Sarmentosamide, 해양 유래 Streptomyces Sp.의 노화 방지 화합물. APmarine042
Apr 28, 2023
키워드:담배; 연쇄상구균sp. APmarine042;노화 방지; MMP-1; UVB; TNF-

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1. 소개
피부노화내적 요인과 외적 요인의 결과인 두 가지 주요 과정에 의해 유발됩니다.외인성 노화주로 대기 오염과 같은 환경적 요인에 노출되어 발생합니다.1] 및 자외선(UV) 방사선 [2]. 자외선은 UVA(315~400nm), UVB(280~315nm),UVC(200~280nm) 중 UVB 광선은 표피를 투과하여 피부에 기여하는 것으로 알려져 있습니다.광노화 [3]. UVB에 의한 피부 광노화는 DNA 손상을 일으킴 [4] 및 활성산소종(ROS) 세대 [5] 그리고 세포외 기질을 방해합니다 [6]. 내인성 노화는 자연적인유전적 요인, 호르몬 및 대사 과정과 같은 생리적 변화의 결과 [7]. 또한 종양 괴사 인자-알파(TNF)와 같은 염증성 사이토카인 ), 인터루킨 1 알파/베타(IL-1 / ) 및 인터루킨 6(IL-6)은 나이가 들면서 만성적으로 증가합니다. 특히, 종양 괴사요인- (TNF )를 통해 세포외 기질(ECM) 성분의 분해를 가속화하는 것으로 알려져 있습니다.노화된 피부에서 MMP(matrix metalloproteinases)의 발현 및 활성을 상향 조절하는 [8]. MMP-1는주로 진피의 섬유아세포에 의해 방출되며 분비된 MMP-1는 분해를 담당합니다.피부 구조와 기능을 지원하는 진피 콜라겐. 따라서 MMP-1의 변조진피 섬유아세포에서의 발현은 노화 방지 개발을 위한 유망한 표적이 될 수 있습니다.화장품 성분.

이전 연구에서는 UVB 방사선이 ROS(활성 산소종 생산을 유도하고 세포 내 신호 전달 경로 및 전사 인자(예: AP-1, NF-kB)의 활성화를 유도한다고 보고했습니다. [9. 이러한 전사 인자는 미토겐에 의해 조절됩니다. - MMP-1 및 전 염증성 사이토카인을 유도하는 활성화된 단백질 키나아제MAPKs). UVB/ROS 자극과 관련된 세 가지 MAPKamilies가 있습니다: 세포외 신호 조절 키나아제(ERK), c-Jun N-말단
키나아제(NK) 및 p38. 우리의 연구는 Streptomyces sp.를 확인했습니다. MMP-1 발현에 강력한 억제 효과를 보인 APmarine042 추출물. 그 후, 이 Streptomyces sp.에서 MMP-1 억제 화합물이 확인되었습니다. APmarine042 추출물과 그 화학 구조는 NMR 분석 지원(1), 헥사디엔아미드 잔기 101을 가진 화합물을 통해 확인되었습니다. 그런 다음 이 화합물이 UVB 조사 및 TNFa 유도 인간 피부에서 MMP-1 발현을 억제하는지 여부를 추가로 조사합니다. 섬유아세포뿐만 아니라 기본 신호 전달 경로의 조절에서의 역할. 추가적으로, 우리는 일을 검사했습니다e cistanche의 항산화 활성(1) 2,2-디페닐-1-피크릴하이드라질(DPPHI)을 통해라디칼 소거 분석.

2. 결과 및 논의
2.1. cistanche (1) 격리 및 식별
cistanche (1)는 HPLC-UV와 생물 활성 유도 분리의 조합을 통해 분리되었습니다. 본 연구에서 확인된 화합물(이하 화합물 1"이라 함)의 NMR 데이터(보충 물질)와 이전에 보고된 화합물의 NMR 데이터(보충 물질)를 비교하여 화합물 1을 cistanche로 확인하였다. 화합물 1의 선광도 값은 또한 화합물 1 지원을 추가로 지원한 이전 보고서와 일치합니다(그림 1).

2.2. 인간 피부 섬유아세포에 대한 cistanche (1)의 세포 독성 효과
Cistanche의 세포 독성 효과를 조사하기 위해 정상 인간 진피 섬유아세포(NHDFor human foreskin fibroblast cells (Hs68))를 다양한 농도(6, 12, 25, 50, 100 ug/mL)로 24시간 동안 처리한 후 세포 counting kit-8 (CCK-8) assay를 통해 세포의 생존율을 정량화하였다. 노란색 포르마잔 염료를 제공하는 세포, 그 양은 살아있는 세포의 수에 비례합니다. 그림 2에서 볼 수 있듯이 cistanche는 {{15} }ug/ml

그림 2. 섬유아세포에 대한 cistanche의 세포 생존력 테스트. (ab)의 세포 생존력cistanche 처리정상 인간 진피 섬유아세포(NHDF)(a) 및 인간 포피 섬유아세포 세포(Hs68)(b) 세포를 24시간에 CCK(세포 계수 키트) 분석으로 측정했습니다. * p < 0.05, ** p < 0.01vs. 처리되지 않은 그룹 ).

2.3. cistanche (1) UVB 조사 NHDF 세포에서 MMP-1 발현 및 분비 억제
다음으로, UVB 방사선(25mJ/cm2)의 부재 및 존재 하의 NHDF를 짧은 기간 동안 시스탄체(2.5ug/mL)로 처리하고, 상대 MMP-1 mRNA 발현 수준을 정량적 실시간을 통해 정량화했습니다. PCR 분석. cistanche는 UVB의 부재(그림 3a)와 존재(그림 3b)에서 각각 MMP-1 mRNA 수준을 최대 16% 및 17%까지 하향 조절하는 것으로 밝혀졌습니다. 주요 외인성 피부 노화 위험 인자인 UVB 방사선은 표피를 관통하여 상부 진피에 도달하여 ROS(Reactive Oxygen Species) MMP 생성 및 콜라겐 합성 하향 조절을 일으키므로 본 연구에서는 UVB 조사 시 cistanche에 의한 MMP-1 분비 억제 여부를 조사하고자 하였다. NHDF 세포. 세포 배양 배지에서 MMP-1의 분비량은 ELISA를 통해 측정하였고, 상대적인 MMP-1 분비량은 전체 세포 용해물에서 귀 단백질로 정규화하여 비신코닉 분석기를 통해 측정하였다. 산(BCA) 단백질 정량화 분석. UVB 조사(25mJ/cm2)는 UVB를 조사하지 않은 그룹(그림 3c)과 cistanche에 비해 MMP-1분비(8.3-배)를 현저하게 증가시켰습니다. - UVB가 조사된 NHDF 세포에서 용량 의존적으로 MMP-1 분비를 억제함.

그림 3. UVB-조사된 NHDF에서 메탈로프로테이나제-1(MMP-1) 발현에 대한 시스탕의 효과. (a,b) NHDF 세포에서 MMP-1의 상대적인 mRNA 수준은 UVB(25mJ/cm2)를 조사하거나 16시간 동안 시스탄체(2.5ug/mL)로 처리했습니다. RPLPO 유전자는 내부 통제로 사용되었습니다. * p < {{10}}.05.*** p < 0.001 (C) UVB 조사 후(25mJ/cm2) , 무혈청 배지의 식염수를 48시간 동안 처리한 다음 세포 배양 배지로의 MMP-1의 상대적 분비 수준을 ELISA### p < 0.001(vs. non-UVB 대조군)로 분석했습니다. ** p < 0.01; *** p < 0.001(UVB 조사 대조군).
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