Cistanche Salsa의 면역 조절 인자
Mar 05, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
마루야마 신지로, 야마다 코지, 타치바나 히로후미
시탕슈 살사(CAMever) G.Beck, Orobanchaceae는 일본에서 한방 강장제로 사용되는 기생 식물입니다. 우리의 이전 연구에서 우리는 C, 살사 추출물이 인간의 림프절 림프구에서 IgM과 IgG의 생산을 모두 향상시킨다는 것을 발견했습니다. 또한, C, 살사 투석액(CSD)은 a3가 있는 투석막을 사용하여 준비했습니다.{1}}Da 분자량 컷오프는 인간 B 세포주 BALL{4}}에서 IgM 생산을 향상시켰습니다. 또한, 약간의 세포 증식을 유도했습니다. 그러나 대조적으로 CSD는 인간 Burkitt's 림프종 세포주 Namalwa에서 세포자멸사를 동반한 성장 억제를 유도했습니다. 이러한 결과는 림프구에 특이적인 활성 성분이 CSD에 존재할 수 있음을 나타냅니다. 지금까지 이러한 성분의 화학적 특성은 해명되지 않았습니다. 이 연구에서 우리는 CSD의 활성 성분의 화학적 특성을 조사했습니다. B-세포주에서 위에서 언급한 두 활성은 CSD의 오토클레이브 처리에 의해 비활성화되지 않았습니다. 겔 여과 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 활성 분획의 피크가 다른 분획에 집중되어 있음을 발견했습니다. 우리의 결과는 CSD에 적어도 2가지 유형의 활성 성분이 있음을 시사하며, 이들은 수용성 고분자량 성분이고 열에 안정하기 때문에 다당류일 수 있습니다.
키워드: 시스탄체 살사, 고분자량, IgM, 성장억제.
소개
시탕슈 살사(CA Meyer) G.Beck, Orobanchaceae는 일본에서 한방 강장제로 사용되는 기생 식물입니다. 중국에서 이 식물은 신장 결핍과 신경쇠약의 치료에 사용되는 중요한 전통 약재입니다. 체외 연구를 통해 우리는 이미 C. 살사가 면역 체계에 미치는 영향을 보고했습니다. 첫 번째. 우리는 C. 살사 추출물이 인간 림프절 림프구에서 IgM과 IgG의 생산을 향상시킨다는 것을 입증했습니다. 둘째, C. 살사 투석액(CSD)은 3,{1}}Da 분자량 컷오프 투석 멤브레인을 사용하여 제조된 인간 B 세포주 BALL-1에서 IgM 생산을 향상시켰습니다. 또한, 세포 증식을 미미하게 유도하였다.2또한 CSD는 인간 Burkitt's lymphoma cell line인 Namalwa에서 세포사멸을 동반한 성장 억제를 유도하는 역효과를 가진다.3) 이러한 결과는 CSD의 이러한 효과가 다음과 관련이 있음을 시사한다. B 세포의 활성화, 세포자멸사는 사이토카인 및 세포-세포 접촉과 같은 B-세포 분화에 필요한 다른 신호의 결핍으로 인한 것입니다. 그러나 CSD의 화학적 특성은 이전 연구에서 설명되지 않았습니다. 따라서 이 연구에서는 CSD의 활성 성분의 화학적 특성을 조사했습니다.
재료 및 방법
CSD는 이전 연구에서 동일한 방법으로 준비되었습니다. CSD를 20 mg/ml의 인산완충식염수(PBS)에 용해시켰다. 준비된 용액(0.8 ml)을 적용하기 전에 필터(0.22 um)를 통과한 다음 TOYOPEARL HW-40F가 포함된 컬럼을 통해 동일한 용액으로 용출 (1.{14}}×96.5cm, Tosoh Corp., 일본),TOYOPEARL HW-55F(1.{16}} × 98.{19}} cm, Tosoh Corp., 일본) 및 Sephacryl S-400HR(1.{21}}×98.0 cm; GE Healthcare UK Ltd.,.England); 그런 다음 1 ml(30방울) 분획을 수집했습니다. 겔의 공극 부피와 분획된 성분의 대략적인 분자량(MW)을 결정하기 위해, 블루 덱스트란(BD)(Sigma-Aldrich Japan KK, Japan); 및 Leuconostoc spp.(Sigma-Aldrich Japan KK, Japan)에서 얻은 알려진 MW의 dextrans, 즉 MW2,{27}}kDa(D1), 500kDa(D2), 70kDa(D3) 및 6kDa(D4); 및 시아노코발라민(VB12, MW:1355.4)(Wako Pure Chemical Industries Ltd., Japan)을 사용하였다. 각 분획의 총 당 및 단백질 함량은 각각 페놀-황산 방법 및 PIERCETM bicinchoninic acid(BCA) 단백질 분석 키트(Thermo Fisher Scientific Inc., USA)를 사용한 Lowry 방법을 사용하여 결정되었습니다. 포도당과 소혈청 알부민을 각각의 표준물질로 사용하였다. 또한, 각 분획의 320nm(A:2o)에서의 흡광도를 측정하였다. 블루 덱스트란 및 시아노코발라민의 용출 피크는 260 nm에서의 흡광도 값에 의해 결정되었고 알려진 MW의 덱스트란 피크는 페놀-황산 방법을 사용하여 결정되었습니다. CSD는 열안정성을 평가하기 위해 120도에서 20분 동안 오토클레이브되었습니다. 생물 검정에서 세포 배양 및 IgM 측정은 이전 연구와 동일한 방법으로 수행되었습니다.
시스탄체 살사 추출물
결과 및 논의
그림 1은 HW-40F에 대한 CSD의 겔 여과 컬럼 크로마토그램을 보여줍니다. 도 1a로부터, 활성 성분의 MW는 덱스트란 마커 D4에 기초하여 6kDa 초과인 것으로 추정되었다. 또한 CSD 활성, 즉 IgM 생성 향상 및 성장 억제 유도는 모두 오토클레이브 처리에 의해 비활성화되지 않았지만(그림 2), CSD가 0을(를) 통과한 후 일부 구성 요소가 응집되고 손실되었습니다.{6} }음 필터. CSD와 고압증기멸균된 CSD의 용출 패턴은 거의 동일했지만 고압증기멸균된 CSD에서 IgM 생성을 향상시키는 상대적 활성은 처리되지 않은 CSD보다 낮았다. 일부 이유는 응집체가 활성 성분을 보유하거나 일부 활성 성분이 비활성화된 것으로 보입니다. HW-55F에 대한 크로마토그래피 결과는 2가지 유형의 면역조절 인자가 존재할 수 있음을 보여주었습니다. 첫 번째는 fr에 집중되어 있습니다. 32번. 두 번째는 fr에 집중된 반면, IgM 생성을 향상시킬 수 있는 고분자량 활성 성분(HCS)이었습니다. no.50은 세포 증식을 억제할 수 있는 중간 분자량 활성 성분(MCS)이었습니다(그림 3). 그러나 HCS와 MCS(각각 fr.no.32 및 50)에 대해 얻은 피크는 알려진 MW(데이터는 표시되지 않음)의 덱스트란의 피크만큼 날카롭지 않았습니다. 이러한 관찰은 CSD 제조 중 인위적으로 생성된 부산물, 쉽게 파괴되고 다중 단위를 포함하는 활성 성분의 중합체 또는 다른 원래 MW를 갖는 다양한 활성 성분의 가능성을 나타냅니다. 크로마토그램의 용출 패턴은 위에서 언급한 바와 같이 MW가 약간 다른 다양한 구성 요소가 있는 것으로 보이므로 HCS 및 MCS에서 순수한 구성 요소를 얻기가 쉽지 않음을 보여줍니다. 둘 다 활성 성분의 혼합물이지만 HCS는 70kDa를 초과하는 MW의 성분을 포함하는 반면 MCS는 6kDa를 초과하는 MW의 성분을 포함하는 것으로 보입니다. HCS는 HW{22}}F에서 분리 범위를 벗어난 부분으로 용리되었습니다. Sephacryl-S400.a에서 HCS(fr.no.36)의 일부가 MW 2,{28}} kDa인 D1 마커와 동일한 분획으로 용출되었습니다(그림 4). 일반적으로 다당류와 단백질은 식물 추출물에서 수용성 고분자량 성분으로 고려됩니다. 거의 모든 기능성 단백질은 열처리에 의해 불활성화되기 때문에 다당류로 보인다. 그러나 Park et. 알. 는 겨우살이(Viscum album L., Viscaceae) 추출물에서 제조된 viscotoxin이라고 하는 열안정성 세포독성 작은 단백질을 보고했습니다.4 게다가, viscotoxin은 인간 자연 살해 세포의 면역 조절 활성을 향상시키는 것으로 나타났습니다.5 그림 3에서 MCS는 MW가 낮고 단백질 함량이 높습니다. 이러한 사실을 고려할 때 MCS는 단백질 결합 다당류일 수도 있고 점독소와 같은 열안정성 단백질일 수도 있습니다. 이러한 결과는 2개의 활성 성분이 다당류일 수 있음을 보여줍니다. 그렇지 않으면 MCS는 열안정성 단백질일 수 있습니다.
참고문헌
1) Deng, M., Zhao, JY, Ju, XD, Tu, PF, Jiang, Y., Li, ZB: 신경 세포에서 TNF 알파 유도 세포자멸사에 대한 tubuloside B의 보호 효과. Acta Pharmacol. Sin.,25, 1276-1284,2004.
2) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H.:시스탄체 살사 추출물인간 B 세포주 BALL{0}}.J에서 향상된 IgM 생산 트라. Med.,24,209-211,2007.
3) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H:시탕슈 살사추출물은 인간 Burkitt's 림프종 세포주 Namalwa에서 세포 사멸을 유도했습니다. J.트라드. Med.,25,24-27,2008.
4) 공원. JH,Hyun,CK,Shin HK: 열처리된 겨우살이(Viscum album) 성분의 세포독성 효과.Cancer Let, 139, 207-213,1999.
5) Tabasco, J., Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: 겨우살이 점독소는 자연 살해 세포 매개 세포 독성을 증가시킵니다. Eur.J. Biochem., 269,2591-2600, 2002.
6) Fisher, M., Yang, LX: 다당류-K(PSK)의 항암 효과 및 기전: 암 면역 요법의 의미. Anticancer Res.,22,{3}},2002.
시스탄체 보충제
