Adenostemma Lavenia(L.) O. Kuntze 잎 추출물의 Ent-11 -hydroxy-15-oxo-kaur-16-en{4}}oic Acid의 높은 함량: 생체 분석에서 예비 포함

연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com

하마모토 아키에, 이소가이 료스케, 마에다 미와, 하야자키 마스미, 호리야마 에이토, 다카시마 시게오, 고케츠 마모루, 타케모리 히로시 *

추상적인:배경: 엔터-11 -하이드록시-15-옥소-카우르-16-엔{4}}오산(11 OH-KA)는 일부 양치류, Pteris semipinnata 및 동종 종에서 발견되는 다기능 생화학 물질입니다. 11 OH-KA의 많은 치료 적용이 제안되었지만(예: 항암, 항염 및피부 미백), 이러한 양치류의 11 OH-KA 함량은 높지 않습니다. Adenostemma lavenia (L.)O. 국화과인 Kuntze도 11개의 OH-KA를 함유하는 것으로 보고되었습니다. A. Lavenia 전체 식물의 달인(뜨거운 물 추출물)은 ashepatitis 및 폐렴과 같은 염증성 질환의 민간 요법으로 사용되며 11 OH-KA가 이 식물의 약용 특성을 담당하는 성분일 수 있음을 시사합니다. 방법: A. 물 추출물의 멜라닌 생성 억제 활성. Lavenia 잎과 Pteris dispar Kunze(P. semipinnata의 동족) 잎을 mouseB16F10 흑색종 세포에서 비교했습니다. 양11 오카액체 크로마토그래피 분광법을 사용하여 측정했습니다. C57BL/6J 마우스에 A. Lavenia 잎의 물 추출물을 처리하고 11 OH-KA의 혈중 농도를 측정하였다. A. Lavenialeaf의 물 추출물의 생체 내 효능은 모발 색상을 모니터링하여 항 멜라닌 생성 활성에 따라 평가되었습니다. 결과: 두 추출물(A. Lavenia 및 P. dispar Kunze) 모두 높은 항멜라닌 생성 활성을 나타내었지만 A. Lavenia만이 건조 잎 중량의 약 2.5%인 다량의 11 OH-KA를 함유했습니다.11 OH-KA A. Lavenia 잎에서 물 추출과 클로로포름 분포의 두 단계로 정제할 수 있습니다. A. Lavenia 잎의 물 추출물로 마우스를 처리하면 머리카락의 색소 침착이 억제됩니다. 결론: 실험한 쥐의 수가 적음에도 불구하고, 현재의 모발 색소 침착 억제의 예비 결과는 A. Lavenia 잎의 물 추출물과 이를 담당할 가능성이 있는 성분인 11 OH-KA가 구강화장품의 신소재임을 시사한다. 결과는 또한 기미와 같은 과색소침착 장애로 고통받는 환자를 치료하기 위한 기능성 식품 및 방법의 향후 개발에 도움이 될 수 있습니다.

키워드: 11 -하이드록시-15-옥소-카우르-16-엔{4}}오산; 멜라닌 생성 억제; 피부 미백;기능성 식품; 의료 공장; Adenostemma Lavenia; Pteris dispar Kunze;티로시나제; B16F10 흑색종

Cistanche는 tyrosinase 활성을 억제합니다.

1. 소개

에 대한 항멜라닌 생성 시약에 관한 연구피부 미백특히 식품(과일, 야채, 약초)의 성분에 대해 노화 방지가 더욱 빈번해지고 있습니다[1]. 많은 폴리페놀과 테르펜 및 그 공급원이 기능성 식품 및 보충제로 개발 및 상업화되었습니다.

디테르펜/카우렌 엔트-11 -하이드록시{1}}옥소-카우르{3}}엔{4}}오산(11 OH-KA), 양치류 잎(Pteris semipinnata [2– 5], Pteris livida [6]) 및 Compositae (Gochnatia decora [7])도 항멜라닌 생성 시약의 매력적인 후보입니다 [5]. 광범위한 생리학적 활성(예: 항암 및 항염)[8-11]에도 불구하고[8-11], 11 OH-KA11 OH-KA의 항멜라닌 생성 가능성을 포함하여 생체 내 효능에 대한 기록은 거의 없습니다. 제한된 수의 소스.

시험관 내 및 배양 세포 모두에서 구조-활성 관계 연구는 기능적 활성을 발휘하는 데 중요한 11 OH-KA의 모이어티를 확인했습니다(그림 1). 19번 위치의 카르복실기 치환11 오카메틸 또는 하이드록시 그룹에 의해 이 화합물을 높은 항암 활성을 갖는 화합물로 전환시키며, 이는 19-카복실 그룹이 이 화합물의 세포 독성을 약화시킨다는 것을 나타냅니다[5,10,12]. 대조적으로, 16번 위치의 alkene 그룹, 15번 위치의 ketone 그룹, 11번 위치의 hydroxy 그룹은 Caspase 신호 전달 경로를 활성화하여 세포 사멸 활성을 향상시킵니다[10,12]. 그러나 이러한 부분은 카우렌의 세포 사멸 신호에 필수적인 것은 아닙니다. 항염증 활성에 대한 구조적 요구 사항은 항암 활성에 대한 요구 사항과 유사하여 핵 인자 카파 B(NF-κB)와 같은 일반적인 세포 표적을 통한 누화를 시사합니다[12].

티로시나제멜라닌 합성에서 속도 제한 효소이다[13,14]. 이 효소는 티로신을 l-3,4-디히드록시페닐알라닌, l-Dopa, 도파퀴논으로의 순차 반응을 촉매합니다. 11 OH-KA가 티로시나제 유전자의 발현을 억제한다고 보고했습니다. 억제의 결과멜라닌 생성B16F10 마우스 흑색종 세포에서 [5]. 11 OH-KA의 11 -hydroxy,15-oxo 및 16-en 부분은멜라닌 생성 억제11 OH-KA의 구조적 요구 사항이 항암 또는 항염증 활성과 같은 다른 활성과 다른 특성입니다.

따라서 항 멜라닌 생성 활성 측면에서 11 OH-KA는 카우렌 중에서 독특한 화합물입니다. 불행히도, Pteris dispar Kunze, 우리의 이전 소스11 오카, 이 화합물[5]은 소량만 함유되어 있으며, 이 양치류와 P. semipinnata(동족)[4,15]는 인간 대상에서 사용한 기록이 없습니다. 또한 과거의 모든 실험에서 유기용매(메틸 또는 에틸알코올, 클로로포름 또는 헥산)를 사용하여 11 OH-KA를 추출했지만 수성 추출을 사용한 기록은 없습니다.

거의 40년 전, 미국 그룹은 AdenostemmaLavenia(L.) O. Kuntze(국화과)에서 11개의 OH-KA와 그 파생물을 발견했습니다[16]. A. Lavenia는 잎과 기타 부분에서 가능한 오염 물질(예: 무기 오염 물질[17] 및 곰팡이에 의해 생성되는 2차 대사물질[18,19])의 위험에 대해 충분히 연구되지 않았지만 전체 식물 분말(Ma Zhi Hu)은 다음에서 판매됩니다. 의사의 허가 하에 미국(제품은 QualiHerb, Cerritos, CA, USA: 보충 자료 그림 S1에서 얻을 수 있음). 따라서 본 연구에서는 측정을 통해11 오카내용 및 항 멜라닌 생성 활성의 효능 평가를 위해 A. Lavenia 잎의 물 추출물이 내부 화장품 및 치료에 사용될 수 있는 새로운 범주의 기능성 식품 [20-22]에 사용할 수 있는 가능성을 조사했습니다. 기미와 같은 과색소침착 장애로 고통받는 환자. 현재까지 트라넥삼산(지혈제)만이 과색소침착 장애의 내재제로 이용가능하였다[23,24].

우리는 A. Lavenia 잎이 높은 수준으로 11 OH-KA를 함유하고 있다고 보고합니다(잎 건조 중량의 약 2.5%). A. Lavenia 잎의 물 추출물이 효율적으로 억제멜라닌 생성inB16F10 세포, 및11 오카물 추출물의 멜라닌 생성 억제 활동의 50%를 담당할 수 있습니다. A. Lavenia 잎의 물 추출물로 마우스를 경구 처리하면 모발 색소 침착이 억제됩니다.

2. 재료 및 방법

2.1. A. lavenia의 번식

A. lavenia는 일본 대부분의 지역에서 멸종위기종으로 지정되어 있기 때문에 실험실 근처에서 이 식물을 재배했습니다. A. lavenia는 10개의 묘목에서 나누어 번식하였으며, 본 연구에서는 2019년 6월부터 7월까지 수확한 약 100그루의 마른잎을 사용하였다.

2.2. 물 추출물에서 11 OH-KA의 정제 및 분석

순수 11 -OH KA(정품)는 BioBioPha(중국 상하이)에서 구입했습니다. A. lavenia 또는 P. dispar Kunze의 잎에서 얻은 건조 잎 분말(100 mg)을 1 mL의 증류수(10-부피 추출용)에 12시간 동안 담그고 12에서 원심분리하여 잔류물을 제거하고, 10분 동안 000 rpm 생성된 추출물은 C18 ODS 컬럼(4.6mm × 50mm: RP{13}} GP, Kanto Kagaku, Tokyo, Japan)을 사용하여 40% 범위의 기울기를 갖는 고성능(HP) 액체 크로마토그래피(LC)로 분석했습니다. 메탄올/물을 10분에 걸쳐 100% 메탄올로. 11 -OHKA 검출은 245 nm(A245)에서 자외선(UV) 흡수를 측정하여 수행되었습니다. 20-,{21}} 및 50-부피 추출을 위해 50mg, 33mg 및 20mg의 건조 잎 분말을 1mL의 증류수로 추출했습니다.

A. lavenia에서 {{0}}OH KA의 구조를 확인하기 위해 kaurenoic acid를 준대규모로 정제하였다. 총 100g의 건조된 A. lavenia 잎을 20부피의 물에서 2회 추출하고 동량의 CHCl3를 잎의 물 추출물에 첨가하고 11 -OH KA를 CHCl3 상으로부터 회수하였다. 회수된 CHCl3 상의 증발 동안, 11 -OH KA는 백색 결정으로 침전되었다. 이 결정을 종이 필터로 회수했습니다. 회수된 결정은 핵자기공명(NMR)(1H-NMR(CDCl3) δ 0.95(3H, s), 1.28(3H, s), 1.05-2.22(15H, m), 2.37(1H, d, J{ {27}}.9Hz), 3.06(1H, 넓은 s), 4.06(1H, d, J{35}}.6Hz), 5.27(1H, s) 및 5.87(1H, s)). 결정의 1H-NMR 스펙트럼은 진정한 11 -OH KAspectrum과 일치했습니다(보충 자료 그림 S2 참조).

2.3. 마우스 혈청 내 11 OH-KA 분석

초고성능 LC(UPLC)-질량분석법(MS) 분석을 위한 방법은 [25,26]에서 사용된 여러 방법에서 가져왔습니다. 간단히 말해서, 마우스(C57BL/6J)를 치료하기 위해 A. lavenia 잎을 30부피의 물로 추출하였다. 120℃에서 20분간 살균한 후 추출물을 물 2배 희석하여 음용수로 사용하였다. 11 -OHKA의 약동학을 조사하기 위해 1% Tween 80(Kanto Kagaku, Tokyo, Japan)에 현탁된 화합물 100mg/kg을 경구 투여했습니다. 혈액은 투여 후 15-240분에 꼬리 정맥을 통해 회수되었습니다.

마우스 혈액에서 {{0}}OH KA를 측정하기 위해 혈청(20 µL)을 200 µL ofacetonitrile로 추출했습니다. 추출 효율을 정상화하기 위해 10 nmol의 18 -글리시레틴산(Kanto Kagaku)을 추출 전에 혈청에 첨가했습니다. 증발에 의해 아세토니트릴을 제거한 후, 화합물을 5 μL의 메탄올에 용해시킨 다음 5 μL의 H2O를 첨가하였다. 그런 다음 LC-MS 분광법(MS: Waters Xevo G{10}XS QTof, Waters, Milford, MA)에 1µLof 용액을 사용했습니다. 11 -OH KA를 분리하기 위해 C18 ODS 컬럼(3.0mm × 150 mm(5 µm): RP{17}} GP, Kanto Kagaku) ​​및 10분에 걸쳐 35% 아세토니트릴/물에서 100% 아세토니트릴 범위의 구배를 적용했습니다. MS 조건은 다음과 같았다: 모세관(kV), 2.20; 샘플링 코어, 45; 추출 콘, 4.0. MS/MS 분석을 통해 11 -OH KA 조각을 감지하지 못했기 때문에(보충 자료 그림 S3A),{28}}OH KA는 질량 대 전하 비율(m/ z) 331.1879, 0.01Da 경로(보충 자료 그림 S3B). 표준 곡선은 11 -OH에 대해 동일한 절차를 사용하여 일반 마우스 혈청에서 제조된 50% 메탄올/물에 11 -OH KA(최종 농도 0.1–3 µM)를 첨가하여 작성되었습니다. KA 추출.11 -OH KA 측정에 사용된 것과 동일한 조건에서 LC-UV를 사용하여 11 -글리시레틴산을 측정했습니다. 이 동물 실험은 기후 대학 동물 실험 위원회(H{45}})의 승인을 받았습니다. 우리는 동물 복지 요구 사항을 준수하기 위해 최소 수의 마우스를 사용했습니다.

2.4. 멜라닌 생성 분석

American Type Culture Collection(RIKEN, Tsukuba, Japan)의 마우스 B16F10 흑색종 세포를 Dulbecco의 변형된 Eagle 배지(DMEM-High glucose(4.5g/L d-glucose), WAKO, Kyoto, Japan)에서 배양하고 10%가 보충되었습니다. 태아 소 혈청 및 항생제. 세포를 37℃에서 5% CO2로 가습된 대기에서 인큐베이션하고 비아트립신 처리를 2일마다 새로운 배양 플레이트로 옮겼다.

세포(2 × 105)를 6-웰 플레이트에 플레이팅하고 유도하기 전에 12-16시간 동안 배양했습니다.멜라닌 생성. 멜라닌 생성은 A. laveniawater 추출물 또는 11 -OH KA와 함께 20 μM forskolin(Fsk)에 의해 48시간 동안 유도되었습니다. 멜라닌 측정은 문헌[5]에 따라 수행되었습니다. 간단히 말해서, 세포를 인산염 완충 식염수로 2회 세척하고 2mL 수집 튜브에서 회수한 다음 8000rpm에서 1.5분 동안 원심분리하였다. 각 세포 펠렛을 200μL의 증류수에 현탁하고 50μL를 단백질 함량 측정에 사용하였다. 나머지 150μL를 150μL의 2M NaOH와 혼합한 다음 45℃에서 2시간 동안 배양하여 용해시켰다. 멜라닌은 2:1 클로로포름-메탄올 혼합물로 추출하고 405 nm에서 종횡광도계(Glomax Multi, Promega, Madison, WI, USA)로 측정하였다. 세포 펠릿의 단백질 농도는 Bradford 시약(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)을 사용하여 결정하고 멜라닌 함량의 정규화에 사용했습니다.

시스탄치 추출물의 효능: 멜라닌 억제 및 피부 미백

2.5. 통계 분석

통계적 분석은 동일한 실험에서 데이터를 얻었을 때 Student's t-test를 이용하여 수행하였다. 실험이 다른 요일에 수행되었거나 표본 수가 2개에 불과한 경우에는 통계적 분석을 사용하지 않았습니다.

3. 결과

3.1. A. 라베니아에는 11 OH-KA가 다량 함유되어 있습니다.

우리는 이전에 10 부피의 건조 중량(v/w) 에탄올로 제조된 P. disper Kunze 잎의 에탄올 추출물이 효과적으로 억제된다고 보고했습니다.멜라닌 생성1/1000 희석 후에도 B16F10 세포에서 [5]. A. lavenia 건조 잎의 물 추출물과 P. disper Kunze 잎의 물 추출물의 효능을 비교하기 위해 추출물(물 20부피(v/w 건조 잎))을 준비하고 배양액에 함께 첨가했습니다. forskolin (멜라닌 생성 유도제 - acAMP 작용제). 두 추출물 모두 테마라닌 함량을 시각적으로 평가했을 때 1/1000 희석에서도 멜라닌 합성을 효율적으로 억제했습니다(그림 2A). 멜라닌 함량은 NaOH추출 후 측정되었습니다(그림 2B). 1/3000 희석에서 A. lavenia 추출물은 대조군(Fsk만 해당)에 비해 멜라닌 함량을 69% 감소시켰고 P. disper Kunze 추출물은 멜라닌 함량을 41% 감소시켰습니다. 1/1000 희석에서 A. lavenia 추출물은 멜라닌 함량을 완전히 감소시킨 반면 P. disperKunze 추출물은 멜라닌 함량을 60% 감소시켰습니다. 이 차이는 추출물을 1/300으로 희석했을 때 관찰되지 않았습니다.

LC-UV 분석은 다음을 제안했습니다.11 오카A. laveniawater 추출물의 주요 성분이었습니다(그림 2C, 왼쪽). 대조적으로, 11 OH-KA에 대한 명확한 피크는 P. disper Kunze 추출물을 분석했습니다(그림 2C, 오른쪽). LC-MS 분석은 화살표로 표시된 피크가 11 OH-KA에 해당함을 시사했습니다(데이터는 표시되지 않음). 이러한 결과는 11 OH-KA가멜라닌 생성A. lavenia 추출물의 억제, 글리코실화 형태와 같은 유도체 [5]는 P. 멜라닌 억제에 우선적으로 기여할 수 있습니다. 분산 Kunze 추출물.

다음으로 우리는 정화를 시도했습니다11 오카배포로. CHCl3는 위의 A. lavenia 물 추출물에서 11 OH-KA를 고순도(87% 이상)로 추출할 수 있었습니다(그림 2D, 왼쪽). CHCl3에서 결정화된 물질의 NMR 분석 스펙트럼은 정품11 OH-KA의 스펙트럼과 동일했습니다(재료 및 방법 참조). 대조적으로, 많은 미지의 화합물이 P. disper Kunze 물 추출물에서 추출되었습니다(그림 2D, 오른쪽). LC 분석의 요약은 A. lavenia가 11 OH-KA의 매력적인 소스임을 시사하는 그림 2E에 표시됩니다.

3.2. A. lavenia에서 11 OH-KA의 적절한 추출

인터넷에서 찾은 정보에 따르면 A. lavenia의 모든 부분(잎, 줄기, 뿌리)은 중국과 대만에서 한약재로 사용됩니다. A. lavenia에서 11 OH-KA 추출을 위한 최상의 조건을 결정하기 위해 우리는 먼저 식물의 어느 부분에 이 화합물이 풍부한지 조사했습니다. 물 추출물은 잎만 또는 공기 부분에서 준비했습니다. 그만큼멜라닌 생성B16F10 세포에 대한 분석은 공기 부분(줄기와 잎)에서 준비한 추출물이 잎만에서 준비한 추출물보다 항멜라닌 생성 활성이 적음을 보여주었습니다(그림 3A, 왼쪽). 이것은 건조 중량의 90% 이상을 차지하는 줄기가11 오카, 이는 LC-UV 분석에 의해 확인되었습니다(그림 3A, 오른쪽).

다음으로 우리는 추출에 얼마나 많은 양의 물을 사용해야 하는지 조사했습니다. 분명히, 적은 양의 물({0}}배)은11 오카(그림 3B). 우리는 물에서 11 OH-KA의 낮은 용해도가 이 화합물을 잔류물에 유지하는 데 도움이 될 수 있다고 추측했습니다. 물에서 11 OH-KA의 최대 회수는 30부피 이상의 물을 사용할 때 관찰되었습니다(그림 3C). 따라서 물에서 11 OH-KA의 최대 회수 및 농축을 고려하여 이후 실험에서 30부피의 물을 사용했습니다.

중국과 대만에서는 A. lavenia를 뜨거운 물에서 추출하여 11 OH-KA의 열안정성을 조사하였다. 물 추출물을 90℃ 또는 120℃에서 10분 또는 20분 동안 배양하고 11 OH-KA 함량을 LC-UV로 분석하였다. 이러한 열처리는 아마도 변성된 단백질로 구성된 다량의 침전을 생성했습니다. 그만큼11 오카용해성 분획의 함량이 분명히 증가했으며(그림 3D), 이는 이러한 침강된 물질을 제거한 결과일 수 있습니다.

3.2.1. OH-KA는 B16F10 세포에서 항멜라닌 생성 활성을 담당하는 A. Lavenia 물 추출물의 화합물입니다

1g의 잎을 3{4}} 부피의 물에 추출했을 때 11 OH-KA의 함량은 약 0.6 mg/mL(1.8 mM)였습니다. 기여도를 결정하기 위해11 오카항 멜라닌 생성 활성에 대한 A. lavenia waterextract에서 B16F10 세포에서 다양한 농도의 정통 11 OH-KA를 테스트했습니다. 육안 검사(그림 4A) 및 멜라닌 함량 측정(그림 4B)은 11 OH-KA 단독(그림 4A, 낮은 세트)의 절반만 포함11 오카. 이러한 결과는 추출물의 11 OH-KA가 추출물의 항멜라닌 생성 활성의 거의 50%에 기여했음을 시사합니다. 나머지 50%는 배당체 형태와 같은 11개의 OH-KA유도체에서 유래할 수 있으며, 이는 P에서 11OH-KA의 낮은 함량을 설명할 수도 있습니다. 항 멜라닌 생성 활성 측면에서 높은 효능에도 불구하고 Kunze 추출물을 분산시킵니다(그림 2).

시스탄치 추출물의 효과: 피부 노화 방지 및 미백

3.2.2. OH-KA는 A. lavenia 추출물의 화합물로 쥐의 멜라닌 생성 억제 활성을 담당합니다

A. lavenia의 향후 화장품 소재 개발에 대한 예비 결과를 얻기 위해 소수의 마우스를 사용하여 생체 내 분석을 수행했습니다. 우리는 먼저 마우스에서 11 OH-KA의 약동학을 조사했습니다. 물 섭취량은 체중이 약 25g인 마우스에서 매일 약 4mL였습니다. A. lavenia의 물 추출물에서 11 OH-KA의 최대 용해도(그림 3C, 20-3{13}} 부피 물: 0.6 mg/mL 참조)는 이론적으로 100 mg/kg을 제공할 수 있습니다. thiskaurenoic acid의 1일 용량(0.6mg/mL 11 OH-KA 4mL로 2.4mg/day, 마우스 체중(25g)으로 2.4mg을 정규화하면 96mg/kg이 됨). 따라서 우리는 마우스를 100mg/kg11 OH-KA(1% Tween 80의 200μL에 현탁)로 처리하기로 결정했습니다.

구강 치료11 오카그 결과 혈액에서 빠른 출현(15분 이내)이 나타났습니다(그림 5A). 농도는 B16F10 세포에서 유효 용량에 도달하고 유지했습니다. 이것은 11 OH-KA가 소화관을 통해 흡수될 수 있음을 나타냅니다. 그러나 60분 이내에 농도가 감소하였다는 사실은 이 화합물의 빠른 배설을 시사한다.

다음으로, 우리는 마우스에서 11 OH-KA의 만성 효과를 조사했습니다. 0.6 mg/mL의 11 OH-KA라도 음용수에 빠르게 침전되면11 오카우리는 A. lavenia waterextract를 테스트하기로 결정했습니다. 그러나 A. lavenia 물 추출물에는 쓴맛이 있는 알 수 없는 성분이 포함될 수 있습니다. 따라서 추출물은 2배의 물로 추가 희석해야 했습니다(11 OH의 경우 최종 값은{0}}.3 mg/mL입니다. -KA, 약 50 mg/kg/일). 마우스를 1주일 동안 물 추출물로 처리한 다음 혈액 샘플을 수집했습니다(그림 5B). LC-MS는 혈액에서 검출된11 OH-KA를 반유효 농도로 분석합니다. A. lavenia 물 추출물과 동일한 절차로 제조된 P. dispar Kunze 물 추출물도 조사하였다. P. dispar Kunze 추출물을 처리한 마우스의 혈액 내 11 OH-KA의 함량은 A. lavenia 추출물을 처리한 마우스보다 10배 낮았다.

성체 생쥐의 경우 휴지기 단계에서 수개월 동안 모발 성장이 멈추고 다른 부위에서 단 며칠 동안 무작위로 새로운 성장(성장기)이 발생합니다[27]. 따라서 의 효과를 조사하기 위해멜라닌 생성억제제의 경우 화합물(억제제)을 사용한 치료 기간이 포함되어야 합니다(예: 몇 개월). 대조적으로, 솜털은 3주{1}}기(W) 단계에서 동시에 성충으로 대체됩니다. 따라서 3W 마우스에 2주간 억제제를 투여하면멜라닌 생성5W~6W에서 새로 자란 모발(즉, 첫 번째 성인 모발)의 착색(색상)으로 평가할 수 있습니다[28].

생쥐를 식수를 통해 2주(3W-4W) 동안 A. lavenia 추출물로 처리했을 때 새로 자란 모발에서 색소 침착이 억제되었습니다(그림 5C). 대조적으로, 그들의 안구 착색은 영향을 받지 않았습니다. P. dispar Kunze 추출물을 처리한 마우스에서는 모발 착색의 억제가 관찰되지 않았다. 이러한 결과는 A. lavenia 잎 추출물이 생체 내에서 효과적인 항멜라닌 생성 물질, 아마도 11 OH-KA를 함유할 수 있는 반면, P. dispar Kunze 잎 추출물, 아마도 풍부한11 오카유도체는 생체 내에서 효과적이지 않을 수 있습니다.

cistanche 혜택: ​​항산화

4. 토론

우리는 A. lavenia 잎에 다량의 11 OH-KA(건조 잎 중량의 약 2.5%)가 포함되어 있음을 발견했습니다. 이 화합물의 소수성 특성에도 불구하고 물은 11 OH-KA를 효율적으로 추출했습니다. 물 속의 11 OH-KA는 120℃에서 20분간 안정하였으므로 A의 물 추출물을 살균하였다. 라베니아 잎을 쥐에게 투여했다. 의 존재를 확인시켜준 결과11 오카테마의 혈액과 생체 내 항멜라닌 생성 시약으로서의 물 추출물의 효능.

A. lavenia에서 11개의 OH-KA와 그 유도체의 존재는 1979년 [16]과 1990년 [29]에 보고되었습니다. 그 이후로 인도네시아의 한 연구에서만 A. lavenia의 성분에 대한 포괄적인 분석이 보고되었습니다[30]. 그러나 해당 물질에서는 11 OH-KA가 확인되지 않았습니다. 또한 A. lavenia에서 순수로 추출할 수 있는 11 OH-KA의 물성에 대한 연구는 발견되지 않았다.

인도의 민간 요법에 대한 리뷰 기사에서는 A. lavenia 물 추출물을 소화기 계통 장애 치료제로 언급하고 있습니다[31]. "A. lavenia" 또는 그 중국 이름에 대한 인터넷 검색은 뜨거운 물 추출물을 통한 항염증 약초로 이 식물의 유익한 용도를 제안했습니다(즉, 달임제)(예: 간염, 폐 염증(알레르기 및 만성 폐쇄성 폐쇄) 폐질환) 및 피부 염증). 그러나 A. lavenia 추출물의 생물학적 활성이나 이 식물의 생태학적 상태에 대한 공식적인 보고는 PubMed에서 발견되지 않았습니다. 우리 시(일본 기후)에서는 A. lavenia가 멸종위기종으로 지정되어 있습니다. A. lavenia의 희귀성으로 인해 한약 및 기능성 식품으로서의 잠재력을 분석하고 개발하기가 어려울 수 있습니다.

반면에 유익한 잠재력은11 오카P. semipinnata에서 정제한 P. semipinnata는 시험관 내 및 생체 내에서 결정되었습니다 [8-11]. P.semipinnata에서 11 OH-KA의 함량을 조사하지는 않았지만, 이 함량은 P. semipinnata는 P. disper Kunze와 밀접한 관련이 있습니다. 또한 인터넷에서도 이러한 양치류를 인간 피험자에게 사용한 기록이 없습니다. 이러한 배경은 11 OH-KA가 임상적 잠재력이 있는 것으로 밝혀지면 A. lavenia가 이러한 양치류보다 한약으로서 더 큰 잠재력을 가질 수 있음을 시사합니다.

의 가능성에 대한 연구11 오카항암제[2,10,11,32] 및 항염증제[11,33]로서의 활성에 초점을 맞추어 왔다. 그러나 이러한 활동에 필요한 11 OH-KA의 선량은 20μM 이상으로 비교적 높은 것도 사실이다. 대조적으로, 1 µM 미만의 농도에서 카우렌은{12}}하이드록시{13}}카렌{14}} 위치에 카복실 대신 메틸기를{15}}갖습니다. 11 OH-KA의 그룹은 humanHL{18}} 단핵구에 대해 높은 세포자멸사 활성을 나타냅니다[12]. 이러한 차이점은 19-위치가 세포 독성의 결정 요인일 수 있음을 시사합니다[5].

항종양 및 항염증 활성이 다양한 카우렌에서 발견되지만[7,34-36], 11 OH-KA의 특정 특징은 일종의 항멜라닌 생성 활성입니다[5]. 플라보노이드 및 테르페노이드와 같은 많은 천연 화합물이멜라닌 생성멜라닌 생성 프로그램에 필수적인 소안구증 전사 인자(MITF)의 발현을 변경함으로써 [13,14]. 이러한 화합물과 달리 카우렌스 오르카우렌산에서는 MITF 조절제가 발견되지 않았습니다.

11 오카의 표현을 억제한다.티로시나제11 OH-KA는 MITF의 발현이나 활성 수준을 변경하지 않지만 11 OH-KA는 MITF 결합 요소 의존 방식으로 11 OH-KA 유전자 프로모터 활성을 억제합니다. 흥미롭게도, B16F10 세포에서 MITF의 과발현은 티로시나제 프로모터 활성의 11 OH-KA 매개 억제의 취소를 초래하며, 이는 11 OH-KA가 MITF 결합 요소에 대해 알려지지 않은 억제인자를 모집할 수 있음을 시사합니다. 또한 11 OH-KA가 억제하는 메커니즘티로시나제B16F10 세포에 1.2 μM의 11 OH-KA를 처리한 경우에도 항멜라닌 생성 활성이 관찰되기 때문에 프로모터 활성은 세포독성으로 이어지는 것과 다를 수 있습니다(그림 4).

1차 각질세포와 멜라닌 세포로 구성된 인간의 3차원 피부 모델과 관련된 연구에 따르면 1mM의 국소 사용이 제안됩니다.11 오카피부 색소 침착을 완전히 억제합니다[5]. 항멜라닌 생성 활성의 관점에서, 1mM의 11 OH-KA는 건조 A. Lavenia 잎의 약 6.6mg/mL(0.66%)에 해당합니다(그림 3). 그런 의미에서 A. Lavenia는 화장품의 매력적인 소스입니다.피부 미백. 또한 A. Lavenia는 민간 요법으로 사용되며 11OH-KA는 항 멜라닌 생성 활성과 세포 독성에 대한 유효 용량 (농도) 사이에 넓은 마진을 가지고 있습니다.

중요하게도, tranexamic acid(지혈제)는 인간 피부의 멜라닌 침착을 억제하는 것으로 밝혀졌으며 기미 치료를 위한 경구 약으로 사용됩니다[23,24]. 흥미롭게도, 트라넥삼산으로 처리된 쥐의 털은 검은색에서 갈색으로 변했습니다[37]. 본 연구에서 우리는 또한 A. Lavenia 잎의 물 추출물이 경구 투여 시 쥐의 모발 색소 침착(검은색에서 갈색)을 효과적으로 억제할 수 있음을 보여주었으며, 이는 A. Lavenia 잎이 미용 및 기능성 식품 모두로 개발될 수 있음을 시사합니다[20- 22] 기미로 고통받는 환자를 위해. A. Lavenia 추출물의 세포 표적에 대한 추가 연구가 필요합니다.11 오카, 뿐만 아니라 그들의 안전.

시스탄체 정제~을 위한피부 미백