ABSTＲACT

목적: 일반적인지 여부를 명확히 하기 위해시스타노사이드( GC) 개선인지 장애쥐의 특정 안드로겐 수용체(AＲ)를 매개하여 급속하게 노화되는 쥐(SAMP8)시냅스 단백질 발현 조절． 

방법: 총 76 7-개월 된 수컷 SAMP8 마우스를 모델 그룹, GCs 그룹, GCs + flutamide(F) 그룹, GCs + fulvestrant(ICI) 그룹, F 그룹 및 ICI 그룹으로 무작위로 나누었습니다. 각 그룹의 쥐의 학습 및 기억 기능은 Morris 수중 미로를 사용하여 테스트되었습니다. Western blotting과 RT-PCR을 이용하여시냅토파이신의 발현 수준각 그룹의 생쥐의 시냅스후 밀도 - 95( PSD - 95), 뇌유래 신경영양인자( BDNF).

결과: GC는 SAMP8 마우스의 학습 및 인지 기능을 크게 향상시켰습니다.

GCs 그룹과 비교하여 GCs + F 그룹 및 GCs + ICI 그룹 쥐의 학습 및 기억 기능이 크게 저하되었습니다. Western blotting과 RT-PCR 결과, BDNF, SYN, PSD-95의 발현 수준은 Model 그룹에 비해 GCs 그룹에서 단백질 수준과 유전자 수준에서 유의하게 증가한 것으로 나타났다(P ＜ 0. {{ 11}}5) ． SYN 발현 수준은 GCs + F 및 GCs + ICI 군에서 증가하였고, BDNF 및 PSD − 95의 발현 수준은 GCs 군에 비해 GCs + F 및 GCs + ICI 군에서 유의하게 감소하였다(P ＜ 0. 05) ．

결론: GC는 AＲ를 구체적으로 중재하여 SAMP8 생쥐의 시냅스 가소성을 향상시켜 학습 및 인지 기능을 향상시킬 수 있습니다.

키워드:일반 시스타노사이드; 안드로겐 수용체; 시냅스 가소성; SAMP8 마우스

시스탄체 보충제 인지기능 개선 식이보충제 PhGs75% Ech 30% Act 12%

알츠하이머병(AD)는 일반적이다신경퇴행성질환, 임상적으로 점진적인 인지 기능 저하와 정신적, 심리적 상태의 변화를 특징으로 합니다[1]. 연구에 따르면 남성 AD 환자의 테스토스테론 수치는 정상 남성보다 현저히 낮은 것으로 나타났습니다.

그만큼환자의 인지 기능이후 다양한 수준으로 개선되었습니다.케톤 대체 요법이는 연령과 관련된 안드로겐 수준의 감소가 노인 남성의 AD 위험 요인일 수 있음을 나타냅니다.

Cistanche Deserticola 총배당체(일반 시스타노사이드, GCs)는 AD 관련 학습을 향상시킬 수 있는 Cistanche Deserticola의 주요 추출물 중 하나이며인지 장애[삼]. 또한, 위관 영양법으로 GC를 투여하면 동물의 테스토스테론 수치가 크게 증가했습니다[4]. GC는 또한 양을 촉진하는 기능을 가지고 있으며

안드로겐 유사 약력학적 효과. 이전 연구에서는 테스토스테론이 AD 모델 동물의 학습 및 인지 기능을 향상시킬 수 있다고 보고했으며, 이 과정은 특정 안드로겐 수용체(안드로겐 수용체, AR) 매개에 의존합니다[5].

AD 환자의 인지 장애는 시냅스 가소성과 밀접한 관련이 있다는 것이 잘 알려져 있습니다. 그러나 GC가 시냅스 가소성을 조절하여 학습 및 인지 기능을 향상시키는 구체적인 메커니즘은 아직 명확하지 않습니다. 이 연구의 목적은 GC가 특정 ARＲ을 중재하여 시냅스 가소성에 영향을 미치고 이를 통해 AD의 학습 및 인지 기능을 향상시키는지 여부를 조사하는 것입니다.

1 재료 및 방법

1. 1 실험동물 및 장비

3-개월 된 수컷 SAMP8 마우스를 Peking University School of Medicine(SCXK [Beijing] 2016-0010)에서 구입하여 7개월이 될 때까지 키웠습니다. 동물은 (24 ± 1)도의 깨끗한 환경에 보관되었으며,

동물에게는 자연 채광이 제공되고 음식과 물에 대한 자유로운 접근이 제공되었으며 실험 동물 사용에 대한 3R 원칙에 따라 인도적 관리가 제공되었습니다. 이 실험 연구는 바오터우 의과대학 실험동물윤리위원회(바오터우 의과대학 번호 20201102)의 승인을 받았습니다.

실험의 주요 시약은 다음과 같습니다.Cistanche Deserticola 총배당체(GCs, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); 안드로겐 수용체 길항제-플루타미드(Sigma Company, USA); 에스트로겐 수용체 길항제-풀베스트란트(ICI 182780, USA) Med Chem Express); 토끼 항마우스 BDNF 항체,

PSD-95 항체, SYN 항체, -actin 항체(미국 Proteintech Company); 단백질 전기영동 용액, 단백질 전달 용액, TEMED, 아크릴아미드 완충액, 과황산암모늄, Tris(Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNA 합성 키트, Talent 형광 정량 검출

시약 키트(Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.) 등 주요 실험 장비에는 수직 평판 전기 영동 탱크, 전기 영동 장치, 이송 탱크, 탈색 진탕 장치(Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), 단백질 겔 이미징 분석 시스템이 포함됩니다. (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), 실시간 형광 정량 PCR 장비 (USA Roche) 등

1. 2 그룹화 및 관리

2마리의 생쥐는 섭식과정에서 자연사하였고, 나머지 78마리의 생쥐는 무작위로 모델군, GCs군, GCs+flutamide(F)군, GCs+fullvestrant(ICI)군, F군, ICI로 나누었다.

각각 13마리의 동물로 구성된 그룹입니다. 모델군, F군, ICI군을 제외한 나머지 군에는 50mg/(kg·d)의 용량으로 30일 동안 지속적으로 GC를 투여하였다.

GCs 투여 후 24일째부터 GCs + flutamide(F)군과 GCs + fulvestrant(ICI)군에는 GCs 투여 30분 후 F(5mg/kg/d)를 복강내 주사하였다. 위관 영양으로. ), ICI(1 mg/kg/d), 7일 동안 연속 주사. 마우스의 최대 위 부피가 0.5 mL, 1회/d가 되도록 투여 농도를 조정하십시오.

1. 3 모리스 수중 미로 테스트

생쥐는 하루 전에 물 환경에 적응했습니다. 모리스 수중 미로(Morris water maze)는 6일 동안 지속되었습니다. 처음 5일은 위치 확인 및 항법 테스트였습니다. 생쥐는 하루에 한 번씩 4개의 사분면에서 매번 1분씩 훈련을 받았습니다. 각 훈련 간격은 15분이며 동시에 기록을 기록했습니다. 동물 위치 파악 및 항법 테스트의 탈출 대기 시간; 6일째에는 플랫폼을 물에서 꺼내 우주탐사 시험을 실시한다. 플랫폼 교차 횟수와 마우스의 대상 사분면에서 소요된 시간의 백분율을 기록합니다. 목표 사분면) 및 공간 탐색 수영 궤적(공간 프로브 테스트의 수영 궤적) 및 기타 지표.

1. 4 웨스턴 블롯 검출

SYN, PSD-95 및 BDNF 시냅스 관련 단백질의 발현. 모리스 수중 미로 테스트 후, 모든 생쥐는 정기적으로 마취되었으며, 머리가 잘리고, 뇌가 제거되었으며, 해마가 벗겨졌습니다. 해마 조직을 단백질 용해하고 4도에서 초음파로 파쇄한 후 얼음 위에 30분 동안 방치하고 12,{5}}r/min, 4도에서 15분 동안 원심분리했습니다. 상등액을 취하여 BCA법을 이용하여 단백질 농도를 측정하였다. 단백질을 로딩한 후, 80V의 일정한 전압에서 스태킹 젤 전기영동, 120V의 일정한 전압에서 분리 젤 전기영동, 300mA의 일정한 흐름에서 습식 전달을 수행합니다. PVDF 멤브레인을 꺼내어 5% 탈지유로 실온에서 80분간 차단한 후 TBST로 멤브레인을 3회 세척합니다. 15분/회, 1차 항체를 진탕 테이블에서 4도에서 밤새 인큐베이션했습니다. 다음날, 막을 TBST로 3회 세척하였다.

15분/회, 2차 항체를 실온에서 2시간 동안 배양한 후 ECL 발색을 수행하고 화학발광 이미징 시스템을 이용하여 이미징을 수행하였다. -actin을 내부 기준으로 사용하였고, Image J 소프트웨어를 사용하여 밴드의 광학 밀도 값을 분석했습니다.

1. 5ＲRT-PCRＲ검출

SYN, PSD{0}} 및 BDNF의 mRNA 발현은 해마 조직의 총 RNA로부터 Trizol 추출 방법에 따라 추출되었으며, 역전사 후 cDNA가 생성되었습니다. 상대적 형광 정량 검출에는 Talent 형광 정량 검출 키트를 사용했습니다. 실험을 3번 반복하였고 그 결과를 2 -로 환산하여 ΔΔCT를 분석하였다. Mouse -actin, SYN, PSD-95 및 BDNF 프라이머는 Shanghai Sangon Company에서 디자인했으며 프라이머 서열은 표 1에 나와 있습니다.

1. 6 통계분석

처리는 SPSS 25.0 통계 소프트웨어를 통해 Graphpad Prism 8 소프트웨어를 사용하여 통계 그래프를 작성하였고, One-way ANOVA를 사용하여 여러 표본의 쌍평균을 비교하였다. P < 0. 05는 차이가 통계적으로 유의하다는 것을 의미합니다.