활동 억제에 대한 Acteoside의 약리학적 연구는 쥐에서 전립선 비대증을 시작합니다

억제 작용에 대한 악테오사이드의 약리학적 연구는 쥐에서 전립선 비대증을 시작합니다

자세한 정보:ali.ma@wecistanche.com

요약:시작 전립선 비대증(BPH) 쥐 모델이 확립되었으며,악티오사이드BPH가 있는 쥐의 아폽토시스 및 초미세 구조 전립선 토지에 대한 Cistanche tubulosa에서 증류된 acteoside의 효과를 연구하기 위해 4주 동안 경구 투여했습니다. 투과전자현미경으로 전립선의 미세구조 변화를 관찰하였다. 결과는 다음을 보여주었습니다.아폽토시스정상적인 쥐의 전립선은 분명하지 않았고, 낮은 비율의 pro-state가 있었습니다.세포자멸사모델 그룹에서 고용량 액테오사이드 치료에서 쥐의 전 상태세포자멸사모델 그룹보다 유의하게 높았다.악티오사이드쥐의 전립선 비대증을 촉진하고 양성 전립선 비대증을 억제하는 역할을 할 수 있습니다.

키워드:악테오사이드, 시스탄체, 전립선 비대증 시작

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전립선 비대증(BPH) 중 세포자멸사는 유전적으로 암호화되고 세포가 특정 신호에 반응하여 세포 사멸을 제어할 수 있게 하는 현재 더 우려되는 메커니즘 중 하나입니다. 전립선이 성체 크기로 발달한 후에는 평균 세포사멸률의 균형 작용에 의해 전립선 세포의 증식률이 1%{1}}%로 유지되며, 이 균형이 깨지면 소인으로 간주됩니다. BPH의. 정상적인 조건에서 전립선의 여성 및 안드로겐 수치와 정상적인 순환은 증식과 세포 사멸 사이에 존재하는 항상성 상태입니다. 증식이 아폽토시스와 균형을 이루지 못하면 샘의 추가 성장 및 확대로 이어지며 주로 상피 세포간 구획의 확장이 일어나도록 합니다. 이 테스트에서 우리는 화학 성분 중 하나의 영향을 관찰하고 분석했습니다.시스탄체, 악티오사이드(예: phyllode) 전립선 비대증 쥐 모델을 확립하여 쥐 전립선의 세포자멸사 및 미세구조 변화에 대해 전립선 비대증 억제에 대한 악티오사이드의 유용성을 평가하고 새로운 용도를 개발하기 위한 과학적 기초를 제공합니다.시스탄체, 한약재.

1 재료 및 방법

1. 1마리의 실험동물

6-7주령의 50마리의 수컷 SD 쥐, 무게 80-100g의 깨끗한 등급이 Yangzhou University의 비교 의학 센터에서 제공되었습니다.

1. 2 시약 및 약물

테스토스테론 프로피오네이트 주사는 Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., 사양 25 mg · ML - 1, lot 060708에서 생산했습니다. PI 염료 용액은 Yangzhou University의 테스트 센터에서 제공되었습니다. 악테오사이드 함량 945g · kg - 1, 중국 약학 대학교 한약 분석학과에서 준비했습니다.

1. 3 실험장치

필립스 TECNAI 12 투과 전자 현미경 네덜란드 필립스; Becton Dickinson을 위해 제조된 Facsaria 유세포 분석기.

1. 4개의 그룹화 및 모델링

전립선 비대증 모델은 문헌 방법에 따라 4주 동안 랫트의 등에 테스토스테론 프로피오네이트를 피하 주사하여 확립하였다. 모델 랫트를 무작위로 4개의 그룹으로 나누었습니다: 모델 그룹, 모델 액테오사이드 고용량 그룹, 모델 액테오사이드 중간 용량 그룹, 모델 액테오사이드 저용량 그룹(각 그룹에 10마리의 래트 포함); 또 다른 10마리의 정상 쥐를 대조군으로 삼았다.

1. 5가지 투여 방법

모델링 1주일 후, 고용량, 중간 및 저용량 그룹의 쥐는 위관 영양법으로 각각 60, 30, 15 mg · (kg · d) - 1를 받았습니다. 모델군과 대조군은 4주간 1일 1회 동량의 생리식염수를 위내 투여하였고, 체중에 따른 투여량을 조절하기 위해 주 1회 체중을 측정하였다.

1. 6 시료 채취 및 처리

1) 시료 및 제제: 마지막 급식 24시간 후 공복 쥐의 체중을 재고 경추 탈구로 쥐를 희생시킨 후 즉시 하복부를 개방하여 주변 전립선 조직을 제거하고 자유 전립선 제거하고, 전립선의 일부를 조직 균질화기에서 얼음욕조에서 균질화하여 전립선의 단일 세포 현탁액을 제조하고, 이를 1단계 절차에서 프로피디움 요오드화물로 염색하였다; 전립선 조직의 다른 부분을 25g·L - 1 glutaraldehyde로 고정하여 극박 절편을 제작하였다.

2) 단일 세포 현탁액의 제조: 무균 상태의 용기에 온전한 랫트 전립선을 제거하고, 전립선 조직 표면의 혈액 및 혈병을 PBS로 헹구어 주변 지방 및 과잉 섬유질 및 세포질 막을 제거하고, 동일한 쥐의 전립선에서 약 0.5 cm3 크기의 신선한 전립선 조직을 채취하여 잘게 썰고 전립선 세포 현탁액을 제조했습니다.

전립선 조직 블록을 페트리 접시에 넣고 소량의 PBS를 첨가했습니다. 조직을 빙욕에서 안과용 가위로 절단하고, 균질기를 현탁액으로 분쇄하고, 10 ml PBS를 첨가하고, 조직 균질물을 피펫으로 흡인하고, 0.074 mm 기공을 갖는 시험관으로 여과하였다. size 나일론 메쉬, 1500 R·min- 1에서 3분간 원심분리하고, 펠릿을 PBS로 3회 더 세척하고, 매번 500 R·min- 1 단시간 저속 원심분리로 세포 파편을 제거하고 0.037mm 기공 크기 나일론 메쉬를 여과하여 세포 덩어리를 제거합니다. 세포를 계수하고 2 × 109 · L - 1의 세포 농도로 조정했습니다. 어두운 곳에서 4℃에서 10분 동안 1ml의 PI 염료 용액으로 염색합니다.

3) 초박형 절편 준비: 초박형 조직 절편 준비.

2 결과 및 분석

acteoside는 proapoptotic 효과가 있는 것으로 결과로부터 알려져 있다. 세포 사멸 결과를 통계적으로 분석한 결과, 고, 중, 저용량의 악테오사이드를 각각 처리한 쥐의 세포 사멸률이 유의하게 증가했으며 정상군, 모델군, 양성군과의 차이가 매우 뚜렷했다. . Acteoside는 세포사멸을 유도할 수 있으며 그 효과는 양성대조군인 alprostadil보다 유의하게 강력하였다.

전립선 비대증 세포의 미세구조에 대한 악테오사이드의 효과는 전자현미경으로 나타내었다. 거친 소포체는 크기가 일정하고 규칙적으로 배열되어 있으며 공포화 현상이 없으며 상피 표면에 손가락 모양의 미세 융모 돌출이 없으며 미토콘드리아 팽창 현상이 관찰되지 않으며 관강 분비물이 거의 없었다. 모델 그룹에서 전립선 세포의 핵은 분명히 변형되고 축소되었으며 세포질은 풍부했습니다. 거친 소포체는 크게 확장되어 있고 액포가 뚜렷했으며 소포는 고밀도 단백질 과립으로 채워져 있습니다. 미토콘드리아는 내강에서 중등도의 조밀한 분비물과 함께 약간 부어 있었고 일부 세포에서는 분비 과립이 관찰되었습니다. Acteoside로 처리된 쥐에서 핵은 모델 그룹과 비교하여 손상되지 않았으며, 핵이 약간 응축되어 있고, 핵 밀도가 증가하고, 이질염색질이 축적되고, 세포질에 약간의 액포가 있고, 거친 소포체에 액포가 더 적습니다. 저용량의 acteoside 군에서는 핵이 약간 수축하고 불규칙하며 세포질이 더 풍부하고 거친 소포체가 감소하였다.

3 토론

FCM에 의한 세포자멸사 세포의 정량적 검출은 간단하고 신속하며 객관적이며 다중 매개변수 분석으로 수행할 수 있어 세포자멸사 및 가능한 조절 메커니즘의 변화에 ​​대한 더 깊은 이해를 제공합니다.

Apoptosis는 유기체 발달의 조절과 유전자 코드에 의해 결정되는 항상성의 유지를 위해 다세포 유기체에서 프로그램된 세포 사멸 과정입니다. Apoptotic 세포는 독특한 형태학적 및 생물학적 특성을 가지고 있습니다: 핵 내 염색질의 pyknosis, DNA 파손의 광범위한 분해, 세포의 포괄적인 수축, 세포소기관을 둘러싸는 외부 프로세스로 세포막의 수축, 특징적인 세포사멸체를 형성하는 핵의 단편, 따라서 apoptotic 세포는 손상되지 않은 세포막 구조와 기능뿐만 아니라 세포 괴사와 다른 세포 소기관 구조의 완전성을 유지합니다. 세포자살의 분자적 기전은 현재까지 완전히 밝혀지지 않았으며 연구에 따르면 세포자살에 관여하는 유전자의 조절에는 다양한 유전자가 관여한다는 것이 밝혀졌다.

아폽토시스는 현재 유전적으로 암호화되고 세포가 특정 신호에 반응하여 세포 사멸을 제어할 수 있게 하는 BPH의 과정에서 더 큰 관심을 받고 있습니다. 전립선이 성인 크기로 발달한 후, 전립선 세포의 증식율은 세포자멸사 비율의 균형 작용에 의해 1%{1}}%로 유지되며, 이 균형의 붕괴는 오랫동안 BPH의 원인으로 여겨져 왔습니다. . 정상적인 조건에서 전립선 내의 에스트로겐에서 안드로겐 수준으로의 정상적인 순환은 증식 과정과 세포 사멸 과정 사이에 존재하는 항상성 상태입니다. 증식이 아폽토시스와 균형을 벗어나면 주로 상피 세포 중격 사이의 확장에 의해 샘이 더 성장하고 확대됩니다. 이 균형의 붕괴는 안드로겐 수준이나 기능의 변화로 인해 발생할 수 있습니다. 두 반응 모두 AR에 의한 DHT의 자극이나 DHT에 의해 매개되는 성장 인자 수준의 변경으로 인해 발생할 수도 있습니다. 본 연구에서는 세포 사멸을 검출하기 위해 FCM을 수행하였고, 고용량의 악테오사이드를 투여한 쥐의 전립선에서 세포 사멸의 비율이 모델군에 비해 유의하게 증가하는 것을 발견하였다. 전자 현미경은 모델 그룹에서 전립선 세포의 핵이 변형되었고, 거친 소포체가 소포에서 크게 확장되었으며, 소포가 고밀도 단백질 입자로 채워져 있고 공포가 분명하다는 것을 보여주었습니다. 미토콘드리아는 관련 연구의 보고서와 일치하여 약간 부어올랐습니다.

쥐의 전립선 비대증 정도는 acteoside 개입 후 유의하게 감소했습니다. 고용량 그룹은 또한 세포 사멸의 초기 징후를 나타내었습니다. 전립선 세포의 핵은 대부분 손상되지 않고 소포체 액포가 상당히 감소했습니다. 핵은 쥐의 거세 후 전립선 조직의 세포 특성과 유사하게 증가된 핵 밀도와 이질염색질 축적으로 응축되었습니다. Acteoside는 전립선 비대증이 있는 쥐에서 apoptosis를 유도하고, apoptosis와 전립선 세포의 증식 사이의 균형을 조절 및 회복하고, 전립선 세포의 증식에 억제 효과를 발휘할 수 있음이 설명되었습니다. 본 연구와 이전 연구의 결과는 Cistanche의 화학 성분인 악테오사이드에 의한 전립선 비대증의 억제가 세포 사멸을 촉진하고 AR 및 tgf-ur1 과발현을 약화시키는 것과 관련이 있을 수 있음을 시사하며 자세한 메커니즘은 완전히 조사되어야 합니다.