Cistanche Tubulosa에서 혈관이완 활성이 있는 페닐에타노이드 올리고글리코사이드 및 아실화 올리고당
Mar 15, 2022
자세한 정보:ali.ma@wecistanche.com
요시카와 마사유키 외
추상적인
말린 줄기에서 추출한 메탄올 추출물시스탄체 튜불로사(Schrenk) R. Wight는 분리된 쥐의 대동맥 스트립에서 노르아드레날린에 의해 유도된 수축에 대한 억제 효과를 나타내는 것으로 밝혀졌습니다. 추출물에서 새로운 페닐에타노이드 아미노글리코사이드 구성성분인 칸카노사이드 F 및 G와 아실화 올리고당인 칸카노스가 14개의 알려진 화합물과 함께 분리되었습니다. 이 새로운 화합물의 구조는 화학적 및 물리화학적 증거를 기반으로 결정되었습니다. 또한 주성분인 kankanoside F, kankanose, echinacoside, acteoside, cistanoside F는 혈관이완 활성을 나타내어 활성을 위한 몇 가지 구조적 요건을 명확히 하였다. 2006 Elsevier Ltd. 판권 소유.
소개
Orobanchaceae 기생 식물,시스탄체 튜불로사(Schrenk) R. Wight는 북아프리카, 아라비아, 아시아 국가에 널리 분포하며, 줄기는시스탄체 튜불로사, C. salsa 및 C. Deserticola 뿐만 아니라 전통적으로 혈액 순환 촉진제 및 발기 부전, 불임, 요통, 허약 및 강장제의 치료제로 사용되어 왔습니다.2,3 의약품,1,4-14 우리는 5가지 이리도이드인 kankanoside A-D와 kankanol과 monoterpeneglycoside인 kankanoside E의 분리 및 구조 해명을 보고했습니다.시스탄체 튜불로사1 이 생약에 대한 연구의 연속으로, 테메탄올 추출물은 고립된 쥐의 흉부 대동맥 스트립에서 노르아드레날린에 의해 유도된 수축에 대한 억제 효과를 나타내는 것으로 밝혀졌습니다. 이 메탄올 추출물에서 페닐에타노이드 올리고 배당체, 칸카노사이드 F(1) 및 G(2)와 아나실화 올리고당인 kankanose(3) 및 14개의 알려진 화합물인 echinacoside(4), acteoside(5), isoacteoside(6)를 추가로 분리했습니다. ),{8}}아세틸락테오사이드(7), 튜불로사이드 A(8) 및 B(9), 시스타노사이드 F(10), 살리드로사이드(11), (2R,3R)-부탄{17}},{18 }}디올 2-ObD-글루코피라노사이드,메소-부탄-2,3-디올2-ObD-글루코피라노사이드, 에틸 bD-글루코피라노사이드,3-메틸 부탄올 bD-글루코피라노사이드, ( 플러스 )-피노레시놀40-ObD -글루코피라노사이드, 및 ( 플러스 )-시린가레시놀 40-ObD-글루코피라노사이드. 이 논문은 새로운 화합물(1-3)의 구조 설명과 노르아드레날린에 의한 분리된 쥐의 대동맥 스트립에 의한 수축에 대한 주성분(1, 3-6, 10, 11)의 혈관이완 효과에 대해 전통적인 응용 프로그램을 기반으로 다룹니다. 혈액 순환 (그림 1).
결과 및 토론
2.1. 줄기에서 추출한 메탄올 추출물의 혈관 이완 효과시스탄체 튜불로사고립된 쥐의 흉부 대동맥에서 노르아드레날린에 의한 수축 유도
표 1에 나타난 바와 같이,시스탄체 튜불로사(중국 신장성 우루무치에서 구매)는 격리된 쥐의 대동맥 스트립에서 노르아드레날린에 의해 유도된 수축에 대해 시간 및 농도 의존적으로 혈관이완 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌습니다(30–3{{1{13}}}} 0 lg/mL). 메탄올 추출물을 순상 및 역상 컬럼 크로마토그래피 및 최종적으로 HPLC로 추가 정제하여 1(0.{25}}16%), 2(0를 제공했습니다.{31} }25퍼센트 ), 3(0.020퍼센트 ), 4(3.09퍼센트 ),3 5({{64} }.68퍼센트 ),3 6(0.096퍼센트 ),3 7 (0.017퍼센트 ),3 8 (0.052 퍼센트 ),3 9 (0.0036퍼센트 ),3 10(0.025퍼센트 ),15 11 (0.044퍼센트 ),16(2R,3R)-부탄-2,{{44 }}디올2-ObD-글루코피라노시드(0.0087%),17 메조-부탄{53}},{54}}디올{55}}ObD-글루코피라노시드(0.0065%),17 에틸b-D- 글루코피라노사이드(0.055%),{66}}메틸부탄올 bD-글루코피라노사이드(0.0030%),17(+)-피노레시놀40-ObD-글루코피라노사이드(0.016%),18 및 (+)-시린가레시놀{81} }ObD-글루코피라노사이드(0.022%).15
2.2. 칸카노사이드 F(1) 및 G(2)의 구조
Kankanoside F(1)는 음의 광학 회전을 갖는 백색 분말로 얻어졌습니다(MeOH에서 ½a -28D -44.8-). 1의 IR 스펙트럼은 156{{69} }, 1508 및 1458 cm-1는 방향족 고리에 기인하며 3432, 1075 및 1044 cm{12}}에서 강한 흡수 밴드를 가지며, 이는 아미노글리코시드 구조를 암시합니다. 음이온 FAB-MS 1, 준분자 이온 피크가 m/z 647(M plus Na) plus 및 623(MH)에서 관찰되었으며, 고해상도FAB-MS 분석에서 1의 분자식은 C26H40O17인 것으로 나타났습니다. 다양한 NMR 실험에 의해 할당된 1의 1H 및 13C NMR(CD3OD,표 2) 스펙트럼은 2메틸렌[d 2.78(2H, m, H{35}}), 3.70, 4.{{ 39}}(각각 1H, m, H2-8 모두)] 및 오르토 및 메타 결합 ABC형 방향족 양성자 [d 6.56(1H, dd, J{48}}}.9,7.9 Hz, H{52}}), 6.67(1H, d, J{56}}.9Hz, H{58}}), 6.69(1H, d, J{62}}.9Hz, H{ {64}})] 3개의 글루코피라노스 부분[d 4.30(1H, d, J{68}}.0 Hz, H{70}}), 4.37(1H, d, J=8)과 함께. 0Hz, H-1000), 5.16(1H, brs, H{80}})]. 1의 아미노글리코사이드 구조는 이핵 다중 결합 연결성(HMBC) 실험에 의해 특징지어졌으며, 이는 다음 양성자와 탄소 쌍(H{83}} 및 C{84}}; H{85}} 및 C-30; H-1000 및 C-60) 그림 2와 같습니다. 절대 입체 구조가 이전에 보고된 echinacoside(4)의 효소적 탈아실화,3 withtannase13,14는 1을 제공했습니다. 위에서 언급한 증거에 기초하여 kankanoside F의 구조는 2-(3,{97}} 디히드록시 페닐)에틸 OaL-람노피라노실({101}})[bD-글루코피라노실({104}})]-b-D-글루코피라노사이드(1).
Kankanoside G(2)는 또한 음의 광학 회전(MeOH에서 ½a{1}}D{2}}.{3}})을 갖는 백색 분말로 수득되었습니다. 2의 IR 스펙트럼은 3432, 1709, 1638, 1518, 1447, 1040 cm{11}}, 히드록실, 공액 에스테르 카르보닐, 에테르 관능기와 방향족 고리에 기인합니다. 분자식 C29H36O14는 양이온 및 음이온 FAB-MS[m/z 631(M plus Na) plus 및 607(MH)-]와 고해상도 FAB-MS에 의해 결정되었습니다. 탄나아제를 사용한 2의 효소적 탈아실화로 시스타노사이드 G(12)가 생성되었으며, 이의 절대 입체구조는 이전에 보고되었습니다.16 10% 수성 수산화칼륨(KOH)-50% 수성 1,{32}}다이옥산(1:1, v/v), 카페인산은 HPLC 분석에 의해 확인되었다. 2의 1H 및 13C NMR(CD3OD, 표 2) 스펙트럼은 다음 기능의 존재를 나타냅니다. 각각 1H,둘 다 m, H2-8)] 및 직교 결합 A2B{54}}형 방향족 양성자[d 6.65, 7.03(각각 2H, 둘 다 d, J=8.6 Hz, H{ {62}},5 및 H-2,6)]} 및 2개의 글루코피라노스 부분 [d4.33(1H, d, J= 7.9 Hz, H-10), 5.19 (1H, br s, H-100)]카페오일 모이어티와 함께 {트랜스-올레핀[d 6.29,7.56(1H 각각, 둘 다 d, J=15.9 Hz, H{84 }} 및 H-7)] 및 피로카테콜형 디히드록시벤젠 [d 6.78(1H, d,J= 8.3 Hz, H-5), 6.89(1H, dd, J{{ 96}}.9, 8.3Hz, H{100}}),7.04(1H, d, J{104}}.9Hz, H{106}})]}. 2의 HMBC 실험에서 {{109}양성자[d 4.36(1H, dd, J{113}}.1, 11.6 Hz), 4.50(dd, J {{ 119}}.8, 11.6Hz)] 및 카페오일 카르보닐카본(dC 169.1). 결과적으로, Kankanoside G의 구조는 4-hydroxyphenyl-OaL-rhamnopyranosyl(1!3)-(6-O-caffeoyl)-bD-glucopyranoside(2)인 것으로 확인되었습니다.
2.3. 칸카노세의 구조 (3)
Kankanose(3), ½a- 27D-35.3-(MeOH)도 백색 분말로 얻었다. 3개의 IR 스펙트럼은 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458 및 1071cm{11}}에서 흡수 대역을 나타냈습니다. 히드록실, 공액 에스테르 카르보닐, 에테르 관능기 및 방향족 고리. 3개의 양이온 및 음이온 FAB-MS는 각각 m/z 673(M + Na) + 및 m/z 649(MH)에서 준분자 이온 피크를 나타냈다. 3의 고해상도FAB-MS는 분자식이 C27H38O18임을 밝혀냈다. 올리고당과 함께 HPLC 분석으로 확인된 1{89}}% KOH–50% 수성 1,{28}}디옥산 유리 카페인산으로 3의 알칼리 가수분해. 이 올리고당을 1.0 M 염산(HCl)으로 산 가수분해하면 L-람노오스 및 D-글루코오스가 유리되며, 이는 광학 회전 검출기를 사용한 HPLC 분석으로 확인되었습니다.1,13,14 1H 및 13CNMR(CD3OD, 표 3) 스펙트럼19 3의 3당류 모이어티{d[5.11(d,J{44}}.4 Hz), 4.57(d, J{48}}.9 Hz), H{ {52}} (ca. 1:1)], 4.25, 4.27(둘 다 d, J{59}}.7Hz, H{61}}),5.13, 5.18(둘 다 br s, H{66 }})} caffeoylgroup [d 6.28, 6.29 (둘 다 d, J{71}}.9 Hz, H{73}}), 6.78 (d,J{76}}.0 Hz, H -5), 6.96(dd, J{81}}.0, 8.0Hz, H{85}}), 7.06(d, J{88}}.0Hz, H{90} }), 7.60(d, J{93}}.9Hz, H{95}})]. 3에 대한 HMBC 실험에서 40-양성자[d 5.04, 4.99(둘 다 dd,J{103}}.5, 9.8Hz)]와 카페오일 카르보닐 탄소(dC168.53) 사이에 장거리 상관관계가 관찰되었습니다. , 168.65). 위에서 언급한 증거에 기초하여 kankanose의 구조는 bea-L-rhamnopyranosyl({114}})[bD-glucopyranosyl({117}})]-O-(4- O-카페오일)-D-글루코피라노스(3).
2.4. 주성분(1, 3-6,10, 11)의 혈관이완 효과시스탄체 튜불로사고립된 쥐의 흉부 대동맥에서 노르아드레날린과 높은 K 플러스에 의한 수축 유도
표 4 및 도 3에 나타난 바와 같이 주성분인 kankanoside F(1)와 kankanose(3), echinacoside(4), acteoside(5), isoacteoside(6), cistanoside F(10), salidroside( 11) 고립된 쥐의 흉부 대동맥에서 노르아드레날린 유발 수축에 대해 조사했습니다. 그 결과, 40- 위치에 caffeoyl 그룹을 갖는 화합물 3-5 및 10은 수축을 시간 및/또는 농도 의존적으로(10-100 lM) 유의하게 억제한 반면, 60- O-caffeoyl moiety는 4와 5보다 약한 활성을 보였다. 반면에 catechol 그룹이 있는 화합물 1은 유의한 억제를 보였으나 phenol 그룹이 있는 11은 그러한 효과를 나타내지 않았다. 이러한 결과는 40-O-caffeoyl moiety와 10-O-dihydroxyphenethyl moiety가 강한 혈관이완제 활성에 필수적이라는 것을 상정하게 했습니다. 반면, 화합물 1, 3-6 및 10(100 lM)은 전압 의존성 칼슘 채널 차단제인 니페디핀과 달리 고농도의 칼륨 양이온(high K plus)에 의해 유도된 수축에 어떠한 영향도 나타내지 않았다. 동일한 조직(데이터는 표시되지 않음). 이 발견은 이러한 활성 성분이 수용체 작동 칼슘 채널을 통해 수축을 억제하지만 전압 의존적 칼슘 채널을 통해서는 수축을 억제하지 않는다는 것을 시사했습니다. 최근 Iizuka et al.은 개나리 열매의 페닐에타노이드인 forsythiaside가 쥐의 대동맥 고리 제제에서 noradrenaline에 의한 수축을 억제한다고 보고했으며, forsythiaside에 의한 noradrenaline에 의한 수축 억제는 부분적으로 noradrenaline에 의한 수축의 감소에 기인한다고 제안했습니다. 칼슘 유입.20 그러나 본 연구에서는 활성 성분의 이완 효과가 약 100% 관찰되었다. 아드레날린 α 수용체 길항제인 프라조신과는 다른 방식으로 노르아드레날린을 추가한 지 30분 후. 활성 성분의 작용 메커니즘은 더 연구해야 합니다.
3. 실험적
3.1. 일반 실험 절차
물리적 데이터를 얻기 위해 다음 도구가 사용되었습니다. 특정 회전, Horiba SEPA{0}} 디지털 편광계(l=5 cm); UV 스펙트럼, Shimadzu UV-1600분광기; IR 스펙트럼, Shimadzu FTIR{3}} 분광기; 1H NMR 스펙트럼, JEOL JNM-LA500(500MHz) 분광계; 내부 표준으로 테트라메틸실란을 사용하는 13C NMR 스펙트럼, JEOLJNM-LA500(125MHz) 분광기; FABMS 및 HR-FAB MS, JEOL JMS-SX 102A 질량 분석기; HPLC검출기, Shimadzu RID{15}}굴절률 및 SPD 10A UV-vis 검출기. HPLC 컬럼, YMC-PackODS-A(250 · 4.6 mm id) 및 (250 · 20 mm id) 컬럼은 각각 분석 및 분취 목적으로 사용되었습니다.
크로마토그래피에는 다음 실험 조건이 사용되었습니다. 순상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, 실리카겔 BW{1}}(Fuji Silysia Chemical, Ltd, 15{11}}–35{16}} 메쉬); 역상 실리카겔 컬럼크로마토그래피, Chromatorex ODS DM1{23}}20T(FujiSilesia Chemical, Ltd, 100-200 메쉬); TLC, 실리카겔 60F254(Merck, 0.25mm)(순상) 및 실리카겔 RP{14}} F254S(Merck, 0.25mm)(역상)가 있는 사전 코팅된 TLC 플레이트; 역상 HPTLC, 실리카겔이 있는 사전 코팅된 TLC 플레이트 RP{21}} WF254S(Merck, 0.25mm); 검출은 1% Ce(SO4)2-10% 수성 H2SO4를 분무한 후 가열하여 달성했습니다.
시스탄체 튜불로사
3.2. 식물 재료
말린 줄기시스탄체 튜불로사2005년 1월 일본 오사카에 있는 EishinTrading Co., Ltd를 통해 중국 신장성 우루무치에서 이전에 설명한 대로 구입했습니다.1
3.3. 추출 및 격리
분수 {{0}}(590mg), 2-1(466mg), 2-3(3931mg), 3-3(3610mg), 3-4 (190mg), 4-5 [=에키나코사이드(4, 2595mg,0.44%)], 4-6(1635mg), 5-2(1114mg), {{ 20}}(306 mg), 5-4(347 mg), 5-5(=4, 1620 mg, 2.03%) 및 5-6(1453 mg)은 줄기의 메탄올 추출물시스탄체 튜불로사이전에 보고된 대로.1 분획 1–2(59{11}} mg)를 HPLC[MeOH/H2O(35:65,v/v)]로 정제하여 3-메틸부탄올 bD-글루코피라노사이드(18 mg , 0.0030퍼센트 ), ( 플러스 )-피노레시놀 40-ObD-글루코피르 아노사이드(96 mg, 0. 016%) 및 ( 플러스 )-시린가레시놀 40-O bD-글루코피라노사이드(129mg, 0.{73}}22%) 시스타노클로린(21mg, {{ 76}}.{{80}}035% ). 분획 2-1(466 mg)를 HPLC[MeOH/H2O(5:95, v/v)]로 분리하여 (2R,3R)-부탄-2,{{40 }}디올 2-ObD-글루코피라노사이드(12 mg, {{1{{1{113}}8}}4}}.{122}}087%), (2R, 3S)-부탄-2,3-디올 2-ObD 글루코피라노사이드(9 mg, 0.{144}}065%) 및 에틸 bD -글루코피라노사이드(76mg, 0.{166}}55%)와 우리딘({175}}.{179}}069%). 분획 2-2(535 mg)을 HPLC[MeOH/H2O(5:95, v/v)]로 정제하여 살리드로사이드(11, 41 mg, 0.022 퍼센트)와 항진균제(15 mg, 0.0079 퍼센트)를 얻었다. 및{78}}데옥시카탈폴(214mg, 0.11%). 분획2-3(535mg)을 HPLC[MeOH/H2O(5:95,v/v)]로 분리하여 글루로 측(110mg, 0.14%)과 함께 11(17mg, 0.022%)을 제공하고 바르시오사이드(164 mg, 0.21%). 분획3-3(510 mg)을 HPLC[MeOH/H2O(40:60, v/v)]에 적용하여 악테오사이드(5, 257 mg, 0.31%)를 제공하고, isoacteoside(6, 79 mg, 0.096%) 및 20-acetylacteoside(7, 14 mg, 0.017%). 분획 3-4(190 mg)을 HPLC[MeOH/H2O(40:60, v/v)]로 추가 정제하여 칸카노사이드 G(2, 17 mg, 0.0029%) 및 튜불로사이드 B(9, 21 mg, 0.0036)를 얻었다. 퍼센트). 분획4-6(75 mg)을 HPLC[MeOH/H2O(35:65, v/v)]로 정제하여 5(18 mg, 0.065%)를 얻었다. 5-2 분획(1114 mg)을 HPLC[MeOH/H2O(10:90, v/v)]로 처리하여 2(24 mg, 0.030%)를 얻었다.{146}} 분획(306 mg)은 HPLC[MeOH/H2O(15:85, v/v)]로 정제하여 칸카노사이드 F(1, 13 mg, 0.016%)를 얻었다. 분획 5-4(347 mg)을 HPLC[MeOH/H2O(10:90, v/v)]에 적용하여 칸카노스(3, 30 mg, 0.038%) 및 시스타노사이드 F(10, 20 mg, 0.025)를 얻었다. 퍼센트). 분획{168}}(530mg)을 HPLC[MeOH/H2O(35:65,v/v)]로 정제하여 4(185mg, 0.62%), 5(91mg, 0.30%) 및 튜불로사이드 A를 얻었다. (8, 16mg, 0.052%).
3.3.1. 칸카노사이드 F(1).
백색 분말, ½a{{0}}D -44.8- (c0.50, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MSm/z: C26H40O17Na(M + Na) + , 647.2163에 대한 계산치. 측정치: 647.2160. UV[MeOH, nm(log e)]: 224(3.83), 283(3.37). IR(KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458,1075, 1044cm-1. 1H NMR(500MHz, CD3OD) d: 표 2에 제공. 13C NMR 데이터(125MHz, CD3OD) dC: 표 2에 제공. 양이온 FAB-MS m/z: 647(M + Na) + . 음이온 FAB-MS m/z: 623(MH), 477(M-C6H11O4)-, 623(M-C6H11O5)-, 623(M-C12H21O9)-.
3.3.2. 칸카노사이드 G(2).
백색 분말, ½a{{0}}D -35.0-(c 0.80, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MSm/z: C29H36O14Na(M + Na) + , 631.2003.Found: 631.1996에 대한 계산. UV[MeOH, nm(log e)]: 329(4.10).IR(KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264,1040cm{26}}. 1H NMR(500MHz, CD3OD) d: 표 2에 제공. 13C NMR 데이터(125MHz, CD3OD) dC: 표 2에 제공. 양이온 FAB-MS m/z: 631(M + Na) + .음이온 FAB-MS m/z: 607(MH)-, 461(M-C6H11O4).
3.3.3. 칸카노세(3).
백색 분말, ½a{{0}}D -35.3- (c0.50, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MSm/z: C27H38O18Na(M + Na) + 673.1956에 대한 계산값: 673.1959. UV[MeOH, nm(log e)]: 219(4.10), 247(3.96), 333(4.21). IR(KBr): 3430, 2962, 1702,1639, 1611, 1458, 1264, 1071cm-1. 1H NMR(500MHz, CD3OD) d: 표 3에 제공. 13C NMR 데이터(125MHz, CD3OD) dC: 표 3에 제공. 양이온 FAB-MS m/z: 673(M + Na) + . 음이온 FABM-Sm/z: 649(MH), 487(M-C9H8O3)-, 325(M-C15H18O8)-.
시스탄체 튜불로사
3.4. tannase를 사용한 2 및 4의 효소적 탈아실화
H2O(1.{27}}mL) 중 2(4.8mg, 0.008mmol)의 용액을 탄나아제(3.7mg, Aspergillus oryzae 제품)로 처리했습니다. , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, Osaka, Japan) 용액을 37도에서 24시간 동안 교반하였다. EtOH를 반응 혼합물에 첨가한 후, 용매를 감압 하에 제거하고 잔류물을 HPLC[MeOH/H2O(35:65, v/v)]로 정제하여 시스타노사이드 G(12, 2.8 mg, 80%)를 얻었다. 유사한 절차로, H2O(2.0mL) 중 4(9.2mg, 0.012mmol)의 용액을 탄나아제(7.5mg)로 처리하고 용액을 37도에서 24시간 동안 교반했습니다. 상기 기재된 바와 같이 반응 혼합물을 후처리하여 잔류물을 얻었고, 이를 HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)]로 정제하여 1 (4.7 mg, 62%)을 얻었다.
3.5. 2 및 3의 알칼리 및 산 가수분해
50% 수성 1,{6}}디옥산(1.{11}}mL) 중 2 및 3(각각 3.5mg)의 용액을 10% 수성 KOH로 처리했습니다. (1.{{30}} mL) 및 전체를 각각 37℃에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 하에서 용매를 제거하여 반응 혼합물을 얻었고, 이를 HPLC 분석 [컬럼: YMC-Pack ODS-A, 250 · 4.6 mm id; 이동상: MeOH/H2O(30:70, v/v); 검출: UV(254 nm); 유속: 1.0 mL/min] 카페인산을 확인합니다(tR: 13.1분). 이어서, 3의 반응 혼합물을 1M HCl(2.0mL)에 용해시키고 환류 하에 3시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 수층은 각각 다음 조건에서 HPLC 분석을 수행하였다: HPLC 컬럼, KaseisorbLC NH{32}}, 250 · 4.6 mm id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokyo, Japan); 검출, 광학 회전 [ShodexOR-2(Showa Denko Co., Ltd, Tokyo, Japan); 이동상, CH3CN/H2O(85:15, v/v); 유속 0.8mL/분]. 수층에 존재하는 L-rhamnose와 D-glucose의 확인은 tR: 9.9분(L-rhamnose, 음의 광학적 회전) 및 17.9분(D-glucose, 양의 광회전).
3.6. 혈관 이완제 활동
3.6.1. 조직 준비.
무게 25{7}}–350 g의 수컷 Sprague–Dawley 쥐를 마취하에 두 경동맥을 절단하여 희생시켰고 흉부 대동맥을 분리하여 나선형 스트립(2–3 mm ·15–2{{25 }} mm). 생리학적 염 용액은 NaCl(118.0mM), KCl(4.7mM), KH2PO4(1.2mM), MgSO4(1.2mM), CaCl2(2.5mM), NaHCO3(25.0mM) 및 D-포도당(10.0mM)을 함유하였다. 용액은 95% O2-5% CO2 가스 혼합물로 폭기되었고 37도에서 유지되었습니다. 기계적 반응을 조사하기 위해, 각 제제를 기관욕(6ml)에 현탁시키고 약 1g의 초기 부하를 가하였다. 실험을 시작하기 전에 1시간의 평형 기간이 허용되었습니다. 수축은 힘-변위 변환기(AD Instruments)를 통해 등척적으로 측정되었고 거짓말 탐지기에 기록되었습니다.
3.6.2. dl-noradrenaline 또는 high K plus에 의해 유도된 수축에 대한 억제 효과.
평형 후, dl-노르-아드레날린(최종 농도: 1M) 또는 3M KCl(0.1 mL, K 플러스의 최종 농도: 54mM)을 욕에 첨가하였다. 조직을 3회 세척하고 수축이 최대 수준에 도달한 후 재평형화하였다. dl-noradrenaline 또는 KCl을 첨가하여 지속적인 수축을 다시 유도한 후, 시험 화합물을 10-100 lM(noradrenaline) 또는 100 lM(high K plus)으로 적용하였다. 테스트 샘플을 적용하기 전의 수축 반응은 100%로 간주되었습니다. Prazosin 염산염과 nifedipine은 참조 화합물로 사용되었습니다.
3.6.3. 통계 분석.
값은 평균 ± SEM으로 표시됩니다. 통계 분석을 위해 일원 분산 분석에 이어 다중 비교 분석을 위한 Dunnett의 검정을 사용했습니다. 0.05보다 작은 확률(p) 값은 유의미한 것으로 간주되었습니다.
감사의 말
이 연구는 제21회 COE 프로그램, 학술 프론티어 프로젝트 및 일본 문부과학성의 과학 연구를 위한 보조금의 지원을 받았습니다.
참조 및 참고 사항
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