HLA-G는 간, 폐 및 신장의 기관 섬유증 영역에서 비만 세포에 의해 널리 발현됩니다
Feb 21, 2022
추상적인:우리는 이전에 HLA-G를 발현하는 비만 세포가 C형 간염 바이러스에 의해 유도된 영역과 관련이 있음을 입증했습니다.간섬유증. 여기, 우리는 비만 세포에서 HLA-G 발현이 바이러스 병인에 특이적인지 여부를 결정하는 것을 목표로 했습니다.간, 또는 섬유화의 일반적인 과정. 우리는 (i)의 면역 조직 화학에 의해 HLA-G 플러스 세포 및 비만 세포를 열거했습니다.간알코올성 간경변증 41건, (ii) 특발성 폐섬유화증(IPF) 10건, (iii) 10건에서 차단 레나l섬유증. HLA-G 플러스 세포의 특성은 소프트웨어를 사용한 다중 면역형광에 의해 지정되었습니다. 모든 HLA-G 플러스 세포의 절반 이상이 알코올성 간경변 및 IPF의 섬유화 영역에 있는 비만 세포였습니다. 에서신장,섬유화증에 걸린 HLA-G 플러스 세포는 실제로 비만 세포였지만 계산할 수 없었습니다. 또한 특정 경우에는간및 폐에서, 우리는 HLA-G가 B 림프구에 의해 고도로 발현되는 2차 또는 3차 여포인 다수의 세포 노드를 관찰하였다. 결론적으로, HLA-G와 비만 세포는 연구된 모든 기관의 섬유화 영역에서 관찰될 수 있었습니다. 이전 연구에서는 염증 및 섬유화에 대한 HLA-G 플러스 비만 세포의 보호 역할을 제안합니다. HLA-G를 발현하는 B 림프구가 있는 관찰된 여포는 또한 항섬유화증 역할을 강화할 수 있습니다.
키워드:섬유증; HLA-G; 비만세포; 모낭; B 림프구; 항섬유화제; 신장; 간
소개장기 섬유화증을 유발하는 만성 질환은 상당한 사망률 및 이환율과 관련이 있으며 선진국 사망의 최대 45%를 차지합니다[1]. 섬유성 질환의 유병률은 꾸준히 증가하고 있으며 중요한 공중 보건 문제입니다. 섬유성 질환은 다음과 같은 모든 기관에 영향을 미칠 수 있습니다.간, 신장, 폐, 심장. 병리학적 섬유화증은 콜라겐과 같은 세포외 기질(ECM) 성분의 과장된 침착이 특징입니다. 이러한 ECM 축적은 장기의 정상적인 구조를 파괴하고 각 장기의 특수 기능의 변경으로 인해 장기 기능 장애 및 부전으로 이어집니다.간, 해독 기능, 폐 기능, 가스 교환 기능 및신장,여과의 기능. 또한 섬유화증은 암 발병을 촉진할 수 있습니다. 섬유화 기관을 대체하기 위한 이식은 종종 최상의 치료 옵션을 나타냅니다. 섬유화 과정은 지속적이거나 과도하게 강한 염증 반응에 따른 부상 또는 조직 손상에 대한 반응으로 발생합니다. 초기에 가역적이었던 섬유증은 비가역적인 상태로 발전할 수 있습니다[2]. 그만큼간바이러스(B, C, D, E형 간염), 곰팡이 독소, 기생충, 자가항체, 고지방식이, 과도한 알코올 섭취에 의해 손상될 수 있으며 이는간fifibrosis [3] 심지어 특정 국가의 주된 원인입니다. 모욕이 반복되면간섬유화증이 있는 만성 간염에 이어 진행성 섬유화증 또는 간경변증이 발생하며, 이는 간세포 암종(HCC)에 걸리기 쉬운 상태입니다.
폐에서 특발성 폐섬유화증(IPF)은 과민성 섬유화증 및 류마티스성 폐를 포함하는 질병 그룹 중 가장 흔한 질환입니다. 원인을 알 수 없는 이 만성 진행성 섬유화 간질성 폐 질환은 전 세계적으로 300만 명에게 영향을 미치는 드문 질환입니다. 그러나 IPF는 조기 사망과 관련이 있습니다. 실제로 IPF는 진행성 호흡부전을 유발하고 폐암의 독립적인 위험인자이기도 합니다[4]. 폐 이식은 진행성 질환이 있는 젊은 환자를 위한 옵션으로 고려되어야 합니다.
신장섬유화증은 수많은 진행성의 최종 공통 경로입니다.신장 질환.만성 발병률신장병, 최종 단계로 이어지는신장 질환, 현저하게 증가하여 전 세계 인구의 10%에 영향을 미치고 사망률이 높습니다[5]. 또한 만성질환자신장병발병할 위험이 높아집니다신장암(일반 인구의 최대 10배), 빈번한 양측 및/또는 다초점 손상 [6].
섬유화증이 발생하는 기관에 관계없이 섬유화를 예방하는 치료법을 개발하려면 섬유화의 출현과 관련된 메커니즘을 이해하는 것이 중요합니다. 특히 만성 염증은간또는신장섬유화증을 조절하고 이를 조절하면 진행과 장기 부전 또는 암의 발병을 제한할 수 있습니다. 사이토카인과 케모카인은 면역 반응의 방향과 염증의 유지 모두에서 중심적인 역할을 합니다[7,8]. 이러한 면역 분자 외에도 면역 조절 특성으로 잘 알려진 class Ib HLA 분자인 HLA-G와 같은 다른 단백질이 조사되었습니다[9]. 우리는 이전에 HLA-G가 C형 간염 바이러스에 의해 유도된 영역과 관련된 비만 세포에 의해 발현된다는 것을 입증했습니다.간섬유화증 [10,11]. 현재 연구에서 우리는 비만 세포에서 HLA-G 발현이 바이러스 병인에 특이적인지 여부를 조사했습니다.간, 또는 기관에 관계없이 섬유화의 과정. 우리는 알코올 유발 간경변증 환자 41명, IPF 환자 10명, 그리고신장섬유증. HLA-G-발현 세포의 정확한 식별은 파라핀 섹션에 대한 4중 면역형광 및 형광을 개별적으로 분석하고 3가지 경우에 병합하는 소프트웨어를 사용하여 수행되었습니다.간알코올 유발 섬유증과 두 가지 IPF.
결과
알코올 유발 섬유증에서 HLA-G 플러스 세포의 정량적 발현 및 특성일련의 알코올 유도 섬유증 샘플(n=41)에 대해 초기 면역조직화학 연구를 수행하여 HALO 소프트웨어를 사용한 반자동 계산에 의해 전체 슬라이드에 걸쳐 HLA-G 플러스 및 CD117 플러스 세포를 계수할 수 있었습니다. 결과는 표 1에 요약되어 있습니다.
HLA-G 플러스 및 CD117 플러스 세포는 HLA-G를 인식하는 4H84 및 항-CD117/c-키트를 사용한 면역조직화학 후 적절한 알고리즘과 함께 HALO 소프트웨어를 사용하여 알코올성 간경변증 41건의 연속 슬라이드의 전체 표면에 걸쳐 계수되었습니다. 평균, 표준 편차 및 범위는 HLA-G 플러스 및 CD117 플러스 세포에 대해 표시됩니다: 555 ± 699 HLA-G 플러스 /(41–2686) 및 200 ± 271 CD 117 플러스 세포(12–1113).
HLA-G 플러스 세포의 형태학적 특징은 알코올 유발 간경변 지형학적으로 비만 세포에 해당합니다(그림 1A). 특정 경우에, CD117 및 인간 비만 세포에 대한 이중 표지가 수행되었으며 간 CD117 플러스 세포가 섬유소화 영역의 비만 세포임을 보여주었습니다(그림 1A). 알코올 유발 간경변증의 대표적인 3가지 사례를 HALO 소프트웨어를 사용한 4중 면역형광 및 Sirius Red 염색으로 연구하여 HLA-G 플러스 세포를 정확하게 식별했습니다. 섬유화증의 평균 면적은 전체 면적의 19.4%에 해당합니다.간조직. HLA-G 세포 플러스의 식별은 51%가 인간 비만 세포 트립타제 + CD1177 표현형 또는 인간 비만 세포 트립타제 플러스 CD117에 대한 공동 염색에 의해 정의된 비만 세포(표 2; 그림 1A,1B1)인 것으로 나타났습니다. HLA-G를 발현하는 비만 세포는 섬유화 영역에 위치했습니다(그림 1B1). 반대로, HLA-G 플러스 세포의 49%는 비만 세포도 아니고 CD117 플러스 세포도 아니었으며(표 3) 일반적으로 노드로 함께 그룹화되는 것으로 나타났습니다(그림 1B2). 따라서 이러한 세포를 식별하기 위해 다른 영역에서 다른 라벨링을 수행했습니다(표 4). 다른 유형의 HLA-G plus 세포의 재분할은 영역에 따라 다릅니다.간조직 검사(표 3 및 4). 전반적으로 섬유소화 영역에서 HLA-G 플러스 세포의 63%가 비만 세포인 반면 노드에서는 3%만 나타났습니다. 또한, 노드의 HLA-G 플러스 세포의 68%는 B 림프구의 마커인 CD20(그림 1C1) 및 3% CD3(그림 1C2)을 공동 발현했습니다. HLA-G + CD117 비만 세포 트립타제 HLA-G + CD117 HLA-G + CD117 비만 세포 트립타제 + 및 HLA-G + CD117 + 비만 세포 트립타제 + 세포는 다음의 세 가지 대표적인 사례에서 계산되었습니다.간적절한 알고리즘과 함께 HALO 소프트웨어를 사용하여 섬유화증을 치료합니다. 알코올성 간경변증 샘플의 두 가지 다른 영역, 즉 섬유화 영역과 세포 노드에서 세포를 계수했습니다.간적절한 알고리즘과 함께 HALO 소프트웨어를 사용하여 섬유화증을 치료합니다. HLA-G 플러스 세포는 내피 세포의 마커인 CD31 또는 수지상 세포의 마커인 CD1a를 공동 발현하지 않습니다.
그림 1. 대표적인 경우에 HLA-G 세포의 성질간섬유증. (A) 다섯 번째 단락에서 왼쪽의 두 사진은 대표적인 경우에 대한 HLA-G 및 CD117 발현을 보여줍니다.간HLA-G를 인식하는 4H84 및 c-kit 세포를 인식하는 CD117 항체를 사용하여 면역조직화학을 사용하여 41개 사례 중 섬유화증. 슬라이드는 Mayer hematoxylin으로 대조염색되었습니다. 섬유증 범위는 빨간색 선으로 둘러싸여 있습니다. 원 안의 영역은 지형적으로 HLA-G 및 CD117 스테인드 슬라이드에 해당합니다. 직사각형은 2개의 HLA-G 세포가 2개의 CD117 세포와 일치함을 나타내는 이 영역의 강한 확대를 보여줍니다. 또한 비만 세포와 호환되는 형태를 가지고 있습니다. 이중 형광(CD117/마스트 세포 트립타제)의 사진은 단순 형광(핵을 파란색으로 착색하는 DAPI, 녹색으로 CD117, 빨간색으로 비만 세포 트립타제)에 해당하는 오른쪽의 3개의 사진과 함께 공동 표지된 대다수의 세포를 보여줍니다. 노란색. CD117 세포는 대부분 비만 세포입니다. (B) 대표적인 경우에 대한 4중 면역형광간핵 청색이 있는 DAPI, 녹색 유사 색상의 HLA-G(4H84 항체 포함), 청록 유사 색상의 CD117, 적색 유사 색상의 비만 세포 트립타제 및 합성 이미지 또는 병합을 사용한 DAPI를 사용한 섬유화증(3개 중). 오른쪽에는 Sirius Red 염색이 표시되어 있습니다. 1과 2는 서로 다른 두 영역에 해당합니다.간,각각 섬유증 범위 및 세포 노드. 대부분의 HLA-G 세포는 섬유증에서 CD117과 비만 세포 트립타제를 공동 발현합니다(1). 대조적으로, 대부분의 HLA-G 세포는 세포 결절(2) 주변의 특정 HLA-G 세포를 제외하고는 비만 세포를 공동 발현하지 않습니다. (C) 의 노드 세포에 대한 4중 면역형광간1 및 2에서 각각 DAPI, 녹색 유사 색상의 HLA-G, 자홍색 유사 색상의 CD20 또는 청록색 유사 색상의 CD3이 있는 B2에 표시된 섬유화증. Sirius Red 착색 일치는 오른쪽에 있습니다. 사각형은 HLA-G 양성 세포와 해당 영역의 해당 세포를 포함하는 제한된 지형 영역을 보여줍니다. 합성 이미지는 HLA-G와 CD20의 분홍색 공동 라벨을 보여줍니다. 녹색 유사 색상이 있는 HLA-G와 청록색 유사 색상이 있는 CD3 사이에는 공동 염색이 관찰되지 않습니다.
HLA-G 플러스, CD3 플러스(T 림프구), CD20 플러스(B 림프구) 및 비만 세포 트립타제 플러스(비만 세포) 세포의 절대 수는 1개의 대표적인 사례에 대해 적절한 알고리즘과 함께 HALO 소프트웨어를 사용하여 결정되었으며 다음과 같이 표현됩니다. mm2당.
IPF에서 HLA-G 플러스 세포 분석면역조직화학에 의해 일련의 IPF(n=10)에 대해 수행된 첫 번째 연구에서 이전에 설명한 바와 같이 HLA-G 플러스 세포의 수는 135 ± 62/mm2이고 CD117 플러스 세포의 수는 다음과 같이 추정되었습니다. 227 ± 134/mm2(표 5). HLA-G 플러스 세포는 폐 섬유화증에서 CD117 플러스 세포와 일치하지 않았습니다(그림 2A). 4중 면역형광 및 Sirius Red 염색의 HALO 분석은 HLA-G 세포의 성질이 폐의 조직학적 영역에 따라 다른 것으로 나타났다(표 6). 실제로, 섬유소화 부위에 있는 HLA-G 플러스 세포의 63%는 비만 세포(B1, C1)인 반면, 결절(B2, C2)의 HLA-G 플러스 세포는 7%에 불과했습니다. 노드의 HLA-G 플러스 세포의 대부분은 CD20을 공동 발현했습니다(그림 2B).
그림 2. IPF의 대표적인 경우에 HLA-G 세포의 특성. (A) 다섯 번째 단락에서 왼쪽 사진은 10개의 IPF 중 1개의 대표적인 케이스의 Sirius Red 착색을 보여주고, 중간 사진은 면역조직화학을 사용한 Mayer hematoxylin의 대조염색을 보여줍니다. 원 안의 영역은 HLA-G를 인식하는 4H84 및 c-kit 세포를 인식하는 CD117 항체를 사용하여 HLA-G 및 CD117 염색 슬라이드에서 지형학적으로 해당합니다. 직사각형은 HLA-G 세포가 CD117 세포와 일치하지 않음을 나타내는 이러한 영역의 강한 확대를 보여줍니다. (B) 대표적인 경우에 대한 4중 면역형광간핵 청색이 있는 DAPI, 녹색 유사 색상의 HLA-G(4H84 항체 포함), 청록 유사 색상의 CD117, 빨간색 유사 색상의 비만 세포 트립타제 및 합성 이미지 또는 병합을 사용하여 두 가지 중 섬유화증. 오른쪽에는 Sirius Red가 표시됩니다. 1 및 2는 각각 섬유화 범위 및 세포 노드인 폐의 두 가지 다른 영역에 해당합니다. (C) DAPI를 사용한 5중 면역형광, 녹색 유사색의 HLA-G, 빨간색 유사색의 트립타제, 시안색 유사색의 CD3, 자홍색 유사색의 CD20, (B)에 표시된 IPF의 동일한 경우 . (C1)은 (B1) 영역에 해당합니다. (C1)에서 대부분의 HLA-G 세포는 섬유증 부위의 비만 세포에 해당하는 반면, 매우 드문 비만 세포는 (C2)에 표시된 노드의 HLA-G입니다. 노드의 대부분의 셀은 CD20입니다. HALO 분석은 대부분의 HLA-G 플러스 세포가 B 림프구인 것으로 나타났습니다.
HLA-G 플러스 및 CD117 플러스 세포는 면역조직화학에 따라 적절한 알고리즘과 함께 HALO 소프트웨어를 사용하여 10건의 경우에 대해 계수되었습니다. 평균, 표준 편차 및 범위가 표시됩니다.
신장 섬유증에서 HLA-G 플러스 세포 분석일련의 10가지 경우에 대한 연구에서신장면역화학에 의한 섬유화, 우리는 133 ± 102 HLA-G + 세포/mm2 및 426 ± 207 CD117 + 세포/mm2를 발견했습니다(표 7). HLA-G 플러스와 CD117 플러스 세포 사이에는 일치하는 항목이 없었습니다(그림 3A).
그림 3. 대표적인 경우에 HLA-G 세포의 성질신장섬유증. (A) 첫 번째 단락에서 왼쪽 사진은 Sirius Red 착색을 나타내고 중간 사진은 면역조직화학을 사용한 Mayer hematoxylin의 대조염색을 보여줍니다. 원 안의 영역은 HLA-G 및 CD117 염색 슬라이드에 지형학적으로 해당하며, 4H84는 HLA-G를 인식하고 CD117은 c-kit 세포를 인식합니다. 빨간색 화살표는 긍정적인 셀입니다. 직사각형은 HLA-G 세포가 CD117 세포와 일치하지 않음을 나타내는 이러한 영역의 강한 확대를 보여줍니다. (B) 대표적인 경우에 대한 4중 면역형광간핵 청색이 있는 DAPI, 녹색 유사 색상의 HLA-G(4H84 항체 포함), 청록 유사 색상의 CD117, 빨간색 유사 색상의 비만 세포 트립타제 및 합성 이미지 또는 병합을 사용한 섬유증. 오른쪽에는 Sirius Red가 표시됩니다. 병합에서 노란색으로 염색된 세포는 HLA-G와 비만 세포에 해당합니다. (C) 시안색으로 염색된 영역은 CD117만 발현하는 수많은 세관에 해당합니다. 병합에서 노란색으로 염색된 세포는 HLA-G와 비만 세포에 해당합니다.
HLA-G 플러스 및 CD117 플러스 세포는 10건의 경우에 대해 계수되었습니다.신장면역 조직 화학에 따라 적절한 알고리즘과 함께 HALO 소프트웨어를 사용하여 섬유화증. 평균, 표준 편차 및 범위는 HLA-G 플러스 및 CD117 플러스 세포에 대해 표시됩니다. Sirius Red와 결합된 HALO 소프트웨어를 사용한 4중 라벨링 및 형태 분석은신장해부학적 영역뿐만 아니라 동일한 해부학적 구획 내에서도(그림 3B,C). 따라서 HLA-G 플러스 세포의 백분율을 계산하고 계산하는 것은 이 기관과 관련이 없습니다. 실제로, 현미경 검사는 비만 세포의 것과 공동 표지되지 않은 CD117로 세관 둘레의 강한 염색을 보여주었습니다(그림 3C). HLA-G 플러스 세포는 비만 세포이며 염증성 간질(그림 3B,C)에 있습니다.
논의HLA-G 단백질의 발현은 태아-모체 경계면의 세포영양막에서 처음으로 입증되었다[12]. 기저 조건에서 발현은 각막[13], 흉선[14], 췌장의 섬[15]과 같은 특정 조직에 크게 제한됩니다. 그러나 기관지 상피 세포 [16], 중간 엽 세포 [17], 단핵구 계통의 세포 [18-20], 적혈구 및 내피 전구체 [21]와 같은 특정 유형의 세포도 독특한 조건에서 발현 할 수 있습니다. . 우리는 이전에 비만 세포가 기저 상태에서 HLA-G를 발현할 수 있고 특정 사이토카인이 풍부한 환경에서 발현이 증가할 수 있음을 입증했습니다.간 조직.우리는 HLA-G가 다음과 관련된 비만 세포에 의해 발현될 수 있는지 조사했습니다.간41건의 알코올 유발 사례를 연구하여 다른 병인에 의한 섬유화 또는 다른 장기의 섬유화간간경변, IPF 10 및 10신장섬유증.
감염, 독성 및 대사성 손상, 특발성 염증성 질환은 섬유화증의 발병을 촉진할 수 있습니다. 콜라겐 생성 세포는 손상에 대한 반응으로 상주하는 중간엽 세포와 분화합니다. 상피에서 중간엽으로의 전이는 담관세포에서 관찰되는 세포 전이의 현상이다.간, 폐의 기포 세포 및 관형 상피 세포신장[22]. 아폽토시스 세포는 모든 기관에서 TGF- 농도의 증가를 유도합니다. 그러나 섬유화의 특정 특징은 다른 기관에서 구별될 수 있습니다. 에서간,apoptosis는 간세포에 영향을 미치는 반면, 폐의 상피 세포에 영향을 미치고신장[22]. 따라서 상주하는 섬유아세포는신장폐는 a-SMA, 콜라겐1을 발현하는 근섬유모세포로 활성화되는 반면,간myofifibroblast는 신경 특이적 마커를 유지합니다[23].
에서간,간 성상 세포는 모든 콜라겐 생성 세포의 80% 이상을 차지합니다. 폐에서, pneumocytes의 손상은 내피 세포의 apoptosis와 관련이 있습니다. IPF에서 염증의 역할은 논란의 여지가 있습니다. 전형적인 IPF는 염증 세포의 유입을 나타내지 않지만 일부 저자는 폐 섬유아세포가 ECM을 생성하는 근섬유아세포로 분화하는 염증의 역할을 제안합니다[24]. 원인을 알 수 없는 반복적인 폐포 상피 병변과 폐포 상피 세포 사멸이 IPF에 관여한다[25]. 에서신장그리고간,골수 단핵구 세포는 골수에서 모집되며 근섬유모세포의 각각 14~15% 및 8~12%를 차지합니다. 폐에서 섬유화증의 가역성은 관찰되지 않습니다.간그리고신장부상이 없고 돌아올 수 없는 지점에 도달하지 않은 경우. 실제로 염증 과정은 IPF에서 특히 질병의 초기 단계에서 제한되는 반면, 원인이 알려지지 않은 폐포 상피 병변 및 폐포 상피 세포자멸사는 폐 섬유모세포 또는 근섬유모세포의 증식 및 활성화를 촉진할 수 있습니다[25].
에 관해서는간섬유화증, 실패한 상처 치유 과정신장만성적이고 지속적인 손상 후 조직은 섬유화 과정에서 핵심적인 역할을 하는 TGF-뿐만 아니라 전염증성 사이토카인의 생성 및 분비를 유도합니다. 예를 들어,간휴지 HSC에서 미량으로 표현되는 섬유화, TGF-는 이러한 유형의 세포에 의해간 손상.HSC 외에도 TGF-의 다른 공급원은 혈소판, 대식세포, 간세포 및 비만 세포로 설명됩니다[26]. TGF- 1는 기질에 잠복 형태로 저장되어 있으며 일단 활성화되면 섬유화 과정의 기본이 되는 섬유모세포에서 근섬유모세포로의 전이를 촉진합니다. 또한, 메탈로프로테아제를 억제하고 천연 억제제인 TIMP를 촉진하여 ECM 분해를 억제합니다. 따라서 SMAD{3}}의존적이거나 SMAD와 관련되지 않은 메커니즘을 통해 ECM의 생성을 유도합니다[27]. 실제로 비만세포와 TGF-사이에는 상호작용이 존재한다. TGF-는 비만 세포에 대한 강력한 유인 물질입니다. 실제로, TGF-에 의해 매개되는 병리학적 과정은 종종 비만 세포 축적과 관련이 있습니다[28]. 또한 비만 세포는 TGF 의존성 섬유화증을 유발하는 IL의 주요 공급원 중 하나입니다[29]. TGF-는 또한 비만 세포 기능을 촉진하거나 억제하는 것으로 보고되었습니다. 실제로 TGF-는 비만세포를 활성화시키는 고친화성 IgE 수용체 Fc1RI의 발현을 억제한다[30]. 한편 비만세포의 증식, 탈과립, 히스타민, TNF-와 같은 여러 이펙터 분자의 생성을 억제한다[31]. 섬유증에서 MC의 증가를 감안할 때 MC 기능에 대한 TGF-의 효과는 섬유증 과정을 유지하는 염증 반응의 조절에 중요할 수 있습니다.
C형 간염 바이러스에 의해 유발된 것과 같이간섬유화증, 알코올 유발 간경변증에서 HLA-G 플러스 세포의 절반이 비만 세포인 것을 발견했습니다(표 2). 비만 세포의 34%만이 HLA-G를 발현했으며, 표준 편차로 표시되는 높은 개별 변동성을 나타냅니다(표 1). . 또한, 우리는 지역에 따라 뚜렷한 재분할을 관찰했습니다.간,여기서 fifibrotic region에 있는 HLA-G plus 세포의 63-92%가 비만 세포인 반면, 3-23%만이 세포 노드에 있는 비만 세포였습니다(표 3). 유사하게, 섬유소화 영역의 비만 세포의 92%가 HLA-G를 발현하는 반면, 세포 노드에서는 23%만이 HLA-G를 발현하기 때문에 비만 세포에 대해 다른 패턴이 관찰됩니다(데이터는 표시되지 않음). 따라서 HLA-G의 발현은 바이러스 병인에 국한되지 않습니다.간경화증. 실제로 폐에서도 비슷한 결과를 얻었습니다. IPF에서 섬유성 영역에 있는 HLA-G 플러스 세포의 63%가 비만 세포인 반면 노드에 있는 세포의 7%만이 비만 세포였습니다(표 6). 의 경우신장섬유화증이 특히 두드러졌습니다. 많은 수의 세관으로 인해 비만세포가 세뇨관에 침투하여 섬유화 부위의 세포 수를 제대로 계산할 수 없었습니다. 정성적 현미경 관찰만이 수행될 수 있었고, 섬유화 영역에서 세관을 구별할 수 없는 HLA-G 플러스 세포의 수가 비만 세포임을 보여줍니다(그림 3). 따라서 HLA-G는 기관에 관계없이 세포 표면 및 세포질 내 분자를 통해 섬유성 질환에서 비만 세포에 의해 발현되는 것으로 보인다. 우리는 이전에 배양된 인간 비만 세포가 기저 상태의 조건 배지에서 가용성 HLA-G 형태를 생성할 수 있었고 분비가 IL-10을 포함한 사이토카인으로 자극한 후 증가한다는 것을 입증했습니다.
HLA-G를 발현하는 비만 세포의 비율이 더 높습니다(절반 이상).간그리고 폐는 섬유화증의 염증 성분에 의해 설명될 수 있습니다. 실제로, 선천성 면역 세포로서 비만 세포의 수는 염증 조건에서 증가하고 또한 전염증 매개체를 방출할 수 있습니다[32]. 비만 세포의 수는 섬유성 질환에서 증가합니다. 실제로 비만 세포 밀도는 다른 폐 병리를 가진 환자와 정상 폐보다 IPF 환자의 폐에서 더 높습니다. 마찬가지로 인간의신장 질환비만세포의 증가를 동반한다.신장비만 세포는 건강한 사람에서 거의 관찰되지 않기 때문에 피질, 특히 섬유화증 영역에서 [34]신장.
이전 간행물에 따르면 비만 세포는 정상적인 인간의 간, 폐 및 폐에 없거나 드물게 발견됩니다.신장[35]. 비만세포에 대한 지식의 진전으로 선천면역세포인 비만세포는 모든 조직에서 관찰될 수 있지만 환경에 노출된 부위에 더 많이 존재함을 보여주고 있다. 게다가, 그들은 자극에 반응하고 다른 세포와 상호작용할 수 있도록 하는 수용체의 큰 레퍼토리를 표시합니다[36].신장비만 세포는 기능적으로 폐에 있는 세포와 유사합니다. 섬유화증에서 비만 세포의 역할에 대해 상반된 데이터가 보고되었습니다. 많은 저자들은 비만 세포가 섬유화증을 유발하는 급성 및 만성 염증에 역할을 하기 때문에 섬유화증에 관여한다고 제안했습니다. 또한 비만 세포는 히스타민, 헤파린 및 IL{0}}을 분비할 수 있으며 이는 섬유아세포의 증식을 향상시킵니다. 그러나 우리[39]를 포함한 다른 사람들[37,38]은 비만 세포가 항섬유화제 역할을 한다는 것을 보여주었습니다. 예를 들어 비만 세포 결핍 Ws/W 마우스 및 쥐와 같은 동물 모델에서. Okazakiet al. 유도된 섬유화증은 야생형 쥐보다 비만 세포 결핍 쥐에서 더 심하다는 것을 보여주었다[38].
또한 비만 세포는 대식세포와 유사하게 암에서 양극화되는 것으로 나타났습니다[40]. 항염증성 비만 세포는 IL{2}}과 같은 사이토카인을 발현하며, 그 수는 염증의 중증도와 반비례하는 반면, 전염증성 비만 세포는 전염증성 설정에 해당합니다. 특히 (i) 여러 모델에서 IL-10 수준과 HLA-G 발현 및 (ii) HLA-G 간의 연관성이 나타났기 때문에 항염증성 비만 세포가 HLA-G를 발현할 가능성이 있습니다. 항염 작용이 있다. HLA-G를 발현하는 비만 세포는 병변에 대한 첫 번째 반응인 염증을 중화하기 위해 염증 단계 동안 질병의 초기 단계에 존재할 수 있습니다. 문헌에서 Il{11}}는 염증 반응을 감소시켜 근원섬유모세포의 증식과 콜라겐 합성을 억제할 수 있다고 보고되었습니다[41]. 실제로 IL{13}}은 알코올 중독에서 보호 역할을 할 수 있습니다.간 질환[42]. 대조적으로, IL{1}}의 혈청 수준은 정상 피험자보다 IPF 환자에서 발견되었고 기관지폐포 세척액에서 IL-10의 최고 수준은 유육종증 또는 과민성 폐렴에 비해 IPF 환자에서 입증되었습니다. [43]. 덜 중요한 염증 성분으로 설명할 수 있습니다. ~ 안에신장섬유화증, IL{0}} 부족이 악화되는 마우스 모델이 입증되었습니다.신장염증 및 섬유화증 [44]. 인간에서 TGF-길항제와 관련된 국소 IL{1}} 면역요법으로 치료하면 만성신장병 [45].
또 다른 관련 결과는 드물게 알코올성 간경변증의 경우 섬유화 영역 근처의 세포 노드에서 HLA-G 플러스 세포의 관찰입니다. 이 세포는 형태학적으로 쉽게 알아볼 수 있는 중소 크기의 세포 클러스터로 특징지어지며, 이는 림프계 응집체를 암시합니다. 그들의 형태학적 특징은 주로 B 림프구에 의해 형성된 구조인 여포를 암시합니다. 노드의 4중 면역형광은 HLA-G와 세포의 68%가 B 림프구의 특정 마커인 CD20을 공동 발현했기 때문에 이 가설을 확인했습니다(표 3). 유사한 구조가 IPF에서도 관찰되었으며, 유사한 결과로 노드의 HLA-G 플러스 세포의 76%가 B 림프구인 것으로 나타났습니다(표 6). 섬유화증에서 림프구 신생이 보고되었습니다. 따라서 지속적인 염증과 같은 특정 병리학적 조건 하에서 세포 응집체는 2차 림프 조직, 즉 3차 림프 기관 또는 이소성 림프 여포와 유사한 고도로 조직화된 구조로 발전할 수 있습니다[46]. 이러한 림프 여포는 T 세포가 풍부한 영역과 배 중심이 있는 뚜렷한 B 세포 여포를 포함합니다[47]. B 세포에 침투하여 이소성 난포와 배중심을 구성하는 기전은 림프독소{14}}와 CC-케모카인 리간드 19(CCL19), CCL21, CXC-케모카인 리간드 12(CXCL12)와 같은 림프계 케모카인에 의해 제어됩니다. 림프구 귀환을 조절하는 CXCL13. lym photoxin 및 chemokine 외에도 난포 형성을 유도하고 유지하기 위해 항원 자극이 필요합니다. 이러한 여포는 C형 간염 바이러스로 유발된 우리 코호트에서 관찰되지 않았습니다.간섬유증은 알코올로 유발된 세 가지 경우 중 한 가지에서만 발견되었습니다.간섬유화증은 질병의 뚜렷한 단계를 나타냅니다. 실제로, 이소성 림프 기관의 기능과 염증 및 섬유화증과의 상관 관계는 아직 명확하지 않습니다. 많은 연구에서 섬유화증에서 섬유모세포를 조절하는 B 세포의 새롭고 놀라운 역할을 보여주었습니다. 여기서 섬유화 효과는 TGF와 유사하고 B 세포 활성화 인자(BAFF)에 의해 강화됩니다[48].
섬유증에서 HLA-G의 세포 공급원의 관련성은 설명적일 뿐만 아니라 기능적입니다. HLA-G는 ILT2 및 ILT4와 같은 특정 수용체를 통해 모든 유형의 림프구[49] 및 수지상 세포[20,50]의 기능에 대한 억제 효과가 있습니다. 이러한 면역 세포에 HLA-G의 존재는 염증의 표지자일 뿐만 아니라 염증을 감소시키는 적절한 면역 반응의 신호이기도 합니다. 실제로 HLA-G는 이전에 패혈성 쇼크에서 보인 바와 같이 과장된 염증 반응에 대한 보호 역할을 하는 것으로 알려져 있습니다[51]. 또한, 우리는 이전에 비만 세포와 간 성상 세포 사이의 상호 상호 작용을 연구했으며 이것이 비만 세포의 유인과 HLA-G 생산을 통한 HSC 세포의 콜라겐 생산의 현저한 감소로 이어진다는 것을 보여주었습니다 [39]. 또한, 이소성 여포에서 B 세포에 의한 HLA-G의 발현은 자가분비 기전을 통해 B 세포를 억제함으로써 근섬유모세포에 대한 B 림프구의 섬유화 효과를 상쇄하는 데 기여할 수 있습니다.
환자 및 방법
환자41명의 코호트간알코올 유발 간경변이 있는 이식 환자를 연구했습니다. 환자에게 프로토콜을 알리고 반대 의견이 없는지 확인했습니다(병원 윤리 위원회, 고시 번호 16.47). 10개의 파라핀 블록 샘플신장fifibrosis 및 10 of IPF(병원 윤리 위원회, 고시 번호 16.123)는 완전하고 비가역적으로 익명 처리되어 헬싱키 선언의 원칙에 따라 연구되었습니다. 세 코호트의 임상 및 생물학적 특성은 각각 표 8-10에 요약되어 있습니다.
방법론
면역조직화학 및 면역형광조직은 이식에서 파생되었습니다.간그리고신장또는 폐 생검. 파라핀이 포매된 연속 절편(두께 4μm)을 준비하고 표준 조직 염색, 즉 콜라겐의 HES 착색 및 Sirius Red 표지를 수행했습니다. 동시에, 면역조직화학 및 면역형광은 탈파라핀화 및 항원 검색 프로토콜에 따라 동일한 블록의 파라핀 포함 섹션의 직렬 섹션에서 수행되었습니다. 1차 항체(mAb)는 다음과 같습니다. 단일클론 마우스 항인간 HLA-G(Exbio, 4H{6}} µg/mL 또는 1:100, Vestec, Czech Republic), 다중클론 토끼 항인간 CD117/c-kit , 골수 및 비만 세포 인식(Dako, 1:200, Coppenhagen, 덴마크), 마우스 단일클론 항인간(hum) 비만 세포 트립타제(클론 AA1, Dako, 1:1000), 비만 세포에 대해 특이적, 단일클론 항인간 CD3 (Thermo Scientififics, SP7, 1:500, Waltham, MA, USA), T 림프구에 특이적, 및 단일클론 항 인간 CD20(Dako, M0755, 1:600), B 림프구에 특이적.
간단히 말해서, 면역조직화학용 슬라이드는 Discovery Ultra(Roche, Meylan, France) 자동화 시스템에서 1차 항체와 함께 배양되었습니다. 결합된 1차 항체는 비오틴화된 염소 항-마우스 또는 항-토끼 IgG 2차 항체(Vector, ABCYS, les Ulis, France, 1:7{18}}0) 및 디아미노-벤지딘(DAB MAP 검출 키트, Roche)을 사용하여 밝혀졌습니다. , Meylan, France), Mayer hematoxylin 착색이 뒤따릅니다. HLA-G 플러스 세포의 성질을 정확하게 결정하기 위해 삼중(DAPI, CD117, 비만세포 트립타제), 사중(DAPI, HLA-G, CD117, 비만세포 트립타제), 오중(DAPI, HLA-G, CD3, CD20, 비만세포 트립타제) 면역형광 염색은 알코올 유발 간경변의 대표적인 3예와 IPF의 대표적인 2예에 대해 수행되었다. 계시는 Discovery FAM, 로다민, DCC 및 Cy5 키트(Ventana Medical Systems, Illkirch, France)를 사용하여 수행되었습니다. 염색 후 공초점 스캐너(Pannoramic Scanner, 3DHistech, Budapest, Hungary)를 사용하여 단면 전체 표면의 이미지를 20X 또는 40X 배율로 디지털화했습니다. 면역조직화학 및 다중 면역형광 염색은 HALO 디지털 분석 소프트웨어(V3.0.311)를 사용하여 분석했습니다. 소프트웨어는 Area Quantifification(V2.1.3) 모듈을 사용하여 섬유화증(Sirius Red)을 인식하도록 훈련된 반면, Fish-IF 모듈(v1.2.2)은 염료로 표지된 샘플에 대해 훈련되었습니다. 각 샘플의 전체 섹션이 해당 알고리즘으로 분석을 위해 선택되었습니다. 데이터는 분석을 위해 스프레드시트 소프트웨어로 추출되었습니다.
결론HLA-G 발현을 통한 비만 세포의 항-보호 역할에 대한 우리의 이전 데이터 실험과 관련된 이 작업은 비만 세포가 섬유화 상황에서 HLA-G의 발현을 통해 항섬유화 및 보호 역할을 한다는 것을 시사합니다. 이 역할은 이소성 여포에서 HLA-G를 발현하는 B 림프구에 의해 강화됩니다. 전반적으로, 이러한 발견은 섬유화 기관에서 비만 세포에 의해 발현되는 HLA-G에 대한 보호 역할을 시사합니다.
