Cistanche Tubulosa의 이리도이드 및 비고리형 모노테르펜 배당체, 칸카노사이드 L, M, N, O 및 P
Mar 06, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
시스탄체 튜불로사(SCHRENK) R. WIGHT(Orobanchaceae)는 북아프리카, 아라비아 및 아시아 국가에 분포하는 Salvadora 또는 Calotropis 종의 뿌리에서 자라는 다년생 기생 식물입니다.1) 이 식물의 줄기(일본어 Kanka-nikujuyou)는 전통적으로 발기 부전, 불임, 요통 및 신체 약화의 치료 및 혈액 순환 촉진제에 사용됩니다.1,2) Cistanche tubulosa 줄기의 생리 활성 성분에 대한 연구 과정에서,3-6) 이전에 보고한 바 있습니다. 칸카노시드 H1, H2, I, J1, J2, K1, K2를 포함한 24개의 페닐에타노이드 아미노글리코시드와 Cistanchetubulosa의 신선한 줄기에서 추출한 2개의 아실화 올리고당.5,6) 또한, 주요페닐에타노이드 배당체,에키나코사이드, 악테오사이드,및 이소악티오사이드D-갈락토사민(D-GalN)/지질다당류에 의해 os당 25-100 mg/kg의 용량으로 유도된 쥐의 손상된 간에서 혈청 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(sAST) 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(sALT) 수준의 증가를 억제하는 것으로 밝혀졌습니다. po).간 보호 활성을 위한 페닐에타노이드 배당체의 구조적 요구 사항도 밝혀졌습니다.5) Cistanchetubulosa의 신선한 줄기 성분에 대한 이 지속적인 연구에서 우리는 kankanosides L(1), M(2), 및 N(3), 칸카노사이드 O(4) 및 P(5)를 포함하는 7개의 비고리형 모노테르펜 글리코사이드, 3개의 페닐프로파노이드, 및 4개의 리그난. 이 논문은 5가지 새로운 화합물(1-5)의 분리 및 구조 설명을 다룹니다.
C. tubulosa의 신선한 줄기(중국 신장성 우루무치에서 재배됨)를 환류하에 메탄올로 추출하여 메탄올 추출물(신선한 줄기에서 8.36%)을 얻었다. 메탄올 추출물에서 앞서 설명한 대로 Diaion HP{9}} 컬럼 크로마토그래피(H2O→MeOH)에 의해 H2O 및 MeOH 용출 분획(각각 5.63% 및 2.73%)을 얻었다. 5) MeOH 용출 분획은 다음과 같다. SiO2 및 ODS 컬럼 크로마토그래피 및 최종적으로 HPLC를 통해 kankanosides L(1, 0.{18}}026% ), M(2, 0을 제공합니다.{{ 27}}001퍼센트), N(3, 0.00{{6{66}}}}7퍼센트) , O(4, 0.0{{9{91}}}}2{{1{114}}5}}퍼센트 ) 및 P(5, {{118} }.0002% ), 6-deoxycatalpol3,7) (6, 0.197% ), bartsioside3,7) (7, 0.{152}}583%), 글루로사이드3,7)(8, 0.0443%), 칸카노이사이드 A3)(9, 22.3mg, 0.0010%), 무사에노사이드산3,7) (10, 0.0056%), 8- 에필로간산3,8) (11, 0.0023%), 8-에피데옥시로간산3,7) (12, 0.0004%), 제니포시드산3,7) (140, 0.00 퍼센트 ), 칸카노사이드 E3) (14, 0.0026퍼센트 ), (2E,6Z)-8-b D-글루코피라노실옥시-2,{83}}디메틸{84}},{85}}옥타디엔산3,9) (15, 31.0 mg, 0.0014%), (2E,6E){95 }},{96}}디메틸{97}}히드록시옥타디엔{98}}일-ObD-글루 카피라노시드10)(16, 0.0082%), 8-히드록시게라니올 8-Ob-D-글루코피라노시드11 )(17, 0.0044%), 베툴랄부사이드 A12)(18, 0.0004%), coniferin13)(19, 0.0002%), syringin13)(20, 0.0015%)(20, 0.0015%)(20, 0.0015%), 시나프알데하이드}O14bD128} 0.0001%), ()-피노레시놀 ObD-글루코피라노시드4,8,15)(22, 0.0010%), 유코민 A16)(23, 0.0002%), 이소유코민 A17)(24, 0.0010%), 및 -오시링(0.0010%), 글루코피라노사이드4,8,18) (25, 0.0044%).
칸카노사이드 L(1), M(2) 및 N(3)의 구조
Kankanoside L(1)은 음의 광학 회전을 갖는 백색 분말로 수득되었습니다(MeOH 중 [a]D 26 45.7). IR 스펙트럼은 3433 및 1{{2{68}}}80 cm 1 에서 강한 흡수 밴드를 보여 배당체 부분을 암시합니다. FAB(Fast Atom Bombardment)-MS는 양이온 및 음이온 모드에서 각각 m/z 371[M Na] 및 347[MH]에서 준분자 이온 피크를 보였고 분자식은 C15H24O9로 결정되었습니다. 고해상도 FAB-MS 측정으로 1.0 M 염산(HCl)을 사용한 1의 산 가수분해는 D-글루코스를 유리시켰고, 이는 광학 회전 검출기를 사용한 HPLC 분석에 의해 확인되었습니다.3-6) 1의 1 H- 및 13C-NMR 스펙트럼(CD3OD, 표 1, 2), 다양한 NMR 실험에 의해 할당된19) 4개의 메틸렌[d 1.43(1H, br dd, J ca. 5, 13Hz, 4a-H), 1.73(1H, br dd, J 약 12, 14Hz, 6a-H), 1.85(1H, m, 4b-H), 1.93(1H, br dd, J{55}} 약 8, 14Hz, 6b-H), 3.50( 1H, ddd, J 2.4, 12.5, 13.0Hz, 3a-H), 3.83(1H, br dd, J{74}}ca. 5, 13Hz, 3b-H), 3.78, 4.12(각각 1H, 둘 다 d, J 13.1Hz, 10-H2)], 2개의 메틴 [d 2.15(1H, dd, J 7.2, 8.9Hz, 9-H) 및 2.23(1H, m, 5-) H)] 및 아세탈 기 [d 4.81(1H, d, J 8.9Hz, 1-H)]와 b-글루코피라노실 부분[d 4.70(d, J 7.9 Hz, 1 - 시간)]. 도 1에 도시된 바와 같이, 1에 대한 1 H-1H 상관 분광법(1 H-1 H COSY) 실험은 굵은 선으로 작성된 부분 구조의 존재를 나타내었다. 1에 대한 이핵 다중 결합 상관 관계(HMBC) 실험에서 다음과 같은 양성자와 탄소 사이에 장거리 상관 관계가 관찰되었습니다({121}H 및 3-C, 8-C; {{ 124}}H 및 1-C, 7-H 및 8-C, 10-C, 9-H 및 8-C, {{131 }}H2 및 7-C, 8-C; 1 -H 및 1-C) 그림 1에서와 같이 다음과 같은 양성자 쌍({142}}H와 3a H, 3a-H와 4a-H, 3b-H와 4b-H, 4b-H) 사이의 NOE 상관관계를 보여주는 오버하우저 향상 분광법(위상 민감성 NOESY) 실험 및 5-H, 9-H, 5- H 및 6b-H, 9-H, 6a-H 및 7-H, 7-H 및 10-H2), 그림 1에 표시된 대로. 1의 1 H- 및 13C-NMR 스펙트럼은 포화된 d-락톨 부분에. 마지막으로 6의 수소화 반응은 1을 제공하여 kankanoside L의 입체 구조가 3,{178}} dihydro{179}deoxycatalpol(1)인 것으로 밝혀졌습니다.
Kankanoside M(2)은 음의 광학 회전을 갖는 백색 분말로서 수득되었다(MeOH 중 [a]D 26 18.7). 2의 IR 스펙트럼은 3433, 1736, 1655 및 1{23}}76 cm 1 에서 하이드록실, d-락톤, 올레핀 및 에테르 부분에 기인하는 흡수 밴드를 보여주었습니다. 2의 양이온 FAB-MS 스펙트럼은 m/z 353[M Na]에서 준분자 이온 피크를 보였고, 분자식은 고해상도 양이온 FAB-MS 측정에 의해 C15H22O8로 결정되었다. 1.0 M HCl로 2를 산 가수분해하여 D-글루코스를 유리시켰다. 2의 1 H- 및 13C NMR 스펙트럼(CD3OD, 표 1, 2)은 4개의 메틸렌[d 1.66, 2.11(각각 1H, 둘 다 m, 4-H2), 2.15, 2.75(각각 1H , 양쪽 m, 6-H2), 4.29(1H, ddd, J 2.8, 8.4, 14.3Hz, 3b-H), 4.32, 4.51(각각 1H, 양쪽 d, J 13.1Hz, 10- H2), 4.35(1H, ddd, J 3.1, 6.7, 14.3Hz, 3a-H)], 2개의 메틴[d 2.97(1H, m, 5-H), 3.82(1H, br s, {{ 84}}H)], 올레핀[d 5.94(1H, m, 7-H)], 및 bD-글루코피라노실 부분[d 4.32(1H, d)과 함께 포화 락톤 기(d C 174.9) , J 7.9Hz, 1-H)]. 그림 1에서 볼 수 있듯이 2에 대한 1 H-1H COSY 실험은 굵은 선으로 표시된 부분 구조의 존재를 나타냈고 HMBC 실험에서는 다음 proton과 탄소 쌍 사이에 장거리 상관 관계가 관찰되었습니다({105 }}H 및 1-C, 7-H 및 9-C, 9-H 및 1-C, 8-C, {{112} }H2 및 7-C, 8-C, 9-C, 1 -H 및 10-C). 2의 상대적 입체구조는 위상에 민감한 NOESY 실험으로 특징지어지며, 다음 양성자 쌍(3a-H와 4a-H, 3b-H와 4b-H, 4b-H와 5-) 사이의 NOE 상관관계를 보여주었습니다. H, 5-H 및 6b-H, 9-H)는 그림 1과 같이 2의 입체구조가 그림과 같이 해명되었습니다.
Kankanoside N(3)은 음의 광학 회전을 갖는 백색 분말로 분리되었습니다(MeOH 중 [a]D 25 24.6). 3의 양이온 FAB-MS에서는 m/z 371[M Na]에서 준분자 이온 피크가 관찰되었다. 분자식 C16H28O8은 고해상도 FAB-MS 측정에 의해 결정되었습니다. 1.{15}} M HCl 유리된 D-글루코스를 사용한 3의 산 가수분해. 1 H- 및 13C-NMR 데이터(CD3OD, 표 1, 2)는 메틸 [d 1.{67}}7 (3H, d, J 7.2 Hz, 10-H3)]에 할당 가능한 신호를 보여주었습니다. , 4개의 메틸렌{d 1.37, 1.87(각각 1H, 둘 다 m, 7-H2), 1.65, 1.81(각각 1H, 둘 다 m, 6-H2), [3.65(1H, dd, J 9.1) , 9.8Hz), 3.90(1H, dd, J 5.9, 9.8Hz), 11-H2] 및 [3.70(1H, dd, J 3.3, 12.0Hz), 3.88(1H, m), {{ 71}}H2]}, 4개의 메틴[d 1.69(1H, m, 4-H), 1.75(1H, m, 9-H), 2.06(1H, m, 8- H), 2.16(1H, m, 5-H)] 및 bD-글루코피라노실 잔기[ d 4.26(1H, d, J 7.9Hz, 1-H)]. 3의 이리도이드 구조는 1 H-1 H COZY 및 HMBC 실험에 의해 명확해졌고 상대적인 입체구조는 그림 1과 같이 위상 민감성 NOESY 실험에 의해 특성화되었다. 결과적으로 3의 입체 구조는 그림과 같이 해명되었다.
칸카노사이드 O(4) 및 P(5)의 구조
Kankanosides O(4) 및 P(5), C16H26O8도 음의 광학 회전을 갖는 백색 분말로 수득되었다(4: [a]D 23 26.1; 5: [a]D 21 32.7 둘 다 MeOH에서). 4와 5의 IR 스펙트럼은 3433, 1696, 1647 및 4의 경우 1{69}}76 cm 1 , 3434, 17{89}}1, 1647 및 1{96} }76 cm 1 for 5, 글리코시드, 카복실 및 올레핀 기능에 기인. 이들의 UV 스펙트럼은 217 nm에서 공통 흡수 최대값을 나타내어 둘 다에 b-불포화 카르복실산 부분이 존재함을 나타냅니다. 4와 5의 산 가수분해는 D-포도당을 유리시킨 반면, 4와 5는 b 글루코시다아제에 의한 효소적 가수분해에 의해 (2E,6E)-8-하이드록시{37}},6-디메틸{39 }},{{4{115}}}}옥타데센산2{194}}) (4a) 및 (2E,6E)-8-하이드록시{46}},{47}} 디메틸{{ 48}},{49}}옥타데센산21)(5a). 4의 1H- 및 13C-NMR 데이터(CD3OD, 표 2, 3)는 2개의 메틸에 할당 가능한 신호를 보여주었다[d 1.71(3H, brs, 10-H3), 1.81(3H, d, J 1.0Hz) , 9-H3)], 3개의 메틸렌{d 2.19(2H, br t, J 약 7Hz, 5-H2), 2.36(2H, m, 4-H2), [ 4.24(1H, dd, J 7.6, 12.0Hz), 4.33(1H, dd, J 6.2, 12.0Hz), 8-H2]} 및 2개의 삼치환된 올레핀[d 5.41(1H, ddd, J 1.2, 6.2, 7.6Hz, 7- H), 6.75(1H, tq, J 7.2, 1.0 Hz, 3-H)] bD 글루코피라노실 부분과 함께 [d 4.34(d, J 7.8 Hz, 1) -시간)]. 4의 13C-NMR 스펙트럼의 탄소 신호를 4a의 탄소 신호와 비교하면 8- 위치(d C 4: 65.5; 4a: 59.4)에서 글리코실화 이동이 관찰되었습니다. 글루코시드 결합의 위치는 그림 2와 같이 HMBC 실험을 통해서도 확인되었습니다. 결과적으로 4의 입체구조는 (2E,6E){139}}bD-glucopyranosyloxy{142}},-2로 밝혀졌습니다. 143}}디메틸{144}},{145}}옥타데센산. 한편, 5(CD3OD, 표 2, 3)의 1 H- 및 13C-NMR 데이터는 (2E,6E){156}}hydroxy{157}},{158} }디메틸{159}},{160}}옥타데센산 부분 [d 1.70(3H, br s, 10-H3), 2.14(3H, br s, 9-H3), 2.24( 2H, m, 4-H2), 2.27(2H, m, 5-H2), 4.05, 4.20(각각 1H, 둘 다 br d, J 약 12Hz, 8-H2) , 5.47(1H, tq, J 7.1, 0.9Hz, 6-H), 5.67(1H, br s, 1-H)] bD-글루코피라노실 부분과 함께 [d 4.23(d, J) 7.7Hz, 1-H)]. 5에서 bD-글루코피라노실 모이어티의 연결성은 도 2에 도시된 바와 같이 HMBC 실험을 기초로 해명되었다. 또한, 전형적인 글리코실화 이동이 8- 위치(d C 5: 75.6; 5a: 68.8). 위에서 언급한 증거에 기초하여, 5의 입체구조는 (2E,6E)-8-bD-글루코피라노실옥시-3,7-디메틸-2,{ 옥타디엔산.
L929 세포에서 종양 괴사 인자-a(TNF-a) 유발 세포독성에 대한 성분의 효과
TNF-α는 세포 사멸의 유도를 통해 다양한 장기 손상을 매개하는 것으로 알려져 있습니다. 간의 경우 TNF-a의 생물학적 효과는 간 독소, 허혈/재관류, 바이러스성 간염, 알코올에 의해 유발되는 간 손상과 관련이 있습니다. 항염증제 및 간보호제 발굴을 목표로 합니다. 위에서 언급한 개념에 기초하여, 우리는 TNF-α-민감성 세포주인 L929 세포에서 TNF-α-유도된 세포 사멸에 대해 자연적으로 발생하는 생성물로부터 보호 성분을 조사하였다.25) 이전에 우리는 Piper Chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 3{31}},31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) 및 Sapindus rarak, 36-38)이 TNF-a의 억제 효과를 나타내는 것으로 밝혀졌습니다. - L929 세포에서 유도된 세포독성. C. tubulosa의 phenylethanoid 성분(eg echinacoside, acteoside, isoacteoside 등) 5)도 이러한 세포독성을 억제하였으므로 표 4와 같이 이리도이드, 페닐프로파노이드, 리그난 성분을 더 조사하였다. 그 결과, 칸카노사이드 A (9, 억제: 100mM에서 16.3 2.{42}}%), 무사에노시드산(10, 44.7 8.7%), 8-에필로간산(11, 10.7 0.4%), 8-히드록시게라니올 8-ObD-글루코피라노사이드(17, 21.3 2.4%) 및 ( )-피노레시놀 ObD-글루코피라노사이드(22, 22.3 1.6%)는 상당한 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌습니다. echinacoside(IC50 31.1mM), acteoside(17.8mM), isoaceteoside(22.7mM)보다 활성이 약하지만, 페닐에타노이드의 주요 구성성분.5)
실험적
스펙트럼 및 물리적 데이터를 얻기 위해 다음 기기가 사용되었습니다. 특정 회전, Horiba SEPA{0}} 디지털 편광계(l 5 cm); UV 스펙트럼, Shimadzu UV{2}} 분광기; IR 스펙트럼, Shimadzu FTIR{3}} 분광기; 1H- 및 13C-NMR 스펙트럼, 테트라메틸실란을 내부 표준으로 사용하는 JEOL JNM-ECA600(600, 150MHz) 및 JEOL JNM-ECS400(400, 100HMz) 분광기; FAB-MS 및 고해상도 FAB-MS, JEOL JMS-SX 102A 질량 분석기; HPLC 검출기, Shimadzu RID-10굴절률, Shimadzu SPD-10UV–VIS 및 Shodex OR{23}} 광학 회전 검출기. HPLC 컬럼, Cosmosil 5C{25}}MS-II 및 pNAP(Nacalai Tesque Inc., 250 4.6 mm id) 및 (250 20 mm id) 컬럼은 각각 분석 및 분취 목적으로 사용되었습니다.
크로마토그래피에 사용된 실험 조건은 순상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(CC), 실리카겔 6{13}}N(Kanto Chemical Co., Ltd., 63-21{19}} 메쉬, 구형, 중립적); 역상 실리카겔 CC, Diaion HP{5}}(Nippon Rensui) 및 Chromatorex ODS DM1{25}}20T(Fuji Silysia Chemical, Ltd., 100-200 메쉬); 순상 TLC, 실리카 겔 60F254(Merck, 0.25mm)가 있는 사전 코팅된 TLC 플레이트; 역상 TLC, 실리카 겔 RP{17}} F254S(Merck, 0.25mm)가 있는 사전 코팅된 TLC 플레이트; 역상 HPTLC, 실리카 겔 RP{23}} WF254S(Merck, 0.25mm)가 있는 사전 코팅된 TLC 플레이트, 1% Ce(SO4)2–10% 수성 H2SO4를 분무한 다음 가열하여 검출을 달성했습니다. .
식물 재료
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추출 및 분리
C. tubulosa의 신선한 줄기(2.98kg)를 잘게 자르고 메탄올로 3시간 동안 환류하에 3회 추출했습니다. 감압하에서 용매를 증발시켜 메탄올 추출물(249.1g, 8.36%)을 얻었다. 메탄올 추출물을 Diaion HP-20 CC(5.{9}} kg, H2O→MeOH)로 처리하여 H2O- 및 MeOH-용리 분획(167.84g, 5.63% 및 81.21g, 2.73%, 각기). MeOH-용출 분획(61.{24}} g)을 순상 실리카겔 CC[1.8 kg, CHCl3-MeOH-H2O(15:3:0}.4→1{{ 36}} : 3 : 0.5→6 : 4 : 1, v/v/v)→MeOH] 7개의 분획 [Fr. 1(1.12g), 2(9.56g), 3(0.89g), 4(1{99}}.69g), 5(8.84g), 6(12.52g) 및 7(4.6{{1{113}}4}} g)], 앞서 설명한 대로.5) 분획 1(1.12g)을 역상 실리카겔 CC[55g, MeOH-H2O(4 0 : 6{138}}, v/v)→MeOH] 5개의 분획을 제공하기 위해 [Fr. 1-1(132.8mg), 1-2(267.{147}}mg), 1-3(182.8mg), {{8{155}}}}(31{{ 156}}.9 mg) 및 1-5 (91.4 mg)]. 분획 1-1(132.8 mg)을 HPLC [Cosmosil 5C{{9{{16{161}}}}}}MS-II, CH3CN–1% 수성 AcOH(1{166} } : 90, v/v)] 칸카노사이드 M(2, 2.8 mg, 0.{{2{214}}3}}{{22{{24{{248 }}}}}}01%), 바르시오사이드(7, 5.2mg, 0.{224}}02%), 시나프알데하이드 {{1{{295 }}6}}O-bD-글루코피라노사이드(21, 1.4 mg, {{3{{3{{3{{310}}9}}5}}{{320} }}}.0001퍼센트 ). 분획 1-2(267.{{350}} mg)을 HPLC[Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1% 수성 AcOH(7:93, v/v)] (2E,6E)-3,{128}}디메틸{129}}하이드록시옥타디엔{{13{{360}}}일-O-bD 제공 -글루코피라노사이드(16, 15.8mg, {{370}}.{{4{411}}6}}007%), 8-하이드록시게라니올 8-ObD 글루코피라노사이드(17, 5.2 mg, 0.0002%), ( )-피노레시놀 ObD-글루코피라노사이드(22, 22.0 mg, 0.0010%), eucommin A(23, 5.0 mg, 0.0002%), eucommin A(23, 5.0 mg, 0.0002%) (24, 21.3 mg, 0.0010%), 및 ( )-시린가레시놀 ObD-글루코피 라노시드(25, 98.0 mg, 0.0044%). 분획 2(9.56g)를 역상 실리카겔 CC[400g, MeOH-H2O(10:90, v/v)→MeOH→아세톤]로 분리하여 5개의 분획[Fr. 2-1(55.9mg), 2-2(4.48g), 2-3(3.42g), 2-4(1.16g), 2-5(31.9mg) ], 이전에 설명한 대로.5) 분획 2-2(500.0 mg)에 HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1% 수성 AcOH(5:95, v/v )] 칸카노사이드 L(1, 6.6mg, 0.0026%) 및 6-데옥시카탈폴(6, 455.5mg, 0.182%)을 제공합니다. 분획 2-3(1.00g)을 HPLC[Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1% 수성 AcOH(7:93, v/v)]로 처리하여 7개의 분획[Fr . 2-3-1(66.5mg), 2-3-2(20.4mg), 2-3-3(26.0mg), 2-3-4(136.6mg), 2-3-5 [ 7(380.6mg) , 0.0581%)], 2-3-6 [글루로시드(8, 285.1mg, 0.0435%)] 및 2-3-7(84.9mg)]. 분획 2-3-4(106.6 mg)을 HPLC[Cosmosil pNAP, CH3CN-1% 수성 AcOH(5:95, v/v)]로 추가 정제하여 6(68.4 mg, 0.0134%)을 살리드로사이드5)와 함께 얻었다. (13.7 mg, 0.0027%). 분획 2-4(1.16g)은 HPLC [Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1% 수성 AcOH(15:85, v/v) 및 Cosmosil pNAP, CH3CN–1% 수성 AcOH(10:90 또는 15:85, v/v)] 칸카노사이드 N(3, 15.6 mg, 0.0007%), O(4, 44.1 mg, 0.0020%) 및 P(5, 4.2 mg, 0.0002)를 제공합니다. 퍼센트), 6(24.0mg, 0.0011%), 8(17.7mg, 0.0008%), 칸카노이사이드 A(9, 22.3mg, 0.0010%), 8-에피데옥시로간산(12, 8.0044%), .00040 칸카노사이드 E(14, 58.1mg, 0.0026%), (2E,6Z){335}}bD-글루코피 라노실옥시-2,{339}}디메틸{340}},{341}}옥타디엔산 산(15, 31.0mg, 0.0014%), 16(168.6mg, 0.0075%), 17(94.3mg, 0.0042%), 베툴랄부사이드 A(18, 8.1mg, 0.0004%), 코니페린 ) 및 시린진(20, 33.9 mg, 0.0015%). 분획 4(10.69g)를 역상 실리카겔 CC[500g, MeOH-H2O(30:70, v/v)→MeOH→아세톤]로 분리하여 4개의 분획[Fr. 4-1(878.2mg), 4-2(7.06g), 4-3(1.57g) 및 4-4(792.8mg)], 앞서 설명한 대로.5) 분획 4-1(500.0 mg)을 HPLC[Cosmosil 5C18-MS-II, CH3CN–1% 수성 AcOH(10:90, v/v)]로 정제하여 무사에노사이드산(10, 39.1)을 얻었다. mg, 0.0031%) 및 제니포시드산(13, 51.2mg, 0.0040%). 분획 5(8.84g)를 역상 실리카겔 CC[400g, MeOH-H2O(20:80→30:70, v/v)→MeOH→아세톤]로 분리하여 7개의 분획[Fr. 5-1(870.2mg), 5-2(478.9mg), 5-3(3.72g), 5-4(979.9mg), 5-5(1.19g), 5-6(1.27 g) 및 5-7(130.1 mg)], 앞서 설명한 대로.5) 분획 5-1(870.2 mg)를 HPLC[Cosmosil pNAP, CH3CN -1% 수성 AcOH(5:95, v/v)] 10(55.3mg, 0.0025%) 및 8-에필로간산(11, 51.5mg, 0.0023%)을 제공합니다.
Kankanoside L(1): 백색 분말, [a]D 26 45.7(c{4}}.48, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C15H24O9Na[M Na]에 대한 계산치 371.1318; 371.1309를 찾았습니다. IR(KBr, cm 1 ): 3433, 2928, 1080. 1 H-NMR(600 MHz, CD3OD) d: 표 1에 제공. 13C-NMR(150 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 제공. 양성- 이온 FAB-MS m/z: 371 [M Na] . 음이온 FAB-MS m/z: 347 [MH] .
칸카노사이드 M(2): 백색 분말, [a]D 26 18.7(c 0.11, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C15H22O8Na [M Na]에 대한 계산치 353.1212; 353.1208을 찾았습니다. IR(KBr, cm 1 ): 3433, 2924, 1736, 1655, 1076. 1 H-NMR(600 MHz, CD3OD) d: 표 1에 제공. 13C-NMR(150 MHz, CD3OD) d C: 표에 제공 2. 양이온 FAB-MS m/z: 353 [M Na] .
Kankanoside N(3): 백색 분말, [a]D 25 24.6(c 1.00, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C16H28O8Na [M Na]에 대한 계산치 371.1682; 371.1686을 찾았습니다. IR(KBr, cm 1 ): 3415, 2874, 1076, 1028. 1 H-NMR(600 MHz, CD3OD) d: 표 1에 제공. 13C-NMR(150 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 제공 양이온 FAB-MS m/z: 371 [M Na] .
Kankanoside O(4): 백색 분말, [a]D 23 26.1(c 2.30, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C16H26O8Na [M Na]에 대한 계산치 369.1525; 369.1528을 찾았습니다. UV[1 max(log e), MeOH, nm]: 217(4.04). IR(KBr, cm 1 ): 3433, 2926, 1696, 1647, 1076. 1 H-NMR(600 MHz, CD3OD) d: 표 3에 제공. 13C-NMR(150 MHz, CD3OD) d C: 표에 제공 2. 양이온 FAB-MS m/z: 369 [M Na] .
Kankanoside P(5): 백색 분말, [a]D 21 32.7(c{4}}.18, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C16H26O8Na [M Na]에 대한 계산치 369.1525; 369.1520을 찾았습니다. UV[1 max(log e), MeOH, nm]: 217(4.08). IR(KBr, cm 1 ): 3434, 2926, 1701, 1647, 1076. 1 H-NMR(600 MHz, CD3OD) d: 표 3에 제공. 13C-NMR(150 MHz, CD3OD) d C: 표에 제공 2. 양이온 FAB-MS m/z: 369 [M Na] .
칸카노사이드 L-P(1-5)의 산 가수분해: 1.0 M HCl(1.0 ml) 중 1-5(각 1.0 mg)의 용액은 8{27}}도에서 3시간 동안 가열했습니다. 냉각 후, 반응 혼합물을 Amberlite IRA{12}}(OH 형태)로 중화하고, 수지를 여과에 의해 제거하였다. 감압하에 용매를 제거한 후, 잔류물을 Sep-Pak C18 카트리지 컬럼(H2O→MeOH)으로 분리하였다. H2O로 용출된 분획은 다음 조건에서 HPLC 분석을 수행했습니다. HPLC 컬럼, Kaseisorb LC NH{18}}, 4.6mm id 250mm(Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan); 검출, 광학 회전 [Shodex OR-2(Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Japan); 이동상, CH3CN–H2O(85: 15, v/v); 동료 속도 0.8 ml/min]. H2O-용출 분획 1-5에 존재하는 D-포도당의 식별은 머무름 시간 및 광학 회전을 정품 샘플의 것과 비교하여 수행되었습니다[tR 17.9분(양성)].
{{0}}데옥시카탈폴(6)의 수소화 MeOH(2.0 ml)를 실온에서 H2 분위기 하에 2시간 동안 교반하였다. 촉매를 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하여 1(12.0 mg, quant.)을 얻었다.
β-글루코시다아제를 사용한 칸카노사이드 O(4) 및 P(5)의 효소 가수분해 H2O(1.5 ml) 중 4(8.{5}} mg)의 용액에 b-글루코시다아제(4.7 mg, 아몬드, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan), 용액을 37도에서 24시간 동안 교반하였다. EtOH(5.{15}} ml)를 첨가하여 반응을 켄칭하고, 혼합물을 감압 하에 응축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 추출하고 용매를 증발시켜 (2E,6E)-8-하이드록시-2,{{20}}디메틸-2,{{22} }옥타데센산20)(4a, 3.9mg, 92%). 유사한 절차를 통해 (2E,6E)-8-하이드록시{31}},{32}}디메틸{33}},{34}}옥타데센산21)(5a, 0.9 mg, 94% ) 칸카노사이드 P(5, 1.8 mg)로부터 얻었다.
Bioassay Method L929 세포에서 TNF-α에 의한 세포독성 억제 효과는 이전 논문에 기술된 방법으로 분석하였다.5)
통계 값은 평균 SEM으로 표현됩니다. 일원 분산 분석(ANOVA)에 이어 Dunnett의 테스트가 통계 분석에 사용되었습니다. 0.05 미만의 확률(p) 값은 유의미한 것으로 간주되었습니다.
시스탄체 허브
