순환하는 엑소좀 PD-L1의 검출 방법
Mar 31, 2022
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순환하는 엑소좀 PD-L1의 검출을 위한 허용되고 주류적인 방법이 여전히 부족합니다. ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 및 흐름 분석과 같은 기존 엑소좀 검출 방법은 순환 엑소좀에서 PD-L1을 검출하는 데 사용할 수 있으며 현재 ELISA가 가장 일반적으로 사용되는 방법입니다. ELISA 방법은 순환하는 엑소좀 내 PD-L1 함량을 정량적으로 검출할 수 있으며 조작이 간편합니다. 유세포 분석은 대규모 샘플에서 순환하는 엑소좀 PD-L1을 정량적으로 검출하는 데 사용할 수 있지만 높은 검출 장비가 필요합니다. 엑소좀에 대한 심층 연구를 통해 엑소좀 단백질 및 핵산의 검출 방법도 풍부해지고 개발되었으며 순환 엑소좀에서 PD-L1 검출 분야에 몇 가지 새로운 방법이 도입되었습니다(그림).
감지순환엑소좀PD-L1
1. 디지털 PCR
엑소좀에 포함된 핵산의 양이 적기 때문에 기존의 검출 방법으로는 유전자 카피 수를 정확하게 검출하기 어려웠다. 디지털 PCR 기술은 극도로 높은 감도와 절대 정량을 가진 핵산 검출 방법입니다. 감도가 단일 핵산 분자 수준에 도달할 수 있어 엑소좀의 핵산 함량을 검출할 수 있다는 장점이 있습니다. 연구팀은 디지털 PCR 기술을 이용해 흑색종 및 비소세포폐암 환자의 혈장 엑소좀 내 PD-L1 mRNA 카피수를 정확하게 정량 분석해 혈장 엑소좀 PD-L1 mRNA 카피수와 항PD1 상관관계를 규명했다. 치료 효과 사이. 디지털 PCR 기술의 도입으로 exosomal PD-L1 mRNA의 검출 능력이 크게 향상되었으며, 이는 exosomal PD-L1 연구에 큰 의미가 있습니다. 그러나 엑소좀 PD-L1 mRNA의 함량과 PD-L1 단백질의 발현 사이에 불일치가 있을 수 있습니다. 따라서 엑소좀 PD-L1 mRNA 단독 검출에는 특정 결함이 있을 수 있으며 이에 대해서는 추가 연구와 설명이 필요합니다.
2. 엘리사
ELISA는 혈장 또는 배양 배지에서 소분자 단백질을 검출하는 데 자주 사용되는 전통적인 면역학적 분석 방법입니다. 감도가 높아 정량분석이 가능합니다. ELISA는 또한 엑소좀 PD-L1 단백질을 검출하는 데 사용할 수 있으며 많은 샘플 배치의 정량적 검출을 달성할 수 있습니다. ELISA 방법의 원리에 기반한 PD-L1 단백질 검출 키트는 혈장 엑소좀 PD-L1 단백질의 정량적 검출에도 적용되고 있습니다. Chen et al. 세포 배양액 또는 혈장에서 유래된 엑소좀 PD-L1 단백질 검출에 사용되는 ELISA 원리를 기반으로 엑소좀 PD-L1 단백질 검출 시스템을 구축했습니다. 선형 감지 범위는 {{1{12}}}.{11}}.0ng/mL입니다. ELISA는 exosomal PD-L1 단백질을 검출하는 좋은 방법으로 정량 검출이 쉽고 반복성이 좋습니다. 그러나 혈장에 유리 PD-L1 단백질이 존재하기 때문에 정확성을 방해합니다. 따라서 이 방법은 순환을 감지합니다. 엑소좀 PD-L1 단백질의 민감도와 특이성은 아직 더 탐구해야 합니다.
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3. 흐름 분석 방법
유세포 분석은 액체에 부유한 세포 또는 기타 생물학적 입자를 입력하고 계산하는 데 자주 사용되므로 이 방법은 엑소좀 검출 및 계산에도 도입되었습니다. THEODORAKIS et al. 처음에 크로마토그래피를 사용하여 두경부암 환자의 혈장에서 엑소좀을 분리한 다음 흐름 분석을 사용하여 PD-L{1}양성 엑소좀을 감지하고 계산했습니다. PD-L1 단백질 발현은 형광 강도로 표현하였다. 결과는 이 방법이 엑소좀 PD-L1 단백질을 검출하는 데 있어 우수한 재현성을 가지며 단일 환자 샘플에 대해 여러 병렬 분석을 수행할 때 개인 내 변이가 7%임을 보여줍니다. 동시에 연구진은 이 방법의 정확성을 검증하기 위해 엑소좀 PD-L1 단백질 검출을 위한 기준 방법으로 공초점 형광 분석을 사용했다. 3개의 시료를 병렬로 시험하여 그 결과를 비교한 결과, 유세포 분석과 공초점 형광 분석 결과가 매우 일치하는 것으로 밝혀져 유세포 분석이 엑소좀 PD-L1의 정확한 정량 분석 방법임을 알 수 있었습니다. 또한, LUX et al. 또한 유세포 분석을 통해 췌장암 환자의 혈청에서 엑소좀 PD-L1 및 c-Met 단백질의 발현을 성공적으로 검출했지만 검출 방법의 성능은 더 연구해야 합니다. 현재 Apogee 초고감도 나노 플로우 분석기와 같이 엑소좀 감지에 특별히 사용되는 플로우 분석기도 출시되어 기존의 플로우 분석기보다 엑소좀 단백질 감지에 더 적합합니다.
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4. 표면 강화 라만 산란 기술
표면 강화 라만 산란(SERS)은 생물 의학 분야에서 널리 사용되는 고감도 지문 분광 기술입니다. 현재 학자들은 엑소좀 PD-L1 단백질을 검출하기 위해 SERS 기술을 사용했습니다. 연구원들은 먼저 TiO2-변형된 자기 비드를 사용하여 혈장에서 엑소좀을 비특이적으로 흡착한 다음 PD-L1 항체에 연결된 SERS 프로브를 사용하여 금 나노입자를 수정한 다음 엑소좀 샘플을 금 나노입자와 배양했습니다. 자기 비드-엑소좀-금 나노입자 복합 구조를 형성하고 마지막으로 자기장을 사용하여 복합물을 농축 및 분리한 다음 검출을 위해 레이저 공초점 라만 분광계에 배치하여 PD-L1 양성 엑소좀의 검출을 실현합니다. . 신체 콘텐츠 감지. 이 방법은 검출 감도가 높으며 최저 검출 한계는 1 PD-L1 + 엑소좀/μL 혈장에 도달할 수 있습니다. 또한 연구자들은 이 방법을 사용하여 농도가 다른 샘플 그룹을 감지했습니다. 결과는 SERS 강도가 엑소좀 샘플 농도의 대수와 선형적으로 관련되어 검출 방법이 안정성이 좋고 혈장에서 직접 사용할 수 있음을 나타냅니다. 추가 엑소좀 분리 단계 없이 엑소좀을 감지합니다. 현재 exosomal PD-L1 단백질 검출에 SERS 기술을 직접 적용한 연구는 거의 없으나 다른 exosome 검출에 SERS 기술을 적용한 연구가 진행되고 있어 중요한 참고자료가 된다. 엑소좀 PD-L1 단백질 값 검출용.
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5. HOLMES-ExoPD-L1 방법
HOLMES-ExoPD-L1 방법은 엑소좀 PD-L1 단백질의 새로운 검출 방법입니다. 이 방법에서는 PD-L1 단백질을 표적으로 하는 새로운 MJ5C 앱타머를 설계했는데, 이는 엑소좀 막에 있는 PD-L1 단백질에 효율적으로 결합할 수 있고 PD-L1 단백질 글리코실화에 간섭을 받지 않는다. 이 방법에서는 형광 표지된 MJ5C 앱타머와 엑소좀을 먼저 얇은 모세관에서 공동 인큐베이션하여 서로 결합하고 적외선 레이저를 얇은 모세관에 집중시켜 마이크론 규모의 온도 구배를 형성했습니다. free MJ5C aptamer와 exosomal MJ5C aptamer 복합체의 열영동 속도는 유의하게 달랐고, free aptamer의 열영동 고갈은 exosome-aptamer 복합체보다 더 빨랐다. 분리됨. 따라서 여기광의 작용 하에 엑소좀 PD-L1 단백질의 함량은 형광 표지된 앱타머의 형광 강도를 검출함으로써 결정할 수 있다. 이 방법은 감도가 높고 검출 한계가 17.6pg/mL입니다. 또한 시료량이 적고 검출시간이 짧은 장점이 있습니다. 새로운 exosomal PD-L1 단백질 검출 방법의 개발에 매우 중요한 exosomal PD-L1 단백질 검출을 위한 매우 독창적인 방법은 계몽적 가치가 있습니다.
항종양: 시스탄체 보충제
Exosomal PD-L1은 악성 종양 면역 요법 분야에서 광범위한 응용 전망을 가지고 있으며 exosome 연구 분야에서 핫스팟 중 하나가되었습니다. 조직 PD-L1 발현의 검출과 비교하여 순환 엑소좀 PD-L1의 검출은 표본을 얻고 실시간 검출을 수행하는 것이 더 쉬우며 병리학적 샘플링으로 인한 조직 이질성 문제를 피합니다. 엑소좀 PD-L1은 또한 종양 면역을 유도합니다. 탈출의 중요한 원인이며 악성 종양의 진행과 관련이 있으며 질병 평가 및 예후 예측에 중요한 지표가 될 수 있습니다. 또한, 혈장 엑소좀 PD-L1 수치는 항PD-L1 면역요법에 적합한 환자를 선별하고 치료에 대한 반응을 예측하는 데 사용될 것으로 기대된다. 그러나 순환 엑소좀 PD-L1의 검출을 위한 인식되고 효과적인 방법이 여전히 부족합니다. 분리가 간단하거나 필요하지 않고, 시료 수요가 적고, 감도가 높으며, 반복성이 우수하고, 검출 신호에 덜 민감한 이상적인 순환 엑소좀을 확립하는 것이 필요합니다. 생체 내 PD-L1 검출 방법. 순환 엑소좀 PD-L1의 검출 방법은 여전히 더 심도 있는 연구가 필요하지만, 향후 새로운 검출 방법의 개발 및 적용으로 순환 엑소좀 PD-L1이 항-PD1 면역 요법을 더 잘 안내할 수 있을 것으로 믿어집니다. 악성 종양의 진단 및 치료에 사용됩니다. 더 중요한 역할을 합니다.
