DNA Aptamer "Aptamin C" 혁신을 사용한 피부과의 발전: 산화 스트레스 예방 및 항산화를 통한 비타민 C의 효과 극대화
Mar 20, 2022
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최수호 박사1|한정민 Ph.D. 후보자2|김지현 MS후보1|김아루 Ph.D. 후보자3|김상헌 Ph.D. 후보자3|이원태 Ph.D., 교수2|윤문영 박사, 교수3|김규엽 PhD1|김윤성 박사, 교수1
추상적인
배경:비타민 C(L-아스코르브산이라고도 함)은 산화 스트레스로부터 세포를 보호함으로써 활성산소(ROS) 감소 및 세포 재생에 중요한 역할을 합니다. 비타민 C는 화장품 및 치료 시장에서 널리 사용되지만 비타민 C가 쉽게 손상된다는 상당한 증거가 있습니다.산화보관 시 공기, pH, 온도 및 자외선에 의해 이러한 비타민 C 결핍은 항산화제로서의 효능을 감소시키고 비타민 C를 성분으로 함유한 제품의 유통기한을 단축시킵니다. 비타민C 결핍증을 극복하기 위해 환원형인 비타민C에 결합하여 비타민C의 항산화 효능을 극대화하는 혁신적인 DNA 압타머인 압타민C를 개발하였습니다.산화.
행동 양식:Aptamin C와 비타민 C의 결합은 ITC 분석을 사용하여 결정되었습니다. ITC 실험은 0.2mmol/L로 수행되었습니다.비타민 C이를 0.02mmol/L의 농도로 Aptamin C가 포함된 1.8mL 샘플 셀에 2µL 분취량으로 25회 주입했습니다. 데이터는 ITC v.5.0용 with origin 프로그램을 사용하여 one-site binding isotherm에 맞춰졌습니다.
결과:압타민C의 효과를 알아보기 위해비타민 C시험관 및 임상 시험 모두에서 인간 피부의 복합물에 대해 수행되었습니다. 압타민C와 비타민C의 복합물이 주름개선, 미백효과, 수분증가에 유의한 효과가 있음을 관찰하였다. 임상 시험에서 복합제를 투여한 피험자들은 피부 자극과 가려움증이 극적으로 개선된 것으로 나타났습니다. 시험에서 압타민 C 복합체에 의한 이상반응은 나타나지 않았습니다.
결론:종합하면, 이러한 결과는 혁신적인 신규 화합물인 압타민 C가 잠재적으로 다양한 피부 상태에 대한 핵심 코스메슈티컬 성분으로 제공되어야 함을 보여주었습니다.
키워드항산화, 압타민C(비타민C결합압타머),산화, 산화 스트레스,비타민 C(L-아스코르빈산)
1|소개
활성산소종(ROS)은 세포 신호 및 항상성에 중요한 역할을 하는 산소를 함유한 화학적 반응성 화학종입니다.{0}} 여기에는 숙주 방어 유전자 유도 및 이온 수송 시스템의 동원과 같은 긍정적인 효과뿐만 아니라 또한 apoptosis(프로그램된 세포 사멸)의 역할도 합니다.4,5ROS 수준은 환경 스트레스에 의해 증가되어 세포 구조가 손상될 수 있습니다.3 이 현상을 "산화 스트레스"라고 합니다. 산화 스트레스는 퇴행성 신경 질환, 루게릭병, 자폐증, 다발성 경화증, 피부 질환을 비롯한 다양한 질병의 주요 원인 중 하나입니다.6-15 또한 산화 스트레스는 피부 노화 과정16에 직접적인 영향을 미칩니다. 단백질, 지질 및 DNA는 ROS로 인한 산화 스트레스에 민감하게 반응합니다.17 항산화제는 ROS에 직접 반응하여 생물학적 표적 분자에 도달하는 것을 방지하므로 피부 보호에 매우 효과적입니다.18,19비타민 C, 비타민 E, 코엔자임 Q10, 폴리페놀 화합물이 ROS로 인한 손상으로부터 피부를 보호합니다. 따라서 항산화제는 다양한 피부 질환을 예방 및 치료하고 피부 노화 과정을 늦추는 데 도움이 됩니다.20 산업 분야에서 비타민 C를 사용하는 것은 주로 다음과 같은 결과로 인한 항산화 특성 때문입니다.비타민 C라디칼 소거라는 과정을 통해 자유 산소 라디칼을 중화하는 능력.21,22 그러나 이러한 동일한 항산화 특성 때문에 분자 자체는 본질적으로 다음을 통해 분해되기 쉽습니다.산화. 이 문제를 해결하기 위해 우리는 비타민 C에 특이적으로 결합하여 비타민 C의 산화를 억제하는 DNA 앱타머인 앱타민 C를 개발했습니다. 앱타머는 광범위한 분자에 선택적으로 결합할 수 있는 단일 가닥 DNA 또는 RNA 기반 올리고뉴클레오티드입니다. 압타머는 일반적으로 지수 농축에 의한 리간드의 체계적 진화 또는 "SELEX"라고 하는 시험관 내 선택 방법으로 식별됩니다. 우리는 Aptamin C가 억제한다는 것을 확인했습니다.산화여러 산화제로부터 비타민 C를 제거하고 장기간 보관하는 동안 항산화 활성을 유지합니다. 압타민C의 안전성 평가를 확인하기 위해 세포 수준에서 실험을 진행해 인체에 직접 적용한 결과 독성이 관찰되지 않았다. 아토피 피부염, 건선, 여드름과 같은 피부 질환은 면역 반응 및 ROS와 관련이 있습니다.23비타민 CROS를 제거하는 능력이 있으며 항염 효과가 있습니다.24 Aptamin C는산화비타민 C를 천천히 방출하여 그 효능을 극대화합니다. 따라서 우리는 압타민 C-비타민 C 복합체가 시너지 효과를 나타낼 것으로 기대한다.
2|재료 및 방법
2.1|환원그래핀옥사이드로 비타민 C에 대한 앱타머 스크리닝
이 방법은 이전 연구의 방법을 변형하여 수행되었습니다.25 ssDNA에 특이적으로 결합할 수 있는 후보비타민 C약 1X1018개의 서로 다른 서열로 구성된 무작위 ssDNA 라이브러리에서 개발되었습니다. ssDNA 라이브러리의 경우, 우리는 크기가 60mer이고 무작위로 생성된 30개의 뉴클레오티드 서열과 증폭을 위한 프라이머 부위(5'-ATGCGGATCCCGCGC-(N)30-GCGCGAAGCTTGCGC-3')를 포함하는 맞춤형 서열을 사용했습니다. 보다 구체적인 시퀀스를 선택하기 위해 실험 조건을 변경하면서 총 5회의 라운드를 수행했습니다. 반응을 위한 총 부피는 200 μL이었다. 약 20μL의 10X 결합 완충액(10X PBS에 10mmol/L MgCl2 첨가), 80μL의 rGO(5mg/mL, 물에 희석) 및 200피코몰의 ssDNA 라이브러리(20μL의 100μmol/L 스톡 )을 첨가하고 dH2O를 200μL로 채웠다. 30분간 반응을 진행하여 ssDNA 라이브러리를 rGO에 결합시킨 후, 혼합물을 20 000 g에서 20분간 원심분리하여 상층액을 제거하였다. rGO 펠렛을 각 라운드의 표적 결합 조건과 동일한 농도의 결합 완충액 200 μL로 1회 세척하였다. 후보를 용출하기 위해 200나노몰의비타민 C2{11}}0 μL의 결합 완충액에 희석된 rGO 펠릿에 첨가하고, 용출 단계는 1시간 동안 수행했습니다. 용출된 ssDNA를 20분 동안 20 000g에서 수행한 원심분리에 의해 분할하고 증폭하였다. 증폭 전에 ssDNA를 제외한 불순물을 제거하기 위해 EtOH 침전을 수행했습니다. 증폭된 ssDNA를 얻기 위해 비대칭 PCR을 수행했습니다. 비대칭 PCR의 포워딩 프라이머와 리버스 프라이머의 비율은 10:1이었다. 몇 마이크로리터의 PCR 산물을 확인하기 위해 2.5% agarose gel에서 전기영동을 했습니다. 비대칭 PCR은 ssDNA만 생성할 수 없습니다. 그래서 우리는 ssDNA 후보를 분리하기 위해 분쇄 및 담금법을 수행했습니다. 이 방법을 위해 우리는 12% 폴리아크릴아미드 천연 겔에 전기영동을 하고 에티듐 브로마이드(EtBr)로 겔을 염색했습니다. 이중 가닥 DNA(dsDNA)와 ssDNA를 분리하기 위해 ssDNA로 염색된 젤 부분을 잘라내어 분쇄한 다음 ssDNA를 crush and soak buffer(500mmol/L NH4OAc, 0.1% SDS, 0.1mmol/L EDTA)로 추출했습니다. 밤새. 분쇄된 겔을 원심분리에 의해 분리하였다. ssDNA가 포함된 상등액을 농축하고 EtOH 침전을 통해 정제합니다. 멸균된 dH2O로 건조된 ssDNA를 수집하여 다음 라운드에 라이브러리로 사용했습니다.
천연 성분시스탄체 아마존
2.2|등온 적정 열량계(ITC) 실험
등온 적정 열량계 실험은 VP-ITC 시스템(MicroCal Inc Northampton)을 사용하여 25도에서 1mmol/L 염화마그네슘(pH 7.4)으로 구성된 인산염 완충 식염수에서 수행되었습니다. 각 적정 실험 전에 Aptamin C 2 mL 및비타민 C600 µL 샘플을 실험 온도보다 몇 도 낮은 온도에서 교반 없이 진공 하에 3{11}}분 동안 탈기했습니다. 우리는 0.02mmol/L의 농도로 Aptamin C를 포함하는 1.8mL 샘플 셀에 2μL 분취량으로 25회 주입된 0.2mmol/L 비타민 C를 준비했습니다. 데이터는 ITC v.5.0(MicroCal Inc)에 대한 원본 프로그램을 사용하여 한 사이트 바인딩 등온선에 맞춰졌습니다.
2.3|비타민 C 산화에 대한 형광 기반 마이크로플레이트 분석
산화의비타민 CVislisel et al.7이 기술한 방법의 수정된 버전을 사용하여 산화 생성물인 탈수소아스코베이트(DHA)를 검출함으로써 측정되었습니다. 이 방법에서 DHA는 o-페닐렌디아민(OPDA)과 반응하여 형광 축합 생성물을 형성함으로써 검출됩니다 3-( 디히드록시에틸)푸로[3,4-b]퀴녹살린-1-온. 검정 384웰 플레이트(Greiner Bio-One)에서 다음과 같이 검정을 수행했습니다. 압타머는 먼저 1mM MgCl2를 포함하는 pH 7.2의 인산완충식염수에 200μmol/L 농도로 용해시킨 다음 95도까지 가열하여 접고 실온으로 15분간 천천히 냉각시켰다. 그런 다음 접힌 앱타머를 1:1(v:v)로 희석하여 5mmol/L의 새로 준비된 용액으로비타민 C검정 완충액 [50mmol/L 아세트산 나트륨, 1%(w/v) BSA, 0.05%(v/v) Tween 20, pH 5.5로 조정된 1mM MgCl2(Sigma, 모든 구성 요소)] 및 혼합물을 실온에서 30분 동안 인큐베이션하여 산화제를 첨가하기 전에 압타머가 결합하도록 하였다. 그런 다음 산화제를 (EM) H2O2(Sigma) 농도의 비타민 C/앱타머 용액에 첨가했습니다. 산화제는 분석 완충액에서 작업 농도로 미리 희석되었습니다. 이어서, 샘플을 10분 동안 실온에서 인큐베이션한 후 검정 완충액에서 5.5mmol/L 농도의 OPDA(Sigma)를 첨가하였다. OPDA를 첨가한 직후에 SpectraMax® i3X 플레이트 판독기(Molecular Devices)를 사용하여 345nm에서 여기를 사용하여 45분 동안 60초마다 측정하여 샘플의 형광을 측정했습니다. 모든 샘플 및 시약 함유 용기는 형광 분석을 위해 수행된 모든 배양 동안 빛으로부터 보호하기 위해 호일로 포장되었습니다.
2.4|DCPIP(2,6-Dichlorophenolindophenol)를 이용한 비타민 C 감소 측정
의 감소를 결정하기 위해비타민 C, 우리는 DCPIP 반응을 사용하여 실험을 수행했습니다. 비타민 C는 DCPIP와 반응하여 색을 파란색에서 무색으로 바꿉니다. 제조된 비타민 C에 5% Aptamin CTM을 처리하고, 처리하지 않은 비타민 C를 실온에서 8주간 배양하였다. 샘플은 2, 4, 8주 후에 측정되었습니다. 피펫을 이용하여 원뿔형 플라스크에 DCPIP 약 2mL를 첨가하고, 용액이 무색이 될 때까지 첫 번째 미처리 비타민 C를 첨가하였다. 양비타민 C추가된 양을 측정하고 다른 샘플로 반복했습니다. 이 데이터에 따라 각 샘플의 감소 정도를 계산했습니다.
2.5|인간 진피 섬유아세포의 주름 개선 효과에 대한 시험관 내 연구
인간 진피 섬유아세포에서 세포 생존력을 평가하기 위해, 세포에 다양한 최종 농도의 압타민 C를비타민 C(압타민 C ug + 비타민 C ug/mL) {{0}}.01 + 0.5 ug/mL, 0.1 + 5 ug/mL, 0.5 + 25 ug /mL, 1 + 50ug/mL 및 2 + 100ug/mL. 그리고 세포내 콜라겐, 세포내 콜라게나제(MMP-1), 엘라스타제 활성을 검출하기 위해 비타민 C를 압타민 C 농도로 세포에 처리하였다.
인간 진피 섬유아세포(HDF)는 식약처의 "기능성 화장품(I)의 효능 평가를 위한 가이드라인"을 기준으로 선정되었습니다. HDF는 37˚C의 가습된 5% CO2 대기에서 10% FBS와 1% 항생제-항진균제가 보충된 고 포도당 DMEM/F{0}}:1 혼합물에서 배양되었습니다.
HDF(5 x 104 cells/well)를 24-well plate에 접종하고 24시간 동안 배양한 후 다양한 농도의 Aptamin C로 처리했습니다.비타민 C그리고 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후 상층액을 채취하고 Procollagen Type IC-Peptide (PIP) ELISA Kit를 이용하여 450 nm에서 배지로 유리된 procollagen의 양을 측정하였다. 콜라겐 생성 정도는 총 단백질 함량으로 보정하고 양성 대조군인 TGF-1과 비교하였다. 시험 물질이 없는 배지를 용매 대조군으로 사용하였다.
HDF(5 x 104 cells/well)를 24-well plate에 접종하고 24시간 동안 배양한 후 다양한 농도의 Aptamin C로 처리했습니다.비타민 C그리고 48시간 동안 배양하였다. 48시간 후, MMP-1 Human ELISA Kit를 이용하여 450 nm에서 콜라게나아제의 활성을 측정하였다. MMP-1 활성은 총 단백질 함량에 의해 평가되었고 양성 대조군으로서 TGF-1과 비교되었다. 시험 물질이 없는 배지를 용매 대조군으로 사용하였다.
모든 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표현되었으며 3개의 독립적인 실험에서 나왔습니다. 통계 분석은 P < .05="" 유의="" 수준에서="" spss®="" 소프트웨어="" 프로그램(ibm)을="" 사용하여="" 독립="" 표본="" t-검정에="" 의해="">
2.6|3차원 영상 분석 시스템을 통한 피부 주름 측정
22명의 여성 피험자(평균 연령: 50.05 ± 2.94세)가 이 연구에 참여했습니다. 기준선, 4주 및 8주에 3D 이미지 분석 시스템으로 까마귀 발의 피부 주름을 평가했습니다. 피부 수화도는 정전용량법으로 평가하였고, 피부표면 수분확산법에 의한 TEWL과 흡인법에 의한 피부탄력도는 치료 2주, 4주, 8주 후에 평가하였다. 또한 2주와 4주, 8주에 효능에 대한 자가 설문지를 작성하였고, 치료 후 8주째에는 사용성 질문을 작성하였다. 얻은 모든 데이터는 SPSS® 소프트웨어에 의해 통계적으로 분석되었습니다. 까마귀 발의 주름 매개변수는 PRIMOS® Premium(GFMesstechnik GmbH)을 사용하여 평가되었습니다. 이 시스템을 통해 피부 주름에 돌출된 거칠기, 깊이, 면적 및 부피를 정량적으로 분석할 수 있었습니다. 이미지는 피부 주름 매개변수(1, 평균 주름 깊이, 2, 평균 깊이 최대 주름, 3, 최대 깊이 최대 주름, 4, 전체 주름 면적, 5, 전체 주름 볼륨, 6 , 총 폼 팩터 주름, 7, 주름의 총 길이, 8, Ra, 9, Ry, 10, Rz) 기준선에서 Primos 5.8 E ver. 소프트웨어.
3|결과
3.1|불안정한 타겟으로 rGO-SELEX를 성공적으로 수행하려면 버퍼 준비에 대한 엄격한 접근 방식이 필요했습니다.
그래핀 표면의 방향족 고리와 DNA 염기 26,27 사이의 π-π 스태킹 상호작용을 통해 rGO에 결합된 ssDNA 라이브러리와 rGO 상의 결합되지 않은 ssDNA를 원심분리에 의해 분리 및 제거하였다. rGO 표면에 흡착된 ssDNA는 target 화합물로 처리하여 용출시켰다. 문헌 보고서에 따르면 타겟과 결합한 후 rGO와의 π-πstacking 상호 작용을 약화시킴으로써 앱타머의 형태가 변경됩니다.28-31 이 과정을 5라운드 동안 반복했습니다. 각 후속 라운드는 더 가혹한 버퍼 조건과 더 짧은 용출 시간으로 진행되었습니다. 이 성능을 통해 우리는 표적 화합물에 대해 더 나은 특이성을 가진 ssDNA를 유지할 수 있었습니다.
rGO-SELEX 프로세스에 의해 생성된 강화 라이브러리의 NGS 데이터는 404071개의 시퀀스를 생성했습니다. 우리는 이 데이터에서 119개의 시퀀스를 선택하고 구조 유사성에 따라 11개의 그룹으로 분류하고 앱타머 후보에 대한 대표적인 시퀀스를 선택했습니다(그림 1A).
3.2|압타민C 선택
Aptamin C 후보의 2차 구조는 M-Fold 무료 소프트웨어를 사용하여 예측되었습니다. 후보는 위치, 길이, 모양, 가장 높은 잠재적 구조의 줄기 및 루프 수에 따라 그룹화되었습니다(그림 1B). DHA, 산화물비타민 C, 지시약의 역할을 하는 o-페닐렌디아민(OPDA)과의 반응에 의해 검출됩니다.34 압타머가 결합하여 이를 방지하면산화, 비타민 C로 전환되어 산화를 방지하면 비타민 C와 OPDA의 축합 생성물인 3-(dihydroxyethyl)-furo-[3,4-b] quinoxaline-1-one의 형광 신호가 노 압타머 제어. 양성 대조군과 함께 비타민 C 및 산화제가 혼합된 각 후보 앱타머의 플롯,비타민 C비타민 C 및 산화제와 혼합된 산화제 및 스크램블 시퀀스(그림 1C). 5가지 압타머인 Aptamin Cb, Cc, Cf, Cg, Ck는 항산화 효과가 있는 것으로 나타났다.
3.3|Aptamin C에 의한 비타민 C 산화 억제
Aptamin C는 높은 결합력을 가지고 있습니다.비타민 C. 비타민 C와 앱타민 C의 결합은 ITC 분석을 사용하여 결정되었습니다. 결합 등온선으로부터 결합 반응의 엔탈피(ΔH), 엔트로피(ΔS) 및 화학량론(n)을 얻을 수 있습니다. ITC 측정에서 Aptamin Cb 발열 결합이 검출되었으며, 엔탈피(ΔH)는 302.5 ± 3.788, 엔트로피(ΔS)는 18.9, 화학량론(n)은 56.7 ± {{21로 계산되었습니다. }}.426, 해리상수(Kd)는 비타민 C에 대해 2.13uM로 계산되었다. ITC 측정에서 Aptamin Cf 발열 결합이 검출되었고, 엔탈피(ΔH)는 279.2 ± 2.992로 계산되었고, 엔트로피(ΔS)는 계산되었다. as 18.4, stoichiometry(n)는 167 ± 1.15로 계산되었고, 비타민 C에 대한 해리 상수(Kd)는 0.89uM으로 계산되었습니다. ITC 측정에서 Aptamin Ck 발열 결합이 검출되었고, 엔탈피(ΔH )는 25{33}}.4 ± 3.742, 엔트로피(ΔS)는 19.8, 화학량론(n)은 82.2 ± 0.732, 해리 상수(Kd)는 0.90 µmol/L로 계산되었습니다. 비타민 C(그림 2A). ITC 측정은 Aptamin C와 결합할 때 엔트로피의 변화가비타민 C. 을 예방하기 위해산화액체 상태의 비타민 C의 경우, 모든 용액은 질소로 처리된 탈이온수로 제조되었습니다. 에 의해 생성된 DHA에 OPDA(o-phenylenediamine)가 결합할 때 형광을 발현하고 정량적으로 분석하였다.산화Aptamin C의 농도(125, 250, 500, 1000 nmol/L)에 따른 비타민 C의 산화 정도를 OPDA assay로 비교 확인하였다. 결과는비타민 CAptamin C의 농도가 높을수록 dehydroascorbic acid로의 전환이 느려졌습니다. (그림 2B). 이러한 데이터는 Aptamin C가 비타민 C 산화의 용량 의존적 억제제임을 증명합니다.
압타민 C가 예방할 수 있는지 여부를 확인하기 위해 실험을 수행했습니다.산화장기간에 걸쳐 비타민 C를 압타민 C 공동 치료비타민 C, 그리고 처리되지 않은 비타민 C를 빛에 노출시키고 8주 동안 실온에서 방치하였다. 그 결과, 미처리 비타민 C를 그대로 두면 2주 만에 감소 정도가 절반 이하로 줄어들었고, 4주 후에는 거의 모두 산화되었다. Aptamin C의 존재하에 비타민 C는 8주 정도로 절반으로 감소했습니다(그림 2C). 이는 압타민 C가 장기간에 걸쳐 비타민 C의 산화를 방지함을 시사한다.
시스탄체 보디빌딩
3.4|세포내 콜라게나아제(MMP-1) 활성 및 콜라겐 분석
콜라게나제 활성 분석에서 기질 금속단백분해효소-1(MMP-1) 생산은 {{1{ {12}}}}.{15}}1 + 0.5 ug/mL, 0.1 + 5 ug/mL, 0.5 + 25ug/ mL, 각각(그림 3A). 콜라겐 합성 분석에서 procollagen type I carboxy-terminal peptide(PIP)는 0.01 + 0.5 ug/mL에서 25.{{2{32}}}% 증가하여 용량 의존적으로 유의하게 증가했습니다. , 0.1 + 5 ug/mL에서 41.99%, 0.5 + 25 ug/mL에서 71.18%(그림 3B).
3.5|인간 피부에 미치는 피부 주름 개선 효과에 대한 임상 연구
주름 매개변수의 통계적 분석은 3D 이미지 분석 시스템으로 수행하여 시험 제품의 사람 피부에 대한 피부 주름 개선 효과를 평가했습니다. 대조군과 비교하여 "평균 주름 깊이" 매개변수는 4주에 4.77%, 8주에 4.25%, "평균 깊이 가장 큰 주름" 매개변수는 4주에 3.37%, 8주에 4.53% 감소했습니다." 최대 깊이 가장 큰 주름" 매개변수는 4주에 4.36%, 8주에 7.19% 감소했으며 "주름의 총 길이" 매개변수는 4주에 1.61%, 8주에 2.67% 감소했으며 "Ra" 매개변수는 4.22% 감소했습니다. 4주차에 3.90%, 8주차에 3.90% 감소한 "Ry" 파라미터는 4주차에 2.66%, 8주차에 7.11%, "Rz" 파라미터가 4주차에 3.69%, 8주차에 6.22% 감소했으며, 감소량은 3.69였다. 퍼센트 -7.11퍼센트(그림 4).
4|결론
비타민 C상업적으로 중요하지만 불안정한 분자이므로 안정성을 개선하는 것은 다양한 시장 부문에 관심이 있습니다. 우리의 연구는 DNA 압타머인 Aptamin C가 잠재적으로 유통 기한을 연장하고 지연을 통해 그러한 제품의 효능을 증가시킨다는 것을 보여줍니다.비타민 C 산화솔루션에서. 압타민C 복합체의 주름개선 및 피부보습에 대한 임상적 효능을 나타내었다. Aptamin C 복합체는 또한 피부가 거칠어지는 것을 완화하는 데 도움이 될 수 있습니다.
피부 미백 개선