Part 2 Detection of Cistanches Herba (Rou Cong Rong) 종별 뉴클레오티드 시그니처를 이용한 의약품

이 연구에서 개발 된 뉴클레오티드 서명을 찾음으로써 우리는 31 개의 중국 특허 의약품 중 15 개가 포함 된 것으로 분류되었음을 발견했습니다.시스탄치 허바대신 여덟 가지 위조 재료와 일곱 개의 간음자를 포함한 간음이 포함되었습니다 (표 2). 예를 들어, 여섯 개의 배치가 Cy로 대체되었습니다. Shihu Yeguang 알약의 세 배치, Kangguzhi Zengsheng 알약의 한 배치, Sanbao 캡슐의 한 배치, Wenweishu 입자의 한 배치를 포함하여 songaricum.

또한 동일한 제조업체의 다른 배치는 다소 다른 결과를 산출했습니다. 예를 들어, 한 제조업체 (ZCY16, ZCY69 및 ZCY71)의 세 배치 중에서 하나의 배치는 Ci의 혼합물로 구성됩니다.데저디콜라및 Cy. songaricum, 하나의 배치는Ci. 데저트리콜라그리고Ci. tubulosa하나의 배치 만 포함되어 있습니다.Ci. tubulosa. 다른 제조업체 (ZCY44 및 ZCY70)의 두 배치도 달랐습니다 : 한 배치에는 Cy가 포함되어 있습니다. songaricum, 다른 배치는 포함 된 반면,Ci. 데저트리콜라그리고Ci. tubulosa.

시스탄치 허바시험된 31개의 중국 특허 의약품 중 23개에서 검출되었으며(표 2), 예를 들어 간통이나 위조 성분이 없는 등 16개의 샘플만 정품이었다.Ci. tubulosa중국 특허 의약품 및 Ci의 16 배치에서 검출되었다. deserticola는 10 배치에서 발견되었습니다. O. 코에룰세센은 어떠한 제품에서도 검출되지 않았다(표 2).

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토론

를 포함하는 상업적으로 이용 가능한 의약품을 모니터링하기위한 새로운 방법을 개발할 필요성시스탄치허바

시스탄치 허바수복 중국 특허 의약품 및 기타 의약품에 널리 사용되는 강장제입니다. 그러나 중국 특허 의약품의 품질 관리는 성분의 다양성과 복잡성으로 인해 큰 도전을 제시합니다. 규제 감독이 없기 때문에 제품 간통 또는 위조에 대한 상당한 기회가 있습니다. 또한 모든 제품은 약전 또는 기타 표준에 따라 처리해야합니다. 간음 또는 위조는 처리 중에 허용되지 않습니다. 따라서, 다중심 절단 이차원 액체 크로마토그래피 (Yao et al., 2015), 근적외선 반사율 분광법 (Zhang and Su, 2014; Zhang et al., 2015) 및 액체 크로마토그래피-질량 분광법 (Wang et al., 2016b). 그러나 현재 중국 약전위원회 (2015)의 분석 화학 방법은 중국 특허 의약품의 모든 성분을 인증하거나 간통 성분의 존재를 탐지하는 데 사용할 수 없습니다. 또한, 연구에 따르면 식물의 표적 대사 산물은 제품 가공 중에 변경되어 테스트 결과에 상당한 변동성이 있거나 테스트 방법이 완전히 실패하는 것으로 나타났습니다 (Ananingsih et al., 2013). 따라서 종별 뉴클레오티드 서명과 같은 분자 도구는 사기성 제품 대체 및 간통 및 표지되지 않은 성분의 포함의 위험으로부터 품질 관리 시스템을 강화할 태세입니다.

ITS / ITS2는 한약재의 식별을위한 고효율 도구로 간주되지만 이러한 서열은 고도로 가공 된 샘플에서 증폭 될 수 없습니다 (Newmaster et al., 2013; de Boer et al., 2015). 왕 등은 ITS2가 안젤리카 시넨시스 기수 추출물 또는 120 분 이상 끓인 달인으로부터 증폭 될 수 없다고보고했다 (Wang et al., 2016a). 전통적인 기술과 중국 약전위원회 (2015)에 따르면, Cistanches Herba는 항상 의약 효능을 높이기 위해 고도로 가공됩니다. 이러한 과정에는 오븐 건조, 소금 절임 및 와인으로 김을 내는 것이 포함됩니다 (Zou et al., 2017), 이는 DNA 분해로 이어집니다. 또한, 다양한 부형제가 가공 중에 첨가된다, 예를 들어 꿀, 전분, 및 덱스트린. 이러한 부형제가 완전히 제거되지 않으면 DNA의 순도가 영향을받습니다. 예를 들어, 다음 제조 공정은 Cistanches Herba-containing Sanbao 캡슐을 생성하는 데 사용됩니다 : "약용 조각을 1.5 시간 동안 두 번 끓여서 달인을 결합하고 혼합물을 여과하십시오. 여액을 1.20∼1.25의 상대 밀도(80◦C에서)로 농축시킨다. 다른 분쇄 분말을 추가하고 결합하여 균질 한 혼합물을 얻습니다. 다음으로, 혼합물을 60◦C에서 건조시킨 다음, 미세하게 분쇄한다.

분말." 그러나 위에서 설명한 생산 공정 후에는 중국 특허 의약품의 DNA 추출에 어려움이있을 수 있으며 분해 된 DNA에서 긴 조각이 증폭되지 않아 간통자의 식별을 방해 할 수 있습니다. 따라서 DNA의 품질과 순도를 보장하기 위해 우리는 게놈 DNA 추출 전에 사전 세척 버퍼로 세척하고 열 개의 평행 튜브를 각 배치에 대해 하나의 튜브로 용출시키는 등의 추가 단계를 추가했습니다.

본 연구에 사용 된 모든 중국 특허 의약품에는 6-25 가지 성분이 포함되어 있지만, 개발 된 프라이머 쌍은이 중국 특허 의약품에서 간통의 서열을 특별히 증폭시킬 수 있습니다. PCR 산물의 직접 시퀀싱은 깨끗한 추적 파일을 보였다. 따라서,이 뉴클레오티드 서명 방법은 본격적인 종 성분과 간통제를 모두 식별 할 수 있으며 시장 감독을위한 DNA 기반 분자 진단 도구의 적용을 확대해야합니다.

신장 손상 및 질병은 cistanche에 의해 치료될 수있다.

Cistanches Herba 제품의 효과적인 식별을 위한 뉴클레오티드 서명

PCR 기술을 활용하는 분자 도구는 품질 관리 시스템 내에서 의약품 인증에 매우 유망합니다. Cistanches Herba의 DNA 분해 된 간통을 확인하기위한 프라이머의 성공적인 적용은 PCR 기반 검출 방법이 널리 사용될 수 있음을 시사합니다. 중국 약초 시장에서 정통 Cistanches Herba 종 재료의 가격은 간통자의 가격보다 다섯 배 이상 높습니다. 우리의 결과는 Cy임을 보여주었습니다. songaricum은 시장에서 Cistanches Herba의 가장 일반적인 간통자이며, Ci가 그 뒤를 잇습니다. 시넨시스. 싸이. songaricum은 이러한 의약품이 유사한 형태 학적 특성을 공유하기 때문에 추가되었습니다. 또한, Ci의 화학적 조성. sinensis는 Cistanches Herba의 그것과 유사합니다. 에 대한 품질 관리 마커로시스탄치 허바추출물, 에키나코사이드 및 액테오사이드는 Ci에서 저렴하게 추출할 수 있습니다. sinensis. 따라서 일부 제약 공장에서는 Ci를 사용합니다. Cistanches Herba 추출물의 생산에서 대체물로서의 sinensis. 종합하면,이 연구의 결과는 의약품 시장에 상당한 사기가 있음을 나타냅니다.

중국 특허 의학에서의 간통은 다른 나라에서 발견되는 것과 유사합니다. 유사한 수준의 간통이 북미 (Newmaster et al., 2013), 유럽 (Raclariu et al., 2017) 및 아시아 (Cheng et al., 2014; Shanmughanandhan et al., 2016; Gao et al., 2017). 이 연구에서, 중국 특허 의약품의 간통률은 약 48.4 %였으며, 31 개의 샘플 중 16 개만이 정통 Cistanches Herba였습니다. 또한, 우리는 동일한 제조업체의 제품에서 생산 된 다른 결과가 한약 재료의 다른 배치의 품질 차이에 기인 할 수 있다고 추측했습니다. 따라서 중국 특허 의약품의 품질을 제어하려면 제품으로 가공되기 전에 원료를 인증해야합니다.

간음의시스탄치 허바전통적으로 원자재의 수요와 공급 문제와 관련이 있습니다.Ci. 데저트리콜라그리고Ci. tubulosa현재 공식화하는 데 사용되는 두 개의 원래 식물입니다.시스탄치 허바. 그러나, Ci. deserticola는 중국 약전위원회 (2000)에 열거 된 전통적인 정통 Cistanches Herba의 유일한 원래 종입니다. tubulosa는 간음자로 확인됩니다. Ci의 부족으로 인해. 사막 자원,Ci. tubulosa2005 년부터 중국 약전에 보충 교재로 등록되었습니다 (Jiang and Tu, 2009). 최근까지이 허브의 가격은 현저하게 달랐습니다. Ci. tubulosa는 Ci보다 훨씬 저렴했습니다. 사막 니콜라는 전자의 훨씬 더 큰 공급이 있기 때문에. 여기에서, 우리의 결과는 Ci를 보여주었습니다. tubulosa는 상업적으로 이용 가능한 Cistanches Herba 제품에서 더 널리 사용됩니다.

결론적으로, 뉴클레오티드 서명 및 PCR 기반

이 연구에서 개발 된 방법은 의약품 산업이 성분을 인증하고 간통을 탐지하는 데 유용한 도구로 사용될 수 있습니다.시스탄치허바 제품. 민감도 결과에 따르면, 간음의 비율이 십만 명 중 하나일지라도, qRT-PCR을 통해 검출할 수 있다. 그것은 일단 뉴클레오티드 서명이 검출되면시스탄치허바 함유 기능성 제품은, 간음 또는 위조 성분으로 확인될 수 있다. 위조 성분 또는 간통된 Cistanches Herba를 탐지하기위한 새로운 솔루션이 제공되었는데, 이전에는 중국 약전에서 화학 검출 방법을 통해 사용할 수 없었습니다. 또한이 방법은 증가하는 유형의 의약품을 검증하고 시장 감독을위한 DNA 기반 분자 진단 도구의 응용 프로그램을 확대하는 데 사용될 수 있습니다.

완화하기 위해만성적인신장질병와시스탄체

저자 기여

JH는 연구를 구상하고 디자인에 참여했습니다. XW, RX 및 JC는 샘플을 제공하고 실험을 수행했습니다. XW는 데이터를 분석했다. XW, JH, ZZ, S-GN, JS 및 SC는 원고를 작성했습니다. 모든 저자는 최종 원고를 읽고 승인했습니다.

자금

이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 [보조금 번호 81673552], CAMS 혁신에 의해 지원되었습니다.

의료 과학 기금 [보조금 번호 2016-I2 M- 3-016] 및 중국 국립 자연 과학 재단의 유나이티드 기금 핵심 프로젝트 [보조금 번호 U1403224].

승인을

우리는 Chaokui Sun, Dianyun Hou 및 Piao Zhang을 포함하여 샘플 수집, 식별, 실험실 작업 및 원고 준비를 도운 동료들에게 감사드립니다.

보충 자료

이 기사에 대한 보충 자료는 https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpls.2018 에서 온라인으로 찾을 수 있습니다. 01643/전체#보충 자료

보충 그림 S1 | 여섯 종으로부터의 ITS2 서열의 정렬 결과.

보충 그림 S2 | 모든 샘플의 아가로스 겔 전기영동.

보충 표 S1 | Cistanches Herba와 그 간통자의 샘플링 정보.

보충 표 S2 | GenBank에서 다운로드 한 관련 종의 시퀀스 정보.

보충 표 S3 | 다른 중국 특허 의학 샘플의 선언 된 조성물.

보충 데이터 시트 S1 | 본 연구에서 얻어진 모든 서열.

시스탄체사막 니콜라에는 많은 효과가 있습니다.

참조

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