심각한 코로나19로 인해 ICU에 입원한 백신 접종을 받지 않은 개인의 말초 혈액 단핵 세포의 지속적인 세포독성 반응은 치명적인 결과를 피하는 데 필수적입니다.

추상적인: 본 연구의 주요 목적은 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 세포독성 활성이 백신을 접종받지 않은 중환자-19로 중환자실에 입원한 개인의 결과에 미치는 영향을 확인하는 것이었습니다. 입원 시 23명으로부터 혈액 샘플을 채취한 후 사망(Exitus 그룹)(n=13) 또는 퇴원(생존 그룹)(n=10)까지 13주 동안 2주마다 수집했습니다. 치명적인 결과에 영향을 미칠 수 있는 사회인구통계학적, 임상적 또는 생화학적 데이터에서 그룹 간 유의미한 차이를 발견하지 못했습니다. 그러나 위형화된 SARS-CoV-2-감염 Vero E6 세포에 대한 Exitus 그룹 개인의 PBMC의 직접적인 세포 독성은 입원 시 크게 감소했습니다(-2.69-배; p{11}}. 0234), 중환자실에서 4주 후(−5.58-배; p=0.0290), 생존한 개인과 비교하여 입원 중에도 호전되지 않았습니다. 시험관 내에서 이들 세포의 IL-15 처리는 치명적인 결과가 발생할 때까지 어떤 시점에서도 효과적인 세포독성을 회복하지 못했으며, NKT, CD4+ 및 CD에서 면역 고갈 마커의 발현 증가가 관찰되었습니다. 8+ T 세포. 그러나 생존 그룹 개체의 PBMC에 대한 IL{21}} 치료는 4주차에 세포독성을 크게 증가시켰습니다(6.{24}}배; p= 0.0303). 결과적으로, 면역 고갈을 극복하고 지속적이고 효율적인 세포 독성 활동을 유도할 수 있는 면역 조절 치료는 심각한 코로나19로 인한 입원 기간 동안 생존을 위해 필수적일 수 있습니다-19.

키워드: SARS-CoV-2; 코로나19-19; 면역 반응; 세포독성 반응; IL-15

cistanche tubeulosa - 면역 체계를 향상시킵니다.

1. 소개

2019년 12월 우한시(중국 후베이성)의 한 해산물 시장에서 발생한 비정형 바이러스성 폐렴 사례가 여러 건 발견되었습니다. 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)라고 불리는 새로운 코로나바이러스가 급속도로 확산되었습니다. 2019년 코로나바이러스감염증(COVID{5}}) [1]이라는 전염병이 전 세계로 확산되었습니다. 그 이후로 전 세계적으로 약 6억 2,600만 건의 코로나19-19 사례와 650만 건의 관련 사망자가 보고되었습니다(2022년 10월 업데이트)[2]. 다양한 위험 요인과 동반질환이 개인 간의 코로나19 진행에 영향을 미칠 수 있으며, 이는 팬데믹 초기부터 영향을 받은 국가 간의 임상 데이터 비교에 영향을 미쳤습니다[3]. 그러나 코로나-19의 임상 증상은 무증상 감염부터 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS)까지 다양할 수 있는 것으로 확인되었습니다[4]. 심각한 형태의 코로나19로 발전할 확률이 높은 것과 관련된 다양한 위험 요인에는-19 노령, 남성, 당뇨병, 고혈압 및/또는 비만과 같은 이전 동반질환이 있습니다[5,6]. 심각하고 심각한 코로나19-19는 주로 CD{21}} T 림프구의 혈구감소증뿐만 아니라 자연살해(NK) 및 CD{22}} T 세포의 과도한 고갈과 관련이 있는 것으로 나타났습니다. 감염을 제거할 수 없는 면역 저하 상태를 초래하고, 사이토카인 폭풍 및 혈전증과 같은 심각한 합병증이 발생합니다[7]. 코로나19 환자의 심각한 형태의 질병 및 사망의 주요 원인은 쇼크 및/또는 다기관 기능 장애를 동반한 고사이토카인혈증의 발병을 촉진할 수 있는 과도한 염증 반응으로 간주됩니다[4]. 이 증후군은 사이토카인 폭풍으로 알려져 있으며[8], 바이러스 감염에 의해 유발되는 과염증 상태로 구성된 혈구탐식성 림프조직구증(sHLH) 질환과 유사합니다[9,10]. 이는 SARS-CoV-2가 안지오텐신 전환 효소 2(ACE2) 수용체를 사용하여 표적 세포를 감염시키는 것과 관련이 있을 수 있습니다. 다양한 조직의 세포에서 널리 발현되는 ACE2 수용체에 SARS-CoV-2가 결합하면[11] 핵 인자-κB(NF-κB)를 활성화하는 안지오텐신 II가 증가합니다. 이 필수 전사 인자의 활성화는 전염증성 사이토카인, 케모카인 및 접착 분자의 발현을 자극합니다[12]. 이러한 과도한 염증 반응에도 불구하고 감염을 제거하는 것은 효과적이지 않은 것으로 보이며 T 세포 활성화로 인해 세포 사멸로 끝날 수 있습니다 [13]. 이 사이토카인 폭풍은 림프감소증을 유발할 수 있으며[12,14] 표현형이 소진되고 NK 세포 및 PD{47에서 NKG2A와 같은 억제 수용체의 발현이 증가하는 NK 및 CD{45}} T 세포의 수준이 감소합니다. }} CD8+ T 세포[15,16]. 더욱이, CD107a와 같은 탈과립 마커의 발현은 일반적으로 이들 세포 표면에서 감소합니다[15]. 이는 중증 및 중증 코로나19 환자의 감염된 세포를 제거하는 능력에 장애가 있음을 입증합니다-19 [17 ]. 효과적인 백신을 개발하고 투여하기 위한 전 세계적인 빠른 대응에도 불구하고, 백신으로 인한 면역 반응에서 벗어날 수 있는 새로운 변종의 출현으로 인해 증상이 있는 질병에 대한 방어력이 급격히 감소했습니다[18]. 결과적으로, 코로나19에 대한 효율적인 치료법에 대한 연구를 계속할 필요가 있습니다-19. 심각하고 위독한 질병으로 인해 입원한 개인의 상태를 개선하기 위해 여러 치료법이 테스트되었지만 감염된 세포를 제거하거나 감염률을 낮추는 데 특이적인 치료법은 아직 입증되지 않았습니다 [15,19]. 따라서 산소 및 수액 요법과 같은 지지 치료는 여전히 이러한 개인의 관리에 적용되는 가장 중요한 전략 중 하나입니다 [2,4,16,20]. 코르티코스테로이드와 같은 비특이적 치료법도 과도한 염증 반응을 조절하고 감소시키는 데 유익합니다[21,22]. 최근에는 몰누피라비르, 니마트렐비르, 리토나비르와 같은 경증~중등도 코로나바이러스-19 환자의 치료를 위해 FDA의 승인을 받은 여러 약물이 있지만 위험이 높은 환자에게 응급 상황인 경우에만 해당됩니다. 심각한 질병으로 진행됩니다 [23-26]. 몰누피라비르는 SARS-CoV-2의 복제 및 전사에 사용되는 RdRp를 포함하여 여러 바이러스성 RNA 의존성 RNA 중합효소(RdRp)와의 간섭으로 RNA 돌연변이 유발을 유도하는 능력으로 인해 광범위한 항바이러스 활성을 나타냅니다. RNA 게놈[27]. nirmatrelvir와 ritonavir의 조합은 SARS-CoV-2- 2 [28]의 주요 바이러스 프로테아제 3CLpro를 억제하여 동물 모델에서 감염 확산을 막을 수 있는 것으로 입증되었습니다. 그러나 감염된 세포를 제거할 수 있는 강력한 세포독성 면역 반응을 유발하려면 이러한 항바이러스 약물을 백신과 같은 다른 조치와 함께 투여해야 합니다. CD8+ T 림프구, NK 및 NKT 세포와 같이 세포 독성 활성을 갖는 대부분의 세포는 기능과 항상성 조절을 위해 인터루킨-15(IL-15)의 존재를 필요로 합니다[29]. IL-15는 특정 항원에 의한 활성화를 위해 CD8+ T 세포를 프라이밍하고 NK 세포 세포 독성 및 증식도 개선합니다. 따라서 IL-15은 감염된 세포에 대한 선천적 및 적응성 세포 면역 반응을 모두 향상시킬 수 있습니다[22,25]. IL-15은 또한 Bcl-2과 같은 세포사멸 방지 인자를 상향 조절하고 GSK-3[26]와 같은 세포사멸 촉진 인자를 하향 조절하여 혈구 감소증을 방지함으로써 NK 및 T 세포의 세포사멸을 방지합니다. 따라서 IL-15은 암 면역요법에서 새로운 면역조절 사이토카인으로 제안되었으며 백신 요법에서 보조제로 간주되어 왔습니다[26,30]. 인간 볼루스 iv 주입 IL-15(rhIL-15) 또는 IL-15 초작용제 N-803을 사용한 1상 임상 시험에서는 이 사이토카인이 상당한 확장 및/또는 활성화를 유도할 수 있음이 입증되었습니다. 생체 내에서 CD4+, CD8+ 및 NK 효과기 세포를 생산하므로 암이나 HIV와 같은 바이러스 감염 치료에 적용되었습니다[31-35]. 따라서 심각한 코로나19로 인해 입원한 개인의 세포독성 활성을 회복할 수 있는 IL과 같은 면역조절제를 사용하면 유기체에서 바이러스를 제거하는 데 유용할 수 있습니다. 이 관찰 종단 연구에서 우리는 집중 치료실에 입원한 코로나19 진단을 받은 개인으로부터 분리한 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 SARS-CoV-19에 대한 세포 독성 면역 반응의 진화를 특성화했습니다. 심각한 합병증으로 인한 치료실(ICU) 및 기타 필수 위험 요소와 비교하여 최종 결과에 대한 이러한 반응의 영향. 또한 IL{112}} 치료에 반응하고 세포독성 항바이러스 반응을 향상시키는 이들 세포의 능력을 평가했습니다. 이 연구에서 얻은 결과는 코로나19의 치명적인 결과에서 세포 독성 반응의 역할을 더 잘 이해하고 바이러스 제거를 촉진하는 효과적인 면역 조절 치료법의 개발을 향한 진전에 기여할 수 있습니다.

cistanche tubeulosa - 면역 체계를 향상시킵니다.

Cistanche Enhance Immunity 제품을 보려면 여기를 클릭하십시오.

【추가 요청】 이메일:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. 재료 및 방법

2.1. 연구 과목

이 연구를 위해 2020년 10월부터 2021년 4월까지 Universitario Ramón y Cajal 병원(스페인 마드리드)의 중환자실에 입원한 중증 코로나19-19 환자 23명을 모집했습니다. 이 기간은 스페인에서 발생한 두 번째 및 세 번째 코로나19 대유행({4}})을 모두 다루었습니다(각각 2020년 6월부터 12월까지, 2020년 12월부터 2021년 3월까지). 참가자는 입원 시 다음 기준에 따라 무작위로 모집되었습니다. 연구 참여에 대한 사전 서면 또는 구두 증인 동의 승인, 심각한 코로나바이러스로 인해 ICU에 입원-19, 양성 SARS-CoV-2 내부 검증 프로토콜에 따라 병원 입원 시 수행된 비인두 도말 검사에 대한 RT-qPCR 분석, 18세 이상이고 감염 당시 SARS-CoV-2에 대한 백신 접종을 받지 않았습니다. 말초혈액 검체와 임상 데이터는 총 13주 동안 2주 간격으로 수집되었으며, 혈액 검체는 분석 시점까지 가공 후 냉동보관되었습니다. 이 기간은 1차 대유행 파동 당시 스페인의 입원 기간이 평균 35일로 추정된다는 점을 고려하여 계산되었으므로[36], 최소 2회의 완전한 모집 및 후속 조치를 수행할 수 있었습니다. 13주 후, 참가자들은 최종 결과에 따라 두 그룹으로 나뉘었습니다: 치명적인 결과(n= 13), 이하 Exitus; 또는 병원 퇴원(n=10), 이후 생존.

2.2. 윤리성명서

본 연구에 참여한 개인은 Universitario Ramón y Cajal 병원(스페인 마드리드)에서 모집되었습니다. 그들 모두는 연구 참여에 대해 사전 서면 동의를 받았거나 오염된 문서를 취급하지 않기 위해 대리인의 서면 동의를 받아 구두 동의를 목격했습니다. 현재 스페인 및 유럽 데이터 보호법은 모든 참가자의 기밀성과 익명성을 보장합니다. 이 연구에 대한 프로토콜(CEI PI 32_2020-v2)은 헬싱키 선언에 따라 준비되었으며 이전에 Instituto de Salud Carlos III 윤리 위원회(IRB IORG0006384) 및 참여 병원의 검토 및 승인을 받았습니다.

2.3. 세포

5 밀리리터의 전혈을 EDTA Vacutainer 튜브(Becton Dickinson, Madrid, Spain)에 수집하고 즉시 처리하여 Ficoll-Hypaque(Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, USA) 밀도 구배 원심분리를 통해 PMBC와 혈장을 분리한 후 분석 전까지 냉동 보관됩니다. 해동 후 세포 생존성을 광학 현미경 및 유동 세포측정법으로 평가했습니다. Vero E6(아프리카 녹색 원숭이 신장) 세포주(ECACC 85020206)는 Antonio Alcami 박사(CBM Severo Ochoa, Madrid, Spain)로부터 제공받았으며, 이들 세포는 10% FCS, 2 mM L-가 보충된 DMEM에서 배양되었습니다. 글루타민, 및 100 단위/mL 페니실린 및 스트렙토마이신(Lonza, Basel, Switzerland).

남성의 면역체계 강화를 위한 시스탄체의 효능

2.4. 유사형 SARS-CoV-2 감염 분석

참가자의 PBMC의 SARS-CoV-2에 대한 세포독성 활성은 단일 주기 유사형 바이러스 pNL4-3Δenv_SARS CoV-2-S에 감염된 Vero E6 세포를 사용하여 분석되었습니다. Δ19(G614)_렌. 이 바이러스는 HIV-1 게놈 내 돌연변이 D614G가 있는 SARS-CoV-2 스파이크 당단백질과 이전에 설명한 대로 생성된 Renilla 루시퍼라제 유전자를 암호화합니다[37,38]. 스파이크(S) 단백질에 D614G 돌연변이를 포함하는 SARS-CoV-2 변종은 대유행 초기에 순환하기 시작하여 많은 지역에서 빠르게 우세해졌습니다[39,40]. 간단히 말하면, Vero E6의 단층은 pNL4-3Δenv_ SARS-CoV-2-SΔ19(G614)_Ren(100 ng p24 Gag/well)에 감염되었습니다. ) 48시간 동안. 그런 다음 세포를 세척하고 이전에 IL{36}}(13ng/mL)으로 48시간 동안 처리하거나 처리하지 않은 참가자의 PBMC(비율 1:1)와 함께 1시간 동안 공동 배양했습니다. 본 연구에 사용된 IL-15의 용량은 NK 증식에 가장 큰 영향을 미치는 이전에 설명된 용량(10–25 ng/mL)[41]과 기억 세포 독성의 우선적인 확장을 고려하여 선택되었습니다. CD8+ T 세포(5ng/mL 이하)[42]. Vero E6 단층에 대한 PBMC의 세포독성 활성은 현탁액에 있는 세포가 포함된 상등액을 제거하고 트립신-EDTA 용액(Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, Germany)을 사용하여 플레이트에서 Vero E6 세포를 분리한 후 결정되었습니다. Caspase-Glo 3/7 분석 시스템(Promega, Madison, WI, USA)을 사용하여 발광을 통해 분리된 세포에서 카스파제{50}} 활성을 후속적으로 정량화합니다. 이러한 활성을 담당하는 세포독성 세포 집단을 확인하기 위해 PBMC를 상등액에서 수집한 다음 유세포 분석으로 분석했습니다.

2.5. 유세포 분석

세포 표면 표현형 마커 염색을 위해 다음과 같은 접합 항체가 사용되었습니다: CD{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC 및 CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, BD Biosciences(San Jose, CA, USA)에서 구입함. 소진 마커 염색을 위해 CD3-BV510, CD{11}}APC-H7, CD{14}}FITC 및 PD{15}}BV650과 같은 접합 항체를 사용했습니다. BD Biosciences 및 CD{17}}PE는 Immunostep SL(스페인 살라망카)에서 구입하고 TIGIT-AlexaFluor700은 Thermo Fisher(미국 매사추세츠주 월섬)에서 구입했습니다. 샘플은 FACS Diva 소프트웨어 v 6.0(BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA)과 함께 BD LSRFortessa X-20 유세포 분석기를 사용하여 수집한 다음 FlowJo 소프트웨어 v10.0.7(Tree Star Inc., Ashland, OR)을 사용하여 분석했습니다. , 미국).

2.6. SARS-CoV-2 RNA혈증 검출

자동 추출기 QIAcube(Qiagen, Hilden, Germany)에서 QIAamp MinElute Virus Kit(Qiagen Iberia, Madrid, Spain)를 사용하여 혈장 샘플에서 총 RNA를 추출했습니다. SARS-CoV-2 RNA 검출은 세계 보건의 임시 지침의 일부인 이전에 설명된 [43] 대로 엔벨로프(E) 및 뉴클레오캡시드(N) 유전자의 표적을 사용하여 RT-qPCR 분석을 통해 수행되었습니다. SARS-CoV- 2 [44] 진단 테스트를 위한 조직(WHO). 정량화 주기(Cq) 값이 45주기 미만인 경우 샘플을 분석에 대해 양성으로 간주했습니다.

남성의 면역체계 강화를 위한 시스탄체의 효능

2.7. 통계 분석

모든 통계 분석 및 그래픽은 GraphPad Prism 소프트웨어 버전 8.4.3(GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA)을 사용하여 수행되었습니다. 그룹 비교는 Mann-Whitney U-test, Wilcoxon match-pairs signed Rank test, one-way ANOVA 및 Tukey의 다중 비교 테스트를 사용하여 수행되었습니다. 두 그룹 사이의 임상적 특징의 차이를 평가하기 위해 Fisher의 정확 검정이 사용되었습니다. p < 0.{{10}}5(양측) 값은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다. Cohen's d 통계량은 Excel 효과크기 계산기를 이용하여 평균과 표준편차를 계산하였다[45]. 0.2, 0.5, 0.8 또는 1.2 이상의 효과 크기는 각각 작은, 중간, 큰 및 매우 큰 효과 크기를 나타냅니다[46].

3. 결과

3.1. 참가자의 특성

이 관찰 종단 연구에는 심각한 합병증으로 인해 ICU에 입원한 코로나19 진단을 받은 23명의 환자가 포함되었습니다.-19 혈액 샘플은 총 13주 동안 또는 최종 결과가 나올 때까지 2주마다 수집되었습니다. 본 연구에 참여한 참가자 중 감염 및 입원 당시 코로나19 예방접종을 받은 사람은 아무도 없었습니다.-19 모든 참가자의 주요 사회인구학적 및 임상적 특성은 표 1에 요약되어 있습니다.

표 1. 본 연구를 위해 모집된 Exitus 그룹 및 Survival 그룹의 모든 참가자의 인구통계학적 및 임상 데이터.

Exitus 그룹의 평균 연령은 65.{1}}세(IQR 62.0–69.0)인 반면, Survival 그룹의 평균 연령은 63세였습니다.{{7} }년(IQR 59.0–68.5). 대부분의 참가자(73.9%)는 남성이었고, 65.2%는 적어도 한 가지 이상의 동반질환을 가지고 있었습니다. 주요 동반질환은 이상지질혈증(52.2%), 고혈압(39.1%), 당뇨병(26.1%)이었다. 대부분의 환자는 표준치료로 코르티코이드(82.6%), 항생제(82.6%), 항응고제(82.6%)를 투여받았다. 토실리주맙(17.4%), 렘데시비르(8.7%) 등 다른 치료제도 투여받았다. 가장 흔한 징후와 증상은 폐렴(100%), 기침 및 가래(87.{38}}%), 호흡곤란(87.0%), 발열(87.0%)이었습니다. 중환자실에 머무는 동안 Exitus 그룹에서 12명의 환자(92.3%)와 Survival 그룹에서 10명의 환자(100%)가 침습적 기계 환기가 필요했습니다. 우리는 사회인구학적 데이터와 임상 데이터에서 두 그룹 사이에 유의미한 차이를 발견하지 못했습니다. 또한 두 그룹 간의 기준선(첫 번째 샘플)에서 혈액 생화학 데이터를 분석했지만 그룹 간에도 유의미한 차이를 발견하지 못했습니다. 모든 참가자의 임상 데이터, 입원 및 혈액 생화학 데이터에 대한 자세한 정보는 보충 표 S1 및 S2에 나와 있습니다.

3.2. 병원 및 ICU 체류 기간

평균 입원 기간은 Exitus 그룹에서 59.0 (IQR 36.0–100.0)일이었고 Exitus 그룹에서는 73일이었습니다. 생존 그룹의 0(IQR 44.5–90.{{20}})일(그림 1A). 중환자실 체류 기간의 중앙값은 Exitus 그룹에서 49.0(IQR 25.5–82.0)일이었고 Survival 그룹에서는 44.0(IQR 25.0–66.5)일이었습니다(그림 1B). 이러한 매개변수에는 두 그룹 간에 유의미한 차이가 발견되지 않았습니다.

그림 1. 병원 및 ICU 체류 기간. 최종 결과에 따라 두 그룹으로 분류된 중증 코로나19-19 환자의 병원(A) 및 ICU(B) 입원 기간(일): 치명적 결과, Exitus 그룹(채워진 점); 또는 회복 및 퇴원, 생존 그룹(빈 점). 각 점은 한 개인에 해당하며 수직선은 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)를 나타냅니다. 그룹 간의 통계적 유의성은 Mann-Whitney U-test를 사용하여 계산되었습니다.

3.3. 말초 혈액 림프구 수준

Exitus 그룹의 개인은 림프구 감소증을 보였습니다.<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

그림 2. 심각한 코로나19로 인한 입원 중 말초혈 림프구 수-19. 림프구 수(세포/mm3)는 총 13주 동안 또는 Exitus(채워진 점) 및 Survival(빈 점) 그룹 참가자의 혈액 샘플에서 최종 결과가 나올 때까지 2주마다 측정되었습니다. 림프감소증의 역치는 1000개 세포/mm3에서 점선으로 표시됩니다. 각 점은 데이터의 평균에 해당하고 수직선은 SEM을 나타냅니다. 그룹 간의 통계적 유의성은 Mann-Whitney U-test를 사용하여 계산되었으며, 그룹 내에서는 Wilcoxon U-test를 사용했습니다.

3.4. 유사형 SARS-CoV-2에 감염된 Vero E6 세포에 대한 PBMC 세포독성 활성

우리는 1시간 동안 공동 배양한 후 위형 SARS-CoV-2에 감염된 Vero E6 세포의 단층에서 카스파제{0}} 활성화를 정량화하여 종단적 샘플에서 입원 환자의 PBMC의 세포독성 활성을 평가했습니다( 비율 1:1). Exitus군 개체로부터 분리한 PBMC의 세포독성 능력은 입원 기간 동안 크게 변하지 않았으며 치명적인 결과가 나올 때까지 꾸준히 낮은 수준을 유지했습니다(그림 3). 이러한 세포독성 활성은 이들 세포를 IL-15로 48시간 동안 자극했을 때 크게 증가하지 않았습니다. 생존 그룹에서 PBMC의 세포독성 활성은 기본 샘플(t {{17} }) Exitus군과 비교하여 입원 6주차까지 꾸준히 증가하였다. 이러한 증가는 4주차 그룹 간 비교에서 통계적 유의성을 나타냈습니다(5.58-배; p=0.0290; Cohen's d=1.28). 6주차부터 생존군에서는 퇴원할 때까지 세포독성 활성이 감소했는데, 이는 입원 같은 주에 림프구 수가 감소한 것과 일치합니다(그림 2 참조). IL-15 처리는 추적 기간 동안 모든 샘플에서 생존 그룹에 속한 개인의 PBMC의 세포독성 활성을 평균적으로 2.30-배 증가시켰습니다. 입원 4주 후, IL-15-유발 세포독성 활성은 PBMC에서 6.18-배(p= 0.0303; Cohen's d{38}}.05) 증가했습니다. 생존 그룹의 개인.

그림 3. 중증 코로나19로 입원한 환자로부터 분리한 PBMC의 직접적인 세포 세포독성-19. Exitus(채워진 점) 및 Survival(빈 점) 그룹의 개인에서 나온 PBMC의 세포 독성 능력은 유사형 SARS-CoV-2에 감염된 Vero E6 세포의 단층에서 카스파제-3 활성을 정량화하여 측정되었습니다. 기본 조건에서 1시간 동안 공동 배양(1:1)한 후(회색 선) 또는 IL{10}}로 48시간 동안 처리한 후(검은색 선). 각 점은 데이터의 평균에 해당하고 수직선은 SEM을 나타냅니다. 그룹 간의 통계적 유의성은 Mann-Whitney U-test를 사용하여 계산되었으며, 그룹 내에서는 Wilcoxon U-test를 사용했습니다.

3.5. NK 및 NKT 세포의 수준

유사형 SARS-CoV-2에 감염된 Vero E6 세포와 함께 배양된 PBMC에서 세포독성 표현형을 갖는 세포의 수준을 분석했습니다. IL-15로 치료한 후에도 두 그룹 간의 NK 표현형(CD{4}}CD56+)을 갖는 세포 수준 사이에 유의미한 차이를 발견하지 못했습니다(그림 4A). 이 세포 표면의 탈과립 마커 CD107a의 발현은 Exitus 그룹의 개체에서 변하지 않은 채로 유지되었습니다. 이 표현은 Survival 그룹에서 4주차부터 퇴원할 때까지 꾸준히 증가했지만, 이 차이는 Exitus 그룹과의 비교에서 통계적 유의성을 얻지 못했습니다(그림 4B). IL{11}} 처리는 이들 세포에서 CD107a의 발현을 크게 변화시키지 않았습니다. 4주차부터 두 그룹의 개인의 PBMC는 NKT 표현형(CD3+CD56+)을 갖는 세포 수준이 4.17-배 더 높은 수준으로 증가한 것으로 나타났습니다. 6주차에 Exitus 그룹의 개인. 비록 이 차이가 유의미한 수준을 달성하지는 못했지만(p= 0.0571; Cohen의 d{21}}.15)(그림 5A). 이 증가는 두 그룹 모두에서 세포가 IL-15로 처리되었을 때 약간 더 높았지만 데이터는 통계적 유의성에 도달하지 못했습니다(그림 5A). CD107a의 발현은 두 그룹 사이에서 또는 IL{27}} 처리 후에 크게 변하지 않았습니다(그림 5B).

그림 4. 중증 코로나19로 입원한 개인의 PBMC 내 NK 세포 수준-19. (A) NK 세포(CD3-CD56+)의 총 수준 및 (B) 이들 세포에서 탈과립 마커 CD107a의 발현은 기본 조건(회색 선)의 PBMC에서 또는 다음 처리 후 평가되었습니다. 유사형 SARS-CoV-2에 감염된 Vero E6 세포와 1시간 동안 공동 배양(1:1)한 후 48시간 동안 IL-15(검은색 선). 각 점은 데이터의 평균에 해당하고 수직선은 SEM을 나타냅니다. 그룹 간 통계적 유의성은 Mann-Whitney U-test를 이용하여 계산하였고, 그룹 내에서는 Wilcoxon U-test를 이용하였다.

그림 5. 중증 코로나19로 입원한 개인의 PBMC 내 NKT 세포 수준-19. NKT 세포(CD3+CD56+)(A)의 총 수준과 이들 세포에서 탈과립 마커 CD107a의 발현(B)을 기본 조건(회색 선)에서 또는 IL 처리 후 평가했습니다. 위형 SARS-CoV-2에 감염된 Vero E6 세포와 1시간 동안 공동 배양(1:1)한 후 48시간 동안(검은색 선) {5}}. 각 점은 데이터의 평균에 해당하고 수직선은 SEM을 나타냅니다. 그룹 간의 통계적 유의성은 Mann-Whitney U-test를 사용하여 계산되었으며, 그룹 내에서는 Wilcoxon U-test를 사용했습니다.

3.6. CD8+ T 세포 수준

비교하여 Exitus 그룹의 기본 샘플(t=0)에서 CD8 수는 2.{2}}배(p=0.0409; Cohen의 d=0.94) 증가했습니다. 생존 그룹의 경우 이러한 수준은 치명적인 결과가 나올 때까지 안정적으로 유지되었습니다(그림 6A). IL-15는 이 세포 집단의 수준에 유의미한 유익한 효과를 나타내지 않았습니다. Survival 그룹에서는 CD{10}} T 세포가 Exitus 그룹에 비해 평균 1.{12}}배 감소했습니다(그림 6A). CD107a의 발현은 4주차에 Exitus 그룹 개체의 CD{20}} T 세포에서 1.53-배(p=0.0313) 감소했으며 치명적일 때까지 변함없이 유지되었습니다. 결과. IL-15 처리는 이 탈과립 마커의 발현에 약간의 이점을 보였지만 이 차이는 크지 않았습니다(그림 6B). 생존군에서도 4주차에 CD{24}} T 세포에서 CD107a의 발현이 감소했다가 이후 증가했지만 IL{{26) 치료 전후에는 유의성이 없었습니다. }}(그림 6B).

그림 6. 중증 코로나19-19로 입원한 개인의 PBMC에 있는 CD{1}} T 세포 수준. (A) CD8+ T 세포(CD3+CD8+)의 총 수준 및 (B) 이들 세포에서 탈과립 마커 CD107a의 발현은 기본 조건(회색)의 PBMC에서 평가되었습니다. 라인) 또는 위형 SARS-CoV-2에 감염된 Vero E6 세포와 1시간 동안 공동 배양(1:1)한 후 IL-15로 48시간 동안 처리한 후(검은색 선). 각 점은 데이터의 평균에 해당하고 수직선은 SEM을 나타냅니다. 그룹 간의 통계적 유의성은 Mann-Whitney U-test를 사용하여 계산되었으며, 그룹 내에서는 Wilcoxon U-test를 사용했습니다.

3.7. 피로 마커 수준

면역 고갈 마커인 PD-1(프로그램화된 세포 사멸 단백질) 및 TIGIT(Ig 및 ITIM 도메인이 있는 T 세포 면역수용체)의 발현 수준은 CD4+ T 세포 및 세포 독성 세포에서 유세포 분석을 통해 분석되었습니다. 모든 참가자. 입원 시점(t= 0)부터 입원 6주차까지 채취한 샘플을 분석했는데, 이 기간 이후에는 샘플이 부족하기 때문입니다. Exitus 그룹 개체의 CD4+ 및 CD8+ T 세포는 PD-1 수준이 1.72(p=0.0095; Cohen의 d {{ 11}}.87)- 및 2.92-배(p=0.0317; Cohen's d=2.07), 각각 입원 4주 후 생존 그룹(그림 7A, B, 왼쪽 그래프). NKT 세포에서 Exitus 그룹의 TIGIT 수치는 입원 시점부터 입원 6주까지 유의하게 증가했으며, 이 수치는 1.76-배(p= 0.0357) 증가했습니다. ; 입원 2주 후 Cohen의 d= 0.33), 생존 그룹과 비교(그림 7C, 오른쪽 그래프).

NK 세포에서 이러한 고갈 마커의 발현 수준에서는 그룹 간의 유의미한 차이가 관찰되지 않았습니다(그림 7D).

그림 7. 중증 코로나19로 입원한 개인의 PBMC 피로 지표 발현 수준-19. CD4+ T 세포(A), CD8+ T 세포(B), NKT 세포(C) 및 NK 세포(D)에서 PD{2}} 및 TIGIT의 발현 수준. 각 점은 데이터의 평균에 해당하고 수직선은 SEM을 나타냅니다. 그룹 간의 통계적 유의성은 Mann-Whitney U-test를 사용하여 계산되었으며 그룹 내에서는 ANOVA가 사용되었습니다.

3.8. 혈장 내 SARS-CoV-2 RNA혈증 정량화

SARS-CoV-2의 RNA 존재는 기본 샘플(t= 0)의 모든 개인의 혈장에서 분석되었으며, Cq 값이 한계 미만인 참가자 중 어떤 참가자에게서도 긍정적인 결과를 얻지 못했습니다. 45주기의 양성 검출.

4. 토론

SARS-CoV-2 감염은 무증상 감염부터 중증, 중대 또는 심지어 치명적인 질병에 이르기까지 다양한 코로나-19 임상 증상을 유발할 수 있습니다[4]. 일반 대중의 백신 접종으로 질병의 중증 형태가 크게 줄어들었음에도 불구하고, SARS-CoV-2의 새로운 변종 출현으로 심각한 코로나19-19가 발생하여 예방 조치가 필요한 개인의 수가 늘어나고 있습니다. 획기적인 감염으로 인해 입원했습니다 [47,48]. 따라서 심각한 형태의 코로나19 발생과 입원 환자의 치명적인 결과를 피할 수 있는 예방 및 치료 전략을 개발하는 것이 여전히 우선순위입니다. 동반질환이 있는 노년층은 심각하고 심각한 코로나19{{1{{30}}}}[49]로 발전할 위험이 더 높다고 설명되었습니다. 스페인에서 코로나19로 인한 사망에 대한 가장 중요한 독립적인 예측 변수는-19고혈압 및 당뇨병과 같은 동반 질환이 있는 50세 이상의 남성입니다[36]. 우리 연구에서 두 그룹의 참가자 대부분은 질병의 심각도나 치명적인 결과에 영향을 미칠 수 있는 사회인구학적, 임상적, 생화학적 데이터에서 두 그룹 사이에 큰 차이 없이 이러한 특성을 나타냈습니다. 실제로 두 그룹 모두 C반응성 단백질(CRP) 및 젖산탈수소효소(LDH)와 같은 코로나19-19의 결과가 좋지 않을 위험이 높은 것과 관련된 생화학적 매개변수 수준이 증가한 것으로 나타났습니다. ]. 한편, 중증 코로나-19 환자는 검출 가능한 SARS-CoV-2 RNAnemia[54]가 있을 수 있다는 보고가 있는데, 이는 사망 위험 증가와 관련이 있습니다[55]. 우리 연구 참가자 중 어느 누구도 혈청에서 검출 가능한 RNA를 나타내지 않았기 때문에 검출 가능한 바이러스혈증과 치명적인 결과 사이의 상관관계를 확립할 수 없었습니다. 마지막으로 코로나-19는 지역사회획득폐렴(CAP)이나 패혈증 등 중환자실 입원이 필요한 다른 감염병에 비해 입원 기간과 사망률이 더 높은 것으로 추정되며[56], 35 첫 번째 대유행 파동 동안 스페인에 입원한 개인의 평균 일수입니다[36]. 우리 연구에서 평균 입원 기간은 Exitus 그룹과 Survival 그룹 모두 유사했고(각각 59.0일과 73.0일), 모든 참가자의 50%가 ICU에서 40일 이상 머물렀습니다. 따라서 Exitus 그룹의 치명적 결과와 Survival 그룹의 회복을 설명하기 위해서는 다른 차별적 요인을 고려해야 한다.

시스탄체 튜불로사의 장점-면역체계 강화

림프구 감소증은 또한 장기간의 입원 기간과 관련된 질병 중증도의 위험 요소로 간주됩니다[57]. 우리 연구에서는 Exitus와 Survival 그룹 모두 참가자의 73.9%가 낮은 림프구 수를 보였습니다. 그러나 전체 림프구 수치는 Exitus 그룹에 비해 Survival 그룹의 참가자에서 평균적으로 더 높았습니다. 이는 코로나-19로 인해 사망한 개인이 살아남은 사람에 비해 시간이 지남에 따라 더 심각한 림프구 감소증이 발생하고[58] 이러한 림프구가 일반적으로 소진된 표현형을 나타낸다는 이전 관찰과 일치합니다. 점진적인 면역 결핍증 [15,16]. SARS-CoV-2[17]를 포함한 바이러스 감염을 통제하려면 효과적인 세포독성 항바이러스 반응이 필수적이므로 면역 재구성은 코로나19로부터의 회복에 매우 중요합니다-19. 이러한 면역 재구성의 가속화는 림프구의 항상성 말초 확장에 크게 좌우되며, 이는 중증 코로나19로 인해 입원한 개인의 결과를 개선하는 좋은 전략이 될 수 있습니다-19 [58]. IL-15은 CD{14}} T 세포, NK, NKT 세포의 기능과 항상성에 필요한 사이토카인으로[29], 암 등 여러 질병에 대한 새로운 면역조절 치료제로 제안되고 있다. 및 HIV 감염 [26,30,35,59]. 따라서 본 연구에서는 IL{20}}을 이용한 시험관 내 치료가 감염이 진행됨에 따라 중증 및 중증 코로나19로 입원한 개인의 PBMC에서 세포독성 반응을 개선할 수 있는지 여부를 평가하여 유효성을 확인했습니다. 코로나19 동안 면역 재구성을 자극하는 후보로 사용됩니다-19. 분석된 용량을 통해 우리는 입원 평균 44일 후 코로나-19에서 살아남은 개인의 PBMC에서 위형 SARS-CoV-2에 감염된 표적 세포에 대한 세포 독성 반응의 전반적인 증가를 관찰했습니다. 중환자 실. 이러한 세포 독성 반응은 추적 기간 동안 수집된 모든 샘플에서 IL 치료 시 평균 2.3-배-15 효과적으로 증가했으며, 입원 6주차가 두 림프구 수의 전환점이 되었습니다. 퇴원할 때까지 세포독성 활성이 감소하기 시작했습니다. 유사한 사회인구학적, 임상적, 생화학적 특성을 공유하고 거의 동일한 기간 동안 입원했음에도 불구하고(총 59일 중 49일이 ICU에 있었음), 코로나19에서 생존하지 못한 개인 그룹은{{34} }는 IL-15로 자극을 받은 경우에도 감염된 표적 세포가 있을 때 반응하지 않는 PBMC를 보여주었습니다. 이 그룹의 개인에서는 입원 2주차부터 림프구의 총 수준이 림프구감소증 역치보다 높았습니다. 그러나 입원 기간 동안 이러한 수준은 크게 증가하지 않았으며 분석 용량에서 IL{37}}이 존재하더라도 효과적인 항바이러스 반응이 감지되지 않았습니다. IL-15에 대한 반응의 부재는 인간 면역결핍 바이러스(HIV), C형 간염 바이러스(HCV), B형 간염 바이러스(HBV) 및 인간 T 림프 친화 바이러스(HTLV)와 같은 다른 만성 감염에 대해 설명되었습니다. 면역 고갈은 CD8+ T 세포에서 IL-15, CD122의 특정 수용체의 발현에 영향을 미쳐 이러한 항상성 자극에 반응하지 않게 만들 수 있습니다. 코로나-19의 특징적인 면역 고갈은 CD8+ T 세포뿐만 아니라 NK 및 NKT 세포와 같은 다른 세포독성 세포 유형에서도 관찰되었습니다[15,16]. 따라서 Exitus 그룹의 PBMC에서 IL{47}}에 대한 반응이 없다는 것은 분석 용량에서 IL{48}} 단독 치료로는 극복할 수 없는 면역 소진 증가와 관련이 있을 수 있습니다. 이는 세포 독성 세포의 엄청난 확장에도 불구하고 IL-15을 사용한 단독 요법이 효과적이지 않은 1상 임상 시험에서도 관찰되었습니다[31,32]. 결과적으로, 항체 의존성 세포 독성(ADCC)을 강화하기 위해 감염된 세포를 표적으로 하는 면역학적 체크포인트 억제제 또는 단일클론 항체와 같은 다른 보조자극 치료가 이들 개인에게 효과적인 반응을 유도하는 데 필요할 것입니다.

또한 우리는 코로나19에서 살아남은 개인 그룹에서 이러한 향상된 세포독성 반응의 발달에 주로 관여한 세포 유형을 확인했습니다-19. 심각한 코로나19-19의 발생으로부터 동물 모델을 보호하려면 기능적 CD{1}} T 세포의 존재가 필수적이라는 것이 입증되었습니다[61,62]. 더욱이, 효과적인 CD{5}}매개 세포독성 반응의 부재는 노인의 중증 또는 중증 코로나19 발병에 대한 감수성 증가의 필수 요소로 지정되었습니다-19[63]. 놀랍게도 입원 당시(t{13}}) Exitus 그룹에서 CD8+ T 세포의 수준이 2.07-배(p=0.0409) 더 높았습니다. , 생존 그룹과 비교하여 치명적인 결과가 나올 때까지 향상된 상태를 유지했습니다. Exitus 그룹의 개인은 림프구 감소증 역치보다 약간 높은 림프구 수치를 보였지만, 이 수치는 입원 기간 내내 거의 변하지 않았습니다. 더욱이, 림프감소증은 CD{14}} T 세포 풀의 강렬한 증식과 동시에 T 세포의 말초 손실이 있는 억제와 활성화가 공존하는 패턴으로 이어질 수 있다고 설명되었습니다[64,65]. 이는 전체 림프구 수준이 변하지 않고 림프구감소증 역치 위에 있음에도 불구하고 입원 6주차 이후 Exitus 그룹 참가자의 PBMC에서 관찰된 CD8+ T 세포 수준이 약간 증가한 것을 설명합니다. 또한 CD4+ T 세포의 잠재적 감소를 나타냅니다. 그러나 이들 CD8+ T 세포는 세포 표면의 탈과립 표지인 CD107a의 낮은 발현에 의해 결정된 바와 같이 낮은 세포독성 활성을 보인 반면, 이 표지의 발현은 CD{22}} T 세포에서 증가했습니다. 4주차부터 서바이벌 그룹 참가자. CD107a의 발현은 세포독성 능력을 평가하는 바이오마커로 간주되며[66], 감염되지 않은 건강한 기증자와 비교하여 코로나19 환자로부터 분리한 세포 표면에서 CD107a 발현이 감소하는 것으로 설명되었습니다[15 ].

따라서 CD{1}} T 세포 표면에서 CD107a의 발현 증가는 생존 그룹 참가자의 PBMC에서 관찰된 향상된 세포 독성 활성에 대한 이들 세포의 기여를 적어도 부분적으로 설명할 수 있습니다. 또한, 우리는 Exitus 그룹 개체의 CD4+ 및 CD{4}} T 세포 모두에서 탈진 마커 PD-1의 발현 증가를 관찰했는데, 이는 또한 세포독성 감소에 기여할 수 있습니다. 이들 세포의 IL-15에 대한 활동 및 반응. NK 및 NKT 세포와 같은 위형화된 SARS-CoV-2-감염 세포에 대한 세포독성 활동에 다른 세포 집단이 관여할 수 있습니다. 다른 중증 급성 감염에서 발생하는 것처럼, NK 세포는 SARS-CoV-2 [67] 감염 부위에 모집될 수 있으며, 이는 모든 참가자에서 관찰된 순환 NK 세포의 수가 감소한 것을 설명합니다. 더욱이 심각하고 심각한 코로나19 동안 발생하는 사이토카인 폭풍은 NKG2A 또는 PD와 같은 억제성 체크포인트 수용체를 높은 수준으로 발현하는 NK 세포의 기능 장애 상태를 초래할 수 있습니다-1 [68]. 본 연구에서는 6주차까지 두 그룹 사이에 NK 세포 수치가 유사했고, 생존 그룹의 참가자들은 퇴원할 때까지 점진적인 증가를 보였습니다. 이는 NK 세포에서 사이토카인 분비가 강화되고 표적 세포의 용해가 개선되는 CD107a의 발현 증가와 관련이 있었습니다[7,69]. CD107a와 같은 활성화 마커를 발현하는 NK 세포의 비율은 다음과 같습니다. 건강한 대조군에 비해 코로나19 환자의 경우-19 더 낮습니다[70]. 반대로, 생존군에서는 6주차부터 NKT 세포의 수준이 크게 향상되었음에도 불구하고 CD107a의 발현은 거의 변하지 않았으며, 세포 표면의 고갈 표지인 TIGIT의 수준은 입원 6주차까지 꾸준히 증가하는 향상된 수준을 보였습니다. . 우리 연구의 가장 중요한 한계 중 하나는 표본 크기의 감소였습니다. 그럼에도 불구하고, 그룹 간 통합된 차이를 계산할 때 크거나 매우 큰 효과 크기를 나타내는 여러 필수 매개변수에서 그룹 간에 통계적 유의성이 달성되었습니다.

cistanche tubeulosa - 면역 체계를 향상시킵니다.

5. 결론

결론적으로, SARS-CoV-2 감염으로 인한 면역병리학에 맞서 싸우는 데 있어 이 연구의 가장 중요한 기여는 PBMC의 손상된 항바이러스 능력이 치명적인 코로나19로 진행되는 중요한 요인인 것으로 나타났다는 점을 확인하는 것입니다. {2}}는 다른 사회인구학적, 임상적, 생화학적 요인보다 훨씬 높습니다. 따라서 세포독성을 강화할 수 있는 면역조절 치료법을 사용하면 심각한 코로나19로 인한 입원 기간 동안 긍정적인 결과를 얻을 수 있습니다-19. 생존 그룹의 개체에서 IL-15에 의해 매개되는 세포독성 활성의 증가는 세포독성 세포의 수준 증가에 의존하는 것이 아니라 그러한 자극에 반응하는 이들 세포의 면역적격성에 의존할 가능성이 높습니다. 따라서 입원 환자의 피로 마커 발현과 IL-15과 같은 세포 집단의 항상성 자극에 대한 반응을 모니터링하는 것은 치명적인 결과를 예측하는 지표로 유용할 수 있습니다. 그것. 결과적으로, 이 관찰 연구는 코로나-19로 입원한 개인에게 IL-15을 사용하면 항바이러스 면역 반응을 향상시킬 수 있다는 개념 증명입니다. 그러나 이 자극만으로는 반응이 없는 개인에게는 효과적이지 않습니다. 면역 소진 또는 IL{8}}R 신호 전달 경로 장애로 인해 세포가 소진을 예방하는 데 필수적입니다[71]. 림프구 수가 림프구 감소증 역치를 초과하는 경우에도 마찬가지입니다. 중요한 형태의 코로나19 동안 항바이러스 반응을 복원하고 강화하는 데 도움이 되도록 감염된 세포를 표적으로 하는 단일클론항체 또는 면역관문억제제와 같은 다른 면역조절제와 IL{10}}의 복용량을 늘리는 조합을 평가하려면 더 많은 인구를 대상으로 더 많은 연구가 필요합니다. -19.

참고자료

1. 아츠로트, CL; 마크노지아, I.; 매카시, RDP; 올드필드, TM; 포, J.; 타, KTL; 스텝, HE; Clements, TP 코로나19 가이드-19: 새로운 코로나바이러스 SARS-CoV-2로 인한 세계적인 유행병. FEBS J. 2020, 287, 3633-3650. [상호참조] [PubMed]

2. WHO 코로나바이러스(COVID-19) 대시보드. 온라인 이용 가능: https://covid19.who.int/(2022년 10월 18일 접속)

3. Capalbo, C.; 아세티, A.; 심마코, M.; 본피니, R.; 로코, M.; 리치, A.; 나폴리, C.; 로코, M.; 알폰시, V.; 테기, A.; 외. 이탈리아 중부 지역의 코로나-19 대유행의 기하급수적 단계: 통합 치료 경로. 국제 J. Environ. 결의안. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. 황, C.; 왕 Y.; 리, X.; 렌, L.; 자오, J.; 후, Y.; 장, L.; 팬, G.; 쉬, J.; 구엑스; 외. 2019년 중국 우한에서 발생한 신종 코로나바이러스 감염 환자의 임상양상. 랜싯 2020, 395, 497-506. [상호참조] [PubMed]

5. 헤이바, H.; 카젬니아, K.; Rahim, F. 기저 만성 질환 및 코로나{1}} 감염: 최신 검토. Jundishapur J. 만성 Dis. 케어 2020, 9, e103452. [상호참조] 6. 하메드, SM; 엘카팁, WF; 카이라랄라, AS; Noreddin, AM SARS-CoV-2 계통의 글로벌 역학 및 코로나-19 역학과의 관계. 과학. 2021, 11, 8435. [교차참조]

7. 에르딘크, B.; 사니, S.; Gotlieb, V. 코로나19의 혈액학적 발현 및 합병증-19. 고급 클린. 특급. 메드. 2021, 30, 101–107. [상호참조]

8. 후, B.; 황, S.; Yin, L. 사이토카인 폭풍과 코로나19-19. J. Med. 비롤. 2021, 93, 250–256. [상호참조]

9. 라모스-카살스, M.; 브리토-제론, P.; López-Guillermo, A.; 매사추세츠주 카마슈타; Bosch, X. 성인 혈구탐식증후군. 랜싯 2014, 383, 1503-1516. [상호참조]

10. 메타, P.; 맥컬리, DF; 브라운, M.; 산체스, E.; 태터솔, RS; 맨슨, JJ; 영국 HLH Across Specialty Collaboration을 대신하여. 전문 분야 전반에 걸쳐. 코로나19-19: 사이토카인 폭풍 증후군과 면역억제를 고려하세요. 랜싯 2020, 395, 1033-1034. [상호참조]

11. 리, M.-Y.; 리, 엘.; 장 Y.; 왕, X.-S. 다양한 인간 조직에서 SARS-CoV-2 세포 수용체 유전자 ACE2의 발현. 감염. 디스. 빈곤 2020, 9, 45. [CrossRef]

12. 장, Y.; 루빈, L.; 펭, T.; 리우, L.; 싱, X.; 라자로비치, P.; Zheng, W. 코로나19의 사이토카인 폭풍-19: 바이러스 감염부터 면역 반응, 진단 및 치료까지. 국제 J. Biol. 과학. 2022, 18, 459-472. [상호참조] [PubMed]

13. 잔, Y.; 캐링턴, EM; 장 Y.; 하인젤, S.; Lew, AM 활성화된 T 세포의 삶과 죽음: 순수 T 세포와 어떻게 다릅니까? 앞쪽. 면역. 2017년 8월 1809일. [CrossRef] [PubMed]

14. 황, I.; 중증 코로나바이러스 질환-2019(COVID{2}})에서의 Pranata, R. Lymphopenia: 체계적인 검토 및 메타 분석. J. 집중치료 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]

15. 정, M.; 가오, Y.; 왕, G.; 송지; 리우, S.; 썬, 디.; 쉬, Y.; Tian, ​​Z. 코로나-19 환자의 항바이러스 림프구 기능적 고갈. 셀. 몰. 면역. 2020, 17, 533–535. [상호참조]

16. 나, M.-S.; 정현화; 고J.-H.; 최수진; 서I.-H.; 이재석; 사, M.; 김, 아칸소; 주이제이; 안재영; 외. PD-1-SARS-CoV를 발현하는-2-특정 CD8+ T 세포는 소진되지 않지만 코로나19 환자에서 기능합니다-19. 면역 2021, 54, 44–52. [상호참조]

17. 비곤, L.; 푸에르테스, D.; 가르시아-페레즈, J.; 토레스, M.; 로드리게스-모라, S.; 마테오스, E.; 코로나, M.; Saez-Marín, AJ; 말로, R.; 나바로, C.; 외. ICU에 입원한 코로나19{4}} 환자의 PBMC에서 손상된 세포 독성 반응: 질병 심각도를 예측하는 바이오마커. 앞쪽. 면역. 2021, 12, 665329. [교차참조]

18. 누구. 변종 업데이트된 코로나-19 백신 사용에 대한 의사결정 고려사항에 대한 임시 성명서. 온라인 이용 가능: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-ofvariant-updated-covid{{15} }백신(2022년 8월 15일 액세스).

19. SK 미슈라; Tripathi, T. 코로나-19 전염병에 대한 1년 업데이트: 지금 우리는 어디에 있습니까? 액타 트로피. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; 겐, M.; 펭, Y.; 멩, L.; Lu, S. 코로나19의 분자 면역 발병 및 진단-19. J.Pharm. 항문. 2020, 10, 102–108. [상호참조]

21. TRC 그룹. 입원한 코로나19 환자의 덱사메타손-19. N.Engl. J. Med. 2021, 384, 693-704. [상호참조]

22. 저우, X.; 유제이; 쳉, X.; 자오, B.; 만암, GC; 장, L.; 슐룬스, K.; 리, 피.; 왕, J.; 선, S.-C. deubiquitinase Otub1은 IL-15-매개 프라이밍을 조절하여 CD{3}} T 세포와 NK 세포의 활성화를 제어합니다. Nat. 면역. 2019, 20, 879-889. [상호참조]

23. Parums, DV 병원에 입원하지 않은 환자의 SARS-CoV-2 감염에 대한 경구 항바이러스제 치료 현황. 메드. 과학. 모니터. 2022, 28, e935952-1. [상호참조] [PubMed]

24. Couzin-Frankel, J. 항바이러스제는 전염병의 진행 과정을 바꿀 수 있습니다. 오전. 협회 고급 과학. 2021, 12, 799–800. [상호참조] [PubMed]

25. 문타셀, A.; MC 오초아; 코르데이로, L.; Berraondo, P.; de Cerio, AL-D.; 카보, M.; 로페즈-보테(López-Botet), M.; Melero, I. 암 면역요법을 위한 NK 세포 체크포인트 타겟팅. 현재 의견. 면역. 2017, 45, 73–81. [상호참조] [PubMed]

26. 파티다르, M.; 야다브, N.; 달라이, SK 인터루킨 15: 면역치료의 핵심 사이토카인. 사이토카인 성장 인자 Rev. 2016, 31, 49-59. [상호참조]

27. 카빙거, F.; 스틸러, C.; Schmitzová, J.; Dienemann, C.; 코킥, G.; 힐렌, HS; 호바트너, C.; Cramer, P. molnupiravir 유발 SARS-CoV-2 돌연변이 유발 메커니즘. Nat. 구조체. 몰. Biol. 2021, 28, 740–746. [상호참조] [PubMed]

28. Hung, Y.-P.; 이J.-C.; 치우, C.-W.; 이씨, C.-C.; 차이, P.-J.; Hsu, I.-L.; 고, W.-C. COVID-19에 대한 경구 Nirmatrelvir/Ritonavir 치료법: 어둠 속의 새벽? 항생제 2022, 11, 220. [CrossRef]

29. 구오, Y.; 루안, L.; 파틸, NK; Sherwood, ER 항종양제 및 항바이러스제로서의 IL-15/IL-15R 복합체의 면역생물학. 사이토카인 성장 인자 개정판. 2017, 38, 10–21. [상호참조]

30. 장, S.; 자오, J.; 바이, X.; 핸들리, M.; Shan, F. IL-15이 면역 세포에 미치는 생물학적 효과와 암 치료 가능성. 국제 면역약물. 2021, 91, 107318. [교차참조]

31. Waldmann, TA; 두부아, S.; MD 밀코비치; Conlon, KC IL-15 암의 복합 면역요법. 앞쪽. 면역. 2020년 11월, 868. [상호참조]

32. SP Dubois; MD 밀코비치; 플래셔, 테타; 피탈루가, S.; 슈-앨버트, J.; 브라이언트, BR; 미네소타주 페트루스; 페레라, LP; 뮐러, JR; 시, JH; 외. 연속 주입으로 제공되는 단기 IL-15은 효과적인 NK 세포의 대규모 확장으로 이어졌습니다. 항종양 항체와의 병용 요법에 대한 의미. J. 면역 다른. 암 2021, 9, e002193. [상호참조]

33. 콘론, KC; 포터, EL; 피탈루가, S.; 이씨,-CR; MD 밀코비치; 플래셔, 테타; 두부아, S.; 브라이언트, BR; 페트루스, M.; 페레라, LP; 외. 1상 시험에서 고형 종양이 있는 성인 환자에 대한 지속적인 정맥 주입에 의한 IL15는 극적인 NK 세포 하위 집합을 유도했습니다. 클린. 암 입술. 2019, 25, 4945-4954. [상호참조]

34. 로미, R.; 쿨리, S.; 베리앙-엘리엇, MM; 웨스터벨트, P.; 베르네리스, MR; 와그너, JE; 바이스도르프, DJ; 블레자르, BR; 우스툰, C.; 디포, TE; 외. 이식 후 재발을 치료하기 위한 IL{5}} 초작용제 복합체 ALT-803에 대한 최초의 인간 1상 임상 연구입니다. 블러드 암. J. 헤마톨. 2018, 131, 2515-2527. [상호참조] [PubMed]

35. 밀러, JS; 데이비스, ZB; 헬게슨, E.; 라일리, C.; Thorkelson, A.; 앤더슨, J.; 리마, NS; 조르스타드, S.; 하트, GT; 이재호; 외. HIV 감염자에 대한 IL-15초작용제 N-803의 안전성 및 바이러스학적 영향: 1상 시험. Nat. 메드. 2022, 28, 392-400. [상호참조] [PubMed]

36. 베렝게르, J.; 라이언, P.; 로드리게스-바뇨, J.; Jarrín, I.; Carratalà, J.; 파천, J.; 일레스카스, M.; JR 아리바; 무뇨스, EA; 길 디바슨, P.; 외. 스페인에서 연속 입원한 4,035명의 코로나-19 환자의 사망 특성 및 예측 변수. 클린. 미생물. 감염. 2020, 26, 1525-1536. [상호참조]

37. 가르시아-페레즈, J.; 산체스-팔로미노, S.; 페레즈-올메다, M.; 페르난데스, B.; Alcami, J. 인간 면역결핍 바이러스 1형의 약물 감수성을 평가하기 위한 도구로서 재조합 바이러스를 기반으로 한 새로운 전략. J. Med. 비롤. 2007, 79, 127-137. [상호참조] [PubMed]

38. 오우, X.; 리우, Y.; 레이, X.; 리, 피.; 미, D.; 렌, L.; 구오, L.; 구오, R.; 첸, T.; 후, J.; 외. 바이러스 진입 시 SARS-CoV-2의 스파이크 당단백질 특성 및 SARS-CoV와의 면역 교차 반응성. Nat. 커뮤니케이터 2020, 11, 1–12. [상호참조] [PubMed]

39. Volz, E.; 힐, V.; 맥크론, JT; 가격, A.; 요르겐센, D.; 오툴, Á.; 사우스게이트, J.; 존슨, R.; 잭슨, B.; 나시멘토, FF; 외. SARS-CoV-2 스파이크 돌연변이 D614G가 전염성과 병원성에 미치는 영향을 평가합니다. 셀 2021, 184, 64–75. [상호참조]

40. 코버, B.; 피셔, WM; 그나나카란, S.; 윤현화; 타일러, J.; 압팔터러, W.; 행가트너, N.; 조르지, EE; 바타차리아, T.; 폴리, B.; 외. SARS-CoV-2 급증의 변화 추적: D614G가 코로나-19 바이러스의 감염성을 증가시킨다는 증거. 셀 2020, 182, 812–827. [상호참조]

41. Nandagopal, N.; 알리, 알래스카; 알래스카주 코말; 이상호. 자연 살해 세포 효과기 기능에서 IL-15–PI3K–mTOR 경로의 중요한 역할. 앞쪽. 면역. 2014, 5, 187. [상호참조]

42. 로젠탈, R.; 그로퍼, C.; 브라치, L.; 아다미나, M.; 페더-멩구스, C.; 자작, P.; 이에지, G.; 볼리, M.; 웨버, WP; 프레이, DM; 외. 건강한 기증자의 항원 특이적 말초혈 순수 또는 기억 세포독성 CD8+ T 세포에 의한 IL-2, IL-7 및 IL-15 공통 수용체 사슬 사이토카인에 대한 차별적 반응 및 흑색종 환자. J. 면역 다른. 2009, 32, 252-261. [상호참조]

43. VM 코먼; 랜드트, 오.; 카이저, M.; 몰렌캠프, R.; 메이어, A.; 추, DKW; 블리커, T.; 브뤼닝크, S.; 슈나이더, J.; 슈미트, ML; 외. 실시간 RT-PCR을 통한 2019년 신형 코로나바이러스(2019-nCoV) 검출. Eurosurveillance 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. 누구. SARS-CoV 진단 테스트-2: 임시 지침, 2020년 9월 11일; 세계보건기구: 스위스 제네바, 2020.

45. 베커, LA 효과 크기(ES); 콜로라도 대학교 콜로라도 스프링스: 콜로라도 스프링스, 콜로라도, 미국, 2000.

46. ​​Cohen, J. 행동 과학에 대한 통계적 힘 분석; 루트리지(Routledge): 영국 애빙던(Abingdon), 1988년. [CrossRef]

47. 모레노-페레즈, 오.; 리베스, I.; 보이스, V.; 마르티네스-가르시아, M.; 오테로-로드리게스, S.; 레우스, S.; 산체스-마르티네스, R.; 라모스, JM; 치코-산체스, P.; Merino, E. 획기적인 코로나19로 입원한 환자-19: 임상 특징 및 열악한 결과 예측 변수. 국제 J. 감염. 디스. 2022, 118, 89–94. [상호참조] [PubMed]

48. 이창민; 이, E.; 박, WB; 최PG; 송경호; 김 ES; 박S.-W. 델타 변종 우세 기간 동안 획기적인 코로나19-19 감염: 백신 접종 상태에 따른 개별화된 치료가 필요합니다. J. Korean Med. 과학. 2022, 37, e252. [상호참조] [PubMed]

49. 에자즈, H.; 알스라니, A.; 자파르, A.; Javed, H.; 주나이드, K.; 압달라, AE; KO 아보살리프; 아메드, Z.; Younas, S. 코로나19-19 및 동반질환: 감염된 환자에게 해로운 영향을 미칩니다. J. 감염. 공중 보건 2020, 13, 1833-1839. [상호참조] [PubMed]

50. 아제베도, RB; 보텔로, BG; 드 홀란다, JVG; 페레이라, LVL; 드 안드라데, LZJ; 오에이, SSML; 멜로, TDS; Muxfeldt, ES 코로나-19 및 심혈관계: 종합적인 검토. J. 흠. 고혈압. 2021, 35, 4–11. [상호참조]

51. 장, JJ; 이경수; 앙, LW; 레오, YS; Young, BE 코로나19에 감염된 환자의 중증 질병 및 치료 효능에 대한 위험 요인-19: 체계적인 검토, 메타 분석 및 메타 회귀 분석. 클린. 감염. 디스. 2020, 71, 2199-2206. [상호참조]

52. 커말리, M.; 칼사, RK; 필라이, K.; 이스마일, Z.; Harky, A. 코로나19 진단에서 바이오마커의 역할-19–체계적인 검토. 생명 과학. 2020, 254, 117788. [상호참조]

53. 말릭, P.; 파텔, U.; 메타, D.; 파텔, N.; 켈카르, R.; 아크마, M.; 가브리러브, JL; Sacks, H. 코로나19 입원의 바이오마커 및 결과: 체계적인 검토 및 메타 분석. BMJ 에비드. 기반 Med. 2021, 26, 107–108. [상호참조]

54. 리, Y.; 오전 슈나이더; 메타, A.; 사데-펠드만, M.; 케이즈, 한국; 젠틸리, M.; 노스캐롤라이나주 찰랜드; 고니, 앨라배마; 구슈테로바, I.; 칸나, 홍콩; 외. SARS-CoV-2 바이러스혈증은 뚜렷한 단백질 경로와 연관되어 있으며 코로나-19 결과를 예측합니다. J. 클린. 조사하다. 2021, 131, e148635. [상호참조]

55. 로드리게스-세라노, DA; 로이-발레호, E.; 크루즈, NDZ; 오전 라미레스; 로드리게스-가르시아, 사우스캐롤라이나; Arevalillo-Fernández, N.; 갈반-로만, JM; 가르시아-로드리고, LF; 베가-피리스, L.; 라노, MC; 외. 혈청 내 SARS-CoV-2 RNA 검출은 입원한 코로나-19 환자의 사망 위험 증가와 관련이 있습니다. 과학. 2021, 11, 13134. [교차참조]

56. 세라핌, RB; 포보아, P.; 수자-단타스, V.; 칼릴, AC; Salluh, JI 코로나-19 감염 중환자의 임상 과정 및 결과: 체계적인 검토. 클린. 미생물. 감염. 2021, 27, 47–54. [상호참조] [PubMed]

57. 리우, X.; 저우, H.; 저우, Y.; 우, X.; 자오, Y.; 루, Y.; 탄, W.; 위안, M.; 딩, X.; 조우, J.; 외. 코로나19-19 환자의 질병 심각도 및 입원 기간과 관련된 위험 요인. J. 감염. 2020, 81, e95–e97. [상호참조]

58. 루오, XH; 주, Y.; 마오, J.; Du, RC T 세포 면역생물학 및 코로나19의 사이토카인 폭풍-19. 스캔. J. Immunol. 2021, 93, e12989. [상호참조] [PubMed]

59. 하우드, 오.; O'Connor, S. HIV/SIV 감염에서 IL-15 및 N-803의 치료 잠재력. 바이러스 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. 신현호; Wherry, 만성 바이러스 감염 중 EJ CD8 T 세포 기능 장애. 현재 의견. 면역. 2007, 19, 408-415. [상호참조]

61. 맥마한, K.; 유제이; 메르카도, 뉴저지; 로스, C.; 토스타노스키, LH; 찬드라셰카르, A.; 리우, J.; 피터, L.; Atyeo, C.; 주, A.; 외. 붉은털원숭이의 SARS-CoV-2에 대한 보호 상관관계. 자연 2021, 590, 630–634. [상호참조]

62. Zhuang, Z.; 라이, X.; 선, J.; 첸, Z.; 장, Z.; 다이, J.; 리우, D.; 리, Y.; 리, F.; 왕 Y.; 외. SARS-CoV-2에 감염된 생쥐에서 T 세포 반응의 매핑 및 역할. J. 특급. 메드. 2021, 218, e20202187. [상호참조]

63. 웨스트마이어, J.; 파니스카키, K.; Karaköse, Z.; 베르너, T.; 서터, K.; 돌프, S.; 오버벡, M.; 리머, A.; 리우, J.; 정, X.; 외. 노인 코로나19-19 환자의 세포독성 CD8+ T 세포 반응이 손상되었습니다. MBio 2020, 11, e02243-20. [상호참조]

64. 랭, AG; 로렌크, A.; 델 바리오, IDM; 다스, A.; 피쉬, M.; 모닌, L.; 무뇨스-루이즈, M.; 맥켄지 박사; 헤이데이, TS; Francos Quijorna, I.; 외. 동적 코로나-19 면역 특징에는 나쁜 예후와의 연관성이 포함됩니다. Nat. 메드. 2020, 26, 1623-1635. [상호참조]

65. 쿠리-세르반테스, L.; 팜페나, MB; 멩, W.; 오전 로젠펠트; 이트너, CAG; 아칸소 와이즈만; 아기쿰, RS; 매튜, D.; 박스터, AE; 벨라, 루이지애나; 외. 중증 코로나19와 관련된 면역 교란에 대한 포괄적인 매핑-19. 과학. 면역. 2020년 5월, eabd7114. [상호참조]

66. 악타스, E.; 쿠쿡세저, UC; 빌릭, S.; 에르텐, G.; Deniz, G. CD107a 발현과 세포독성 활성 사이의 관계. 셀. 면역. 2009, 254, 149-154. [상호참조]

67. 비요크스트룀, NK; 스트룬츠, B.; 융그렌, H.-G. 항바이러스 면역의 자연살해세포. Nat. Immunol 목사. 2022, 22, 112–123. [상호참조] [PubMed]

68. Bi, J. 코로나19 환자의 NK 세포 기능 장애-19. 셀. 몰. 면역. 2022, 19, 127–129. [상호참조] [PubMed]

69. 알터, G.; 말렌판트, JM; Altfeld, M. CD107a는 자연 살해 세포 활동을 식별하기 위한 기능적 마커입니다. J. Immunol. 방법 2004, 294, 15-22. [상호참조] [PubMed]

70. JN 거스틴; Jones, D. 코로나19의 과염증에 대한 면역병리학-19. 오전. J. 클린. 파톨. 2021, 191, 4–17. [상호참조] [PubMed]

71. 그, C.; 저우, Y.; 리, Z.; 매사추세츠주 파루크; 아즈말, I.; 장, H.; 장, L.; 타오, L.; 야오, J.; 두, B.; 외. IL-7의 공동발현은 증식을 강화하고 세포사멸 및 피로를 억제함으로써 전립선암에 대한 NKG2D 기반 CAR T 세포 치료법을 개선합니다. 암 2020, 12, 1969. [CrossRef]