장 기능을 촉진하는 Cistanche Deserticola의 메커니즘

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

추상적인

페닐에타노이드배당체(PhGs)는 폴리페놀 화합물의 한 종류로시스탄체데저스티콜라YC Ma (CD) 추출물은 중국 전통 의학에서 구두로 사용됩니다. 이전의 약리학적 연구에서 PhGs가 많은 활동을 한다고 보고했지만, 이들의 장내 수송 프로파일은 명확하지 않습니다. 이 연구에서 우리는 PhG가 풍부한 추출물(PRE)의 장 투과성을 조사했습니다.시스탄체데저티콜라바이오어세이 시스템을 사용하는 Caco{0}} 세포 단층 모델의 통합 시스템입니다. 결과는 PRE가 유출 없이 농도 구배 아래로 잘 흡수되지 않은 수동 확산을 통해 주로 운반되며, 이는 PhG의 임상 적용을 위한 약동학적 기초를 제공한다는 것을 보여주었습니다.시스탄체 데저티콜라. 우리는 또한 세 가지 주요박사[액테오사이드(AC), 이소액테오사이드(IS) 및 에키나코사이드(EC)]HLPC에 의해. 또한 AC 및 IS의 플럭스 양을 정확하게 결정하기 위해 새로운 HPLC 형광 검출 방법을 개발했습니다. 예상대로 세 가지의 운송 특성은박사PRE의 것과 일치하며, 이는 현재의 생물학적 검정 시스템이 PRE에서 활성 성분 그룹(AIG)의 수송 특성 평가에 적합하고 신뢰할 수 있음을 나타냅니다. 또한, 이 시스템은 적절한 생리활성이 주어진 다른 식물 추출물에도 적합할 수 있습니다.

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소개

인간 결장 선암종에서 유래한 Caco{0}} 세포주는 장세포와 유사한 특성을 나타냅니다. 정상적인 조건에서 Caco-2 세포는 성숙한 세포와 ​​자발적으로 분화하여 손상되지 않은 단일층을 형성합니다[1]. 인접한 세포는 단층의 정점 측에 형성된 단단한 접합부를 통해 부착되어 상피층을 가로질러 수동적 및 능동적으로 수송되는 약물을 구별할 수 있습니다[2]. 정상적인 장세포와 형태학적 및 생화학적 유사성으로 인해 Caco{5}} 세포 단층은 약물의 장 흡수 잠재력 및 수송 특성 연구를 위한 잘 받아들여지는 시험관 내 모델 역할을 합니다[3, 4].

화학 물질과 달리 식물 추출물(PE)은 생물학적 활성과 활성 성분이 잘 확인되지 않는 혼합물입니다[5]. 더욱이, PE의 장내 수송 특성은 성분의 특성과 대조적으로 임상 사용과 밀접한 관련이 있습니다. Caco{1}} 세포 단층에서 테스트 샘플에 대한 플럭스 측정에는 일반적으로 HPLC, LC/MS 등과 같은 화학적 방법이 포함됩니다. 이러한 방법은 강력한 도구이지만 복잡하고 시간이 많이 걸리며 비용이 많이 들고 때때로 정교한 장비가 필요합니다. 더 중요한 것은 단일 또는 소수 구성 요소가 전체 PE를 반영할 수 없다는 것입니다. 따라서 PE의 운송 특성을 식별하고 평가하기 위해 구성 요소의 결정과 무관한 새로운 접근 방식이 수립되어야 합니다.

시스탄체데저스티콜라홀로 기생 식물인 YC Ma (CD)는 주로 신장 결핍, 신체 허약 및 변비 치료에 사용되는 일반적인 한약이며 이러한 용도는 중국 약전에 공식적으로 기록되어 있습니다[6]. Echinacoside(EC), acteoside(AC), isoacteoside(IS) 등을 포함한 페닐에타노이드 배당체(PhG)는 폴리페놀 화합물의 한 종류입니다[7]. 그들은 주요 생리 활성 성분 중 하나로 간주됩니다.시스탄체종 [8]. 약리학적 연구에 따르면박사항산화[9], 항피로[10], 간보호[11], 면역조절[12], 항염[7, 13] 및 신경보호 효과[14]를 포함합니다. 그러나 장내 수송 특성은박사조사되지 않았습니다. 이 연구에서 우리는 통합 시스템으로서 CD의 PhG가 풍부한 추출물(PRE)의 장 투과성과 분화된 Caco{1}} 세포에서 세 가지 주요 PhG(AC, IS, EC)의 투과성을 조사했습니다. 우리의 결과는 PRE가 유출 없이 농도 구배 아래로 잘 흡수되지 않은 수동 확산을 통해 주로 수송되어 CD에서 PhG의 임상 적용을 위한 약동학적 기초를 제공함을 나타냅니다.

재료 및 방법

재료

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98%)는 Must Biotechnology Co.(중국 청두)에서 구입했습니다. Dulbecco의 변형 독수리 배지(DMEM), 태아 소 혈청(FBS) 및 비필수 아미노산(NEAA)은 Gibco BRL(Grand Island, NY, USA)에서 생산했습니다. 6-well Transwell™ 플레이트(삽입 막 성장 면적 4.67 cm2)는 Corning(Costar) Inc.(Tewksbury, MA, USA)에서 구입했습니다. 쥐 꼬리 콜라겐은 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO, USA)에서 입수했습니다. HPLC 분석을 위한 모든 시약 및 화학물질은 분석 등급이었습니다.

Cistanche Deserticola로부터 PRE의 제조

공기 건조된 CD 재료를 가루로 만들고 70% 에탄올로 여과하여 추출했습니다. PhG가 풍부한 분획은 이전에 설명된 대로 준비하고 [10] 물로 포화된 n-부틸 알코올로 추출했습니다. 추출액을 농축하고 감압하에 건조시켰다. Macroporous resin-UV spectrophotometry[15]는 78.4%의 PhG 함량을 측정했습니다. 최종 샘플은 건조 중량 기준으로 1.75%의 원료 수율을 나타냅니다. 얻어진 샘플은 더 사용할 때까지 -20도에서 보관하였다.

HPLC에 의한 AC, IS 및 EC 측정

LC 용액 소프트웨어가 장착된 Shimadzu HPLC 시스템을 사용하여 PRE에서 AC, IS 및 EC의 함량을 분석했습니다. 역상 Intersil C18 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5 μm)을 사용하고 실온에서 유지했습니다. 이동상은 아세토니트릴 및 1.0ml/min의 유속에서 구배 용리(표 1)를 포함하는 00.1% 인산(v/v)을 포함하는 물이었습니다. UV 분광 광도계 검출기는 334 nm로 설정되었습니다. AC 및 IS의 플럭스를 정확하게 결정하기 위해 새로운 HPLC-형광 검출(HPLC-FLD) 방법을 개발했습니다. 구조 분석 및 형광 파장 스캐닝(데이터 표시 안 됨) 후 AC(Ex: 338 nm, Em: 448 nm) 및 IS(Ex: 320 nm, Em: 434 nm)에 대한 최적의 형광 검출 조건을 얻었습니다.

HPLC 분석 방법은 안정성, 선형성, 감도, 정밀도(일중 및 일중 변동성) 및 정확도와 같은 성능 특성을 사용하여 검증되었습니다. 수송 완충액에 있는 분석물을 암소에서 25도에서 24시간 동안 보관하고 안정성을 측정하였다. 피크 영역의 상대 표준 편차(RSD) 값이 < 3.5%였기="" 때문에="" 분석="" 물질은="" 비타민="" c(0.4%)가="" 있을="" 때="" 매우="" 안정적이었습니다.="" ac,="" is="" 및="" ec에="" 대한="" 선형="" 회귀="" 방정식,="" 상관="" 계수,="" 선형성="" 범위,="" lod="" 및="" loq가="" 표="" 2에="" 나와="" 있습니다.="" lod(18–3{20}}="" nm)="" 및="" loq(60–100="" nm)="" 값은="" hplc-fld="" 및="" hplc-uv="" 방법이="" 매우="" 민감함을="" 보여줍니다.="" 방법의="" 정밀도를="" 나타내는="" rsd="" 값은="" 일중="" 및="" 일간="" 변동성에="" 대해="" 모두="" 2%="" 미만으로="" 우수한="" 정밀도를="" 나타냅니다.="" 회수="" 평가를="" 위해="" ac,="" is="" 및="" ec를="" 수송="" 완충액에="" 추가하여="" 3가지(높음,="" 중간="" 및="" 낮음)="" 농도="" 수준을="" 산출했습니다.="" 분석="" 물질에="" 대한="" 방법의="" 회수율="" 값은="" 표="" 3에="" 요약되어="" 있습니다.="" 평균="" 회수율은="" 90.0%에서="" 96.4%="" 범위로="" 정확도가="" 우수함을="" 나타냅니다.="" 결론적으로,="" 확립된="" hplc="" 방법은="" 수송="" 완충액에서="" ac,="" is="" 및="" ec의="" 정량화를="" 위한="" 선형성,="" 감도,="" 정밀도="" 및="" 정확도="" 면에서="">

바이오어세이 시스템에 의한 PRE 측정

생물학적 분석(총 항산화 능력)은 우리가 이전에 설명한 FRAP(제2철 환원/항산화력) 분석을 기반으로 했으며[16] 선형성과 정확성(일중 및 일중 변동성) 측면에서 검증되었습니다. 생물 검정 방법의 선형성은 보정 곡선을 기반으로 결정되었습니다. 선형성의 농도 범위는 0.0625 − 4{15}} ug/ml(y=0.0258x + 0.0968, R{10}}.996)입니다. 확립된 생물학적 검정 방법의 정밀도는 PRE(10.0 ug/ml) 분석을 위한 일중 및 일중 변동성 측면에서 결정되었습니다. 방법의 일간 반복성은 같은 날 5번의 연속적인 측정을 기반으로 결정되었습니다. 3일 동안 5회의 연속 측정을 기반으로 일간 반복성을 측정했습니다. 방법의 정밀도에 대한 RSD 값은 일내 및 일간 변동성에 대해 각각 1.014% 및 4.72%로 우수한 정밀도를 나타냅니다. 따라서, 확립된 바이오어세이 방법은 수송 완충액에서 PRE의 정량화를 위한 선형성, 정밀도 및 정확도 면에서 만족스럽습니다.

세포 배양

Caco{0}} 세포는 5% CO2 및 DMEM, 10% FBS, 1% NEAA, 1% L-글루타민, 페니실린( 100U/ml) 및 스트렙토마이신(100ug/ml). 배지는 세포 성장 및 분화 동안 격일로 교체하였다. 세포를 75-cm2 플라스틱 플라스크에서 성장시키고 0.05% EDTA-트립신으로 3~5일마다 수확했습니다. 수송 실험을 위해 세포를 콜라겐으로 코팅된 Transwell 삽입물에 1×105 cells/cm2의 밀도로 파종하였다. 파종 후 약 21일 후에 단층을 수송 실험에 사용했습니다. 그들의 무결성은 ENDOHM-SNAP(World Precision Instruments, Inc., USA)가 장착된 EVOM을 사용하여 단층에 걸쳐 TEER(trans-epithelial electric resistance)을 측정하여 결정되었습니다. Caco{24}} 세포 단층의 TEER 값은 500O∙cm2를 초과해야 합니다.

운송 실험

단층을 수송 완충액(1{24}}mM HEPES, 1mM 피루브산 나트륨, 10mM 포도당, 3mM CaCl2 및 145mM NaCl을 함유하는 P-완충액, pH 7.4)으로 세척한 다음, 20분 동안 사전 인큐베이션하였다. 37도 . 수송 완충액을 제거한 후, 검사 샘플을 포함하는 새로운 수송 완충액을 AP의 정점(AP) 챔버(1.5ml)에 추가하여 기저측(BL) 방향 연구로, BL 챔버(2.5ml)를 BL에서 AP 방향 연구로 추가했습니다. HPLC를 사용한 AC, IS 및 EC 분석의 경우, 분취량(300 ul)을 다른 시간 간격(30, 60, 90 및 120분)으로 각 수용기 챔버에서 제거했습니다. 리시버 챔버는 각 샘플링 후에 동일한 부피로 새로 예열된(37도) 수송 버퍼로 보충되었습니다. 수집된 샘플은 추가 사용을 위해 -20도에 보관되었습니다. 바이오어세이를 사용한 PRE 결정을 위해 120분에 샘플만 채취했습니다. PRE, AC, IS 및 EC의 불안정성으로 인해 HPLC에 의해 AC, IS 및 EC 함량을 결정하기 위해 0.4%(w/v) 비타민 C를 첨가하여 샘플을 안정화하고 PRE에 대한 샘플 생물학적 분석은 샘플링 직후에 분석되었습니다. 각 샘플의 겉보기 투과 계수(Papp 또는 'Papp) 값을 계산했습니다.

데이터 분석

AC, IS 및 EC의 AP BL 또는 BLAP 방향의 Papp 값은 Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC{7}}) 방정식에 따라 계산되었습니다. 여기서 Papp은 HPLC에 의해 결정된 겉보기 투과 계수(cm/s)입니다. (4Q/4t)는 수신기 측에서 테스트 화합물(AC, IS 또는 EC)의 출현율(μmol/s)입니다. A는 인서트의 표면적(cm2)입니다. CO는 도너 측의 초기 테스트 화합물 농도(μmol/ml)입니다. 구체적으로, 'Papp 값을 계산할 때 "μmol" 대신 질량 단위 "ug"를 사용했습니다. 데이터는 평균 ± SD로 표시됩니다.

결과

Cistanche Deserticola의 PRE에서 Acteoside, Isoacteoside 및 Echinacoside의 구성

AC, IS 및 EC는 Cistanche 종의 주요 생리 활성 PhG로 간주되기 때문에[8], HPLC-UV를 통해 PRE의 함량을 분석했습니다. 대표적인 크로마토그램이 그림 1에 나와 있습니다. 이러한 구성 요소의 식별은 머무름 시간 및 UV 스펙트럼을 파장 334nm에서 표준 표준의 것과 비교하여 수행되었습니다. PRE의 AC, IS, EC의 함량은 각각 26.60%, 1.84%, 32.83%였다. 따라서 이 세 가지 화합물은 PRE의 61.27%를 차지합니다. 또한, 위의 결과는 PRE의 PhG 함량이 78.4%임을 나타냅니다. 따라서 AC, IS 및 EC는 PRE에서 PhG의 약 80%를 차지합니다.

PRE, AC, IS, EC의 총 항산화 능력

CD에서 PhGs의 항산화 활성에 대한 연구가 보고되었으며[9] AC, IS 및 EC가 PRE에서 PhGs의 약 80%를 차지합니다. 따라서 PRE, AC, IS 및 EC의 총 항산화 능력을 분석하고 FRAP 값(×10-6mmol)을 사용하여 표현합니다. 그림 2와 같이 FRAP 값이 8×10-6mmol일 때 PRE, AC, IS, EC의 최종 농도는 6.20ug/ml, 3.14ug/ml, 22.92ug/ml, 4.89ug/ml이었다. ml는 각각 이 4가지 샘플의 총 항산화 능력이 AC > EC > PRE > IS로 순위가 매겨졌음을 나타냅니다. PRE의 생체 활성은 활성 성분 그룹(AIG)에 기인합니다. 약 60%의 PRE에서 AC와 EC는 PRE와 IS보다 더 강력한 총 항산화 활성을 보였다. IS(1.84%)는 PRE의 매우 작은 부분을 구성하기 때문에 약한 항산화성 IS와 같은 다른 구성 요소도 PRE에서 분명히 활성입니다. 놀랍게도, 총 항산화 활성은 AC와 이성질체 IS 사이에서 거의 7-배 차이가 났는데, 이는 페놀성 수산기의 수[9]뿐만 아니라 분자 내 페놀성 수산기의 위치가 항산화에 영향을 미친다는 것을 나타냅니다. - 산화 효과.

Caco{0}} 단층의 검증

Caco{0}} 세포 단층 시스템을 검증하기 위해 Caco-2 단층을 가로질러 AP에서 BL까지 propranolol(잘 전달된 마커) 및 Lucifer yellow(잘못 전달된 마커)의 Papp 값 1.51 × 10–5 cm/s 및 2.8 × 10–7 cm/s로 결정되었으며 이 값은 이전 보고서에서 발표된 값과 일치합니다[17, 18]. 알칼리성 포스파타제 활성 분석은 Caco{13}} 세포 단층이 소장 상피와 질적으로 비슷함을 확인했습니다. [19]

Acteoside, Isoacteoside 및 Echinacoside의 투과성

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s)인 반면, 잘 흡수되지 않는 약물의 경우 낮은(< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

PRE의 투자율

위의 결과는 PRE의 총 항산화 능력이 적어도 PRE의 AIG의 61.27%에 기인함을 나타냅니다. 따라서 총 항산화능의 농도-효과 곡선을 기반으로 PRE의 TR을 평가하고 PRE의 수송 특성을 반영하기 위해 'Papp 값을 계산했습니다. AP!BL 및 BL!AP에 대한 PRE의 'Papp 값은 (2.16 ± 0.26) × 1{11}}–7 cm/s 및 (3.13 ± 0.29) × 10–7 cm/ s는 각각 이 화합물이 투과성이 좋지 않음을 나타냅니다. 또한 PRE에 대한 'Papp BL 대 AP/'Papp AP 대 BL의 비율이 1.45이기 때문에 유출 또는 능동 수송이 분명하지 않았습니다[20]. 또한, PRE의 양방향 TR은 약 300~900ug/ml 사이에서 선형적으로 증가했습니다(그림 5). 결과의 방향성 선호도가 없다는 것은 수동 확산이 PRE의 주요 전달 메커니즘임을 시사합니다.

논의

고순도 의약품과 비교할 때 PE는 일반적으로 물리화학적 특성이 크게 다른 수백 가지 성분으로 구성된 혼합물입니다. 따라서 PE는 복잡한 AIG[21]로 인해 체계적이고 다중 타겟이며 다중 채널 시너지 효과를 발휘하여 PE의 전송 특성 분석을 방해합니다. PE의 수송 특성을 보다 과학적으로 평가하기 위해 일부 연구자들은 PE에서 단일 구성 요소가 아닌 여러 구성 요소를 식별했습니다[22-24]. 그럼에도 불구하고 제한된 수의 구성 요소가 전체 PE를 반영할 수 없습니다. 그러나 PE의 모든 구성 요소를 결정하는 것은 불가능합니다. 더욱이 PE의 다양한 구성 요소가 완전히 다른 수송 특성을 나타내면 PE의 전체적인 수송 특성을 식별하기 어려울 것입니다.

1990년대에는 생물검정 시스템을 사용하여 항균제의 TR을 평가했습니다[25]. 2005년까지 Eguchi와 그의 동료[26]는 분화된 Caco{5}} 세포에서 추출한 BL 배지를 사용하여 당근 추출물의 항산화 활성을 평가했습니다. 이 접근 방식은 생체 내 상황을 반영하는 데 더 적합합니다.

PhGs의 활동에 대한 이전 보고서[9]와 우리의 결과(그림 2)를 기반으로 하여 PRE에서 AIG의 TR은 수용실에 있는 배지의 총 항산화 능력을 결정하여 평가할 수 있습니다. 수송 실험 후, 우리는 PRE의 TR이 양방향에서 유사하고 이 수송이 불포화되고 잘 흡수되지 않는다는 것을 발견했습니다('Papp < ​​1.{3}}="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3],="" 유출을="" 나타내지="" 않았으며="" 농도="" 구배="" 아래로의="" 수동="" 확산이="" pre의="" 주요="" 전달="" 메커니즘임을="" 시사합니다(그림="" 5).="" 또한,="" pre의="" 수송="" 특성은="" pre에서="" 항산화="" 활성을="" 나타내는="" 유효="" 성분인="" ac,="" is,="" ec와="" 일치한다(fig.="" 4="" 및="" table="" 4).="" 이="" 결과는="" 현재의="" 생물학적="" 검정="" 시스템이="" 분화된="" caco{11}}="" 세포에서="" pre에서="" aig의="" 수송="" 특성을="" 평가하는="" 데="" 적합하고="" 신뢰할="" 수="" 있음을="" 시사하고="">

단일 화합물의 수송을 반영하기 위해 일반적으로 사용되는 표준 Papp 값과 달리 농도-효과 곡선을 기반으로 TR에서 얻은 'Papp 값은 손상되지 않은 구조로 단층을 관통하는 성분을 반영할 뿐만 아니라 또한 구성 요소의 대사 산물, 화학적으로 분해된 제품, 심지어 표적 생체 활성에 영향을 미칠 수 있는 자극에 대한 반응으로 Caco{1}} 세포에서 분비되는 일부 사이토카인과 같은 표적 활성과 관련된 다른 요인도 관련됩니다. 따라서 위에서 언급한 다인자는 운송된 온전한 성분만이 아니라 'Papp 값'을 결정합니다. 따라서 'Papp은 표준 Papp 값보다 Vivo 상황 내에서 더 강하게 상관될 수 있습니다[26]. 본 연구에서는 PRE의 'Papp value'를 기준으로 PRE의 수동적 확산 및 흡수 불량 특성을 명확히 하였으며, 이러한 특성은 CD의 고용량 및 긴 임상 치료 기간과 관련이 있을 수 있다[27]. 그럼에도 불구하고 이러한 발견은 PhG뿐만 아니라 CD에서 대부분의 AIG의 수송 특성만이 확인되었을 때 CD를 적용하는 임상의에게 보다 체계적인 지침을 제공할 것입니다.

그러나 선택된 생물 활성 항목은 수용 챔버의 매체에서 감지될 수 있을 만큼 충분히 민감해야 하며, 이는 PE의 수송 특성을 평가하기 위한 생물 검정 시스템의 구축에 어려움을 나타냅니다. 또한 생체 활성도 가능한 많은 구성 요소에 의존해야 합니다. 우리 연구에서는 총 항산화 능력 분석이 여러 다른 방법보다 더 적절했습니다(S1 그림). 그러나 그럼에도 불구하고 우리의 분석은 120분에 PRE의 TR만 감지할 수 있습니다.

종합적으로, 본 연구는 분화된 Caco{0}} 세포에서 PRE의 장 투과성을 평가하기 위한 새로운 생물학적 검정 시스템을 확립했습니다. 얻어진 결과는 유출 없이 농도 구배 아래로 잘 흡수되지 않은 수동 확산이 CD에서 PhG의 임상 적용을 위한 약동학적 기초를 제공하는 PRE의 주요 수송 메커니즘임을 보여주었다(그림 5). TR을 평가하고 PE에서 AIG의 장 수송 특성을 평가하기 위한 'Papp 값'을 계산하기 위한 새로운 생물검정 시스템의 사용은 분명히 실현 가능합니다. 이 접근법은 적절한 생리활성이 주어진 다른 PE에도 적합할 수 있습니다.

지원 정보

S1 그림. (A) 슈퍼옥사이드 음이온, (B) 하이드록실 라디칼, (C) 지질 과산화 생성물 및 (D) DPPH 라디칼에 대한 PRE의 효과. 분석 절차는 수송 완충액을 사용하지 않고 이전 보고서[1, 2]에 따라 수행되었습니다. IC50(50% 억제 농도) 및 SC50(50% 소거 농도) 값은 표준 농도-반응 곡선을 기반으로 계산되었습니다. (DOCX)

저자 기여

실험을 구상하고 설계했습니다: YG XC YQ. 실험 수행: YG CZ FL LF RC YS. 데이터 분석: CZ YG YQ. 기여한 시약/재료/분석 도구: RC. 논문 작성: YG YQ

약리 및 독성 연구 센터, 약용 식물 개발 연구소, 중국 의과 학회 및 북경 연합 의과 대학, 베이징, PR 중국,

중국 헤이룽장성 하얼빈 헤이룽장성 중의과대학