F344 쥐를 대상으로 한 13-주간 2-(l-멘톡시)에탄올의 아만성 독성 연구
Apr 02, 2024
개요: 2-(l-Menthoxy)에탄올은 향미제로 자주 사용되어 왔습니다. 그러나 2-(l-멘톡시)에탄올 독성에 관한 데이터는 여전히 제한적입니다. 우리는 13-주 동안 공연했습니다.아만성 독성수컷 및 암컷 F344 쥐를 대상으로 0, 15, 60 또는 250mg/kg 체중(BW)/일의 용량을 위관 영양법으로 경구 투여한 {{0}}(l-멘톡시)에탄올 연구 차량으로 옥수수 기름. 어떤 그룹에서도 일반적인 상태, 체중 또는 음식 섭취량에 있어 유의미한 독성학적 변화는 관찰되지 않았습니다. 혈액학적 평가 결과헤모글로빈 감소,적혈구용적률, 평균 미립자 용적, 평균 미립자 헤모글로빈 및 남성 250mg/kg 그룹에서 혈소판 수가 증가했습니다.혈청 생화학노출된총 콜레스테롤 증가수컷과 암컷 쥐의 250mg/kg 그룹에서는 암컷 250mg/kg 그룹에서 중성지방이 감소했고, 수컷 250mg/kg 그룹에서는 총 단백질이 증가했습니다.지질 대사그리고단백질 합성. 장기 중량의 경우, 남녀 모두 250mg/kg 투여군과 수컷 250mg/kg 투여군에서 간과 부신의 절대 중량과 상대 중량이 각각 증가했습니다. 조직 병리학 적 분석 결과만성 신장병남성 15 mg/kg 이상 그룹에서는 절대 및 상대 신장 중량이 증가하고 남성 60 및 250 mg/kg 그룹에서는 혈청 크레아티닌도 증가했습니다. 그러나 2u-글로불린을 함유한 호산구성 과립이 근위세뇨관에서 확인되었는데, 이는 2u-글로불린 신장병증이 수컷 쥐에게 특이적이고 독성학적 중요성이 없음을 시사합니다. 이러한 결과는 2-(l-메톡시)에탄올의 관찰되지 않은 부작용 수준이 남녀 모두에서 60mg/kg BW/일임을 나타냅니다. (DOI: 10.1293/tox.2020-0091; J Toxicol Pathol 2021; 34: 309–317)
키워드: 2-(l-멘톡시)에탄올, 2-l-멘톡시에탄올, 식품첨가물, 향료, 피셔랫트, 멘톨
Cistanche 보충제 신장 기능 지원 보충제 PhGs75% Ech 30% Act 12%
소개
{{0}}(l-멘톡시)에탄올(CAS 번호 38618-23-4)은 특유의 냄새가 있는 투명하고 무색의 액체이며 향료로 널리 사용됩니다. FAO/WHO 합동 식품 첨가물 전문가 위원회(JECFA)는 구조적으로 멘톨과 관련된 물질로 분류되는 향료로서 2-(l-멘톡시)에탄올을 평가했습니다1. 향료의 구조적 분류에 따라 2-(l-멘톡시)에탄올은 분류 I로 지정되었습니다. 미국과 유럽에서는 인간의 2-(l-멘톡시)에탄올 섭취 수준이 각각 12ug/인/일 및 0.01ug/인/일로 추정되었으며, 둘 다 Class I 기준치인 1,800ug/인/일보다 낮았습니다. 이러한 추정에 기초하여, 2-(l-멘톡시)에탄올은 향료로서 일상적으로 사용하는 동안 안전 문제를 나타내지 않을 수 있는 것으로 간주됩니다.
As part of the risk assessment, it has been revealed that 2-(l-menthoxy)ethanol was not mutagenic in the Ames test, and the only in vivo study performed to date was an oral acute toxicity study in male and female rats (LD50: >2,000mg/kg 체중[BW])1. 향료로 2-(l-men thoxy)에탄올을 사용함에도 불구하고 이 화합물의 반복 투여 독성에 관한 데이터는 제한적입니다. 우리 연구실에서는 설치류 모델2-7을 대상으로 각 범주의 대표적인 향료를 포함한 여러 식품 첨가물의 독성을 조사했습니다. 독성학적 프로파일을 명확히 하고 NOAEL(no-observed-adverse- effect level)을 확립하기 위해 다음 환자에게 경구 투여되는 2-(l-menthoxy)에탄올에 대한 13-주간의 아만성 독성 연구를 실시했습니다. 위관 영양법에 의한 F344 쥐.
재료 및 방법
시험물질
2-(l-멘톡시)에탄올(Lot No. 5I0002, 순도 99.9%) Takasago Int. Corp.(일본 도쿄)는 일본 향료 및 향료 협회(일본 도쿄)의 지원을 받아 일본 후생노동성 식품안전부 표준평가과에서 제공했습니다. 시험물질은 광학이성질체의 혼합물(CAS No. 38618-23-4)로 제공되었으나 제조사로부터 l-거울상이성질체(CAS No. 75443-64-0)로 확인되었습니다. 2-(l-멘톡시) 에탄올의 수불용성 및 휘발성으로 인해 투여 경로로 옥수수유(일본 오사카 소재 Wako Pure Chemical Industries)를 사용한 경구 위관 영양법을 투여 경로로 선택했습니다. 2-(l-멘톡시)에탄올 용액을 투여 직전 매일 제조했습니다. 상온에서 2시간 보관한 후 4, 40, 400mg/mL 용액 내 2-(l-멘톡시)에탄올의 잔존율은 각각 96.8%, 99.8%, 96.5%로 확인되었으며, 가스 크로마토그래피(일본 식품 및 식품 산업 환경 검사 협회, 일본 도쿄).
실험동물
총 40마리의 수컷 및 40마리의 특정 병원균이 없는 특정 병원체 쥐(F344/DuCrlCrlj, 5-주령)를 Charles River Laboratories Japan(일본 요코하마)에서 구입하여 일주일 동안 적응시킨 후 사용했습니다. 연구 기간 동안 동물은 부드러운 칩 침구가 있는 폴리카보네이트 우리에 가두었고 명암 주기(12시간), 환기(공기 교환 속도 18회/시간), 온도( 24 ± 1도) 및 상대 습도(55 ± 5%). 케이지와 칩 침구는 일주일에 두 번씩 교체되었습니다. 각 동물은 수돗물과 기본 식단(CRF-1; 동양 효모, 일본 도쿄)을 자유롭게 섭취할 수 있었습니다. 실험 시작 시, 시험물질 처리 직전에 측정한 체중을 기준으로 동물을 수컷과 암컷 각각 10마리씩 4그룹으로 무작위 배정하였다.
연구 설계
0, 200, 400 및 800 mg/kg BW/일 용량으로 투여된 2-(l-멘톡시) 에탄올을 평가한 예비 {{0}일 연구에서 절대값 상대적인 간 무게는 남녀 모두 치료받은 모든 그룹에서 유의하게 증가했습니다(데이터는 표시되지 않음). 이러한 결과를 바탕으로 우리는 현재 수컷과 암컷 쥐 모두에게 투여하기 위해 2-(l-멘톡시) 에탄올 용량 0, 15, 60 및 250mg/kg BW/일을 선택했습니다. 13- 주간 독성 연구
일반적인 상태와 사망률은 매일 평가되었습니다. 실험 기간 동안 체중, 공급 사료량, 잔여 사료량을 매주 1회 측정하였다. 치료가 완료된 후 모든 쥐를 밤새 금식시켰으며 혈액학 및 혈청 생화학을 위한 혈액 샘플을 이소플루란을 사용하여 깊은 흡입 마취하에 복부 대동맥에서 수집했습니다. 연구 설계는 일본의 식품 첨가물 지정 지침 및 식품 첨가물 사용 기준 개정(1996)에 따라 이루어졌으며 일본 국립 보건 과학 연구소의 동물 관리 및 이용 위원회의 승인을 받았습니다.
혈액학 및 혈청 생화학
ProCyte Dx 자동 혈액학 분석기(IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA)를 사용하여 다음 혈액학적 매개변수를 분석했습니다: 백혈구 수(WBC), 적혈구 수(RBC), 헤모글로빈 농도(HGB), 헤마토크릿(HCT), 평균 적혈구 용적(MCV), 평균 적혈구 헤모글로빈(MCH), 평균 적혈구 헤모글로빈 농도(MCHC), 혈소판 수(PLT) 및 호중구(Neut), 림프구(Lymph), 단핵구(Mono), 호산구를 포함한 차등 백혈구 세포 (Eosino) 및 호염기구(Baso). 혈청 생화학적 분석은 총 단백질(TP), 알부민(Alb), 알부민/글로불린 비율(A/G), 총 빌리루빈(Bil), 포도당, 총 콜레스테롤(T-Chol), 트리글리세리드(TG), 요소질소(BUN), 크레아티닌(Cre), 칼슘(Ca), 무기인(IP), 나트륨(Na), 칼륨(K), 염소(Cl), 아스파르테이트 아미노전이효소(AST), 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 알칼리성 포스파타제(ALP) 및 -글루타밀 트랜스펩티다제(-GTP).
장기 중량 및 조직병리학적 평가
모든 동물에 대해 완전한 부검을 수행하고 뇌, 흉선, 폐, 심장, 비장, 간, 부신, 신장, 고환 및 난소의 무게를 측정했습니다. 이러한 기관과 척수, 삼차신경, 뇌하수체, 비강, 타액선, 혀, 식도, 기관, 대동맥, 갑상선, 부갑상선, 췌장, 위, 소장 및 대장, 턱밑 및 장간막의 조직 림프절, 질, 자궁, 방광, 전립선, 정낭, 부고환, 대퇴골 및 흉골과 골수, 척추, 골격근, 좌골 신경, 피부 및 유선을 10% 중성 완충 포르말린에 고정시켰습니다. 그런 다음 파라핀이 포매된 절편을 준비하고 조직병리학적 검사를 위해 헤마톡실린과 에오신으로 염색했습니다. Harderian 샘이 있는 고환과 눈은 각각 Bouin 고정액과 Davidson 용액으로 고정되었습니다. 비강, 척추, 흉골 및 대퇴골을 포함한 뼈 조직을 10% 포름산과 10% 완충 포르말린의 혼합물을 사용하여 최대 2주 동안 석회질 제거했습니다. 치료 관련 병변이 관찰되지 않는 한 대조군과 최고 용량을 투여한 군의 동물로부터 채취한 모든 조직에 대해 조직병리학적 평가를 수행하였다.
2u-글로불린에 대한 면역조직화학
수컷 쥐의 경우, 파라핀 포매 절편의 면역조직화학적 분석을 통해 신장 내 2u-글로불린 축적을 검사했습니다. 항원 검색을 위해 각 그룹의 5마리 쥐로부터 얻은 절편을 단백질분해효소 K(DAKO, Glostrup, 덴마크)와 함께 실온에서 1분간 배양했습니다. 내인성 퍼옥시다제 활성의 불활성화를 위해 모든 절편을 실온에서 10분 동안 3% H2O2/메탄올 용액에 담갔습니다. 10% 정상 토끼 혈청으로 비특이적 반응을 차단한 후 절편을 2u-글로불린에 대한 1차 항체(1:400 희석; 항쥐 2u-글로불린 항체; R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)와 함께 밤새 4도에서 배양했습니다. 8. 항체 결합의 시각화는 Vecta Stain Elite ABC 키트(Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) 및 3,3'-디아미노벤지딘을 사용하여 수행되었습니다. 모든 섹션은 헤마톡실린으로 대비염색되었습니다.
통계 분석
실험 기간 동안 체중뿐만 아니라 혈액학, 혈청 생화학 및 장기 중량에 대한 데이터 값의 차이를 Bartlett 테스트를 사용하여 균질성에 대해 평가했습니다. 동종 데이터와 이종 데이터에는 일원 분산 분석과 Kruskal-Wallis 테스트가 각각 사용되었습니다. 통계적으로 유의미한 차이를 결정하기 위해 Dunnett의 다중 비교 테스트를 사용하여 대조군과 치료군을 비교했습니다. 조직병리학적 발생률과 등급의 비교는 각각 Fisher의 정확 확률 검정과 Mann-Whitney의 U 검정을 활용하여 분석되었습니다. P 값<0.05 were considered statistically significant.
