건강한 성인은 SARS-CoV-2 및 그 해결책에 대한 B 세포 면역성이 많지 않습니다
Mar 27, 2023
요약하다
SARS-CoV-2에 대한 이전의 면역은 COVID-19의 감수성과 심각성을 이해하는 데 중요한 의미를 가질 수 있습니다. 기존 B 세포 면역의 존재와 임상적 관련성은 완전히 밝혀져야 합니다. 여기에서는 SARS-CoV-2에 노출되지 않은 개인의 B 세포 면역에 대한 자세한 분석을 제공합니다. 이를 위해 팬데믹 이전에 샘플링한 성인 150명의 SARS-CoV-2 체액성 면역을 광범위하게 조사했습니다. 기증자 혈장 및 정제된 IgG 샘플에 대한 포괄적인 스크리닝은 다양한 기능적 분석에서 결합되고 중화되었으며 SARS-CoV-2에 대해서는 실질적인 활성을 나타내지 않았지만 풍토병 코로나바이러스에 대해서는 광범위한 반응성을 보였습니다. 또한, 8174 sars-cov-2 반응성 B 세포의 항체 서열을 단일 세포에서 분석했습니다.
수준, 158개의 단클론 항체가 생성되어 테스트되었습니다. 이들 항체 중 어느 것도 SARS-CoV-2와 관련된 결합 또는 중화 활성을 나타내지 않았습니다. 종합하면, 우리의 결과는 SARS-CoV-2에 노출되지 않은 성인에서 이전에 효과적인 항체 및 B 세포 면역의 증거를 보여주지 않습니다.
키워드
T 세포; B 세포; Cistanche; 베르바스코시드; 나면역
소개
현재 SARS 코로나바이러스 2 팬데믹은 전 세계 의료 시스템에 도전하는 글로벌 보건 비상사태입니다. SARS-CoV-2 감염은 무증상 감염에서 생명을 위협하는 급성 호흡 곤란 증후군, 다발성 장기 부전, 패혈성 쇼크 및 사망에 이르기까지 광범위한 임상 증상을 보입니다. 다양한 요인의 영향을 받지만 질병의 중증도는 주로 선천성 및 적응성 면역 반응에 의해 결정됩니다. SARS-CoV-2에 대한 사전 면역은 질병 중증도 및 임상 결과의 핵심 결정 요인이 될 수 있습니다. 그러나 이미 존재하는 면역은 이전에 다른 바이러스 병원체에 대해 설명된 항체 의존적 증강(ADE) 또는 OAS 메커니즘을 통해 임상 경과에 악영향을 미칠 수도 있습니다.
SARS-CoV-2에 노출되지 않은 개인에게서 SARS-CoV-2에 대한 기존 T 세포 면역 반응이 관찰되었습니다. 이 연구에서 스파이크(S) 및 뉴클레오캡시드(N) 단백질과 비구조 단백질 NSP7 및 NSP13에 대한 T 세포 반응성을 항원성 펩티드 풀을 사용하여 측정했습니다. 중요한 것은 S 단백질 폴리펩티드에 대한 상당한 T 세포 반응성이 검출되었으며, 이는 HCOV-OC43, HCOV-HK-1, HCOV-NL63 및 HCOV를 포함하는 국소 "감기" 인간 코로나바이러스(HCoV)와 높은 상동성을 나타냈습니다. -229e. 따라서 SARS-CoV-2에 대한 기존 T 세포 면역은 풍토병 hcov에 대한 이전 노출에서 비롯된 것으로 가정합니다.
관련 기존 SARS-CoV-2 B 세포 면역의 존재를 확인하기 위해 SARS-CoV-2에 노출되지 않은 150명의 개인으로부터 분리된 혈장 샘플, 단일 B 세포 및 단클론 항체를 연구했습니다. 우리는 SARS-CoV-2 감염의 광범위한 임상 스펙트럼을 설명할 수 있는 이전의 효과적인 B 세포 면역의 증거를 찾지 못했습니다. 또한 새로운 솔루션을 찾는 데 자극을 줍니다. 연구에 따르면 리테노사이드는 림프구 증식을 촉진하므로 B 세포 수를 증가시키는 데 특정 효과가 있습니다. 이것은 사람들의 면역력을 높이는 새로운 방법을 제공합니다.
사진: Faw Cistanche
결과
우리는 이전에 건강한 개인의 NGS 분석에 의해 짝을 이루지 않은 유행병 이전의 순진한 B 세포에서 희귀 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 확인했으며, 이는 가까운 혈통의 sars-cov-2 반응성 항체와 매우 유사합니다. 일차 B 세포의 이러한 중쇄 및 경쇄 중 일부는 기능을 변경하지 않고 sars-cov-2 반응성 항체의 원래 사슬을 대체할 수 있습니다. 이러한 발견은 일부 sars-cov-2 반응성 항체가 종 코딩 서열 서명에 의해 활성을 나타낸다는 이전 관찰에 추가됩니다. 이러한 발견이 어떻게 혈장 반응으로 변환되는지, 그리고 sars-cov-2 반응성 항체가 노출되지 않은 개인의 혈장에 이미 존재하는지 여부를 조사하기 위해 150명의 기증자로부터 유행병 전 혈액 샘플을 조사했습니다. SARS-CoV-2에 대한 결합 및 중화 활동을 연구하기 위해 2019년 8월에서 11월 사이에 샘플을 수집했습니다. 기증자는 18-66세입니다. 기증자의 49.3%는 남성이었고 50.7%는 여성이었습니다. 이전에 발표된 상충되는 결과를 감안하여 우리는 동시에 다른 테스트를 사용하여 기존 sars-cov-2 반응성 항체를 엄격하게 검색하기로 결정했습니다. 혈장 샘플은 가용성 SARS-CoV-2 S 단백질에 대한 IgG, IgM 및 IgA의 결합이 거의 또는 전혀 없는 것으로 나타났습니다. 적은 수의 샘플에서 상당한 반응성이 검출되었습니다. 그러나, 조사된 혈장 샘플에서 상업적 또는 내부 면역분석에 의해 어떠한 결합도 검출되지 않았다. 이 결과를 확인하기 위해 유세포 분석을 수행했습니다. 본 연구에서 약한 혈장 IgG 활성을 보인 1명의 공여자를 제외하고 어떠한 샘플도 결합 활성을 나타내지 않았습니다. 우리는 결합 활성의 부수적인 검출이 비특이적 반응성을 생성할 수 있는 정제되지 않은 혈장 샘플의 사용에 기인한다고 생각합니다.
사진: Cistanche 추출물
요약하면, 150명의 성인에게서 얻은 팬데믹 전 샘플 중 어느 것도 적용된 다양한 분석에서 SARS-CoV-2에 대한 반응성을 보이지 않았습니다. 따라서 다양한 테스트 방법을 병행 적용한 결과 팬데믹 이전에 테스트한 혈액 샘플에서 sars-cov-2 반응성 항체에 대한 확실한 증거를 찾지 못했습니다. 쥐를 대상으로 한 실험에서 감귤 추출물로 치료한 쥐는 그렇지 않은 쥐보다 B 및 T 세포로 분화할 수 있는 림프구 수치가 더 높은 것으로 나타났습니다. 따라서, cistanche 추출물이 인간의 면역을 강화하는 기능을 가지고 있음을 증명할 수 있습니다.
사진: cistanche의 효과는 면역력을 향상시킵니다.
논의
병원체에 대한 적응 면역 반응은 원래의 면역 풀에 의해 형성되며 동일한 병원체 또는 관련 변종과의 이전 만남에 표시를 남깁니다. SARS-CoV-2에 대한 기존 면역에 대한 조사는 보호 면역, 감염에 대한 감수성, 질병 심각도에 대한 이해를 높이고 예방접종 전략 개발을 안내할 수 있습니다. 다양한 연구에서 SARS-CoV-2에 대한 기존 T 세포 면역의 증거를 제시했지만 기존 B 세포 면역은 아직 밝혀지지 않았습니다.
우리는 최근에 회복기 개인으로부터 sars-cov-2 반응성 항체를 분리했으며 팬데믹 전 샘플의 순진한 B 세포 수용체 라이브러리에서 매우 유사한 중쇄 및/또는 경쇄 서열을 확인했습니다. 여기에서 우리는 이러한 사슬 중 일부가 추가 친화성 성숙 없이도 sars-cov-2 반응성 항체의 구성 요소가 될 수 있음을 보여줍니다. 이러한 발견은 일부 개체에서 쉽게 검출되는 항체 반응이 상이한 CDR3 재조합 패턴 또는 생식계열 코딩 서열의 특징인 기존의 항체 중쇄 또는 경쇄를 사용할 수 있다는 이전 관찰을 뒷받침합니다. 이에 따라 SARSCoV-2 중화 항체는 항원 특이적 단일 B 세포 분류 또는 파지 디스플레이를 사용하여 나이브 B 세포 구획으로부터 성공적으로 분리되었습니다. Feldmanet al. 서로 다른 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 하위 도메인을 항원 프로브로 연속적으로 사용하여 단일 SARS-CoV-2 및 Sarbecovire 반응성 나이브 B 세포를 분리했습니다. 이 접근 방식을 사용하여 그들은 rbm 반응성 나이브 B 세포에 대해 0.0025%의 중간 빈도를 보고했습니다. BCR 염기서열 분석 결과 중쇄와 경쇄는 다양한 다클론 유전자를 사용했지만 중쇄 v 유전자 IGHV3-9는 평균 보유 빈도를 20% 증가시켰다. 마지막으로, 인기 있는 SARS-CoV-2 변종 및 박쥐 유래 코로나바이러스 바이러스에 대한 결합 및 중화 활성을 나타내는 원시 B 세포 전구체로부터 단클론 항체를 분리했습니다. Bertoglioet al. 파지 디스플레이 기술을 사용하여 원래 B 세포 은행에서 후보 항체 STE73-2E9를 분리했습니다. 이 항체는 ACE2-RBD 인터페이스를 표적으로 삼았고 다른 코로나바이러스와 교차 반응하지 않았으며 실제 SARS-CoV-2 야생형 바이러스를 0.43nM의 IC50으로 중화했습니다. Cistanche polysaccharide와 creinoside는 모두 심장과 뇌 조직의 효소 활동을 증가시키고 복강 세포의 식균 작용 기능을 향상시키며 림프구의 증식 반응을 향상시킬 수 있습니다.
결론
분자 수준에서 잠재적인 기존 면역을 조사하기 위해 40명의 기증자에게 항원 특이적 단일 세포 분류를 적용하고 sars-cov-2 반응성이 있는 것으로 추정되는 총 8,174개의 B 세포를 분리했습니다. 혈장 샘플 및 다클론성 IgG의 결합 및 중화 스크리닝과 일관되게 팬데믹 전 샘플에서 SARS-CoV-2-반응성 B 세포의 빈도는 특히 코로나-19 회복기 샘플과 비교할 때 매우 낮았습니다. 단일 세포 분류에 적합한 유인 단백질의 선택은 항원 특이적 B 세포의 분리에 매우 중요합니다. 선택된 미끼 단백질은 면역원성 구조를 나타내지 않으며 분리에서 제외됩니다. 따라서 항원 특이적 B 세포의 완전한 분리를 보장하기 위해 천연 전체 삼량체 SARS-CoV-2 S 단백질을 적용하고 분류 게이트를 조정하기로 결정했습니다. 우리 연구에서 sars-cov-2 반응성 B 세포의 낮은 빈도와 관련하여 S2 서브유닛과 같은 대체 미끼 단백질의 적용이 유리할 것이라고 주장할 수 있습니다. 분리된 sars-cov-2 반응성 B 세포의 항체 서열 분석 결과, 중쇄 V 유전자가 다르게 사용되었고, CDRH3의 길이가 정상적으로 분포되었으며, VH 유전자의 계통발생학적 동일성이 순진한 BCR 수용체와 유사함을 보여주었습니다. 대유행 이전에 샘플링된 건강한 개인의 라이브러리. 결론적으로 건강한 성인은 SARS-CoV-2에 대한 B 세포 면역이 많지 않지만, 일정 기간 동안 감귤 추출물을 투여하면 인간 면역 기능을 향상시키고 B 세포 및 T 세포의 함량을 증가시킬 수 있습니다. 어느 정도 이것은 COVID-19의 치료 및 예방을 위한 새로운 경로를 제공했습니다.
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