PART 2 알로이시아 폴리스타키아로부터 페닐에타노이드 배당체의 분리 및 확인 및 모노아민 산화효소-A의 억제제로서의 활성

Cistanche Actosides가 효소 활성을 억제할 수 있는 이유는 무엇입니까?

씨스탄슈의 항산화 효과 원리

자세한 내용은 다음으로 문의하십시오.joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche Deserticola에는 많은 효과가 있습니다. 자세한 내용을 보려면 여기를 클릭하십시오.

초고성능 액체 크로마토그래피-질량분석법에 의한 성분의 분리 및 식별

음이온 모드에서 작동하는 Z-스프레이 소스가 있는 다이오드 어레이 검출기(DAD) 및 Waters Xevo TQ-S 직렬 사중극자 질량 분석기가 장착된 Waters Acquity UPLC H-Class 시스템을 사용하여 크로마토그래피 분석을 수행했습니다. 1.{4}}mg/mL의 추출물 또는 표준을 포함하는 스톡 솔루션악티오사이드, 이소악티오사이드, 6'-아세틸락테오사이드및 4',4''',5,5''-테트라히드록시-6,6'',3'''-트리메톡시-[C7–O–C7'']-비플라본(LC 등급 메탄올) 필요한 경우 각각 3{15}}분 동안 초음파 처리하여 별도로 준비하고 0.45μm Millipore 필터(Merck Millipore)를 통해 여과했습니다. 용액을 메탄올로 10μg/mL로 희석하고 분취량(5μL)을 Sigma-Aldrich Ascentis Express C18 컬럼(1{{30}}0 x 4.6 mm id; 2.7μm 입자 크기). 이동상은 용리 프로파일에 따라 0.5mL/min의 유속으로 공급되는 0.1% 포름산(용매 A)과 0.1% 포름산을 포함하는 메탄올(용매 B)로 구성됩니다. 4분 후 4분에서 19분 사이에 3%에서 60% B로, 19분에서 23분 사이에 60%에서 90% B로 선형 구배가 이어지며 마지막으로 23분에서 28분 사이에 3% B로 돌아옵니다. 유출물은 210~720nm 범위의 DAD와 다음과 같이 최적화된 소스 및 작동 매개변수를 사용하여 MS에 의해 모니터링되었습니다. 모세관 전압 2.50kV, Z-스프레이 소스 온도 150도, 탈용매 온도(N2) 350도, 탈용매 가스 흐름 전체 스캔 모드에서 600L/h, 질량 범위 m/z 150 ~ 600.

확인된 성분의 정제

조 하이드로에탄올 추출물(10g)을 물:에탄올(50:50; v/v)에 용해시키고 헥산, 에틸 아세테이트 및 n-부탄올에 대해 연속적으로 분배하였다. 부탄올 분획을 회전 증발기에서 농축하고 분획된 추출물의 3g 샘플을 C-18 RP 실리카겔(230-400 메쉬; Sigma -Aldrich) 및 물로 용리된 다음 물:메탄올(90:10, 50:50 및 10:90; v/v)의 연속 혼합물. 물:메탄올(90:10; v/v)로 용출하여 얻은 하위분획을 SPD{20}A UV/Vis 검출기에 결합된 Shimadzu LC AP 시스템을 사용하여 RP-HPLC로 추가 정제했습니다. Phenomenex Luna® C{21}} 컬럼(250 × 10mm id, 5μm 입자 크기)이 장착되어 있습니다. 이동상은 물:메탄올이 90:10(v/v)에서 시작하여 100분 내에 30:70(v/v)으로 변경되어 4개의 알려진 화합물이 생성되었습니다.악티오사이드(750 mg), 분리된 측면(430 mg), 6'-아세틸락테오사이드(42 mg), 및 4',4''',5,5''-테트라히드록시-6,6'',3'''-트리메톡시-[C7–O–C7'']-비플라본( 13mg). 이동상의 유속은 1 mL/min, 주입 부피는 500 μL, 크로마토그램은 340 nm에서 기록되었으며 UV 스펙트럼은 240 ~ 400 nm 범위에서 얻어졌습니다. 정제된 성분의 정체는 Bruker 모델 DPX 500 분광계에 기록된 1H-(500MHz) 및 13C-NMR(125MHz) 스펙트럼과 문헌[18, 19, 41]. 분리된 화합물의 순도는 UPLC-DAD-MS(▶무화과. 1b–d) 및 NMR(▶무화과. S1–S12, 지원 정보).

정량화악티오사이드HPLC-다이오드 어레이 검출기에 의해

건조된 하이드로에탄올 추출물의 샘플(1 mg)을 메탄올(JT Baker HPLC 등급) 및 Milli-Q의 혼합물(80:20; v/v) 1 mL에 재용해했습니다. 초순수(Merck Millipore), 30분 동안 초음파 처리하고 0.{7}}μm Millipore 필터를 통해 여과합니다. 이 용액의 분취량(20µL)은 SPD-M10Avp DAD에 결합되고 Phenomenex로 보호되는 Phenomenex Luna C18 컬럼(250 × 4.6mm id, 5µm)이 장착된 Shimadzu LC{9}}APvp 시스템에서 분석되었습니다. C18 precolumn (4.0 × 3.0 mm id, 5 µm). 분리는 물(용매 A) 및 메탄올(용매 B;

JT Baker HPLC 등급) 프로그램에 따라 1.{1}} mL/min의 일정한 유속으로 공급: 0과 32분 사이, 70에서 10까지 10에서 70퍼센트 B까지 선형 구배 32분에서 35분 사이에 퍼센트 B, 35분에서 40분 사이에 10퍼센트 B로 최종 등용매 용리. 검출 파장은 330 nm로 설정하였다.

의 내용악티오사이드추출물에서 다음을 사용하여 추정되었습니다.악티오사이드(Sigma-Aldrich, CAS 번호 61276-17-3)를 외부 표준으로 사용합니다. 500, 250, 125, 62.5, 31.2 및 15.6 ug/mL의 참조 표준을 포함하는 용액을 준비하고 각 용액을 3중으로 HPLC 분석하여 검량선을 작성했습니다[42]. 표준 피크 면적의 비율악티오사이드표준 곡선의 선형 회귀를 통해 분석물의 해당 농도를 설정했습니다(▶무화과. S13, 지원 정보). 분석 데이터는 Agência Nacional de Vigilância Sanitária[42]에서 발행한 지침에 따라 선형성, 정밀도 및 정확성과 관련하여 검증되었습니다. 검출 한계(LoD) 및 정량화(LoQ)악티오사이드각각 {{0}}.30 및 0.92 µg/mL였습니다.

모노아민 산화효소-A 억제 분석

재조합 인간 MAO-A, 티라민, 클로르길린, 바닐산, 4-아미노 안티피린 및 양고추냉이 과산화효소는 Sigma-Aldrich에서 구입했습니다. MAO-A 억제 분석은 López et al.에 의해 기술된 방법의 수정된 버전에 따라 96-웰 플레이트를 사용하여 수행되었습니다. [43]. 각 웰에 50μL의 발색 용액(pH 7.6의 인산 완충액 중 0.8mM 바닐산, 2.5mM 4-아미노 안티피린 및 4U/mL 양고추냉이 퍼옥시다제), 100μL의 3 mM 티라민 및 메탄올에 용해된 조 하이드로에탄올 추출물 또는 정제된 페닐에타노이드 중 하나의 50-μL 분취량. 마지막으로, 8 U/mL MAO-A의 50 μL 분취량을 각 웰에 첨가하고 플레이트를 37도에서 30분 동안 인큐베이션했으며, 이 시간 동안 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 흡광도를 5분마다 기록했습니다. 클로르길린(GC 97% 이상; Sigma-Aldrich) 및 메탄올은 각각의 분석 플레이트에 양성 및 음성 대조군으로 포함되었습니다.

통계 분석

MAO-A 억제 활성에 대한 3가지 독립적인 평가가 수행되었고 수집된 데이터는 Graph-Pad Prism 소프트웨어를 사용하여 분석되었습니다. IC₅₀하이드로에탄올 추출물, 정제된 페닐에타노이드 및 양성 대조군의 값은 로그(억제제 농도) 대 정규화된 억제 백분율의 플롯을 시뮬레이션하는 비선형 회귀에 의해 계산되었습니다.

지원 정보

H- 및 13C-NMR 스펙트럼악티오사이드, isoacteoside, 6'-acetylacteoside, 및 4,4,5,5-tetrahydroxy-6,6,3 trimethoxy-[C7–O– C7'']-biflavone 및 HSQC/HMBC 상관관계 분석 세 가지 페닐에타노이드는 지원 정보로 사용할 수 있습니다.

참고문헌

[1] 세계보건기구. 우울증 및 기타 일반적인 정신

장애: 글로벌 건강 추정치. 제네바: WHO; 2017년

[2] 퍼거슨 JM. SSRI 항우울제: 부작용 및 내약성. Prim Care Companion J Clin Psychiatry 2001; 3: 22–27

[3] van der Watt G, Laugharne J, Janca A. 불안과 우울증 치료의 보완 및 대체 의학. Curr Opin Psychiatry 2008; 21: 37–42

[4] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. 불안 장애에 대한 식물 기반 의약품, 파트 1: 전임상 연구 검토. CNS 약물 2013; 27: 207–219

[5] Sarris J, McIntyre E, Camfield DA. 불안 장애에 대한 식물 기반 의약품, 파트 2: 전임상 증거를 뒷받침하는 임상 연구 검토. CNS 약물 2013; 27: 301–319

[6] Del Vitto LA, Petenatti EM, Petenatti ME. Recursos Herbolarios de San Luis (아르헨티나 공화국). 프리메라 파트: Plantas Nativas. 멀퀴나 1997; 6: 49–66

[7] 곤잘레스 Y, 아루아 RD, 로하스 GD, 가르시아 MG. Etnofarmacobotánica foliar de "burrito",알로이시아 다기증 (Griseb.) Moldenke ( Verbenaceae ), cultivado en Paraguay. 로자시아나 2014; 13: 31–41

[8] Mora S, Díaz-Véliz G, Millán R, Lungenstrass H, Quirós S, Coto-Morales T, Hellión-Ibarrola MC. 히드로알코올 추출물의 항불안 및 항우울 효과알로이시아 폴리스타키아쥐에서. Pharmacol Biochem Behav 2005; 82: 373–378

[9] Hellión-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Tortoriello J, Fernández S, Wasowski C, Marder M, De Lima TCM, Mora S.알로이시아다기증(Griseb.) 생쥐의 Moldenke ( Verbenaceae ). J Ethnopharmacol 2006; 105: 400–408

[10] Hellion-Ibarrola MC, Ibarrola DA, Montalbetti Y, Kennedy ML, Heinichen O, Campuzano M, Ferro EA, Alvarenga N, Tortoriello J,

De Lima TCM, Mora S. 항우울제 유사 효과알로이시아다기증(Griseb.) 생쥐의 Moldenke ( Verbenaceae ). 식물의학 2008; 15: 478–483

[11] Herraiz T, González D, Ancín-Azpilicueta C, Arán VJ, Guillén H.

- Peganum harmala의 카르볼린 알칼로이드 및 인간 모노아민 산화효소(MAO) 억제. Food Chem Toxicol 2010; 48: 839–845

[12] Herraiz T, Guillén H, Arán VJ, Salgado A. Peganum harmala에서 퀴나졸린 알칼로이드의 식별, 발생 및 활성. Food Chem Toxicol 2017; 103: 261–269

[13] Herraiz T, Guillén H. Monoamine oxidase-A 억제 및 잠재적인 항우울제 작용이 있는 식물 추출물의 관련 항산화 활성. Bio-Med Res Int 2018; 1018: 4810394

[14] Carradori S, D'Ascenzio M, Chimenti P, Secci D, Bolasco A. 선택적 MAO-B 억제제: 천연 제품의 교훈. 몰 다이버 2014; 18: 219–243

[15] Fajemiroye JO, 실바 DM, 올리베이라 DR, 코스타 EA. 불안과 우울증의 치료: 회고에 있는 약용 식물. Fundam Clin Pharmacol 2016; 30: 198–215

[16] Fišar Z. 약물은 모노아민 산화효소 활성과 관련이 있습니다. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry 2016; 69: 112–124

[17] Naoi M, Maruyama W, Shamoto-Nagai M. A형 모노아민 산화효소와 세로토닌은 우울증 장애에 공동으로 관여합니다. 신경 전달 물질 불균형에서 신경 발생 장애까지. J 신경 전달 2017; 125: 53–66