연령 관련 신경퇴행성 질환의 전임상 연구 진행 경로: 설치류 및 HiPSC 유래 모델에 대한 관점 2부

개별 학술 연구실에서 개발한 형질전환 모델 외에도 국립 보건원(NIH)은 현재 여러 기관 및 다학제 보조금으로 구성된 컨소시엄인 AMP-AD(Accelerated Medicines Partnership-AD) 표적 발견 및 전임상 검증 프로젝트를 주도하고 있습니다. 이는 전체적으로 AD에 대한 약물 발견 파이프라인을 가속화하려는 의도입니다(https://www.nia.nih.gov/research/dn/amp-ad-target-discovery-and-preclinicalvalidation-project).

생명공학의 급속한 발전과 함께 형질전환 기술이 점차 생물학 분야에 적용되고 있다. 형질전환 기술은 외래 유전자를 유기체에 도입하여 특정 특성을 나타내도록 하는 유전공학 기술입니다. 그러나 형질전환 모델과 기억 사이의 관계에 대해서는 논란이 있어 왔습니다.

일부 연구자들은 형질전환 모델이 기억력에 긍정적인 영향을 미칠 수 있다고 믿습니다. 예를 들어, 일부 유전자 변형 동물 실험에서는 특정 유전자를 변경하면 동물의 학습 능력과 기억력이 향상될 수 있음이 나타났습니다. 이러한 실험 결과는 형질전환 기술이 인간의 인지 능력을 잠재적으로 향상시킬 수 있음을 보여줍니다.

이러한 연구 결과는 매우 흥미롭지만 이러한 실험 과정 이후의 결과는 인간의 승진이나 성급한 적용의 결과가 아니기 때문에 주의할 필요도 있습니다. 우리는 이 기술이 환경과 인간에 대한 잠재적인 위험을 이해하고 가능한 사회적 영향을 측정하기 위해 더 많은 연구를 수행해야 합니다. 동시에 기억력 향상은 유전자에만 의존하는 것이 아니라 신체 건강과 건강한 생활 습관에도 영향을 받아 정상적인 경로를 통해 좋은 기억력 상태를 달성할 수 있다는 점도 인정해야 합니다.

요컨대 형질전환 기술의 긍정적인 측면을 기대하고 이를 적절히 규제하고 평가해야 한다는 것이다. 형질전환 기술의 합리적인 사용을 통해 우리는 게놈을 변화시킬 수 있으며, 이는 기억력 향상을 포함한 여러 분야에서 인간의 진보를 촉진하는 동시에 의료 및 환경 문제를 해결하는 데 도움이 될 것입니다. 기억력 향상이 필요하다는 것을 알 수 있는데, 시스탄체에는 항산화, 항염증, 항노화 효과가 있어 뇌의 산화 및 염증 반응을 감소시켜 뇌의 건강을 보호할 수 있으므로 기억력을 크게 향상시킬 수 있습니다. 신경계. 또한 시스탄체는 신경 세포의 성장과 복구를 촉진하여 신경망의 연결성과 기능을 향상시킬 수 있습니다. 이러한 효과는 기억력, 학습능력, 사고속도 향상에 도움을 줄 수 있으며, 인지기능 장애 및 퇴행성 신경질환의 발생을 예방할 수도 있습니다.

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특히 이 검토와 관련된 것은 MODEL-AD(Model Organism Development and Evaluation for LOAD) 이니셔티브로 명명된 AMP-AD 부문입니다. MODEL-AD는 AD 표현형을 정확하게 모델링하고 약물 개발 파이프라인을 위한 향상된 플랫폼과 전임상 DMT 검증을 위한 보다 번역 가능하고 생물학적으로 관련성이 높은 모델 역할을 하는 새로운 형질전환 마우스 라인을 생성하는 것을 목표로 합니다.

MODEL-AD 계획은 인디애나 대학교 의과대학 센터, 잭슨 연구소, Sage Bionetworks, 피츠버그 대학교 의과대학, 캘리포니아 대학교 어바인 센터로 구성되어 있습니다.

이 컨소시엄은 엄격하고 고도로 통제된 방식으로 인간 데이터를 기반으로 차세대 생체 내 AD 모델을 구축할 계획입니다. 이를 통해 전임상 결과의 번역 가능성을 높이는 수단으로 번역 가능한 바이오마커를 사용하여 AD 모델의 병리생리학적 특징을 임상 질병의 해당 단계와 정렬하는 것을 목표로 합니다.57

현재까지 fAD, APOE, APP, MAPT/tau 마우스뿐만 아니라 Ab 축적 및 이전에 확인된 기타 LOAD 관련 변종을 기반으로 하는 LOAD 모델을 포함하여 54개의 AD 마우스 모델이 생성되었습니다(https://www.model-ad.org). /strain-table/)은 JAX/IU/Pitt AD Precision ModelsCenter를 통해 사용할 수 있습니다.

AD의 화학-독소 모델

보다 최근의 형질전환 모델 외에도, AD 설치류 모델은 역사적으로 AD 환자에서 관찰된 것과 유사한 인지 및 행동 장애를 초래하는 선택적 신경변성을 유발하는 독성 화합물에 대한 노출을 기반으로 했습니다.

다양한 독소 노출 모델이 AD와 PD 연구에 사용된 반면, AD 모델은 위에서 논의한 보다 최근의 형질전환 모델로 대체되었습니다.

AD의 화학 기반 모델은 콜린성 뉴런 활동을 선택적으로 및 가역적으로 방해하는 화합물이나 오카다산 및 다양한 종류의 중금속과 같이 세포 항상성 과정을 영구적으로 방해하여 세포 사멸을 초래하는 독소를 사용하여 AD 유사 병리를 유발합니다58(표 2). 이러한 모델은 학습 및 기억 장애를 포함하여 AD 증상과 유사한 일부 신경학적 및 행동적 결함을 나타내지만 AD 병리학적 병변(즉, Ab 플라크 및 NFT)은 대체로 부족합니다.

콜린성 뉴런의 파괴에 명시적으로 초점을 맞춘 동물 모델은 이제 다소 오래된 AD의 콜린성 가설을 기반으로 합니다.59 이러한 모델에서 무스카린성 수용체 길항제(예: 화합물 스코폴라민)는 HP와 같은 표적 뇌 영역에 전달되어 콜린성 뉴런의 파괴를 차단합니다. 내인성 아세틸콜린 활동을 억제하고 학습 및 기억의 인지 장애를 유발합니다.60

AD의 다른 화학적 개입 모델은 비특이적 신경 세포 사멸을 초래하는 신경독의 국소 또는 말초 투여와 관련됩니다61-64(표 2).

PD의 형질전환 모델

AD의 경우와 마찬가지로 PD의 형질전환 마우스 모델을 사용하면 멘델의 질병 형태와 관련된 유전자좌의 조작을 통해 유도된 임상 질병 특징에 대한 연구가 가능하며 현재 수백 개의 고유한 계통을 상업적으로 구입할 수 있습니다.

AD와 마찬가지로 대부분의 임상 PD 사례는 산발성으로 분류되며, 유전성 형태의 질병은 전체 사례의 1% 미만을 차지합니다.89 SNCA, LRRK2 및 UCH-L1 유전자의 유전적 변형은 상염색체 우성 형태의 PD와 연관되어 있습니다. PD인 반면, PRKN, PINK1 및 DJ{7}} 유전자의 교대는 상염색체 열성 형태와 관련이 있습니다90(표 1).

형질전환 PD 모델에서 가장 일반적으로 표적이 되는 두 가지 유전자는 SNCA와 LRRK2입니다.91,92 이들 유전자의 돌연변이는 가족성 PD를 유발하고 GWAS를 통해 산발성 형태의 PD와도 연관되어 있습니다.93

또한, 가족성(삼중/중복 사례) 및 산발성 PD에서 SNCA 과발현의 역할은 잘 확립되어 있습니다.94

현재까지 SNCA를 조작하는 대부분의 형질전환 모델은 가족성 미스센스 돌연변이를 도입할 뿐만 아니라 인간 또는 마우스 SNCA 유전자의 여러 복사본을 삽입하여 단독으로 또는 조합하여 증가된 α-시누클레인(a-syn) 생산을 모방함으로써 과발현 전략을 사용합니다. 가족성 미스센스 돌연변이.95-97

LRRK2의 과오 돌연변이는 가족성 PD와 관련된 가장 일반적으로 보고된 돌연변이이며, 알려진 다양한 LRRK2 돌연변이를 기반으로 여러 형질전환 마우스라인이 생성되었습니다.

예를 들어, GS2019S 돌연변이는 강화된 키나제 활성으로 기능 획득 돌연변이를 초래합니다.99 R1441C/G, T1348N 및 A2016T 돌연변이와 같은 다른 모델은 ina-syn 발현 또는 응집의 변화를 보고하며 일부 경우에는 명목상 운동 결핍; 그러나 정확한 결함과 임상 특징은 모델마다 크게 다릅니다.89,92,100

SNCA 및 LRRK2 유전자 외에도 다른 PD 관련 유전자를 표적으로 삼는 여러 다른 형질전환 계통이 생성되었습니다(표 1). 이들 모델 중 다수는 a-syn의 발현과 응집을 성공적으로 변경하는 반면, 대부분은 신경변성을 거의 또는 전혀 나타내지 않으며 결과적으로 운동 기능은 상대적으로 손상되지 않은 상태로 유지됩니다92(표 1).

많은 형질전환 계통에서 생성된 a-syn 응집체를 주의 깊게 분석한 결과, 형성된 함유물이 사후 PD 뇌에서 관찰된 자연적으로 발생하는 Lewy체(LB)와 유사하지 않고 대신 독특한 구조적 구성을 나타내는 것으로 추가로 밝혀졌습니다.101

PD의 분자적 측면과 신경퇴행적 측면을 모두 재현하는 형질전환 모델의 실패는 여러 요인의 조합으로 인한 것 같습니다. 이러한 우려 중 가장 중요한 것은 가족 관련 유전자의 관여 정도와 성격, 그리고 보다 흔하게 산발적으로 발생하는 질병의 형태가 불분명하여 대다수의 PD 사례에 대한 이러한 유전자 조작을 기반으로 한 모델의 타당성에 의문을 제기한다는 것입니다.

또 다른 한계는 형질전환 모델이 생리학적 수준을 모방하지 않는 이식유전자의 과발현을 초래하여 인공물을 도입할 수 있다는 것입니다. 더욱이, 이 질병의 산발적 형태는 여러 유전자의 변화를 수반할 가능성이 높으며, 감수성은 환경적 요소에 의해 더욱 영향을 받아 단일 유전자 형질전환 모델의 유용성이 제한적일 수 있음을 시사합니다.

전반적으로, AD 형질전환 모델을 괴롭히는 많은 동일한 문제가 PD 모델에도 적용됩니다. 현재 PD 병인학에서 가족 관련 유전자의 정확한 역할과 이들이 질병의 산발적 형태에 기여하는 정도에 대한 이해가 부족합니다.

이러한 문제로 인해 a-syn 축적과 LB 형성을 충실하게 재현하여 임상 집단에서 관찰된 것과 일치하는 신경변성 및 행동 장애의 패턴을 초래하는 형질전환 PD 모델을 생성하는 것이 매우 어려워졌습니다.

현재의 형질전환 모델은 이러한 특징 중 일부만을 요약하고 결과적으로 잠재적인 DMT의 효과를 평가하기 위한 예측 타당성이 거의 없는 것으로 입증되었습니다. 대조적으로, PD의 화학적 독소 모델은 PD의 선택적 DA 신경퇴행 특성을 충실하게 재현하는 능력으로 인해 여전히 널리 활용되고 있습니다.

PD의 화학-독소 모델

지난 반세기 동안 PD에서 관찰되는 신경변성 패턴을 모델링하기 위해 다양한 독성 화합물이 사용되었습니다. 이 중에서 네 가지 화학적 손상 모델이 전임상 연구에 가장 널리 활용되는 것으로 나타났으며 그 효과는 광범위하게 특성화되었습니다.

여기에는 카테콜아민 유사체인 6-히드록시도파민(6-OHDA); 1-메틸-4-페닐1,2,3,6-테트라히드로피리딘(MPTP), 합성 오피오이드 유사체; 로테논, 살충제; 및 제초제인 파라콰트102(표 2). 또 다른 비형질전환 PD 모델은 미리 형성된 원섬유(PFF, 원섬유 집합체 형태로 변환된 재조합 단량체 a-syn 단백질)를 동물의 뇌에 주입하는 것을 기반으로 하며, 이는 내인성 a-syn 단백질의 과인산화를 유발하고 SN에서 LB 유사병리를 유발합니다. 파스 컴팩트타(SNpc)87,88(표 2).

이러한 독소 기반 모델은 다양한 각도로 흑질선조체 경로에서 DA 뉴런의 a-syn 응집 및 선택적 신경변성을 유도할 수 있으며, 이는 형질전환 모델 대응의 주목할만한 단점입니다.

그러나 세포 사멸과 DA 뉴런 손실의 정도를 유발하는 경로는 모델마다 상당히 다르며 다른 곳에서 자세히 검토되었습니다.103 궁극적으로 PD에서 DA 세포 손실의 결과는 선조체의 운동 핵이 더 이상 유지할 수 없다는 것입니다. 정상적인 생리적 기능을 저하시켜 광범위한 운동 능력 손상을 초래합니다.

그러나 흑질선조체 DA 뉴런의 상실은 그 자체로 PD 모델이 아니라 더 넓은 범위의 운동 증상을 특징으로 하는 보다 일반적인 파킨슨증을 모방합니다.104

이 시점에서 PFF, 만성 MPTP 및 로테논 투여를 포함한 일부 독소 기반 모델은 a-syn 응집체 및 LB 유사 형성을 유도할 수 있지만 PD의 특징적인 LB 포함 및 이러한 응집체의 전체 분포와는 다릅니다. PDbrains.102에서 관찰된 패턴을 반영하지 않습니다.

이러한 모델은 또한 PD의 진행성 특성과 다른 뇌 영역으로의 병리 확산을 모델링하는 능력이 제한되어 있습니다. 왜냐하면 PD 환자도 질병의 후기 단계에서 피질하 부위, 궁극적으로 피질 부위에서 신경변성을 겪기 때문입니다.105

요약하면, 독소 노출 기반 모델은 PD에서 관찰되는 병리 현상과 일부 유사점을 보여줍니다. 그러나 독소에 의해 유발된 세포 사멸의 메커니즘은 PD의 근본적인 신경 손실과 다를 가능성이 높습니다. PD의 화학 독소 모델에 대한 일반적인 투여 일정은 며칠에서 몇 주에 걸쳐 발생하는 반면 PD의 과정은 수십 년에 걸쳐 진행되며 연령.

이러한 한계는 흑질선조체 경로에서 선택적 DA 뉴런 사멸을 유도하는 것을 목표로 하는 독소 노출 기반 모델이 PD에 대한 불완전한 그림을 제시하고 그러한 모델에서 DMT를 식별하려는 노력이 임상 시험에서 효과적이지 못한 이유에 대한 설명을 제공한다는 것을 시사합니다.12

PD 및 AD용 바이러스 벡터 모델바이러스 벡터 시스템의 장점

바이러스 벡터 전달 시스템은 다른 접근법으로는 달성하기 어려운 몇 가지 장점을 제공합니다.108 첫째, 바이러스 벡터 시스템은 관심 유전자의 일시적인 발현에 대한 강력한 제어를 제공합니다.

둘째, 노화는 AD-PD 스펙트럼 장애의 주요 위험 요소이며, 동물 수명의 어느 시점에서든 벡터를 전달할 수 있다는 가능성은 연구 설계에 있어 주요 이점을 나타냅니다. 셋째, 바이러스 벡터는 국소 이식유전자 전달 및 발현을 지원하므로 다음이 가능합니다. 관심 있는 뇌 영역을 정확하고 구체적으로 타겟팅합니다.

넷째, 바이러스 벡터를 사용하면 정확한 용량 조작이 쉽게 이루어질 수 있습니다. 다섯째, 관심 모델은 작은 설치류부터 인간이 아닌 큰 영장류에 이르기까지 다양한 동물 종에서 생성될 수 있습니다.

여섯째, 관심 있는 표현형을 얻기 위해 유전자의 다양한 변이가 쉽게 만들어질 수 있습니다. 일곱째, 바이러스 매개 유전자를 중추신경계로 전달하는 데 사용되는 다양한 벡터 플랫폼의 다양성과 유연성은 엄청납니다.

재조합 아데노 관련 벡터(UAV) 및 렌티바이러스 벡터(LV)를 포함한 바이러스 시스템은 각각 로컬 및 전 세계적으로 단기 또는 장기 유전자 발현을 효율적이고 강력하게 지원합니다. 마지막으로, 바이러스 벡터 기반 시스템은 훨씬 더 경제적입니다. , 다른 질병 모델에 비해 노력과 비용 측면에서 모두 그렇습니다.

AD 및 PD 바이러스 벡터 모델: AAV 및 LV

생체 내에서 AD 및 PD 표현형을 모델링하기 위한 바이러스 벡터 접근법은 rAAV 또는 LV를 사용하는 여러 다른 그룹에서 활용되었습니다. 밀레니엄 초기에 처음 사용된 이후 다양한 바이러스 기반 모델이 AD에 개발되어 활용되었습니다.

초기 AAV-타우병증 모델은 AAV2/2를 활용하여 생쥐와 쥐의 뇌에서 인간타우 P301L 단백질을 발현했습니다.109,110 이 연구에서 AAV-tau-P301L 벡터는 성인 쥐의 기저 전뇌에 주입되어 타우 수준이 증가했습니다. 형질전환 후 최소 8개월 동안. 중요하게도 NFT와 유사한 과인산화된 타우 및 응집체는 형질도입 후 3~4주에 발견되었습니다.110,111

이러한 연구는 AAV-P301L 타우를 주사하면 생쥐와 쥐에서 단백질의 지속적인 발현과 그 응집을 초래할 수 있다는 개념의 첫 번째 증거를 제공했습니다.

일관되게, AAV-야생형(WT) 또는 삼중 돌연변이 APP의 주입은 Ab 플라크의 형성을 초래했으나 명백한 신경퇴행은 발생하지 않았습니다. 이러한 발견은 AAV-WTtau 또는 AAV-P301L 타우가 HP 피라미드 뉴런의 심각한 신경변성을 일으킬 수 있다는 위의 관찰과 대조됩니다.112

보다 최근의 실험에서는 AAV2/5를 사용하여 WT tau와 GFP 제어 벡터를 나이든 Fischer 344마리 쥐의 등쪽 HP에 전달했습니다.113 두 바이러스 모두 HP 뉴런에서 강력하게 발현되었으며 비정상적인 축삭 구조, 축삭 변성 및 타우 단편화를 초래했습니다. HP 축삭은 정상으로 보이는 대조군 GFP 발현 축삭과 비교되었습니다.

또 다른 모델에서는 인간 시냅신 I 프로모터에서 발현된 타우 P301L이 AAV2/9 벡터에 의해 외측 내후각 피질로 전달되었으며, 이를 통해 저자는 천공 경로 시냅스 및 신경퇴행이 손실되기 전에 인산화되고 응집된 타우 변이체의 여러 형태를 감지할 수 있었습니다.114

이러한 데이터는 특히 축삭 변성 및 분해와 같은 초기 병리학적 변화를 모델링하는 데 있어 AD에서 AAV 기반 접근 방식의 유용성을 뒷받침합니다. 여러 연구에서는 LOAD의 다른 병리학적 측면을 유도하는 것을 목표로 바이러스 기반 모델을 사용했습니다.115,116 예를 들어, AAV-BRI-Ab42및 AAV-BRI-Ab40 벡터는 설치류 HP에서 Ab 펩타이드의 발현 및 분비를 조절하는 데 사용되었습니다.116

특히 AAV-BRIAb42- 주사 동물에서는 이러한 벡터가 플라크 형성을 유도할 수 있음을 입증했지만 rAAV2/1-BRIAb40 발현에서는 이러한 현상이 나타나지 않았습니다.

또 다른 연구에서는 AAV2/2를 사용하여 Ab 펩타이드(C100)를 포함하는 APP의 C-말단 단편인 Ab40 및 Ab42와 C100의 V717F 돌연변이를 마우스의 HP 및 소뇌에 전달했습니다.

흥미롭게도, Ab42 및 V717F 돌연변이체는 Ab40 형태에 비해 소교세포증의 더 큰 유도 및 혈액뇌장벽(BBB)의 파괴를 나타냈지만 플라크 형성, 성상교세포 유도 또는 신경변성을 활성화하지 않았습니다. 다양한 형태의 Ab와 그 전구체를 표현하기 위한 AAV 및 LV 기술의 사용은 계속해서 LOAD에서 이들의 역할을 연구하는 데 필수적인 방법이 될 것입니다.117

최근에는 쥐의 운동 피질에서 TDP-43, Ab42 또는 둘 다를 발현하는 데 LV가 사용되었으며, 이는 TDP-43의 손실이 소교세포가 LOAD에서 관찰되는 시냅스 변성의 원인임을 밝혀냈습니다. 118

또한, lenti-TDP-43는 Ab42 생산과 관련된 APP 처리의 변경을 유발하고 카스파제 활성 및 신경염증을 유발했으며 이는 lenti-Ab42에서도 유사하게 관찰되었습니다.

TDP-43와 Ab42 단백질의 결합된 발현은 TDP-43 단독과 유사한 결과를 가져오지만 신경 세포 손실의 추가 특징이 있어 두 요인 사이의 시너지 효과가 있을 수 있음을 시사합니다. 운동 피질에서 TDP-43를 발현하기 위해 LV를 사용한 또 다른 연구에서는 변경된 아미노산 대사, 산화 스트레스 및 신경 세포 사멸을 발견했습니다.119

이러한 결과는 AD와 관련된 단백질 기능 장애와 관련된 주요 병원성 요인을 밝히기 위한 LV 기반 AD 모델 시스템의 유용성을 함께 입증하는 반면, Ab와 tau는 LOAD에서 광범위하게 테스트되었으며 이는 Ab가 AD 병인의 주요 용의자라는 오랜 개념과 일치합니다. . 그럼에도 불구하고, 아밀로이드 수준을 낮추는 것을 목표로 하는 약물 실험의 지속적인 실패로 인해 다른 잠재적 범인에 대한 노력을 다시 집중해야 합니다.

여러 최근 연구에 따르면 APOEε4는 AD 표현형과 관련된 독성에 기여할 수 있으며 현재까지 APOE는 AD에 대한 가장 중요하고 복제 가능한 유전적 위험 요소로 남아 있습니다.120

AD 병인에서 APOEε4의 역할과 ε2 isoform의 잠재적인 보호 효과를 고려하여 Hu와 동료들은 모든 뇌 영역의 성상교세포에서 특이적으로 발현되는 GFAP 프로모터에 의해 구동되는 AAV8-APOE isoform을 사용하여 마우스 모델을 생성했는데, 이는 전반적인 증가를 가져왔습니다. 마우스 뇌 전체에 APOE 수준이 있습니다.

APOEε4-TR 마우스에서 APOEε4의 바이러스 매개 과발현은 APOEε4-TR 마우스에서 지질이 낮은 APOE 지질단백질 입자를 증가시키고 APOE 관련 콜레스테롤을 감소시켰습니다. 반대로, APOEε4-TR에서 APOEε2 과발현 생쥐는 APOE 지질화 및 관련 콜레스테롤을 강화했습니다.

더욱이, APOEε4의 과발현은 내인성 Ab의 수준을 증가시키는 반면, APOEε2 과발현은 내인성 Ab의 수준을 낮추는 경향이 있었습니다. 이러한 데이터를 바탕으로 저자들은 APOEε4 보균자에서 APOEε2를 증가시키는 것이 AD 치료에 유익한 전략인 반면, APOEε4 보균자에서 APOEε4를 증가시키는 것은 해롭다고 제안합니다. 또 다른 연구에서는 APOEε2를 발현하기 위해 AAV를 사용하여 직접 뇌내 주사를 수행했습니다.

연구에서는 APOEε2 과발현이 뇌 아밀로이드증의 두 마우스 모델에서 뇌 용해성(올리고머 포함) 및 비수용성 Ab 수준과 아밀로이드 부담을 현저히 감소시켰다고 보고했습니다. 이 모델의 병리는 마우스 또는 인간 APOEε4 이소형의 발현에 따라 달라집니다.122

Zhao 등122은 APOEε2를 발현하는 AAV의 시상내 전달을 통한 바이러스의 단일 주입을 통해 뇌 Ab의 광범위한 감소가 달성될 수 있음을 추가로 보여주었습니다.

종합적으로, 이들 데이터는 AAV를 사용한 APOEε2의 AAV 유전자 전달이 뇌 아밀로이드 병리학에 대한 APOEε4의 유해한 효과를 구제할 수 있음을 제시하며; 따라서 이 접근법은 LOAD를 치료하거나 예방하기 위한 실행 가능한 치료 방법을 나타낼 수 있습니다.

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