글루코코르티코이드 유발 쥐 모델에서 Cistanche Deserticola와 막걸리 증숙 제품의 신경내분비 면역 기능-II

3.2.4. 면역조직화학

신경 세포사멸은 많은 세포사멸 및 항세포사멸 유전자, 주로 세포사멸 촉진 유전자 Bax와 Bcl-2 유전자 계열의 항세포사멸 유전자에 의해 제어됩니다. Bcl-2는 미토콘드리아, 소포체 및 핵막과 같은 반응성 산소 생성 소기관에 국한되어 있습니다. Bcl-2은 산소 자유 라디칼에 거의 영향을 미치지 않지만세포의 산화 손상을 방지. Bax는 세포질에서 미토콘드리아 막으로 이동하여 미토콘드리아 막 구조를 변경하고 시토크롬 C의 방출과 세포사멸 유도를 촉진합니다.

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Bax와 Bcl{0}} 단백질의 부신 세포질에서 발현이 있었습니다. 염색 결과는 모두 노란색 입자로 나타났습니다. BC 그룹과 비교하여 MC 그룹의 Bax 단백질의 평균 광학 밀도는 크게 증가했습니다(P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

그림 5(b)는 BC 그룹과 비교하여 MC 그룹의 Bcl{1}} 단백질의 평균 광학 밀도가 크게 감소한 것을 보여줍니다(P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

카스파제-3 단백질은 정상 조직에서 원래 형태로 주로 세포질에 국한되어 있으며 발현율이 낮습니다. 양성 신호는 연한 노란색 또는 갈색을 띤 노란색입니다. BC 그룹과 비교하여 MC 그룹에서 카스파제-3의 발현이 크게 증가했습니다(P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

정상 조직에서는 Fas 유전자의 발현이 감소되었으며 in situ hybridization에 대한 양성 신호는 갈색을 띤 노란색이었습니다. 그림 5(d)에서 볼 수 있듯이 BC 그룹에 비해 MC 그룹에서 Fas 단백질의 평균 광학 밀도가 증가했습니다(P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

FasL 단백질은 주로 세포막이나 세포질에 위치하며 양성 신호는 갈색입니다. BC 그룹과 비교하여 MC 그룹의 FasL 유전자의 평균 광학 밀도가 크게 증가했습니다(P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

결과는 CD와 WCD가염증세포의 세포사멸을 유도FasL 단백질의 발현을 촉진하고 Fas 단백질에 결합하여 카스파제-3 단백질을 활성화하고 카스파제 캐스케이드를 유발하여 부신 손상을 줄입니다. WCD-HD 그룹의 효과가 가장 좋았습니다.

3.3. 면역 기능의 결정

3.3.1. 면역기관지수

BC군에 비해 MC군은 흉선계수와 비장지수가 유의하게 감소하였다(P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

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3.3.2. 말초 혈액에서 T 림프구 하위 집합의 검출

BC군과 각 약물군에서 좌측상단 사분면의 CD4+ 세포와 우측 하사분면의 CD{1}} 세포의 비율이 MC군보다 높았다. BC군에 비해 MC군에서는 CD4+ThCD8+의 비율이 크게 감소했습니다(P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. 혈청 내 IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α 및 IFN-C 수준 측정

그림 8은 BC 그룹과 비교하여 IL-6, TNF- 및 IFN-c 수준이 크게 증가한 것을 보여줍니다(P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Lymus 조직현미경 관찰 실험 결과

그림 9는 BC 그룹에서 많은 수의 림프구가 존재함을 보여줍니다. 림프구와 망상적혈구는 중앙에 느슨하게 배열되어 있고 원형 또는 타원형 흉선세포가 흩어져 있습니다. 괴사도 없었고, 염증세포 침윤도 없었으며, 비정상적인 변화도 없었다.

MC 그룹에서는 중앙에 림프구와 망상적혈구의 무질서한 배열이 있는 다량의 림프성 괴사 조직이 나타났습니다. 원형 또는 타원형의 흉선세포가 사라지고, 대량의 세포 변성 또는 괴사가 뚜렷하며, 비정상적인 병리학적 변화를 동반한 염증세포 침윤이 있었다.

CD군에서는 림프구의 형태학적 특성이 정상으로 회복되었으며, 중앙 림프구와 망상적혈구의 배열도 거의 정상이었다. 원형 또는 타원형 흉선세포는 회복되었으나 소수의 퇴행성 또는 괴사성 림프구와 침윤성 염증세포가 남아있었습니다.

WCD 그룹과 PC 그룹에서는 림프구의 형태학적 특성이 더 잘 복구되었습니다. 중앙의 림프구와 망상적혈구는 잘 정렬되어 있었고 원형 또는 타원형 흉선세포는 거의 정상이었으나 소수의 침윤성 및 퇴행성 림프구가 남아 있었습니다.

3.4. CaM 단백질 유전자 발현

CaM mRNA의 발현을 조사하기 위해 RQ 값(CaM mRNA -actin mRNA)을 고려하였다. BC군의 RQ는 1이었으며, MC군에서 시상하부의 CaM mRNA 발현이 유의하게 증가하였다(P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. 토론

중국약전[2]에는 CD와 WCD가 임상에서 사용되는 달편의 주요 형태로 기록되어 있다. 막걸리로 찐 후,노화방지 및 신장양장 효과강화되었습니다. UPLC-QqQ-MS를 통해 막걸리 찌는 과정에서 화학물질 염기의 정량적 변화를 검출하였습니다. 이리도이드 배당체는 불안정했고 이들 배당체의 함량이 감소하여 심지어 검출할 수 없게 되었습니다. 페닐에탄올 배당체의 함량도 변화하여 약력학 및 임상 효과의 변화를 유발할 수 있습니다.

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고전적인 신장양 결핍 모델은 코르티코스테론의 피하 주사로 재현되었습니다[19]. 코르티코스테론을 과다 복용하면 시상하부에서 CRH의 비밀이 억제될 수 있습니다. 동시에 ACTH의 비밀도 억제되었습니다. 부신피질호르몬 수치가 감소하여 HPA 축의 기능이 저하되었습니다. HPA 축의 기능저하는 신장양 결핍의 일반적인 특징입니다[20]. 그러면 쥐는 "고갈" 현상을 나타내며 그 증상은 임상에서의 신장 양 결핍 증상과 일치합니다.

MC군에서는 쥐 혈청의 CRH, ACTH, T, CORT 수준이 유의하게 감소했습니다(P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Bcl-2 계열 구성원의 비율을 조절하는 것은 FasThFasL이 사멸 수용체 경로를 매개하는 핵심 메커니즘 중 하나이며, Bcl-2 계열은 미토콘드리아 경로를 조절합니다[21]. 세포사멸 억제 인자 Bcl-2 및 Bax와 같은 세포사멸 유도 인자는 모두 Bcl-2 계열에 속합니다[22]. 세포사멸은 세포사멸을 억제하는 인자와 세포사멸을 유도하는 인자의 상대적인 비율에 의해 결정될 수 있다[23]. 미토콘드리아는 다양한 형태의 세포사멸에 대한 중앙 체크포인트 기능을 가지고 있습니다[24]. 본 연구는 CD-MD와 WCD가 Bax의 발현을 추론하고 Bcl-2을 증가시킬 수 있음을 보여주었습니다.신장양허를 개선하다. Fas는 Fas 리간드(FasL)와 연결하여 세포사멸을 유도하는 주요 사멸 수용체입니다. MC 그룹에서 Fas와 FasL의 발현이 증가한 반면, WCD-MD 그룹에서는 이 발현이 크게 증가했습니다(P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

면역 기능의 결핍은 신장양 결핍의 중요한 징후 중 하나입니다[28]. 본 연구에서는 WCD-MD 그룹의 비장 및 흉선 지수가 유의하게 회복된 것을 확인했습니다(P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA 축은 글루코코르티코이드 분비와 내분비계를 조절하여 부신 피질의 분비 기능을 유지하기 때문에 가장 중요한 조절 시스템입니다[32]. 시상하부 조직에서 CaM mRNA의 과발현은 신장양 결핍과 관련이 있었습니다. CD와 WCD는 칼슘 채널을 차단하고, 시상하부에서 CaM mRNA 발현을 억제하고, 칼슘 유입을 감소시켜 Ca{1}}·CaM 복합체 활성을 감소시킬 수 있습니다.

신장양결핍증의 형성은 만성질환의 발생과정이다. 신장은 더 이상 순전히 해부학적인 개념이 아니며, 신경내분비 면역 및 비뇨생식기 계통을 가리키는 일반적인 용어입니다. 신경내분비면역(NEI) 네트워크는 중요한 통합 규제 시스템입니다[33]. CD와 WCD는 HPAT 축의 기능을 조절하고 신장양 결핍의 회복을 향상시킬 수 있습니다. 이번 결과는 신장양결핍증의 임상적 예방과 치료를 위한 실험적 기초를 제공한다.