피부 광노화에 대응하고 장벽 무결성을 회복하기 위한 혁신적인 전략으로서의 Salvia Haenkei의 추가 평가

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요약:피부는 여러 기능을 수행하는 인체의 필수 장벽입니다. 내인성 요인은 외부 공격과 함께 지속적으로 피부 무결성에 영향을 미치며 피부의 외양뿐만 아니라 다양한 생리 기능에도 영향을 미치는 뚜렷한 구조적 변화를 일으킵니다. 장벽 기능의 변화는 질병 및 부작용의 발병 위험을 증가시키므로 표피 장벽의 완전성을 유지하고 피부 노화 과정을 늦추는 것이 중요합니다.cistanche 음경 성장Salvia hankie(SH)는 최근 잠재적인 노화 방지제로 확인되었습니다. 그 추출물은 ll.1a 방출에 영향을 미치고 활성 산소 종(ROS) 생성을 감소시켜 노화 세포의 수준을 감소시킬 수 있습니다. 이 연구에서 SH 추출물은 자유 라디칼 및 자외선 B 방사선과 같은 세포의 조기 노화와 관련된 스트레스 요인에 노출된 인간 각질세포 세포주(HaCaT)에서 테스트되었습니다. 우리는 SH가 ROS의 스캐빈저(scavenger) 역할을 하고 세포골격 구조를 강화하고 단단한 접합부를 밀봉하며 세포의 이동 속도를 증가시켜 피부 장벽 무결성을 복원하는 능력을 발견했음을 확인했습니다. 이러한 결과를 감안할 때 이 작업은 임상 수행에서 노화 방지 피부 치료에 유용한 화합물로 Salvia hankie를 식별하는 관련성이 있습니다.

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소개

건강하고 기능적인 피부는 100%, 미생물, 알레르겐, 자극 물질 및 방사선으로부터 다양한 탈수 및 침투를 보호하는 데 필수적입니다. 유전학, 세포 대사, 호르몬 및 대사 과정과 같은 몇 가지 내재적 요인과 결합된 외인성 물질에 매일 노출되면 피부가 자연적으로 노화됩니다[1]. 특히 피부노화 현상은 자외선, 공해, 반복적인 근육사용, 중력과 큰 관련이 있다[2, 3]. 따라서 피부 노화는 누적된 구조 및 생리학적 변화와 피부층의 점진적인 조절로 인해 발생합니다[2, 4, 5]. 노화가 병적인 상태가 아니라 생물학적이고 불가피한 과정으로 간주되더라도 다양한 피부 질환과의 상관관계는 이제 잘 확립되어 있습니다. 가장 관련성이 높은 연령 관련 피부 질환이 퇴행성 질환, 양성 및 악성 신생물 등임을 고려할 때, 특정 피부 질환의 치료 또는 예방을 위한 스킨케어의 중요성은 자명하다.[{8}}]. 오늘날, 피부 노화 방지 전략은 광/시간적 노화의 진피 및 표피 징후를 역전시키는 작용을 합니다. 접근 방식에 따라 미용 치료, 국소 약제, 침습적 시술, 전신 약제, 노화 외인성 요인 방지, 생활 습관 및 습관 교정, 예방의학으로 분류할 수 있습니다[9]. 노화 방지 제제의 구성 요소로 사용할 수 있는 두 가지 주요 제제 그룹이 있습니다. 1. 콜라겐 대사 및 생산에 직접 작용하는 레티놀, 펩티드 및 성장 인자와 같은 세포 조절제; 2. 비타민, 폴리페놀, 플라보노이드와 같은 항산화제는 콜라겐 분해를 감소시킬 수 있습니다[9].

실질적인 증거는 피부 노화가 주로 내인성 산화 세포 대사 동안 생성되는 ROS에 의해 주도된다는 생각을 뒷받침합니다[10,11]. ROS 축적은 지질 과산화, 막 단백질 손상 및 구조적 및 기능적 피부 변화를 유발하는 DNA 돌연변이를 포함한 세포 손상의 원인이 되는 것으로 알려져 있습니다. 시간이 지남에 따라 인간 세포는 항산화 방어의 부분적 손실과 관련된 ROS 수준의 자연적인 증가를 뒷받침합니다. 이 불가피한 상태는 기질 금속단백분해효소(MMP) 합성을 유도하고 결과적으로 MMP 매개 콜라겐 파괴를 유도하는 매일의 자외선 조사(UVR)에 의해 더욱 촉진됩니다[12, 13]. 생체 내 연구는 미토콘드리아 산화 손상, 세포 노화 및 노화 표현형 사이의 인과 관계를 입증했습니다[10, 14].

세포 노화는 노화[{0}}] 동안 모든 인간 세포에서 발생하는 세포 성장의 안정적인 정지로 정의됩니다. 종양유전자 과발현, ROS 생성 및 DNA 손상(예: UVR, 특히 UVB 광에 의해 유도됨)과 같은 스트레스 이벤트의 결과로 세포가 조기에 노화될 수 있습니다[18].시스탄체 살사 혜택이 시나리오에서 노화 세포의 축적을 방지하거나 선택적으로 죽일 수 있는 혁신적인 전략을 개발하여 노화 및 노화 관련 장애에 대처하는 것이 중요하다는 것이 분명해 보입니다. 최근에 우리는 비타민 B와 항산화 특성이 풍부한 볼리비아 식물인 Salvia hankie(SH)가 잠재적인 노화 방지제임을 확인했습니다[18].

시간 경과에 따른 노화 세포의 축적은 조직이 노화 과정을 겪는 가장 중요한 메커니즘 중 하나로 잘 알려져 있으며, 이는 주로 전형적인 염증 상태의 지속에 의해 유발되는 것으로 보입니다. 실제로 노화 세포는 증식할 수 없음에도 불구하고 높은 대사 활성을 가지며 여러 가지 전염증성 분자를 효율적으로 생성합니다[19]. 피부 인간 표피(EpiSkin) 모델을 사용하여 SH 추출물이 ILla 방출에 영향을 미치고 ROS 생성을 감소시켜 노화 세포의 수준을 감소시킨다는 것이 실제로 입증되었습니다[18].

항상성 조건에서 피부는 외부 공격 및 내인성 요인으로부터 보호하고 체액, 전해질 및 단백질의 손실을 조절하는 효율적인 장벽입니다. 이 중요한 작업은 주로 역동적이고 고도로 계층화된 상피인 표피에 기인합니다. 두 가지 주요 표피 구성 요소는 외부 층인 각질층과 과립층에서 인접한 각질 세포를 봉인하는 세포간 접합인 밀착 접합(TJ)입니다. 세포-세포 유착은 표피-장벽 무결성을 유지하는 데 필요합니다.cistanche tubulosa 복용량 레딧이 중요한 기능은 AJ(adherens junctions), desmosomes 및 tight junction과 같은 특수화된 세포-세포 접합에 의해 수행됩니다. 이러한 구조는 세포 간의 물리적 연결을 허용할 뿐만 아니라 전반적으로 세포골격 요소를 구성하고 조직 발달, 구조 및 생리에 관련된 신호 전달 경로를 조절합니다. 최근의 유전 연구는 예기치 않게 접합 단백질의 비정규적 역할을 밝혀, 접합 누화, 상호 의존성 및 조직 견고성을 허용하는 보상의 중요성을 드러냈습니다[21].

여기에서 우리는 광/연대기 피부 노화에 대한 보호 효과를 담당하는 분자 메커니즘을 이해하기 위해 샐비어 haenkei 추출물의 활성을 연구했습니다. 이러한 관점에서 인간의 자발적 불멸화 각질형성세포(HaCaT)가 시험관 내 모델로 사용되었고 SH 작용 메커니즘은 H2O2 및/또는 UVB 조사에 의해 유도된 스트레스 조건뿐만 아니라 기초 요법 하에서 분석되었습니다.

결과

SH 추출물의 안전한 프로필 및 노화 방지 특성 피부의 산화 스트레스는 노화 과정과 여러 피부 질환의 발병에 중요한 역할을 합니다[22]. Matic et al. Salvia haenkei의 항노화 활성도 소거 특성과 상관관계가 있음을 이미 입증했습니다[18]. 이러한 보호 효과는 장벽의 완전성을 보존할 수 있는 새로운 피부 복구 치료법을 개발하는 데 활용될 수 있습니다. SH 특성을 심층 조사하기 위해 HaCaT 세포 모델에서 세포 생존 및 ROS 생성에 대한 추출물 활성을 먼저 확인했습니다.

Cistanche 캔 안티 에이징

세포 생존력 분석은 케라티노사이트에 대한 샐비어 해케이 추출물의 가능한 세포독성 효과를 다루기 위해 수행되었습니다. HaCaT 세포를 SH 추출물(0.{1}} ug/ml)로 24시간 및 48시간 동안 처리했습니다. 세포 생존력은 Trypan blue Exclusion Assay에 의해 평가되었습니다. 그림 1A 및 1B는 SH 추출물 처리가 사용된 실험 조건에서 HaCaT 세포에 대한 추출물의 안전성 프로파일을 확인하는 세포 생존력에 영향을 미치지 않음을 보여줍니다.

ROS 생성에 대한 샐비어 해케이 추출물의 활성은 처리 3-24시간 후와 H2O2 노출 전후에 HaCaT 세포에서 분석되었습니다.

그림 2A의 결과는 SH가 특히 3-시간 처리 시간 동안 세포 내의 기초 ROS 수준을 감소시킬 수 있음을 보여줍니다. H-Oz 자극 후 ROS 수준의 상당한 증가 외에(그림 2C), SH는 ROS의 생성을 방지할 수 있습니다. SH 추출물(0.01 ug/ml)은 산화 자극에 의해 유도된 ROS 생성을 현저히 감소(-25%)하여(그림 2B), 처리 3시간 후 NAC와 유사한 효과를 보여줍니다. SH 처리 24시간은 1 및 10 ug/ml에서 ROS 수준을 상당히 감소시키는 데 있어 보다 효과적인 ROS 중화 증가로 보입니다(그림 2B). 이 결과는 Salvia haenkei를 확인합니다

이전에 관찰된 바와 같이[18] 항산화 효과는 짧은 치료에서 이미 시작되는 항산화 기초 효과를 나타냅니다. 산화 자극 유발 증가를 방지하는 효과는 더 긴 치료 시간과 가장 관련이 있습니다.

자외선은 인간 피부에서 세포 내 ROS 수준의 증가를 유도하여 손상 및 조기 노화 및 기타 병리를 유발하는 것으로 보고되었습니다[{0}}]. 따라서 UVB 매개 ROS 생성에 대한 SH 추출물의 효과가 평가되었습니다. 예상대로 그림 3C의 결과는 UVB 자극 후 세포 내 ROS 수준의 상당한 증가를 보여줍니다. 세포 내 기초 ROS 수준을 감소시키는 경향을 유도하는 SH 처리(그림 3A)는 UVB 자극에 의해 유도된 증가를 방지할 수 있습니다(그림 3B). 3시간의 SH 처리는 ROS 수준을 감소시키는 경향을 유도합니다. 더 긴 SH 처리는 산화 스트레스에 대응하는 데 더 효과적이며 그림 3A에 보고된 바와 같이 상당한 감소를 보여줍니다. 이러한 데이터는 UVB 매개 산화 스트레스에서도 Salvia haenkei의 항산화 활성을 강조합니다.

언급한 바와 같이 노화 세포가 시간순으로 그리고 광노화 피부에 축적되어 노화 관련 피부 변화 및 병리학에 기여한다는 증거가 증가하고 있습니다[26]. 따라서 Salvia hankie의 효과는 에 의해 유도된 광 스트레스 후 p21 및 p27 노화 마커(망막모세포종 단백질(Rb)의 인산화를 방지하고 CDK{5}}cyclin E에 대한 억제 활성[27])에 대해 평가되었습니다. 자외선. 그림 4의 결과는 UVB 조사가 자극되지 않은 대조군과 비교하여 p21 및 p27 mRNA 수준의 상당한 증가를 유도한다는 것을 보여줍니다.시스탄체 แอ ม เว ย์증가 방지에 있어서 유사한 경향이 SH로 처리된 세포에서 관찰된다. SH 1 ug/ml는 UVB 자극 대조군과 비교하여 p21 수준의 상당한 감소를 유도하는 반면, 다른 농도는 감소하는 경향을 유도합니다(그림 4A). P27 수준은 SH 0로 전처리하면 상당히 감소합니다.{6}}1,0.1 및 10ug/ml(그림 4B).

노화 관련 분비 표현형(senescence-associated secretory phenotype, SASP)으로 알려진 케모카인, 사이토카인, 성장 호르몬 및 프로테아제의 전염증성 혼합물을 분비함으로써 노화 세포가 미세 환경에 부정적인 영향을 미친다는 것도 확인되었습니다. 도 5의 결과는 UVB 자극이 자극되지 않은 대조군과 관련하여 IL1a(A), IL6(B) 및 IL18(C)mRNA 수준의 상당한 증가를 유도함을 보여줍니다. SH로 전처리하면 사이토카인 수준의 증가에 대응하는 강력한 활성이 나타납니다. 도 5A에 나타낸 바와 같이, SH 10 ug/ml는 ILla 수준을 유의하게 감소시켰고; IL6의 증가는 SH 0.01,0.1 및 10ug/ml(그림 5B)에 의해 크게 상쇄되는 반면, 모든 테스트된 농도는 IL18 수준을 상당히 감소시킬 수 있습니다(그림 5C). 피부 장벽 유지 상피 세포주에 대한 위에서 보고된 결과를 고려하여 피부 장벽 유지 및 조직 손상 복구에 관련된 여러 단백질 및 프로세스에 대한 SH 추출물의 효과를 평가했습니다.

시르투인{0}} 식

여러 시험관 내 연구에 따르면 UVB 방사선은 인간 섬유아세포의 Sirtuinl(SIRT1) 단백질 수준을 감소시켜 UVB 매개 손상에 SIRT1이 관여함을 나타냅니다[29]. 따라서, Sirtuinl 단백질 발현에 대한 Salvia haenkei 추출물의 효과를 western blot assay로 평가하였다(Figure 6). 예상대로 UVB 자극은 HaCaT 세포에서 SIRTI 단백질 발현의 상당한 감소를 유도했습니다. 따라서 SIRT1 수준에 대한 SH 추출물의 활성을 조사했습니다. 흥미롭게도 결과는 대조군과 비교하여 1ug/ml SH 추출물이 기본 조건에서 SIRT1 발현 증가(+4{10}}%)를 유도했음을 보여주며, 이는 SIRT1 수준에 대한 잠재적 자극 효과를 나타냅니다. 예상대로 UVB 자극은 SIRT1 수준의 상당한 감소를 유도합니다. 결과는 0.01 ug/ml SH 추출물을 사용한 전처리가 UVB 처리된 대조군과 비교하여 Sirtuin 1 수준에서 개선 효과를 나타냄을 보여줍니다.

상처 치유 분석

각질 세포는 표피의 주요 구성 요소로 유기체와 환경 사이에 장벽을 제공합니다. 따라서 이들의 증식과 이동은 효과적인 장벽의 유지와 부상 후 상처 치유에 중요한 역할을 합니다[30, 31]. 따라서, HaCaT 세포 이동에 대한 SH의 효과를 평가하였다. 그림 7A의 이미지는 SH 처리가 HaCaT 세포 이동에 대한 영향을 나타내는 스크래치 두께의 감소로 이어진다는 것을 보여줍니다. 도 7B는 HaCaT 세포의 이동 속도의 kymogram 구성을 보고합니다. 이미지는 세포 이동의 농도 의존적 ​​증가를 보여줍니다. 도 7C의 그래프는 0.01ug/ml SH 추출물로 4-8시간 처리한 후 세포 이동 속도의 상당한 증가를 나타냅니다. 최대 증가는 8-12시간 간격에 도달하며, 여기서 세포 이동 속도 셀의 비율은 대조군에 대해 약 165%입니다. 이러한 데이터는 세포 증식에 ​​대한 결과로서, SH 추출물의 최저 농도가 과증식 표현형과 무관한 세포 이동 속도의 증가를 유도할 수 있음을 나타낸다.

단단한 접합의 유지 보수

TJ(tight junctions)는 각질층과 마찬가지로 피부 완전성에 중요한 역할을 하며 수분과 용질에 대한 장벽 역할을 하며 세포의 분화, 증식, 세포 극성 및 신호 전달 과정에 관여합니다. 최근 연구에서는 자외선이 TJ 구조의 단일 단백질의 발현과 위치를 변화시켜 피부의 장벽 기능을 교란시키는 것으로 나타났습니다[32].

TJ 파괴에 대한 가능한 보호제로서의 샐비어 haenkei 추출물의 효과를 평가하기 위해 UVB 방사선에 노출된 후 면역세포화학에 의해 occludin의 발현을 측정했습니다. 도 8A 및 8B의 이미지는 두 농도의 SH를 사용한 처리가 오클루딘 단백질 발현의 증가를 유도하여 표피 장벽 완전성의 유지에 유용한 접합 형성을 촉진함을 보여줍니다. 예상대로 UVB 방사선에 노출된 후 세포는 불규칙하고 정의되지 않은 멤브레인 링을 보여줍니다(그림 8A). 특히 더 높은 농도에서 SH 처리는 자극되지 않은 대조군에 필적하는 구조를 유지하는 막의 형태를 보존합니다. SH 추출물은 접합 강화를 촉진하고 UVB 노출로 인한 손상을 방지하여 피부 장벽의 기능을 유지합니다.

필라그린 표현

샐비어 해케이 추출물이 필라그린(FLG) 단백질 발현에 미치는 영향을 면역세포화학으로 평가하였다. 필라그린은 피부장벽의 발달과 유지에 필수적인 구조적 단백질입니다. 도 9A 및 9B의 결과는 SH 추출물로 24시간 처리한 후 필라그린 단백질 발현의 농도 의존적 ​​증가를 보여줍니다. 또한, F-액틴 단백질의 발현은 SH 처리 후 세포의 규칙적인 분포를 나타내며, 이는 상피 장벽의 잘 조직된 구조적 연속성을 유도합니다. 이 데이터는 SH가 피부 장벽에 유익한 영향을 미치고 피부의 올바른 형성과 기능에 필수적인 필라그린 발현을 개선함을 나타냅니다.

메탈로프로테이나제 발현

자외선에 노출된 피부는 세포외기질(ECM)의 손상을 유발하여 피부 노화의 주요 특징인 피부 주름, 처짐 및 늘어짐을 유발합니다. Matrix metalloproteinases(MMPs)는 콜라겐, 엘라스틴, 피브로넥틴, 프로테오글리칸과 같은 ECM 성분을 분해하는 주요 원인입니다[33].얼마나 많은 cistanche를 복용많은 연구에서 UV 조사에 대한 피부 노출이 다양한 MMP의 상향 조절을 유도하여 피부 외관과 건강에 영향을 미친다는 점을 강조합니다[{0}}].

그림 10의 결과는 UVB 방사선이 기저막 콜라겐과 변성된 구조 콜라겐을 분해하는 젤라티나제 MMP{1}}의 mRNA 발현을 증가시킴을 보여줍니다[38]. SH 처리는 MMP-2 mRNA 수준(SH 0.01-0.1-10 ug/ml)을 상당히 감소시킬 수 있으며, 이는 SH 추출물의 구조적 무결성 유지에 대한 활성을 나타냅니다. 광 스트레스로 손상된 피부.

논의

피부 노화는 내적 요인과 외적 요인이 복합적으로 작용하여 피부가 얇아지고 뻣뻣해지고 유연성이 저하되는 현상입니다. 피부는 유기체와 환경 사이의 첫 번째 장벽이므로 기능적 및 해부학적 완전성을 유지하는 것이 필수적입니다. 당뇨병, 갱년기 등과 같은 자연적인 노화 과정과 노화 관련 상태 외에도 피부 구조에 영향을 미치는 외부 요인이 일치할 수 있습니다. 특히 광손상, 오염 또는 생활 습관 요인(흡연, 다이어트, 정서적 스트레스 등)은 피부 구조와 기능을 방해할 수 있습니다[39,40]. 케라티노사이트는 표피의 주요 구성 성분으로, 가장 바깥쪽 장벽을 위한 세포 기반을 제공합니다. 이 연구에서 HaCaT 인간 케라티노사이트 세포주는 자연적인 피부 노화를 모방하여 장벽 기능을 변경하기 위해 자유 라디칼 및 자외선 B와 같은 스트레스 요인에 노출되었습니다. 샐비어 hankie는 피부 노화 및 피부 노화 관련 장애에 적용할 수 있음을 시사하는 잠재적인 노화 방지제로 최근에 확인되었습니다. 따라서 이 식물 추출물의 효과는 피부 노화, 피부 무결성 유지 및 생리적 조건과 관련된 매개변수에 대해 깊이 조사되었습니다. 정상적인 내인성 대사 과정 또는 UVR 및 오염을 통한 활성 산소 종 또는 자유 라디칼의 생성은 피부 노화 과정에 기여하는 것으로 생각됩니다. 피부는 다양한 산화환원 반응에 취약하며, 피부 항상성을 유지하기 위해서는 산화환원 균형이 필수적입니다. 낮은 ROS 농도는 생리학적 활성을 나타내지만 이러한 종의 증가된 수준은 경로 활성화에 관여하여 콜라겐 분해 증가, 엘라스틴 축적, 기질 분해 메탈로프로테아제 활성화 등을 초래합니다[41]. 또한, ROS는 노화, 염증, 부상 및 건선 및 백반증과 같은 여러 피부 질환의 발병을 비롯한 병리학적 과정에서 중요한 역할을 합니다[42]. 흥미롭게도 샐비어 haenkei 추출물은 기본 조건, 산화 스트레스 조건 및 UVB 조사에 의해 유도된 스트레스 조건에서 ROS 수준을 감소시키는 것으로 나타났으며, 이는 ROS 매개 변경에 대한 잠재적인 보호 효과를 나타냅니다[22].

이전에 관찰된 Salvia hankie의 노화 방지 효과를 뒷받침하기 위해, 이 연구에서 우리는 SH 추출물이 UVB 방사선에 의해 자극된 각질 세포의 노화를 감소시키는 능력을 입증했습니다. 결과는 SH가 UVB 방사선에 의해 자극되는 p21 및 p27 노화 마커의 유전자 발현을 감소시킬 수 있음을 보여줍니다. 흥미롭게도, SH 추출물은 인터루킨 전사를 낮춤으로써 세포의 광손상에 의해 촉진되는 염증 반응을 감소시키는 유망한 활성을 보여줍니다. 또한, 우리는 샐비어 haenkei 추출물이 스트레스 후뿐만 아니라 기저 조건에서도 Sirtuinl 단백질 발현을 유도하여 노화 과정을 늦추는 유망한 활성을 보여주었다는 것을 흥미롭게 입증했습니다. Sirtuin 계열, 특히 SIRT1은 특히 MMP 및 후속 콜라겐 분해의 억제를 통해 노화-광노화에 역할을 하는 것으로 나타났습니다. 여러 연구에서 UVB 매개 광노화에서 보호 역할을 강조했습니다. 주글론(5-하이드록시{6}},4-나프탈렌디온)과 같은 천연 화합물은 UVB 처리 후 SIRT1을 정상 수준으로 회복시키는 것으로 나타났으며, 이는 SIRTI가 UVB 유발 발암을 예방하는 역할을 할 수 있음을 시사합니다. [29]. 우리의 결과는 UVB 스트레스 후 복구 과정에서 시르투인의 가능한 관여와 표피 항상성 유지에서의 역할을 나타냅니다.

아토피 성 피부염 및 건선과 같은 일반적인 염증성 피부 질환과 노화 과정은 장벽 기능 감소를 나타내며 장벽 파괴에 대한 표피 세포의 반응은 이러한 상태를 악화, 유지 또는 시작할 수 있습니다. 이 작업의 결과는 이러한 과정에 관련된 여러 단백질의 조절에 의해 피부 장벽 완전성을 회복하는 SH의 강력한 능력을 보여주었습니다. 특히, occludin과 filaggrin 전사의 자극이 세포간 유착에 대한 강화작용을 나타내는 것으로 관찰되었다. 유전 및 후천 필라그린 결핍은 표피 장벽에 영향을 미쳐 피부 조직을 변화시킵니다.

세포골격 케라틴 필라멘트와 피부의 각질화된 외피의 구조 [43]. 또한, FLG 발현의 결함은 케라토히알린 과립의 수 감소, 천연보습인자(NMF) 농도의 현저한 감소 및 피부 pH의 알칼리화를 유발한다[44]. 또한, TJ(Tight junctions) 단백질에 속하는 claudins 및 occludin 단백질의 변경은 노화 과정과 관련하여 잘 설명되어 있습니다. TJ는 상피 세포 사이의 세포간 공간을 밀봉하여 기능적 장벽을 형성하는 역할을 하며 세포 증식 및 분화에 관여합니다[45]. 샐비어 헹케이 추출물은 필라그린 발현을 개선하고 UVB 방사선에 의해 손상된 세포막의 오클루딘 국소화를 보존하는 것으로 나타났습니다. 건강한 피부를 유지하는 데 있어 SH 추출물의 추가적인 활성은 UVB 방사선에 의해 자극되는 기질 금속단백분해효소 2(MMP-2) 전사를 감소시키는 능력에 의해 입증되었습니다. MMP의 상향 조절은 콜라겐과 엘라스틴을 분해하여 세포외 기질(ECM) [33, 38]의 손상을 일으키므로 노화와 피부 병리를 촉진하므로 이러한 프로테이나제의 감소는 피부 노화의 맥락에서 가치가 있습니다.

가장 일반적인 피부 분자 매개변수에 대해 이 연구에서 관찰된 SH 치료의 긍정적인 효과는 45세에서 60세 사이의 백인 여성 50명을 대상으로 한 최근 임상 시험에서도 확인되었습니다[46]. Salvia hankie는 크림 제형으로 투여되었으며 피부 발적과 탄력, 주름 깊이, 항산화 가능성과 같은 여러 매개변수는 임상 및 도구 평가와 대상에 의한 자가 평가 모두에 의해 평가되었습니다. 이 연구의 결과는 중간 정도의 피부 노화의 맥락에서 매일 적용했을 때 피부 쇠퇴를 개선하는 SH 효능을 보여줍니다. 실제로 적용 84일 후 여성의 피부가 더 탄력 있고 붉은 부분이 적고 주름이 얇아졌습니다. 더욱이 이 연구는 크림을 매일 바르면 피부 항산화 능력이 점진적으로 증가한다는 것을 보여줍니다[46].

피부는 외부 환경으로부터 신체를 보호하는 피난처로서 지속적으로 잠재적인 손상에 노출되어 있으므로 상처 치유는 모든 유기체의 생존을 위한 필수적인 과정입니다. 건강하고 흠 없는 피부를 유지하는 SH의 입증된 능력을 고려할 때, 우리는 이 추출물이 피부 병변의 복구에 유용하여 피부 재생을 향상시키는 데 도움이 될 수 있다고 가정했습니다. 따라서 손상 후 피부 장벽을 복원하는 핵심 단계인 각질 세포 이동에 대한 SH 활성이 최종적으로 고려되었습니다. SH 추출물 처리는 HaCaT 이동 속도를 증가시킬 수 있는 흥미로운 활성을 나타내어 병변 후 상피 손상의 재확립에 강한 효과를 보여줍니다. 이동은 상처 치유 과정에서 중요한 요소이기 때문에 추출물의 비과증식 활성을 고려한 우리의 데이터는 SH 추출물이 피부 장벽에서 손상의 영향을 더 빠르게 중화시켜 다음 위험을 줄이는 잠재적인 효과를 나타냅니다. 감염.

우리의 데이터는 샐비어 haenkei 추출물이 장벽 재구축을 돕거나 표피 스트레스 반응을 약화시키는 데 유용한 화합물임을 지적합니다. 인간에 대한 최근 실험과 동시에 이 연구는 피부 노화에 대한 추출물의 긍정적인 효과와 관련된 메커니즘에 대한 추가 통찰력을 제공합니다.

이전 연구[18, 46]를 지원하는 이 연구는 피부 매개변수를 조절하는 샐비어 손수건의 효능과 연결된 분자 메커니즘을 보다 독특한 방식으로 확인하여 노화 방지에 유용한 매력적인 제제로서의 샐비어 손수건의 관련성을 강조합니다. 및 노화 관련 피부 장애.

재료 및 방법 세포 배양 및 UVB 조사

HaCaT 세포(인간의 자발적 불멸화 각질형성세포)는 10% 소태아혈청(Life-Technologies, Waltham, MA, USA), 2mM 글루타민, 100U/ml 페니실린 및 100U/ml 페니실린이 보충된 고 포도당 Dulbecco의 변형된 Eagle 배지(DMEM)에서 배양되었습니다. ug/ml 스트렙토마이신(Lonza, Basilea, Switzerland). 세포는 공기 중 5% CO2의 가습 분위기에서 유지되었고 37도에서 배양되었습니다.

실험 프로토콜의 요청에 따라 세포는 Philips Medical Narrowband UVB PL-S 램프에서 제공하는 30KJ/m²UVB 방사선에 노출되었습니다. 조직 배양 배지에 의한 빛 흡수를 방지하기 위해 조사 전에 이것을 제거하고 조사 프로토콜에 따라 DMEM FBS 및 red phenol-free로 교체했습니다[47]. UVB 조사 후, 세포에 새로운 성장 배지를 공급하거나 프로토콜에 따른 실험에 사용했습니다.

세포 생존력-Trypan blue 배제 분석 35 x10³ 세포를 12웰 플레이트에 플레이팅하고 밤새 배양한 후 실험 프로토콜에 따라 다양한 농도의 샐비어 헨케이 하이드로에탄올 추출물에 노출시켰습니다. 추출물은 IBSA Farmaceutici Italia(Lodi, Italy)에서 제공했으며 HPLC에 의해 0.6% w/w의 마커 rosmarinic acid 함량을 나타냅니다. 처리 후 세포를 세척하고 0.25% 트립신{8}}.2% EDTA로 분리하고 중간 용액에서 1:I 비율로 트립판 블루(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)에 현탁했습니다. 챔버 버커 혈구계를 사용하여 세포를 계수하였다.

ROS 형광 분석

ROS는 이전에 설명된 대로 2',7'-디클로로플루오레세인-디아세테이트(Hz-DCF-DA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)를 사용하여 정량화되었습니다[48]. 간단히 말해서, 세포(5x10')를 {{10}웰 플레이트에 파종하고 밤새 부착되도록 한 다음 3시간 또는 24시간 동안 SH 추출물에 노출시켰습니다. N-아세틸시스테인 5mM(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)을 양성 대조군으로 사용하였다.

산화 스트레스 조건의 경우, H2Oz의 부재 또는 존재하에 50μM Hz-DCF-DA를 첨가한 후 ROS 수준을 측정하였다[48]. DCF 형광 강도는 Multilabel Plate Reader VICTOR X3(PerkinElmer, Waltham, MA, USA)를 사용하여 여기 485 nm - 방출 535 nm에서 측정되었습니다.

UVB 스트레스 조건에서 ROS 수준을 평가하기 위해 PBS에서 SH 처리 - 50 μM Hz-DCF-DA 용액에서 세포를 배양하여 프로토콜을 약간 수정했습니다. 37도에서 25분 동안 인큐베이션한 후, 플레이트를 UVB 방사선에 노출시키고 DCF 형광 강도를 멀티라벨 플레이트 판독기 VICTOR X3(PerkinElmer, Waltham, MA, USA)를 사용하여 여기 485 nm - 방출 535 nm에서 즉시 측정했습니다.

면역형광 현미경

10x104 세포를 24-웰 플레이트에서 콜라겐으로 미리 코팅된 유리 커버슬립에 파종하고 밤새 부착되도록 하고 프로토콜에 따라 SH 추출물로 처리했습니다. α-카테닌 및 오클루딘 단백질의 검출을 위해, 상기 프로토콜에 기재된 바와 같이 세포를 UVB 방사선에 노출시켰다. 조사 후, 세포에 새로운 성장 배지를 공급하거나 프로토콜에 따른 실험에 사용하였다. 면역형광 분석의 경우 UVB 조사 후 4시간 후에 세포를 세척하고 4% 포름알데히드로 고정하고 PBS에서 0.1% Triton X-100로 투과화하고 다양한 단백질 특이적 항체로 37도에서 1시간 동안 염색합니다. 마우스 모노클로날 항-옥클루딘(미국 매사추세츠주 월섬 소재의 Invitrogen Life Technologies), 마우스 항필라그린(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). PBS 세척 후, 세포는 2차 항체/플루오레세인 이소티오시아네이트(Alexa Fluor 488 항-마우스 또는 Alexa Fluor 536 항-토끼 면역글로불린 G, Molecular Probes, Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA)와 함께 1시간 동안 phalloidin과 함께 인큐베이션되었습니다. 실온. RNase 처리 10분 후, 커버슬립을 Mowiol 40-88(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)을 사용하여 유리 슬라이드에 장착하고 propidium iodide를 첨가했습니다. 공초점 현미경 LSM 800, 배율 60X, 소프트웨어 ZN 2.1 blue Edition(Carl Zeiss, Jena, Germany)을 통해 이미지를 획득하고 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 정량화했습니다.

통계 분석

통계 분석은 Windows용 GraphPad Prism 버전 7.02(GraphPad Software, San Diego, CA, USA)를 사용하여 수행되었습니다. 달리 명시되지 않는 한 결과는 평균 + SEM으로 표시됩니다. 스튜던트 t-검정이 사용되었고 p 값<0.05 were="" considered="" statistically="">

약어

AJ:접착 접합부; ECM: 세포외 기질; FLG: 필라그린; Hz-DCF-DA: 2',7'-디클로로플루오레세인-디아세테이트; H2Oz: 과산화수소; MMP: 매트릭스 메탈로프로테이나제; NAC: N-아세틸시스테인; NMF:인자; ROS: 활성산소 천연보습

종; SIRT1: 시르투인; SH: 샐비어 손수건; TJ: 단단한 접합부; UVB: 자외선 B.

이 기사는 www.aging-us.com에서 발췌했습니다.