Cistanche Deserticola 추출물이 거세된 쥐의 음경 발기 반응에 미치는 영향
Jun 22, 2022
추상적인:시스탄체 데저티콜라(CD)는 수천년 동안 생식 기능에 대한 강장제로 간주되었습니다. CD 추출물의 효과음경 발기현재 연구에서 응답을 조사했습니다. 거세 수술 후 쥐에게 CD 추출물({0}}.45, 0.90, 1.8 g/kg)을 4주 동안 매일 위내 치료했습니다.음경 발기반응을 측정하고 실험이 끝날 때 혈청 호르몬을 분석했습니다. 라는 평가를 받았다.발기력더 길어졌고발기 기간sham-operatedcontrols에 비해 거세된 쥐에서 유의하게 짧습니다. 그러나 CD 추출은 단축되었습니다.발기 지연거세의 부정적인 영향을 최소화하기 위해 발기 기간을 연장했습니다. 0.9g/kg의 투여량에서 CD 추출물은 거세된 쥐의 혈청 황체형성 호르몬 농도를 정상 수준으로 조절했습니다. 이러한 결과는 CD가 음경 발기 반응을 촉진하고 혈청 호르몬 수치를 어느 정도 조절함을 나타냅니다.
키워드:시스탄체 데저티콜라; 발기 반응; 거세; 호르몬
소개
시스탄체호프. Et Link는 Orobanchaceae과에 속하는 속으로 주로 내몽골,신장, 중국, 이란, 인도, 몽골 등의 Ningxia 자치 지역. Cistanche종은 Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliatum 및 Tamarix 식물 등과 같은 모래 고정 식물의 뿌리에 일반적으로 부착되는 다년생 기생충 허브에 속합니다. (Jiang and Tu 2009). Cistanche 종의 줄기인 Herba Cistanche는 우수한 강장제로 간주되어 "사막의 인삼"의 영예를 얻었습니다. Cistanche 종 중 Cistanche Deserticola YC MA는 Cistanche의 1차 원료로 지정되어 있다(Stefanova et al.2011). 그러나 최근 몇 년간 과도한 수확으로 인해 중국에서 보호가 필요한 Class II 식물 중 하나로 수집된 야생 C. Deserticola(CD)의 천연 자원이 부족하여 C. salsa와 같은 이 속의 다른 종 및 C. sinensis도 일부 지역에서 대용으로 사용됩니다. ShenNong의 Chinese Material Medica(고대 약리학 개요서)에 처음 기록된 이래로 CD는 생식, 발달 및 생식 기능에 효과적이라고 주장되는 중국 전통 의학 이론에 따라 임상 실습에서 신장을 강화하고 "양"을 활성화하는 것으로 생각되었습니다. 한편 CD는 수백 년 동안 양고기, 감자 또는 쌀과 함께 끓여서 과긴장 유발 장애를 치료하는 강장제 식품을 생산하여 구두로 복용하는 것이 안전함을 시사합니다(Xiong et al.2013). 그러나 이러한 일화적 사용은 주로 현대 약리학적 개념의 관점에서 논의되는 제한된 과학적 정보와 함께 중국의 인큐나불라에 존재합니다. 발기 부전(ED)은 음경의 부적절한 발기 또는 성인 남성에서 충분히 오래 지속되지 않는 발기를 특징으로 하는 상태입니다(Cohan andKorenman 2000 ). 현대적이고 정교한 화학 작용제에 대한 반응으로 발기부전 치료를 위해 식물에서 효과적이고 안전한 약물을 찾는 데 새로운 관심이 생겼습니다(Adimoelja 2000). 이전 연구(Liuet al. 2009)에 따르면 CD 전기가 정상 쥐에서 음경 발기를 촉진했지만 발기 부전에 대한 CD의 영향과 관련된 데이터는 없었습니다. 동물에서 양측 고환 절제술을 사용한 외과적 거세는 거세의 표준으로 간주되었습니다. 조사 ED(Tombal 2005). 따라서 본 연구는 거세된 쥐의 발기 잠복기와 지속 기간을 조사하여 발기부전에 대한 CD의 잠재적 효과를 평가하기 위해 수행되었습니다.
재료 및 방법
Chemicals and materials Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98%는 National Institutes for Food and Drug Control(중국 베이징)에서 구입했습니다. HPLC 등급 메탄올은 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 구입했습니다. 정제수는 MilliporeMilli-Q Integral 3 System과 Q-POD Milli-Q System(Bedford, MA, USA)을 사용하여 제조하였다. C. Deserticola 줄기는 Shenzhen GURU Biology Co., Ltd(GuangDong, China)에서 구입하여 60mesh 체를 통과한 분쇄기로 미세한 분말로 분쇄했습니다. (Zhao et al.2011). 그런 다음, 100g의 건조 분말을 1.5L의 물에 1.5시간 동안 끓였습니다. 상온으로 식힌 후 혼합액을 2000rpm에서 10분간 원심분리(Eppendorf 5810R, Germany)하고 동일한 조건에서 침전물을 2회 재추출하였다. 결합된 상층액을 60도에서 진공 회전 증발기(Heidolph Laborota 4001-효율, 독일)로 농축한 다음 동결 건조하여 약 42%의 건조 추출물 분말을 얻었다. 후속 동물 실험을 수행할 때 건조 추출물을 상온에서 정제수에 녹였다.
실험 동물
성체 수컷 Sprague-Dawley 쥐(200-220g)를 Medicine Experimental Animal로부터 얻었다
광동성 중심(중국 광저우), 12-시간 광/암주기(실온(22-24도) 및 일정 습도(40-70 퍼센트))가 있는 온도 제어 구역에서 유지됨(특정 병원체 무함유) 실험실 및 급식. 실험 절차는 NationalInstitutes of Health Guide for Care and Use of LaboratoryAnimals.Experimental 절차를 준수했습니다.
투여 1주 전에, 50마리의 수컷 SD 쥐를 나트륨 펜토바르비탈로 복강내(40 mg/kg) 마취하고(Jung et al. 1999) 무작위로 5개 그룹을 할당했습니다: 가짜 수술 그룹(Sham)의 쥐를 제외하고, 나머지는 음낭 접근법을 통해 양측 거세되었습니다(Anderes 2{7}}03, Schlatt et al. 2002). 한편, CD 처리군은 0.45g/kg(저용량의 CD 추출물, LCD + Cas), 0.9g/kg(CD 추출물의 중앙값, MCD + Cas) 및 1.8g/kg(고용량의 CD)을 위내 투여하였다. 추출물, HCD + Cas) CD 추출물, 각각, 가짜 그룹과 거세 그룹에는 상응하는 양의 물만 투여했습니다. 모든 쥐는 다음 기관의 제거 및 후방 무게를 위해 사망 직후 개복술을 받았습니다: 포피샘, 정낭, 전립선 및 항문거근.
남근 발기 반응 측정
각 그룹에서 쥐의 발기 기능은 이전 방법에 따라 평가되었습니다(Ji et al. 2{5}}09, Luo et al.2006). 간단히 말해서, 스테인레스 스틸 양극 전극(BL420F Data Acquisition & Analysis System, TmeTechnology Co., Ltd, Chengdu, PR China)을 전기 자극(5 V) 0.2초의 펄스로 발기될 때까지 음경에 조심스럽게 위치시켰다. 자극으로부터 발기까지의 시간을 음경 발기잠복기로 기록하였고, 음경 발기반응이 관찰되었을 때 음경에서 전극을 빼낼 수 있었고, 음경이 발기된 상태를 유지한 시간을 발기시간으로 기록하였다.
혈액 샘플링 및 혈청 호르몬 분석
쥐를 나트륨 펜토바르비탈로 복강내(40mg/kg) 마취시켰다(Jung et al. 1999).
혈액 샘플을 채취하여 4도에서 4시간 동안 응고시킨 다음, 4도에서 5분 동안 4{25}}00rpm에서 원심분리하여 혈청을 수집하고(Eppendorf 5810 R, Germany) 즉시 -20도 냉동고에 보관할 때까지 추가 분석. 총 LH 및 FSH 수준은 제조업체의 지침(Matsumoto et al. 1986)을 참조하여 상업용 RIA(radioimmunoassay) 키트(Beijing NorthInstitute of Biological Technology, Beijing, China)를 사용하여 측정되었습니다. 경쟁적인 방사성 면역 기술에 따라 LH(또는 FSH)로 표시된 I{8}표시가 분석에 사용되었습니다. 간단히 말해서, LH(또는 FSH)로 표시된 100µl의 시약을 100µl 혈청 샘플에 첨가하고 다음과 함께 배양했습니다. 밤새 4도(또는 37도)에서 100μl 정제된 토끼 항체. 그런 다음 항원-항체 복합체에 당나귀-항토끼 면역분리제를 첨가하고 원심분리(3500rpm, 15분)하여 유리 및 항체 결합 125I-LH(또는 FSH)를 분리하였다. 그 후, 방사성 면역 분석 카운터(DMF{23}}, Zhongcheng electric technology development Co., Ltd., Hefei, China)에서 침전물의 방사능을 측정했습니다. LH와 FSHassay의 감도 한계는 모두 1.0mIU/ml였습니다.
통계 분석
데이터 분석은 SPSS 버전 16.{1}}소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다.
값은 평균 ± 표준편차(SD)로 표현되었습니다. 모수 데이터는 사후 LSD 테스트에 이어 일원 분산 분석(ANOVA) 분석을 사용하여 분석되었습니다. 비모수 데이터는 Kruskal-Wallis 테스트로 분석했습니다. 편차 확률이 0.05 미만이면 차이가 통계적으로 유의한 것으로 간주됩니다.
결과
CD 분말의 에키나코사이드 및 아세토니드 함량의 정량적 측정
CD 분말의 echinacoside 및 acetonide 함량은 1.27±{2}}.{4}}1% 및 0.52±0.003%로 중국 약전의 요구 사항에 부합했습니다. CD 분말의 HPLC 크로마토그램은 그림 1에 나와 있습니다. 1.
(4.6mm×250 mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, USA), 이동상: 0.5%(V/V) 아세트산 수용액(A) 및 메탄올( B) 구배(0분, A: B=25:75; 10-30분, A: B{10}}: 60, 30분, A: B=0: 100); 유속: 1ml/min; 검출 파장: 330 nm; 온도:30.
그림 2: 거세쥐의 음경 발기 잠복기 및 지속 시간. 데이터는 평균 ± SD(n=10)로 표시됩니다. ##피<0.01 relative="" to="" sham-operated="" group,=""><0.01 relative="" to="" castrated="" group.="" abbreviation="" (below):="" sham,="" sham-operated="" group;="" cas,="" castration="" control="" group;="" lcd="" +cas="" (0.45g/kg),="" mcd="" +cas="" (0.9g/kg)="" and="" hcd="" +cas="" (1.8g/kg),="" three="" groups="" of="" cd="" extract="" treated="" in="" castrated="">
그림 3: 거세된 쥐의 혈청 LH 농도에 대한 CD 추출물의 효과. 데이터는 평균 ± SD(n=10)로 표시됩니다. #피<0.05 relative="" to="" sham-operated="" group,="" *=""><0.05 relative="" to="" castrated="" group.="" body="" weights="" and="" relative="" accessory="" organs="" weights="" shown="" in="" table="" 1,="" all="" rats="" were="" of="" similar="" initial="" body="" weights="" with="" an="" increase="" from="" day="" 1="" to="" day="" 28.="" however,="" mean="" values="" in="" castrated="" group="" increased="" from="" 216.8±9.2="" g="" to="" 251.4±12.7,="" 283.3±15.1,="" 306.8±15.4="" and="" 322.2±18.4="" g,="" gaining="" less="" weights="" compared="" to="" the="" sham="" operated="" counterparts=""><0.05). there="" were="" no="" statistical="" difference="" between="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">
또한, 포피샘, 전립선 및 정낭 및 항문거근 근육이 거세된 쥐의 평균 상대 중량은 유의하게 낮았습니다(p<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="" extract.="" erectile="" response="" assessment="" in="" contrast="" to="" sham="" group,="" castration="" made="" the="" rats="" spend="" more="" time="" gaining="" penis="" erection="" under="" electric="" stimulation=""><0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" by="" 52.7%="" in="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" sham="" operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">
혈청 호르몬 수치
RIA 분석으로 분석한 결과, 거세된 쥐에서 LH의 평균 혈청 농도는 2.5{2}}±0.34mIU/ml로 가짜 수술 대조군에 비해 증가를 보였습니다(p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">
논의
우리의 결과는 거세가 현저한 부속 기관 위축과 함께 음경 발기 잠복기를 상당히 연장시키고 발기 기간을 단축시키는 것으로 나타났습니다. 그러나 CD 추출물은 거세된 쥐에서 음경 발기 반응을 촉진하고 혈청 LH 수준을 어느 정도 조절했습니다. 자발적 발기는 주로 해면체 평활근의 이완을 포함하는 세포, 분자 및 생리학적 메커니즘을 통해 안드로겐에 의해 자극되고 유지됩니다(Traish et al. 2007, Talha et al.2007). 불충분한 테스토스테론 수치는 이완 개시를 감소시키고(McClure 1988), 이에 따라 남성의 발기부전을 초래합니다(Bivalacqua et al. 2000).
특히 쥐의 경우 광범위한 전신 테스토스테론 농도가 {{0}} 퍼센트로 유지되며, 그 이하에서는 용량 의존적으로 발기 반응이 약화됩니다(Armagan et al. 2006). 본 연구에서는 모든 거세 쥐의 혈액 순환 테스토스테론 농도가 민감도 한계(0.02ng/ml)에 미치지 못할 정도로 낮았다(데이터는 결과에 나타나지 않음). 그러나 CDextract는 0.90g/kg 및 1.8g/kg에서 3회 투여 시 음경 발기 잠복기를 유의하게 단축하고 발기 기간을 연장했습니다. 이것은 아마도 일부 이전 연구에서 언급된 CD의 안드로겐 유사 효과의 결과일 것입니다(He et al. 1996a, He et al. 1996b). 전립선 및 정낭과 같은 일부 부속 기관은 안드로겐 의존적이므로 체중 변화는 체중 변화를 반영할 수 있습니다. 내분비 상태의 변화(Trisomboon et al. 2007, Jang et al. 2011).
테스토스테론의 역치 수준이 존재했으며 그 이하에서는 이들 기관의 테마 대사가 억제되었습니다(Trachtenberg1985). 우리 연구에서 거세가 테스토스테론 결핍으로 인해 부속 생식기의 무게를 감소시키는 것으로 확인되었습니다. 테스토스테론은 주로 고환 라이디히 세포에서 분비되며 황체 형성 호르몬(LH) 및 난포 자극 호르몬(FSH)과 같은 하체 호르몬에 의해 조절됩니다. 거세된 동물의 성기 기능을 유지하는 데 중요한 역할(Robert et al. 2004). 시상하부-뇌하수체-생식샘(HPG) 축은 폐쇄 루프 피드백 제어 메커니즘이므로 낮은 생식선 호르몬 수치는 차례로 LH와 FSH의 분비를 조절할 수 있습니다(Morales et al. 2004). 우리의 연구는 혈청 LH 수준이 거세된 쥐에서 유의하게 증가한 다음 0.90g/kg의 CD 추출물에 의해 정상 수준으로 감소했음을 조사했는데, 이는 LH 수준이 증가하면 발기부전의 위험이 더 높다는 이전 결론과 일치했습니다(Kupelian et al. 2006).
고환에서 LH는 피드백 제어가 비교적 일관된 테스토스테론의 합성 및 방출을 자극하는 반면, FSH는 피드백 제어 복합체와 함께 영양 공급을 위해 Sertoli 세포에 직접 작용합니다(Hellqvist et al. 2008). 이러한 발견은 CD가 안드로겐 유사 효과를 발현하며, 이는 FSH보다 혈청 LH 감소에 주로 책임이 있을 수 있다는 추측을 더 뒷받침합니다. 현재 관찰에서 수컷 쥐의 체중 발달에 대한 거세의 영향은 이전 연구(Christoffersen)의 발견과 유사했습니다. et al. 2006), 반면 암컷 쥐의 결과와는 반대입니다(Pantaleão et al. 2010). CD 추출물은 체중을 유의하게 개선할 수 없었으며, 이는 치료 기간이 충분하지 않거나 전반적인 건강 상태에 미치는 복합적인 영향 때문일 수 있습니다. 결론적으로 거세는 음경 발기 기간을 연장하고 기간을 현저히 단축시키며, 혈청 LH 증가 및 부속 성기 위축, CD 추출물은 거세된 쥐의 발기 잠복기를 단축하고 발기 기간을 연장하여 음경 발기 반응을 촉진했습니다. 이러한 효과는 아마도 CD 추출물이 특히 0.90g/kg의 투여량에서 혈청 LH 농도를 정상화한다는 관찰에 의해 뒷받침되는 안드로겐 유사 효과 때문일 것입니다.
그러나 ED 시상하부 및 변연계 수준에 대한 CD 추출물의 효과를 입증하려면 추가 증거가 필요하며 현대 세계에서 이 귀중한 전통 의학에 더 많은 관심을 기울일 수 있습니다.
