추상적인:본 연구의 주요 목적은 Fusarium oxysporum에 민감하거나 내성이 있는 3가지 대추야자 알코올 추출물의 총 페놀 함량의 다양한 생물학적 활성을 차별 분석을 통해 추정하는 것입니다. sp 알비디니스. 여기에서 항산화 및 생리활성 능력을 가진 스틸벤 제품이 저항성 품종 Taabdount(TAAR)에서 입증되었습니다. 또한, TAAR 저항성 대추 야자 품종의 메탄올 분획물은 LCMS/MS 및 1H, 13C NMR에 의해 측정된 바와 같이 항산화 능력을 나타내고 버섯 티로시나제 활성을 억제하며 인간 진피 섬유아세포 노화 세포의 20S 프로테아좀에서 차아염소산염으로 유발된 손상에 보호 효과를 발휘합니다. 전체적으로 본 결과는 저항성 Phoenix dactylifera L.에 존재하는 hydroxytoluene이 스틸벤이 노화 방지 능력을 발휘할 수 있는 방식을 이해하기 위해 연구되어야 함을 나타냅니다.

Cistanche의 배당체는 또한 심장 및 간 조직에서 SOD의 활성을 증가시킬 수 있으며 각 조직에서 lipofuscin 및 MDA의 함량을 크게 감소시켜 다양한 활성 산소 라디칼(OH-, H₂O₂ 등)을 효과적으로 제거하고 이로 인한 DNA 손상으로부터 보호합니다. OH-라디칼에 의해. Cistanche phenylethanoid glycosides는 자유 라디칼 소거 능력이 강하고 비타민 C보다 환원 능력이 높으며 정자 현탁액에서 SOD의 활동을 개선하고 MDA 함량을 줄이며 정자 막 기능에 일정한 보호 효과가 있습니다. Cistanche 다당류는 D-갈락토스에 의해 유발된 실험적으로 노화된 쥐의 적혈구 및 폐 조직에서 SOD 및 GSH-Px의 활성을 향상시킬 수 있을 뿐만 아니라 폐 및 혈장의 MDA 및 콜라겐 함량을 감소시키고 엘라스틴 함량을 증가시킬 수 있습니다. DPPH에 대한 우수한 소거 효과, 노화된 쥐의 저산소증 시간 연장, 혈청 내 SOD 활성 개선, 실험적으로 노화된 쥐의 폐의 생리적 퇴행 지연 피부 노화 질환을 예방하고 치료하는 약물이 될 가능성이 있습니다. 동시에 Cistanche의 echinacoside는 DPPH 자유 라디칼을 제거하는 상당한 능력이 있으며 활성 산소 종을 제거하고 자유 라디칼 유발 콜라겐 분해를 방지하는 능력이 있으며 티민 자유 라디칼 음이온 손상에 대한 우수한 복구 효과도 있습니다.

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키워드:Phoenix dactylifera L.; 푸사리움 옥시스포룸. sp 알비디니스(FoA); 항산화활성; 항티로시나제 활성; 프로테아좀 활성화; LC-MS/MS 분석; 스틸벤 유도체

1. 소개

대추야자(Phoenix dactylifera L.)는 Arecaceae과의 다년생 외떡잎식물입니다. 이 나무는 경제적으로나 사회적으로 모로코 남부와 남동부의 사하라 인구의 삶에서 가장 중요합니다. 토양 진균 Fusarium oxysporum f에 의해 발생하는 Bayoud 질병. sp Albidinis(FoA)[1]는 최근 몇 년 동안 모로코 대추야자 수확량을 크게 줄였습니다[2]. FoA는 모로코 phoenicicole 유산의 2/3에서 사라진 것으로 추정되지만 최고 품질의 상업용 대추야자 재배 품종의 4.5%에서 12% 사이를 계속해서 파괴하고 있습니다[2]. 이 질병을 퇴치하고 대추 야자 방어 메커니즘을 설명하기 위해 많은 노력을 기울였습니다 [3]. 대추 야자의 가능한 방어 메커니즘에 대한 첫 번째 연구는 FoA에 대한 내성에서 페놀 화합물과 항산화 능력의 역할을 강조했습니다[4,5]. 저항성 및 감수성 뿌리 페놀 화합물 품종의 생화학적 분석은 대추야자 방어 메커니즘의 이점을 밝힌 최초의 생화학적 연구였습니다. 실제로, 문헌은 저항성 뿌리 품종이 민감한 뿌리 품종보다 5-caffeoyl shikimic acid와 그 위치 이성질체가 더 풍부하다고 나타냅니다[5]. 이러한 화합물은 FoA에 대해 in vitro에서 잠재적인 항진균 활성을 효과적으로 보여주었습니다[6].

자유 라디칼을 제거하는 천연 항산화제의 뛰어난 능력은 식품 및 의학 연구에서 인기가 높아지는 원인입니다[7-10].

예를 들어, 활성 산소종은 세포 손상 및 노화 과정을 악화시키는 요인[11]이므로 많은 질병과 관련이 있습니다. 결과적으로 항산화 분자는 퇴행성 질환을 예방하고 노화의 결과를 늦춤으로써 인간의 건강을 도울 수 있습니다[12]. 이 연구에서 우리는 20S-프로테아좀의 활성화를 촉진하고 산화적 손상으로부터 보호하는 항산화제의 능력에 관심이 있습니다. 프로테아좀은 실제로 손상된 단백질을 제거하는 세포의 과정을 가능하게 하고 수명이 짧은 단백질의 제어된 파괴를 가능하게 함으로써 세포 항상성의 유지에 기여합니다[13]. 따라서 항산화제로 프로테아좀을 활성화하는 것이 새로운 노화 방지 전략이 될 수 있습니다[14]. 또한, 이 작업은 활성 생물학적 화합물로서 FoA에 대한 저항성 뿌리의 페놀 함량의 잠재력을 탐구하고자 합니다.

2. 재료 및 방법

2.1. 식물 샘플

이 연구는 모로코 남동부 Palmaria Figuig에 위치한 오염된 구획 또는 오염되지 않은 구획에서 자란 10개의 성충 대추야자 품종(Phoenix dactylifera L.)의 재료로 각 샘플에 대해 수행되었습니다. 주요 뿌리(공기 호흡 뿌리 포함)는 charas Bouffegous 감염(BI) 또는 감염되지 않은 것(BNI)과 같은 감수성 품종의 직경이 0.5~2cm입니다. 또한, Taabdount(TAAR)의 FoA 저항성 품종이 수집되었고, 두 가지 약용 식물의 잎이 FoA에 대한 phylactic 치료제로 국부적으로 사용되었습니다. 또한 로즈마리(R, Rosmarinus officinalis)와 석류(G, Punica granatum L.)[15]도 동일한 오염되지 않은 소포에서 수집하여 분석하여 대조군으로 사용했습니다. 샘플은 연중 두 기간, 즉 9월과 1월 말(2013년에서 2015년 사이)에 채취하여 실온에서 밀폐 보관했습니다. 샘플은 팔머로부터 획득했기 때문에 모로코 농업부 장관 [16]에 의해 정식으로 인증(식별 및 분류)됩니다.

2.2. 추출물의 준비

뿌리나 잎을 물로 충분히 씻은 후 그늘에서 말린 다음 믹서기에 갈았다. 각 샘플(BI, BNI, TAAR, R 및 G)에 대해 1g의 건조 물질에 10mL의 메탄올을 첨가한 다음 실온에서 4시간 동안 교반했습니다. 그런 다음 여과하고 37ºC에서 회전식 증기로 증발시켰습니다. 건조 추출물을 10mg/mL 또는 50mg/mL의 최종 농도로 메탄올 용액에 넣었습니다(나중에 시험관 내에서 생물학적 활성을 분석하는 데 사용됨). 생물학적 활성 분석을 위해 각 샘플에 대해 세 가지 독립적인 추출을 수행했습니다.

2.3. 생물학적 활동

2.3.1. 페놀 함량 및 항산화 활성

Nacoulma et al.에 의해 설명된 절차. 마이크로플레이트 판독기에서 사용하기 위해 200 µL의 부피를 최종 조정하여 각 추출물의 총 페놀 및 총 플라보노이드 함량을 평가하기 위해 적용되었습니다[17]. 760 nm 및 510 nm에서의 흡광도는 각각 메탄올 블랭크에 대해 측정되었습니다. 갈산(0–300 mg/L)(y=0.0083x + 0.9106, r2=0.978) 및 케르세틴(0–100 mg/L)(y {{14 }}.0008x + 0.0597, r2=0.994)를 각각 사용했습니다.

1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl 자유 라디칼을 활용하여 항산화 소거 활성을 조사하였다(DPPH). 마이크로플레이트 판독기를 사용하기 위해 각각 300µL 및 275µL의 부피를 최종 조정하여 철(III)을 감소시키는 추출물의 능력을 Nacoulma et al. [17]. 메탄올 블랭크와 비교하여 각각 517 nm 및 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그런 다음 다음 방정식을 사용하여 각 용액의 자유 라디칼 소거 활성을 억제 백분율로 추정했습니다.

아스코르브산({0}–100 mg/L)을 산화방지제 표준(y=0.0014x + 0.0875, r2=0.998)으로 사용하여 표준 검량선을 얻었습니다.

2.3.2. FoAMyc 헬륨 성장 억제 분석

약간 수정하면 Neri et al. 순수 화학 물질이 FoA 균사체 성장을 억제하는 정도를 결정하는 데 사용되었습니다. FoA의 7-일 된 배양은 50, 75 및 100 µg/mL에서 위에 나열된 순수 화학 물질로 보충된 PDA 배지가 있는 페트리 접시에 놓인 5mm의 균사 디스크를 가졌습니다. 플레이트를 28 ºC에서 5일 동안 배양했습니다. FoA 균사체 성장 억제를 평가하기 위해 두 개의 직각에서 측정된 콜로니의 평균 직경을 사용했습니다. 각 처리는 FoA 41818, FoA 41814(벨기에 BCCM) 및 FoA Local(모로코 Figuig의 Palemeraie)의 세 가지 다른 FoA 균주를 사용하는 세 가지 테스트와 추가되지 않은 배지를 사용하는 음성 대조군으로 구성되었습니다.

2.3.3. 세포 생존력 및 20S 프로테아좀 활성

{0}세 남성(NHDF)(Promocell, Heidelberg, Germany)의 정상 인간 진피 섬유아세포를 사용하여 세포 밀도를 100,{{3 }} cells/mL in RPMI 10%, 10%(w/v) FBS, 1%(w/v) L-글루타민, 100 units/mL 페니실린 및 100 µg/mL 스트렙토마이신으로 보충됨. 5% CO2의 가습 환경에서 인큐베이터에서 37ºC로 24시간 동안 흰색 또는 투명한 96-마이크로웰 플레이트에 보관했습니다. 프로테아좀 활성 분석 및 차아염소산염 유발 손상에 대한 보호 효과 평가를 위해 세포를 테스트 물질(5~50μg/mL의 순수 화합물, 0.5 및/또는 1μM의 양성 대조군, 및 메탄올성 식물 추출물(15~50μg/mL)을 24시간 동안 최종 농도에서 최대 0.3%의 DMSO를 사용하여 음성 대조군과 관련하여 변경 없이 동시에. 프로테아좀 활성에 대한 TAAR 추출물 또는 순수 화합물의 보호 효과를 조사한 결과, 섬유아세포가 나중에 35분 동안 50μM OCl-에 노출됨을 의미했습니다(세포 독성 없이 최적으로 선택됨, 20S 프로테아좀 조건의 산화제 억제제)[19]. 다음 실험 단계는 공급자의 방법론(Proteasome-Glo Chymotrypsin-Like Cell-Based Assay, Promega Corporation, USA)에 의해 완료되었습니다. 이 세포 생물 발광 분석을 정상화하는 데 사용되었습니다. 2개의 개별 테스트(n=6)에서 얻은 3중 샘플의 표준 편차 및 평균 형광이 표시됩니다. 모든 측정 및 독립 실험(n=2)은 두 번 수행되었습니다.

2.3.4. 무세포 버섯 Tyrosinase에 대한 억제 효과

효소 활성에 미치는 영향을 조사하기 위해 시험 물질(순수 항산화제 또는 메탄올성 식물 추출물)을 실온에서 인산염 완충액에서 효소와 함께 사전 배양했습니다. 간단히 말해서, 다양한 농도의 시험 물질이 있거나 없는 50mM 인산염 완충액(pH 6.5)의 5mM L-DOPA 용액 300mL를 96-버섯 티로시나제 수용액 100mL(20단위)와 함께 잘 마이크로플레이트합니다. 40분 동안 분석 혼합물을 25ºC에서 배양했습니다. 배양 후, 반응 혼합물의 도파크롬 생성 수준은 492nm에서 분광광도계로 측정되었습니다[20]. 갈산(0–1000 µg/mL)(y=-0.087 × + 0.45; r2=0.97)을 사용하여 표준 검량선을 그렸습니다. 각각의 독립적인 측정 및 실험(n=2)은 두 번 수행되었습니다.

2.4. 분석, 격리 및 구조 규명 절차

갈은 뿌리(20g)를 메탄올 200mL로 추출하고 상온에서 24시간 동안 교반한 후 여과하고 10000×g에서 15분 동안 원심분리한 다음 로터리를 사용하여 35ºC에서 증발시켰다. 진공 증발 장치. 조 추출물을 20 mL의 증류수로 희석하고 2 x 20 mL의 에틸 아세테이트로 재추출한 다음 회전식 진공 증발 시스템을 사용하여 35 °C에서 농축했습니다. 주 생성물은 Waters C18 컬럼(SymmetryPrep 150 × 19mm, 7μm 입자 크기)을 사용하여 위에서 사용된 것과 동일한 LC 구배 조건 및 5mL/분의 유속으로 분취용 HPLC로 정제했습니다. RT에서의 피크는 38.8분에서 40.8분 사이였으며, 39.2분에서 40.2분 사이에 수집되었습니다. 전체 부피 수집물을 동결건조하여 27 mg의 화합물을 얻었다. MS 및 NMR 1H 및 13C는 이를 식별하였다.

분석은 320nm에서 UV 스펙트럼을 모니터링하는 데 사용되는 다이오드 어레이 검출기(DAD)를 사용하는 고속 분해능 LC 1200 시리즈 시스템(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)으로 수행되었습니다. 화합물 분리는 pH 2.9({{{{ 13}}용매 A) 및 30/70 아세토니트릴/메탄올 혼합물(=용매 B). 유속은 0.8mL/분이었고, 용매 B는 45분 안에 5%에서 35%로 증가되었고 2분 동안 재평형화되었습니다. DAD 시리즈에서 ESI-QTOF 6520 시리즈(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 고분해능 MS 및 표적 직렬 MS(MS/MS) 분석에 사용했습니다. 스펙트럼은 네거티브 및 고해상도(4GHz) 수집 모드에서 수집되었습니다.

1H NMR 및 13C NMR 스펙트럼은 300MHz에서 작동하는 Bruker Avance 300 분광계에서 기록되었습니다. 자유 유도 붕괴는 MestreLab Research SL의 MestreNova 5.3.2 NMR 제품군으로 처리되었습니다.

2.5. 통계 분석

모든 독립적인 실험은 3중으로 수행되었습니다. 모든 데이터는 평균값 ± SD로 표시되었습니다. GraphPad Prism 프로그램 버전 6을 사용하여 Dunn의 다중 비교 테스트와 함께 비모수적 Kruskal-Wallis 테스트를 사용하여 결과를 분석했습니다. p-값 0.05 이하는 유의한 것으로 간주됩니다.

3. 결과 및 논의

3.1. 메탄올 추출물의 총 페놀 및 플라보노이드 함량

산화환원 특성으로 인해 식물 페놀 화합물은 항산화 활성을 포함하여 다양한 생물학적 영향을 미치는 것으로 밝혀졌습니다[21]. 표 1은 FoA에 의해 Bouffegous 감염(BI) 및 감염되지 않은(BNI) 또는 Taabdount(TAAR)에 내성이 있는 ghagras의 감수성 변종의 메탄올 뿌리 추출물(500μg/mL)의 총 페놀 함량을 보여줍니다. 그들의 농도는 171 ± 14에서 253 ± 47 mg의 갈산 eq./g까지 다양했습니다. BNI 품종에서 가장 많은 양의 화합물이 발견되었으며 BI의 메탄올 뿌리 추출물에서 가장 낮은 농도가 나타났습니다. 동일한 추출물(표 1))의 플라보노이드 수는 240 ± 25에서 406 ± 66 mg의 퀘르세틴 eq./g으로 다양했으며, 다시 한 번 가장 많은 양은 BNI 품종에 기인했습니다. 감염되지 않은(BNI) 품종과 감염된(BI) 또는 내성(TAAR) 품종 사이에서 FoA에 대한 총 폴리페놀 및 플라보노이드 양의 약 1/3이 손실됩니다. 따라서 식물의 항산화 능력에 중요한 것으로 기술된 화합물의 손실이 우리가 관심을 갖는 생물학적 활동에 어떤 영향을 미칠 수 있는지 확인하는 것은 주목할 만합니다.

3.2. 메탄올 추출물의 항산화 가능성

DPPH 라디칼 소거 활성은 식물 추출물의 항산화 활성을 스크리닝하는 데 널리 사용되는 방법입니다[22]. 이 테스트는 추출물에서 발견되는 항산화 화학 물질이 안정한 라디칼 종인 DPPH를 제거할 수 있는지 확인합니다. 실험 데이터(그림 1)는 모든 메탄올 추출물(100 또는 500 µg/mL)이 TAAR 뿌리(87.0 DPPH 억제율). 항산화 활성은 폴리페놀 또는 플라보노이드 화합물의 총량에 의존하지 않는 것으로 보입니다. 그러나 TAAR 뿌리 메탄올 추출물의 더 나은 활성은 추출물에 포함된 더 많은 수소 공여 성분 때문일 수 있습니다.

환원력은 Fe(III)를 Fe(II)로 전환시키는 메탄올 추출물의 능력에 의해 평가된다. 이러한 Fe(III) 환원 능력은 페놀 화합물에 존재하는 수산기의 수와 위치 및 수소를 제공하는 능력에 기인할 수 있습니다[23]. 표 2는 우리 식물 샘플의 메탄올 추출물의 환원 활성을 아스코르브산과 비교하여 표준으로 보여줍니다. TAAR 뿌리의 메탄올 추출물은 높은 환원(95 ± 1 mg의 아스코르브산 eq./g)을 함유하는 반면, BNI 뿌리 추출물(27 ± 2 mg의 아스코르브산 eq./g)에서 가장 낮은 함량을 얻었습니다.

얻어진 결과를 상관시키기 위해 회귀 분석을 수행하였다(상관 계수(R)). 총 페놀 및 플라보노이드 함량(R {0}}.849, p < 0.05)과 DPPH 및 환원력 분석(R=0) 간에 상당한 선형 상관관계가 발견되었습니다. 816, p < 0.05), 메탄올 추출물의 페놀 또는 플라보노이드 함량과 항산화 활성 사이에는 차이가 없었다. 마지막으로, 모든 메탄올 추출물은 DPPH 라디칼 소거 활성 및 환원력 분석에 대해 유의한 항산화 활성을 나타내었지만, 이러한 항산화 활성은 총 페놀 또는 플라보노이드 함량과는 무관한 것으로 보입니다. 따라서 이러한 발견은 다양한 추출물에서 발견되는 페놀 또는 플라보노이드 화합물의 양이 아니라 특정 유형의 화학 물질이 검토 중인 식물 추출물의 항산화 활성에 가장 큰 책임이 있음을 의미합니다. 이전에 기술되고 활성이 높은 몇 가지 페놀 성분도 식물 추출물의 항산화 활성에 영향을 미칠 수 있습니다. 농도와 관계없이 숙성된 적포도주에서 발견되는 페놀 화합물은 구조적 측면과 관련된 다양한 항라디칼 특성을 나타낼 수 있습니다. 24].

TAAR FoA 내성 품종은 다양한 대추야자 품종 중에서 가장 높은 항산화 활성을 나타냅니다. 문헌을 참조하면, 이러한 특정 대추야자의 저항성 발달은 카페오일 시킴산의 다른 위치 이성질체의 양이 증가한 것으로 볼 수 있습니다[5].

3.3. 버섯 티로시나제 활동

버섯 티로시나제 디페놀라제 활성은 멜라닌 합성으로 이어지는 두 개의 도파퀴논 유도체의 산화를 촉매합니다. 표 3에 제시된 결과는 TAAR, BI 및 BNI의 메탄올 추출물에 존재하는 화합물이 버섯 티로시나제 활성의 억제를 통해 l-DOPA의 수산화를 방해하는 능력을 보여줍니다. 또한, 이러한 결과는 TAAR의 메탄올 추출물이 버섯 티로시나아제 활성에 대해 BI(p < 0.05) 및 BNI(p < 0.05) 추출물보다 통계적으로 더 활성이 있음을 보여줍니다. 따라서 팜데이트 뿌리 추출물의 티로시나제 활성 억제 능력은 항산화 능력과 동일한 경향을 따르는 것으로 보입니다.

티로시나아제는 주로 피부, 눈 및 모발 색소 침착과 관련이 있습니다. 실제로 티로시나아제는 멜라닌 생합성의 첫 번째 단계에 관여하는 멜라닌 생성 효소이며, 멜라닌은 자외선(UV), 태양광 또는 감마선에 대한 보호, 세포 감수성 감소, 가수분해 효소에 대한 세포벽 저항성과 관련이 있습니다[20]. 반대로 멜라닌의 과잉 생산은 피부 기형이나 암과 같은 더 심각한 질병(예: 흑색종)에서 역할을 할 수 있으며 도파퀴논 과잉은 신경 퇴행성 질환(예: 파킨슨병)으로 이어질 수 있습니다[20,25]. 더욱이, 멜라닌 생성은 과산화수소 및 기타 ROS를 생성하여 인간 멜라닌 세포를 높은 수준의 산화 스트레스에 노출시키는 것으로 보고되었습니다[26]. 식물에서 얻은 여러 천연 항산화 화합물(페놀, 플라보노이드 등)은 티로시나아제 페놀라아제 활성을 억제했습니다[27,28]. 여기에서 TAAR 추출물은 피부 노화와 멜라닌 생성을 억제할 수 있는 화합물을 함유하고 있는 것으로 보입니다.

3.4. 메탄올 뿌리 대추야자 추출물의 프로테아좀 활성

20S 프로테아좀 수치가 높아지면 산화 스트레스에 대한 내성이 증가하는 것으로 보고되었습니다[13]. 따라서 BI, BNI, TAAR, 품종의 뿌리 추출물에 의한 프로테아좀 활성 조절을 조사하였다. 측정된 20S 프로테아좀 활성은 NHDF 노화 세포의 키모트립신 유사(CT-L) 활성과 관련이 있습니다(재료 및 방법 참조). 그림 2A에서 볼 수 있듯이, 24시간 동안 50µg/mL의 메탄올 추출물로 처리된 세포는 BI 및 TAAR 추출물에 대해 CT-L의 상당한 활성화와 30% 이상의 세포 독성을 생성하지 않고 BNI에 대한 억제를 나타냈습니다. TAAR 뿌리 추출물은 1µM의 리포산(Ct +)과 비교하여 매력적인 프로테아좀 활성화를 보여주었습니다(각각 212% 및 248%). 프로테아좀은 비정상적으로 분해된(26S) 프로테아좀 및 산화적으로(20S 단백질 분해 코어 복합체) 손상된 단백질의 제거를 담당하는 4개의 적층 고리 코어를 포함하는 원통형 프로테이나제 복합체입니다(Ciechanover, 1998). Hwang의 작업[29]에서 제시된 바와 같이, 프로테아좀 기능 장애는 인간 피부의 노화에 기여할 수 있습니다. 실제로, 노화 및 복제 노화 세포는 프로테아좀 서브유닛의 단백질 수준뿐만 아니라 프로테아좀 활성을 감소시키는 것으로 나타났습니다. 산화 및/또는 손상된 세포 단백질이 이들 세포에 더 자주 축적된다는 사실은 단백질 분해의 유비퀴틴-프로테아좀 경로가 본질적인 노화 과정과 관련되어 있음을 시사합니다. 그림 2B 및 C는 OCl- 산화제에 의한 20S 프로테아좀 활성 억제로부터 NHDF 노화 세포를 보호하는 TAAR 메탄올 추출물의 능력을 보여줍니다. 실제로, OCl- 산화제는 대조군 세포(Ct)의 프로테아좀 활성을 50% 억제하는 반면, 억제 활성이 50% 이상인 가장 높은 20S-프로테아좀 활성화제(1 μM의 리포산, Ct 플러스 )는 억제를 역전시키지 못했습니다. TAAR 메탄올 추출물의 다른 모든 농도(15, 50 및 75µg/mL)는 이 억제를 역전시키는 것으로 보입니다(0~19% 억제). 이러한 결과는 TAAR 뿌리 추출물이 프로테아좀 활성을 증가시킬 뿐만 아니라 산화제의 억제 효과를 상쇄함으로써 피부 노화를 지연시킬 수 있는 분자를 포함할 수 있음을 시사합니다. 이 분자들 중에서 caffeoyl shikimic acid와 다른 화합물이 존재할 가능성이 가장 높습니다. 또한, 추출물의 주요 화합물을 확인하기 위해 LC-DAD-MS(MS) 및 NMR 분석이 수행되었으며 이에 따라 다음 섹션에서 논의됩니다.

3.5. 분광 분석

3.5.1. 메탄올 추출물의 LC-DAD-MS 분석

대추야자 뿌리에 대한 비교 연구는 질적 차이를 나타내지 않았지만, 대신 품종 간의 반정량적 차이(DAD 및 MS 크로마토그램)가 어느 정도 나타났습니다(그림 3A, D). 실제로, 현재 결과는 저항성 품종(TAAR)이 이러한 화합물의 상대적 풍부도가 가장 낮기 때문에 caffeoyl shikimic acid의 다른 위치 이성질체 양의 증가에 대한 대추야자의 저항성 사이의 연결을 허용하지 않습니다(그림 3C). caffeoyl shikimic acid의 세 가지 위치 이성질체(오류 1.2ppm의 m/z=335.0768)는 m/z에서 단편이 있는 MS/MS 스펙트럼(그림 S6)으로 식별되었습니다. 179.0340, 카페산 단편 A(C9H7O4)에 해당하고 m/z 135.0443에서 단편, 카페산의 탈카르복실화(C8H7O2)에 해당. 그럼에도 불구하고, caffeoyl shikimic acid에 해당하지 않고 m/z=259.0607(또는 TFA 부가물의 경우 373.0543)로 유지 시간이 29분인 다른 화합물(그림 3C)은 서로 다른 품종 간에 명확하게 구별되는 것으로 보입니다. (그림 3D). 약 1:35(m/z=259.06, MS 데이터)의 비율로 민감하고 저항성 품종(0.135%)의 뿌리에서 이 화합물 축적의 차이는 탁월한 생물학적 특성을 설명할 수 있습니다. 이 뿌리의 메탄올 추출물에 대해 관찰된 활동.

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