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아밀로이드 베타 응집의 억제 및 Cistanche Tubulosa 수용액 추출물의 침착

Mar 02, 2022

연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com

Chien-Liang Chao , Hsin-Wen Huang , Hui-Chi Huang , Hsin-Fan Chao , Shuen-Wen Yu , Muh-Hwan Su , Chao-Jih Wang 및 Hang-Ching Lin

추상적인

시스탄체 튜불로사 수성 추출물(CTE)는 이미 중국에서 치매 치료를 위한 식물 처방약으로 사용되고 있습니다. 우리의 이전 연구는 CTE(시스탄체 튜불로사 수성 추출물) 아밀로이드 펩타이드(A) 응집 및 침착을 억제함으로써 항알츠하이머병(AD) 활성을 갖는다. 그러나 최근 연구에서는 모든 분석 결과 페닐에타노이드 배당체의 생체이용률이 극히 낮은 것으로 나타났기 때문에 페닐에타노이드 배당체가 장내 세균에 의해 대사될 수 있다고 생각했습니다. 이 연구에서 우리는 철 킬레이션이 A 응집 및 침착 억제 메커니즘에서 어떻게 중요한 역할을 하는지 보여줍니다.페닐에타노이드 배당체CTE의(시스탄체 튜불로사 수성 추출물). 또한, 우리는 페닐에타노이드 배당체(1-3)가 뇌에 도달할 수 있음을 추가로 증명했습니다. 활성 CTE(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)성분 및 작용 메커니즘 확인은 향후 제품 품질 관리 및 생체 이용률 연구에 큰 도움이 될 것입니다. 동시에, 우리는 화학적 지문 및 약동학 연구를 위해 식물, 식품, 혈액 및 조직에서 페닐에타노이드 배당체(1-3)를 결정하는 데 유용한 새로운 분석 방법을 제공합니다.

키워드: 세뇨관(Cistanche tubulosa); 페닐에타노이드 배당체; 알츠하이머병; 철 킬레이트화

Cistanche tubulosa

시스탄체 튜불로사

1. 소개

치매는 가장 흔한 만성 노화 질환 중 하나입니다. 2015년 세계 알츠하이머 보고서에 따르면 약 4,680만 명이 치매를 앓고 있으며, 2030년에는 7,470만 명, 2050년에는 1억 3,150만 명에 이를 것으로 예상됩니다[1]. 전 세계 치매 인구는 해마다 증가하고 미래에 통제 불능 상태가 될 것입니다. 2010년 치매 치료를 위한 전 세계 의료비 지출은 약 6040억 달러에서 2030년에는 10000억 달러에 이를 것으로 예상된다[2]. 치매 환자는 우발적인 사망의 위험이 더 높기 때문에[3] 더 많은 의료가 필요합니다. 이는 치매환자 가족 간병인에게 큰 부담이다. 간병인, 가족 및 사회에 대한 치매의 영향은 신체적, 심리적, 삶 및 경제적 스트레스를 유발할 수 있습니다. 치매에는 두 가지 주요 형태가 있는데, 알츠하이머병(AD)과 혈관성 치매[4,5]입니다. 알츠하이머병은 가장 흔한 치매이며 비가역적이고 진행성인 퇴행성 신경질환이다[4-6]. 알츠하이머병은 2015년 미국에서 6번째 주요 사망 원인이었습니다[6].

최근 연구는 아밀로이드 펩타이드(A)(플라크) 및 단백질 타우(엉킴) 응집에 의해 유도된 뉴런 독성이 알츠하이머병 발병과 밀접하게 관련되어 있음을 뒷받침합니다. A와 단백질 타우가 뇌에 축적되면 뉴런 손상과 기억 상실을 유발할 수 있습니다[7]. 불용성 A 올리고머는 세포외 플라크에 응집되어 시냅스 기능 장애, 뉴런 독성 및 세포 사멸을 유발하는 것으로 보고되었습니다[8]. 불행히도, A 및 단백질 타우를 제거하거나, A의 형성 또는 올리고머화를 억제하고, 비가역적 뉴런 손상을 정지 또는 치료하는 효과적인 치료법이 아직 없습니다. 아세틸콜린에스테라제 억제제인 ​​갈란타민, 도네페질 등 현재 치료제는 신경전달물질 수치를 높여 일시적으로 기억상실을 개선할 수 있을 뿐이다. 2012년에는 대규모 알츠하이머병 환자 임상 연구에서 A 효과를 감소시킬 수 있는 후보 약물이 없었다[9]. 따라서 알츠하이머병의 유병률을 억제할 수 있는 새로운 치료법에 대한 연구가 시급하다. 금속 이온은 최근 A 응집과 밀접한 관련이 있는 핵심 요소로 간주되고 있다[10]. 잠재적인 납 화합물로 간주되는 금속 킬레이터는 항알레르기 접근법을 위한 완전히 새로운 전략을 제공합니다[9,11-15].

Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight, Rou Cong Rong의 말린 줄기는 중국의 Xinjiang 사막에서 널리 수확됩니다. 중국 약전에 등재된 강장제에 속하는 중요한 한약으로, 허약, 신장 결핍, 불임, 건망증, 발기 부전 및 노인성 변비의 치료에 수천 년 동안 사용되었습니다[16,17].Cistanche tubulosa 수성 추출물(CTE) 캡슐은 중국에서 혈관성 치매에 대한 식물성 약물로 승인되었습니다. 경증에서 중등도의 알츠하이머병으로 진단된 18명의 환자를 대상으로 한 임상 시험에 따르면, CTE는(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)캡슐은 아세틸콜린에스테라제 억제제에 비해 환자에게 더 안정적인 기억 상태를 제공했습니다[18]. 이전 연구에서 CTE는(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)알츠하이머병 유사 쥐의 아밀로이드 펩타이드(A) 침착 감소 및 기억 상실 개선[19]. 페닐에타노이드 배당체, 에키나코사이드(1), 악테오사이드(2) 및 이소-액테오사이드(3)는 CTE의 주요 성분으로 간주됩니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)[20]. 화합물 1은 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine(MPTP)[21], 1-methyl의 독성에 대한 신경보호 활성을 가지고 있습니다. -4-페닐 피리디늄 이온(MPP 플러스)[22] 및 6-하이드록시도파민({13}}OHDA)[23]. 우리의 이전 보고서는 1이 시험관 내 연구에서 A 올리고머화 및 독성을 억제하고 A 침착을 억제하여 A로 유도된 쥐의 손상된 기억과 인지 기능 장애를 개선한다는 것을 보여주었습니다[24]. 화합물 2 및 3은 시험관 내에서 A 분해를 증가시키고 A 올리고머화를 감소시켰다[25]. 화합물 3은 A로 유도된 쥐에서 A 침착을 감소시켰다[25]. 이러한 연구를 기반으로 C. tubulosa는 이미 AD를 치료할 가능성이 있음을 입증했습니다. CTE(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)항-A 응집 및 침착과 밀접한 관련이 있다[24,25]. CTE를 더 잘 이해하려면(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)메커니즘에서 활성 성분과 뇌 조직 샘플의 함량을 식별할 수 있는 편리하고 효율적인 방법이 필요합니다. 대부분의 연구는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의한 허브 또는 식품의 echinacoside, acteoside 및 iso-acteoside의 정량적 측정을 위해 설계되었지만[26-28], 혈청 또는 조직에서의 측정에 대한 연구는 단 두 개[29, 30]. 그러나 CTE 후 뇌 조직에서 1-3의 동시 분석에 대한 보고는 없다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)경구 투여. 또한 최근 연구에서 CTE가(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)활성 성분 또는 그 대사 산물은 혈뇌 장벽을 성공적으로 통과하여 뇌 뉴런에 작용했습니다. 따라서 이 연구는 CTE의 기본 메커니즘을 명확하게 보여주는 설득력 있는 증거와 함께 고급적이고 민감한 방법을 제공합니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)A 집합 및 기탁에 대해.

Cistanche tubulosa aqueous extract

시스탄체 튜불로사 수성 추출물

2. 결과

2.1. 3가지 주요 화합물의 분리 및 동정(1-3)

C. tubulosa의 말린 줄기를 실온에서 75% EtOH로 추출했습니다. 응축된 75% EtOH 추출물을 수지 및 C18 컬럼 크로마토그래피에 적용하여 에키나코사이드(1), 악테오사이드(2) 및 이소-액테오사이드(3)의 세 가지 주요 화합물을 제공했습니다. 그들의 구조는 NMR(Nuclear Magnetic Resonance) 분광법 및 ESI-MS(전자분무 이온화 질량) 분석과 문헌 데이터[31-33](그림 1, 보충 자료 그림 S3-S11)와 비교하여 설명되었습니다.

2.2. CTE의 페닐에타노이드 배당체(1–3) 함량 분석(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)

분석 방법은 페닐에타노이드 배당체 분석을 위해 검증되었습니다. 화합물 1~3(5.{3}} mg)의 무게를 정확하게 측정하고 50% 메탄올(40 mL)과 혼합했습니다. 혼합물을 5분 동안 초음파 처리하였다. 3개의 페닐에타노이드 배당체(1-3) 표준 용액을 표준 스톡 용액(100 µg/mL)으로 혼합했습니다. 표준 스톡 용액은 50% 메탄올의 연속 부피로 희석하여 표시된 용액의 5가지 농도(각각 5,10, 25, 50 및 100μg/mL)를 준비하는 데 사용되었습니다. 페닐에타노이드 배당체(1–3) 곡선은 5–100 µg/mL의 초고성능 액체 크로마토그래피(UPLC)를 사용하여 설정되었으며 각각 선형이었습니다(1, r{22}}.9999; 2, r{25} }.9999, 3, r2=0.9998). 일중 및 일중 정밀도[ 퍼센트 RSD(상대 표준 편차)는 0.1~1.8%]이고 정확도(95.6~104.2%)는 1~3에 대해 UPLC에 의해 허용되었습니다. UPLC는 CTE의 1, 2 및 3을 정량화했습니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)함량은 각각 254, 38 및 41 mg/g입니다(그림 S2).

2.3. UPLC/MS/MS 검증

페닐에타노이드 배당체(1-3)를 쥐의 뇌 조직 균질물과 혼합하고 스파이킹하고 고상 추출이 포함된 Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometer(UPLC/MS/MS)를 사용하여 분석했습니다. 1~3의 검출 하한(LLOQ)은 0.2ng/mL였습니다. 페닐에타노이드 배당체 회복은 각각 1의 경우 91.39%, 2의 경우 89.54%, 3의 경우 96.81%로 뇌 조직 균질물(10ng/mL)로 급증했습니다(그림 2).

2.4. AD 유사 쥐 뇌 조직 분석

CTE 14일 후(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)경구 투여(200 mg/kg/day), AD 유사 쥐의 뇌 조직을 수집하여 해마와 선조체의 두 부분으로 나누고 둘 다 균질화했습니다[19]. 각 쥐의 해마와 선조체 균질물은 고상 추출에 로드하기에는 너무 부족하고 과도한 실험 오류를 피하기 위해 4마리 개별 쥐의 해마와 선조체 균질물을 다음을 사용하여 UPLC/MS/MS용 분석 샘플에 혼합했습니다. 고체상 추출 방법(그림 3A,B). 페닐에타노이드 배당체(1-3)는 해마(그림 3A)와 선조체(그림 3B)에서 관찰되었습니다. 빈 뇌 조직에는 유의미한 피크가 없었습니다(그림 3C). 해마에서 에키나코사이드 함량은 11.97 ± {{2{28}}}}.34ng/mL, 악테오사이드 함량은 1.25 ± 0.16ng/mL, 이소악테오사이드 함량은 1.38 ± 0.08ng/mL였습니다. ML. 선조체에서 echinacoside 함량은 22.60 ± 1.69 ng/mL, acteoside 함량은 2.03 ± 0.61 ng/mL, isoacteoside 함량은 4.90 ± 0.64 ng/mL였습니다. 그림 4와 같이 CTE는(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)해마와 선조체에서 1-3의 상당한 양의 감지 가능한 양에 따라 혈액-뇌 장벽을 통과할 것입니다. 1의 내용은 CTE의 2와 3보다 훨씬 높습니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)UPLC 분석(그림 S2). 따라서 경구 CTE 후 뇌 조직에서 1이 가장 높다는 것을 관찰하는 것이 합리적입니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)관리. 분자 2019, 24, 12 2.4의 동료 검토 4용 x. CTE 14일 후 AD-유사 쥐 뇌 조직 분석(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)경구 투여(200 mg/kg/day), AD 유사 쥐의 뇌 조직을 수집하여 해마와 선조체의 두 부분으로 나누고 둘 다 균질화했습니다[19]. 각 쥐의 해마와 선조체 균질물은 고상 추출에 로드하기에는 너무 부족하고 과도한 실험 오류를 피하기 위해 4마리 개별 쥐의 해마와 선조체 균질물을 다음을 사용하여 UPLC/MS/MS용 분석 샘플에 혼합했습니다. 고체상 추출 방법(그림 3A,B). 페닐에타노이드 배당체(1-3)는 해마(그림 3A)와 선조체(그림 3B)에서 관찰되었습니다. 빈 뇌 조직에는 유의미한 피크가 없었습니다(그림 3C). 해마에서 에키나코사이드 함량은 11.97 ± {{2{28}}}}.34ng/mL, 악테오사이드 함량은 1.25 ± 0.16ng/mL, 이소악테오사이드 함량은 1.38 ± 0.08ng/mL였습니다. ML. 선조체에서 echinacoside 함량은 22.60 ± 1.69 ng/mL, acteoside 함량은 2.03 ± 0.61 ng/mL, isoacteoside 함량은 4.90 ± 0.64 ng/mL였습니다. 그림 4와 같이 CTE는(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)해마와 선조체에서 1-3의 상당한 양의 감지 가능한 양에 따라 혈액-뇌 장벽을 통과할 것입니다. 1의 내용은 CTE의 2와 3보다 훨씬 높습니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)UPLC 분석에 의해 따라서 경구 CTE 후 뇌 조직에서 1이 가장 높다는 것을 관찰하는 것이 합리적입니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)관리자.

2.5. 페닐에타노이드 배당체(1–3) 금속 킬레이트화 활성

문헌에서 자유 화합물 및 금속 착물의 측정은 HPLC를 사용하여 수행되었습니다[34,35]. 킬레이트화 활성의 측정은 이 연구에서 UPLC에 의해 분석되었습니다. 각 페닐에타노이드 배당체(1-3)의 50μg/mL 용액을 구리(Cu), 칼슘(Ca), 마그네슘(Mg), 아연(Zn), 철(Fe) 또는 각각 쥐 혈청. 각 금속 용액 또는 혈청과 함께 각 화합물을 UPLC로 분석했습니다. 페닐에타노이드 배당체(1-3)는 철 및 혈청과 함께 금속 킬레이트 활성을 나타냈습니다(그림 5, 보충 재료 그림 S1). Molecules 2019, 24, x FOR PEER REVIEW CTE 후 AD 유사 쥐의 샘플 12개 중 5개(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)경구 투여(200 mg/kg, po) [1(tR= 4.19분), 2(tR= 5.13분) 및 3(tR= 5.68분)] . (c) 빈 뇌 조직. 그림 4. 페닐에타노이드 배당체(1-3)는 UPLC/MS/MS를 사용하여 쥐의 뇌 조직에서 검출 가능했습니다[19]. 표시된 데이터는 각 그룹의 평균 ± SD, n{14}}입니다. 2.5. 페닐에타노이드 배당체({17}}) 금속 킬레이트화 활성. 문헌에서 자유 화합물 및 금속 착물의 측정은 HPLC를 사용하여 수행되었습니다[34,35]. 킬레이트화 활성의 측정은 이 연구에서 UPLC에 의해 분석되었습니다. 각 페닐에타노이드 배당체(1-3)의 50ug/mL 용액을 구리(Cu), 칼슘(Ca), 마그네슘(Mg), 아연(Zn), 철(Fe) 또는 각각 쥐 혈청. 각 금속 용액 또는 혈청과 함께 각 화합물을 UPLC로 분석했습니다. 페닐에타노이드 배당체(1–3)

2.6. 생체 내 쥐 혈청 내 Echinacoside(1) 분석

랫트 혈청 내 에키나코사이드 분포를 이해하기 위해 에키나코사이드 (1) 경구 투여(100 mg/kg) 후 초기 시간부터 720분까지 혈청을 채취하였고, 에키나코사이드 투여 초기부터 720분까지 혈청을 채취하였다. (1) 경구 투여(100 mg/kg) 및 UPLC로 분석. 그림 6은 쥐 혈청에서 에키나코사이드의 농도 대 시간 프로파일을 보여줍니다.

Cistanche

3. 토론

치매, 특히 알츠하이머는 돌이킬 수 없는 노화와 만성 질환으로 고르디우스의 문제를 낳습니다. 이 극복할 수 없는 질병은 막대한 재정적 부담과 함께 심각한 경제적 문제를 초래합니다. 전 세계적으로 알츠하이머병 연구자들은 새로운 항알츠하이머병 치료제를 연구하기 위해 많은 노력을 기울이고 있지만 2012년 A를 대상으로 한 여러 대규모 임상 시험에서 실패했습니다[9]. A 를 직접 표적으로 하는 것을 제외하고, 뇌의 금속 이온 항상성은 AD 형성으로 이어지는 A 응집 및 침착과 관련된 주요 원인으로 간주됩니다[9,10]. 따라서 금속이온은 알츠하이머병의 발병기전에 필수적인 역할을 하며 금속 킬레이트화 가설은 중요한 연구 방향이 되었다[9,13-15].

우리의 이전 연구[18,19,24,25]에 따르면, CTE(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)잠재적인 항치매 활동을 보였다. 인간 임상 연구에서도 CTE로 1년 치료 후(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)중등도 알츠하이머병 환자를 위한 알츠하이머병 평가 척도 인지 하위척도(ADAS-cog) 점수는 치료 전과 비교하여 유의한 악화를 나타내지 않을 것입니다[18]. CTE(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)AD 환자의 ADAS-cog 점수를 안정적으로 유지했지만 다른 처방약은 그렇지 않았습니다. 알츠하이머병 치료제로 허가된 처방약의 유일한 선택은 도네페질(donepezil), 갈란타민(galanthamine)과 같은 아세틸콜린에스테라제 억제제(acetylcholinesterase inhibitors, AChEIs)로 단기간에 알츠하이머병 증상을 호전시키지만 치료 1년 후에 악화된다[36]. 임상 연구에 따르면 CTE는(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)항AD제 개발을 위한 잠재적인 치료제가 될 수 있는 기회가 있습니다. 우리의 이전 보고서[24,25]에 따르면, echinacoside(1), acteoside(2) 및 iso-acteoside(3)는 A에 의한 손상으로부터 뉴런을 보호하고, 시험관 내 A 올리고머화를 감소시키며, A에 의해 유도된 인지 기능 장애를 상당히 개선합니다. 생체 내. 시험관 내 연구에서는 1-3의 활성 용량이 최대 5{14}}ug/mL인 것으로 나타났습니다[24,25]. 그러나 이전 연구에서는 1과 2의 경구 생체이용률이 쥐에서 매우 낮았습니다({17}}1의 경우 .83%, 2의 경우 0.12%)[29,30]. 화합물 1은 에키네시아 정제를 경구 투여한 후 인간 혈청에서도 확인되지 않았다[37]. 현재 연구에 따르면 1-3은 장 세포에서 막 투과성과 흡수가 좋지 않으며 [38], 1의 대부분은 위장관에서 대사됩니다 [39]. 쥐 혈청의 화합물 2 함량은 10mg/kg의 악테오사이드를 15분 동안 정맥 주사한 후 약 4.5ug/mL에 불과했습니다[30]. 그러나 이 연구는 CTE 후 쥐 뇌 조직의 해마와 선조체에서 1-3이 검출될 것임을 보여줍니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)경구 투여(그림 3 및 4). 또한, 도 6은 화합물 1 경구 투여(100 mg/kg) 후 15분에서 720분으로 래트 혈청 내 화합물 1 함량이 약 5배 증가함을 보여주었다. 우리는 CTE의 페닐에타노이드 배당체를 고려했습니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)혈액 뇌 장벽을 통과하고 CTE 사이에 킬레이션 작용이 있을 것입니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)그리고 금속. 킬레이션은 가역적인 화학 반응입니다. 철분은 혈청과 뇌의 필수 요소입니다[10,40]. 그림 5는 3개의 페닐에타노이드 배당체가 철 및 혈청과 함께 금속 킬레이트 활성을 가질 수 있음을 보여줍니다. 철과 혈청은 3가지 페닐에타노이드 배당체의 피크 체류 시간 영역을 분명히 변화시킵니다. 철 킬레이트화는 페닐에타노이드 배당체의 매우 낮은 생체이용률을 잘못 식별하는 결정적인 원인일 수 있습니다. 따라서 세 가지 CTE의 혈청 및 뇌 분석에서 금속 킬레이트 활성을 고려해야 합니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물)실제 생체이용률과 약동학을 회복하기 위한 페닐에타노이드 배당체. 또한, 결과는 3개의 페닐에타노이드 배당체(1-3)가 혈액-뇌 장벽을 통과하여 신체 순환을 통해 뇌 조직에 도달함을 나타냅니다. 이 연구는 UPLC/MS/MS를 사용하여 1-3 분석을 위한 가장 빠르고 민감한 방법을 개발했으며 페닐에타노이드 배당체(1-3)가 CTE의 주요 생리 활성 성분임을 입증하는 강력한 증거를 제공했습니다.(시스탄체 튜불로사 수성 추출물).

Cistanche tubulosa extract

Cistanche tubulosa 추출물

4. 재료 및 방법

4.1. 식물 재료

C. tubulosa의 줄기는 2016년 5월 중국 항저우에서 수집되었습니다. 식물은 Lin HC 바우처 표본(No. 20016CT)에 의해 확인되었으며 중국 항저우에 있는 Sinphar Tian-LiPharmaceutical Co., Ltd.에 기탁되었습니다.

4.2. 분리 및 정제

건조된 C. tubulosa 줄기를 분말로 분쇄한 다음 75% EtOH로 5회 추출했습니다. 감압 하에서 용매 증발 후, 조 추출물을 H2O/EtOH 구배 용매 시스템을 사용하여 Macroporousresin AB{1}} 컬럼 크로마토그래피에 적용했습니다. 20% EtOH에서 100% EtOH까지. 박층 크로마토그래피에 따르면 4개의 분획(Fr.1~Fr.4)을 추가 분리를 위해 수집했습니다. 정말로. 2는 이동상 시스템으로 18% 아세토니트릴을 사용하여 COSMOSIL® 5C{10}AR-II 컬럼(250mm × 20mm id, 5µm)에서 예비 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 수행했습니다. 동료 속도는 15mL/분이었습니다. 세 가지 주요 관심 피크를 선택적으로 수집했습니다. 표적 화합물을 함유하는 분획을 추가로 농축 건조하여 각각 1, 2 및 3을 생성하였다.

4.3. 실험적 분석

1H 및 13C NMR 스펙트럼은 내부 표준으로 테트라메틸실란(TMS)을 사용하는 Bruker Avance DRX 500MHz 분광기(Billerica, MA, USA)를 사용하여 얻었다. Shimadzu LC{8}}AD 시리즈에서 역상 컬럼(Cosmosil C18-AR-II 컬럼, 250mm × 20mm id; NacalaiTesque, Inc., Kyoto, Japan)을 사용하여 분취용 HPLC를 수행했습니다. Prominence HPLC UV-Visdetector(교토, 일본)가 있는 장치.

에키나코사이드 (1):백색 분말; ESI-MS m/z: 785 [M-H]-; 1H NMR(CD3OD, 500MHz):δ 1.{67}}7(1H, d, J{7}}.2Hz, Rha-H{{1{79}}} }), 2.79(2H, t, J= 5.2Hz, H{16}}), 3.56(1H, m, Ha{{20}}), 3.79(1H, m, H-30 ),3.91(1H, m, Hb-8), 4.29(1H, d, J= 7.7, Glc-H-1), 4.38 (1H, d, J=7.9Hz, H{41}} ), 5.00 (1H, t, J=9.6Hz, H{47}}), 5.17(1H, d, J{51}}.5Hz, Rha-H-1), 6.27(1H, d, J{58}}.9Hz, H{60}}), 6.58(1H, dd, J{64}}.1,2.0Hz,H{68}}), 6.67(1H, d, J{72}}.1Hz, H{74}}), 6.70(1H, d, J{78}}.0Hz, H{80}}), 6.77(1H, d, J{84}}.2Hz, H{ {86}} ), 6.94(1H,dd, J{90}}.3, 2.0Hz, H{94}}), 7.05(1H, d, J{98}}.0Hz, H{ }), δ 7.59(1H, d, J{104}}.9Hz, H{106}}); 13C-NMR(CD3OD, 125MHz): δ 18.5(Rha-C{114}}), 36.6(C{117}}), 62.6(Glc-C{121}}), 69.4(C-6) 124}}), 70.5(C{127}}), 70.6(Rha-C{131}}), 71.5(Glc-C{135}}), 72.0(Rha-C{139}}) , 72.3(C{142}}), 72.4(Rha-C{146}}), 73.8(Rha-C{150}}), 74.7(C{153}}), 75.1(Glc-C) -2), 76.1(C{160}}), 77.8(Glc-C{164}}), 77.9(Glc-C{168}}), 81.7(C{171}}) , 103.1(Rha-C{175}}), 104.2(C{178}}), 104.7(Glc-C{182}}), 114.7(C{185}}), 115.3(C{{ 188}}), 116.3(C{191}}), 116.5(C{194}}), 117.1(C{197}}), 121.3(C{200}}), 123.3(C{{ 203}} ), 127.6(C{206}}),131.5(C{209}}), 144.7(C{212}}), 146.1(C{215}}), 146.9(C{{ 218}}), 148.2(C{221}}), 149.8(C{224}}), 168.5(C{227}})(그림 S3–S5)

Echinacoside

악티오사이드(2):백색 분말; ESI-MS m/z: 623 [M-H]-; 1H NMR(DMSO-d6, 500 MHz): δ0.94(3H, d, J=5.9Hz, H{{1{{ 156}}}}), 2.68(2H, m, H{14}}), 4.33(1H, d, J{18}}.8Hz, H{{2{159}}}}), 4.70(1H, t, J= 9.0Hz, H{26}} ),5.01(1H, s, H-1000 ), 6.18(1H, d, J=15 .9Hz, H{36}} ), 6.48(1H, dd, J{40}}.9, 1.4Hz, H{44}}), 6.62(1H, d, J=7 .1Hz, H{50}}), 6.73(1H, d, J= 2.0Hz, H{56}}), 6.75(1H, d, J{60}}.9Hz , H-50 ), 6.97(1H, d, J=8.1Hz, H{68}} ),7.01(1H, s, H{72}} ), 7.44(1H , d, J=15.8Hz, H-70 ); 13C NMR: (DMSO-d6, 125MHz): δ 18.2(C-6000), 35.1(C-7), 60.8(C-600), 68.8(C{{94} } ), 69.2(C{97}} ), 70.3(C{100}}), 70.3(C{103}}), 70.4(C{106}}), 70.6(C{109} } ), 71.7(C{112}} ),74.5(C{115}} ), 79.2(C{118}}), 101.3(C{121}}), 102.3(C{124} } ), 113.6(C{127}}), 114.7(C{130}}), 115.5(C{133}}), 115.8(C{136}}),116.3(C{139} }), 119.6(C{142}}), 121.5(C{145}}), 125.6(C{148}}), 129.2(C{151}}), 143.6(C{154} }), 145.0(C{157}}), 145.0(C{160}}), 145.6(C{163}}), 148.5(C{166}}), 165.7(C{169} } ) (그림 S6–S8).

이소-액티오사이드(3):백색 분말; ESI-MS m/z: 623 [M-H]-; 1H NMR(DMSO-d6, 5{19}}0MHz):δ 1.{150}}7(3H, d, J= 6.1Hz, H{10} } ), 2.65(2H, m, H{14}}), 4.35(1H, d, J{18}}.0Hz, H{20}}), 5.10(1H, s, H{{ 24}}),6.27(1H, d, J{28}}.9Hz, H{30}}), 6.45(1H, dd, J{34}}.0, 1.8Hz, H{{ 38}}), 6.58(1H, d, J= 8.8Hz, H{44}}), 6.73(1H, d, J=1.6Hz, H{50} }), 6.74(1H, d, J=8.1Hz, H{56}} ), 6.94(1H, d, J=8.2Hz, H{62}}) , 7.04(1H, s, H{66}}),7.46(1H, d, J{70}}.8Hz, H{72}}); 13C NMR(DMSO-d6, 125MHz): δ 17.9(C-6000), 35.2(C{82}}), 63.5(C-600), 68.2(C-5000 ), 70.4(C{91}}), 70.6(C{94}}), 71.7(C{97}}), 72.1(C{100}}), 73.7(C{103}} ), 74.1(C{106}}), 74.5(C{109}}), 80.9(C{112}}), 100.7(C{115}}), 102.7(C{118}} ), 113.9(C{121}}), 114.9(C{124}}), 115.5(C{127}}), 115.8(C{130}}), 116.3(C{133}} ), 119.6(C{136}}), 121.5(C{139}}), 125.5(C{142}}), 129.2(C{145}}), 143.5(C{148}} ), 145.0(C{151}}), 145.3(C{154}}), 145.6(C{157}}), 148.5(C{160}}),165.6(C{163}} ) (그림 S9–S11).

acteoside from cistanche

4.4. Cistanche Tubulosa 수성 추출물(CTE)의 제조

쑥갓 분말의 줄기를 물과 함께 1.5시간 동안 환류하여 2회 추출하고, 추출액을 여과하였다. 필터링된시스탄체 튜불로사수성 추출물(CTE)는 사용 전 4℃에서 보관하였다.

5. 결론

이 연구는 1-3이 항AD 활성을 위한 CTE의 활성 성분임을 입증했습니다. 철 킬레이트화는 AD 치료를 위한 차세대 약물을 설계하기 위한 새로운 개념이 되었습니다[41]. CTE는 철 킬레이트화 유도 A 응집 및 침착을 표적으로 하는 잠재적인 식물 항알츠하이머병 치료제입니다. 또한 우리는 1-3이 BBB(혈액뇌장벽)를 통해 뇌에 도달한다는 것을 추가로 증명했습니다. 활성 성분 및 CTE의 기본 메커니즘 확인은 향후 제품 연구의 품질 관리 및 생체 이용률에 크게 도움이 될 것입니다. 동시에, 제시된 첨단적이고 효율적인 분석 방법은 화학적 지문 및 약동학 연구를 위해 식물, 식품, 혈액 및 뇌 조직에서 1-3을 결정하는 데 유용할 것입니다.

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