 크게 다르지 않았습니다(그림 2C). 동물의 걸음걸이는 Catwalk XT 분석 시스템에 의해 감지되었습니다. 놀랍게도 miR{-29b2/c KO 마우스의 속도와 보폭은 모두 상대 마우스보다 높았지만, 스텝 사이클, 스탠드 및 스윙 시간은 더 짧았고 듀티 사이클은 miR{ {15}} b2/c 결핍 마우스(그림 2D).

MPTP 유도 PD 마우스 혈청에서 miR-29의 변화

miR-29 수준은 건강한 대조군에 비해 PD 환자의 혈청에서 감소했습니다[24]. 이 연구에서 PD 생쥐의 혈청 내 miR-29 수준은 MPTP의 아급성 요법을 투여한 후 3일, 30일 및 120일에 정량화되었습니다. miR-29a 및 miR-29b 수준은 주입 후 3일에 감소했고 30일에 기준 값으로 회복되었으며 120일에 다시 감소했습니다. 그러나 miR-29c 수준은 크게 변하지 않았습니다(보조 그림 5).

Cistanche 보충제

miR-29b2/c 결핍은 마우스에서 MPTP로 유발된 흑색선조체 손상 및 운동 장애를 완화합니다.

miR-29b2/c 녹아웃 마우스와 WT 한배 새끼에게 MPTP를 주입하여 PD 모델을 유도했습니다. miR-29b2/c KO 마우스와 WT 대조군 모두의 선조체에서 p21, p53 및 Pai1의 발현 수준은 MPTP 투여 후 변하지 않았습니다. MPTP 노출은 SNpc[F(1, 20)=5.441, P=0.0302]에서 TH 양성 도파민성 뉴런과 TH 양성 신경 말단인 TH 단백질의 현저한 감소를 일으켰습니다. [F(1, 20)=10.5, P=0.0041] 및 선조체의 도파민, DOPAC 및 HVA 수준(그림 3A-3D). 그러나 MPTP 처리된 miR-29b2/c KO 생쥐의 흑질선조체 손상은 MPTP 처리된 WT 대조군과 비교했을 때 도파민 신경 세포의 수, 도파민 신경 말단의 밀도, 선조체 TH 단백질 수준 및 도파민 농도는 상당히 높았습니다. 또한 DOPAC 대 DA 및 HVA 대 DA 비율의 변화[F(1, 19)=12.64, P=0.0021]가 현저하게 완화되었습니다(그림 3A-3D). 정상적인 식염수를 주입한 miR-29b2/c KO 마우스에서 5-HT와 그 대사산물인 5-HIAA의 선조체 농도는 WT에 비해 증가했으며 NE 농도는 야생형 및 miR-29b2/c KO 마우스(그림 3D). 생쥐의 자발 수직 활동[26, 27]과 운동 활동[28]을 각각 평가하기 위해 양육 및 극 테스트를 사용했습니다. 마지막 MPTP 주사 2일 후, 일반 식염수로 처리된 WT 대조군과 비교할 때 마지막 2분 동안 WT 마우스에서 양육 빈도가 감소했습니다. 유사한 실험에서 miR- 29b2/c 결핍이 MPTP로 유도된 양육 빈도 변화에 미치는 영향을 밝히지 않았습니다(그림 3E). 유사하게, 폴 테스트에서 MPTP 투여 후 WT 마우스에서 방향 전환 및 하강에 소요된 총 시간이 증가한 반면, 정상 식염수 및 MPTP 처리된 miR-29b2/c KO 마우스 사이의 총 시간은 근접했습니다(그림 3F). .

miR-29b2/c 결핍은 생쥐에서 MPTP로 유도된 신경교 활성화를 약화시킵니다.

신경아교세포 활성화 및 신경교세포 매개 신경염증은 PD 병리학에 관여합니다[29]. 성상세포는 WT 마우스의 흑질선조체 경로에서 현저하게 증가한 반면, GFAP와 성상세포는 선조체에서 증가했지만 miR의 SNpc[F(1, 8)=5.412, P=0.0484]에서는 증가하지 않았습니다. -29b2/c KO 마우스 MPTP 주입 3일 후. 특히 성상 세포 밀도는 WT 및 MPTP로 처리된 miR-29b2/c KO 마우스의 두 영역에서 차이가 없었습니다(그림 4A, 4B). Iba 1과 미세아교세포는 WT 생쥐의 흑색질과 WT와 miR{{21} }MPTP 투여 후 b2/c KO 마우스. 더욱이, miR-29b2/c KO 마우스에서 MPTP 주입은 소교세포 밀도를 상당히 감소시켰습니다(그림 4C, 4D).

2. 1차 배양 성상세포에서 miR-29b2/c 결핍의 영향

miR-29b2/c 결핍이 성상 세포 증식 및 이동에 영향을 미치는지 테스트하기 위해 스크래치 분석을 활용했습니다. 1차 miR-29b2/c KO 성상세포는 증식 및 이동 능력에 차이를 보이지 않았습니다. 1차 WT 및 miR-29b2/c KO 성상세포의 세포 생존력은 기준선에서 차이를 나타내지 않았습니다. MPP와 중독 후, WT 성상세포의 세포 생존율은 대조군에 비해 더 높았지만, 돌연변이 성상세포의 생존율은 변하지 않았습니다[F(1, 18)=5.727, P=0.0278 ]. 향상된 ROS 생성물 및 포도당 흡수는 MPP 플러스 처리된 WT 및 miR-29b2/c KO 성상세포에서 관찰되었습니다.

시스탄체 튜불로사

MPP 플러스 처리된 성상교세포에서 신경영양 인자, 염증 관련 분자, 성상세포 A1형 및 A2형 마커 유전자의 발현 수준을 측정하였다. 챌린지 12시간 후, WT 및 miR-29b2/c KO 성상세포에서 BDNF의 발현이 증가하였다(도 5A). TGF- 1 발현 수준은 MPP 플러스에 노출된 후 WT 성상교세포에서 상당히 상향 조절된 반면, miR- 29b2/c KO 성상교세포에서는 기준선과 이후 모두에서 야생형 성상교세포와 비교할 때 하향조절되었습니다. 중독(그림 5B). TNF 전사체의 기본 수준은 WT 성상세포와 비교할 때 miR-29b2/c KO 성상세포에서 더 낮았습니다. 12시간 처리 후 WT 및 miR-29b2/c 성상세포에서 IL-1, IL-6 및 COX-2의 발현 수준이 크게 증가한 반면 TNF 전사체 WT 성상교세포에서만 상승했고 IL-1 , TNF 및 COX-2 전사체는 miR-29b2/c KO 성상교세포에서 야생형 대응 세포와 비교했을 때 감소했습니다(그림 5C). . A1 마커 H2-T23 및 A2 마커 CD14는 WT 대조군과 비교할 때 PBS로 처리된 miR- 29b2/c KO 성상세포에서 현저히 낮았습니다. 12시간 처리 후, A1 마커 H2-D1, Ggta1 및 C3, A2 마커 Clcf1 및 S100 10는 WT 및 miR-29b2/c KO 성상세포 모두에서 상향조절되었습니다. H2-T23은 WT 성상세포에서만 증가했습니다. Gbp2와 CD14는 성상교세포의 두 유전자형에서 변하지 않았다. 또한 H2-T23, H2-D1 및 CD14의 전사체는 WT 대조군과 비교할 때 miR-29b2/c KO 성상세포에서 하향조절되었습니다(그림 5D, 5E). 처리 후 12시간 및 24시간 후 AMPK 단백질 및 인산화된 AMPK 단백질의 수준은 WT 성상세포에서 변경되지 않았지만 MPP 플러스 챌린지 24시간 후 AMPK 단백질 수준은 miR-29b2/ c KO 성상 세포 및 돌연변이 성상 세포에서 p-AMPK 대 AMPK의 비율은 WT 성상 세포 및 PBS 처리 돌연변이 성상 세포와 비교하여 증가했습니다 (그림 5F). 또한 PBS 또는 LPS(약칭 CM 및 LCM)로 처리된 BV2 세포의 조절 배지를 사용하여 WT 및 miR-29b2/c KO 마우스의 1차 성상세포를 자극했습니다. p-AMPK 단백질의 발현은 LCM 처리 12시간 후 변화가 없었지만 WT 성상교세포에 비해 miR-29b2/c KO 성상교세포에서 유의하게 높았다. 우리는 pAMPK 단백질이 LCM의 24회 처리 후 성상교세포의 두 유전자형 모두에서 증가하는 것을 관찰했습니다. LCM 자극은 COX- 2 단백질[F(2, 18)=10.29, P=0.0010]의 발현을 현저하게 증가시켰지만, COX-2 단백질 수준은 miR-29b2/c KO 성상세포는 WT 성상세포에 비해 감소했습니다(그림 5G). LCM 처리된 miR-29b2/c KO 성상세포의 아질산염 농도도 LCM 처리된 WT 성상세포에 비해 상당히 낮았습니다[F(2, 30)=17, P<0.0001] (Figure 5H). Further, the expression of senescence marker genes was evaluated. 12 h-treatment of MPP+ increased p53 transcript levels in both WT and miR- 29b2/c KO astrocytes. p19 and Pai1 transcripts were elevated only in WT astrocytes, and Pai1 expression levels in miR-29b2/c KO astrocytes were decreased compared to WT astrocytes after the treatment. Moreover, Bcl-2, Bax protein levels, and the ratio of Bcl-2 to Bax did not change in WT and miR-29b2/c KO astrocytes.

3. 1차 배양 미세아교세포에서 miR-29b2/c 결핍의 영향

염증 자극에 대한 miR-29b2/c 결핍 소교세포의 반응을 측정하기 위해 LPS를 사용했습니다. BDNF 발현 수준은 기준선에서 miR-29b2/c KO 미세아교세포에서 더 낮았습니다. LPS 처리 4시간 및 8시간 후 WT에서 IL-1, IL-6, TNF 및 COX-2 전사체의 양은 증가한 반면 IGF-1 발현은 감소하였다. 및 miR-29b2/c KO 미세아교세포, BDNF의 발현은 WT 미세아교세포에서만 감소[F(2, 27)=41.5, P<0.0001]. IL-10 transcript increased in WT and miR-29b2/c KO microglia [F(2, 27) = 3.753, P=0.0365], and TGF-β1 transcript decreased in WT microglia at eight hours after the LPS challenge. BDNF and TGF-β1 transcripts were not changed in miR-29b2/c KO microglia. In addition, IL-6 transcripts were significantly reduced in miR-29b2/c KO microglia after the challenge compared to WT controls, IGF-1 and IL-10 transcripts were markedly higher in miR-29b2/c KO microglia after four and eight hours of intoxication, respectively (Figure 6A–6C). At baseline, the p-AMPK protein level and pAMPK to AMPK ratio were dramatically elevated in miR-29b2/c KO microglia when compared with WT microglia. 24 h after the treatment of LPS, p-AMPK level [F(1, 17) = 5.066, P=0.0379] and the ratio [F(1, 17) = 5.537, P=0.0309] were elevated only in WT microglia (Figure 6D). At one hour after the treatment, the phosphorylated-NF-κB p65 (p-p65) proteins and pp65 to p65 ratio, but not p65 proteins, increased in wildtype and miR-29b2/c KO microglial cells, yet the ratio decreased modestly in miR-29b2/c KO microglial cells when compared with WT microglia (p=0.071) (Figure 6E). The expression of COX-2 was enhanced in the two genotypes of microglial cells; whereas, the level of COX-2 in mutant microglia decreased when compared with WT controls after 24 h-treatment of LPS [F(1, 17) = 5.33, P=0.0338] (Figure 6D). Nitrite product was induced by the treatment of LPS in both genotypes of microglia, however, it was dramatically lower in miR- 29b2/c KO microglia at baseline and after the treatment of LPS [F(1, 20) = 14.03, P=0.0013] (Figure 6F).

논의

miR-29 계열 구성원의 발현은 개인이 나이가 들면 여러 조직에서 상향 조절됩니다[30-32]. 우리 연구실과 다른 사람들의 작업은 miR-29과 파킨슨병 사이의 연관성을 보여주었습니다[33]. 본 연구에서는 노화와 파킨슨병에서 miR- 29b2/c의 역할을 연구하였다. miR-29은 조직, 종, 발달 단계에 따라 노화 촉진 및 노화 방지 효과를 발휘합니다. 우리는 3-한 달 된 miR-29b2/c KO 마우스가 정상적인 골격과 지방 조직을 가지고 있고 4-한 달 된 miR- 29b2/c KO 마우스가 있음을 발견했습니다. 다른 연구[11, 34]와 일치하는 WT에 비해 더 가벼운 체중을 나타냈습니다. 3-개월된 miR- 29b2/c KO 생쥐에서 근육 약화와 불안정한 보행이 감지되었습니다. 13개월 된 miR-29b2/c KO 마우스는 진피 비후를 보였다. 그러나 그들은 대퇴골의 정상적인 미세 구조를 가졌습니다. 체중 감소는 16-개월된 miR-29b2/c KO 생쥐에서 나타났습니다. 이 나이에 miR-29b2/c KO 생쥐는 복부 지방과 갈색 지방이 적고 명백한 후만증을 보였습니다. miR-29는 p53- 매개 세포 주기 정지[35, 36] 및 p16/Rb 유도 세포 노화[37]에 관여합니다. 그러나 miR-29b2/c KO 마우스 뇌에서는 세포 노화가 분명하지 않았습니다. 따라서 miR-29b2/c는 노화 조절에 기여하지만 말초 조직과 뇌에서의 역할은 다를 수 있습니다.

miR-29의 혈청 수준은 건강한 대조군에 비해 PD 환자에서 하향 조절되었습니다[24]. 여기에서 우리는 PD 마우스 혈청에서 miR-29의 발현이 MPTP 투여 후 3일에서 120일까지 변동하는 것을 발견했습니다. miR-29은 뇌에 풍부합니다[6, 30]. GEO 프로파일을 통해 miR-29c 발현은 PD 환자의 흑색질에서 상향 조절되는 것으로 나타났습니다(p=0.0059, Mann-Whitney 테스트). }} 대조군과 비교했을 때 상전두이랑의 c 발현은 다르지 않았다(Student-T-test에 의한 p=0.47)(보충 그림 10). 여기에서 miR-29b2/c KO 마우스는 MPTP로 도전하여 PD 유사 손상을 유도했습니다. 돌연변이 마우스는 흑색선조체 도파민성 시스템에 덜 심각한 손상을 보였고 더 가벼운 신경교 활성화와 어느 정도 행동 저항성을 보였다. 따라서 miR-29b2/c는 PD의 병리학에서 해로운 역할을 합니다. 우리는 MPTP 유도된 마우스 PD 모델에서 p21, p53 및 Pai1 전사체의 선조체 수준이 변하지 않았음을 관찰했으며, 이는 세포 노화가 발생하지 않을 수 있음을 시사합니다. 노화는 파킨슨병 발병의 고위험 요인으로 간주되지만[38], 뇌의 노화 관련 변화, 특히 도파민 시스템이 더 관련 있는 요인일 수 있습니다.

기본 메커니즘을 조사하기 위해 WT 및 miR-29b2/c KO 마우스의 1차 아교세포를 배양했습니다. MPP + 치료는 miR-29b2/c 결핍 혼합 신경교세포에서 GDNF 발현을 증가시켰고 IL-1 발현을 감소시켰습니다. MPP 플러스는 또한 WT 성상세포에서 전염증성 유전자의 발현을 증가시켰지만 miR- 29b2/c-결핍 성상세포에서는 그렇지 않았습니다. 마찬가지로, 돌연변이 성상세포는 LPS로 처리된 BV2 세포의 컨디셔닝된 배지에 노출된 후 WT 성상세포에 비해 더 적은 NO를 생성했습니다. 1차 미세아교세포 배양에서 LPS 처리된 WT 대조군과 비교하여 항염증성 사이토카인 IL-10 및 신경영양 인자 IGF-1의 전사물이 현저하게 더 높았고 전염증성 사이토카인 IL{-1의 전사물이 현저히 높았습니다. {15}}는 LPS 처리된 miR-29b2/c KO 미세아교세포에서 감소했습니다. 기준선과 LPS 중독 후에 miR-29b2/c KO 미세아교세포에서 NO 수준이 감소했습니다. 연구에 따르면 miR-29과 많은 예상 표적 유전자가 대사 과정에 관여하는 것으로 나타났습니다[34, 39–41]. 필수 조절기로서 AMPK는 활성화될 때 PD를 보호하는 것으로 입증되었습니다[42]. AMPK의 활성화는 Sirtuin 1을 자극하고 NF-κB 활성화 및 다운스트림 염증 표적 유전자를 간접적으로 억제합니다[43]. 우리는 인산화된 AMPK 단백질 수준과 p-AMPK 대 AMPK의 비율이 각각 LCM 처리 및 MPP 플러스 처리된 miR- 29b2/c KO 성상세포에서 상향조절됨을 관찰했습니다. COX-2 단백질 수준은 WT 성상교세포에 비해 LCM 처리된 돌연변이 성상교세포에서 감소했습니다. 기준선에서 AMPK 활동은 miR-29b2/c KO 미세아교세포에서 증가했습니다. COX-2 단백질의 양은 LPS 처리 후 WT 대조군과 비교했을 때 miR-29b2/c KO 미세아교세포에서 상당히 감소했습니다. LPS 처리에서 p-p65 및 p65 비율은 돌연변이 미세아교세포에서 약간 하향 조절되었으며, 이는 완화된 NF-κB 신호 전달 경로를 암시합니다. 우리의 결과는 아교세포에서 향상된 AMPK 활성 및 감소된 염증 반응이 miR-29b2/c KO 마우스에서 흑질선조체 경로를 보호함을 나타냅니다(그림 6G). 결론적으로, miR-29b2/c는 흑질선조체 도파민 시스템의 노화와 손상에 중요한 역할을 합니다.

참조

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Xiaochen Bai 1,2, Xiaoshuang Zhang 1, Rong Fang 1, Jinghui Wang 1, Yuanyuan Ma 1, Zhaolin Liu 1, Hongtian Dong 1, Qing Li 1, Jingyu Ge 1, Mei Yu 1, Jian Fei 3,4, Ruilin Sun 4, 팡황 1

1. 상해 Jing'an District Center Hospital of Shanghai, State Key Laboratory of Medical Neurobiology and MOE Frontiers Center for Brain Science, Institutes of Brain Science, Institutes of Brain Science, Fudan University, Shanghai 200032, 중국 중개신경과학과

2. 재활의학과, Shanghai Jiao Tong University 부속 Sixth People's Hospital, Shanghai 200233, 중국

3. Tongji University, Shanghai 200092, 중국 생명 과학 기술 학교

4. 모델 유기체를 위한 상하이 공학 연구 센터, 상하이 모델 유기체 센터, INC, 상하이 201203, 중국