타림 사막에서 배양된 Cistanche Deserticola 줄기에서 추출한 항염증 Iridoids

연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com

요약

의 화학 성분을 결정하기 위해시스탄체 데저티콜라타림사막에서 재배한 식물을 대상으로 체계적인 파이토케미컬 조사를 진행하였습니다. 성분은 실리카겔, Sephadex LH{0}}, MCI 겔, ODS 컬럼 크로마토그래피 및 반분취 HPLC로 분리되었습니다. 이들의 구조는 MS 및 NMR 분광 분석, 화학적 방법 및/또는 문헌 데이터와의 비교에 기초하여 결정되었습니다. BV{4}} 마우스 소교세포에서 지질다당류(LPS)로 유도된 산화질소(NO) 생성에 대한 억제 효과에 대해 분리주의 항염증 활성을 평가했습니다. 9개의 이리도이드가 분리되어 다음과 같이 확인되었습니다.시스탄체 데저토사이드A(1), 시스타닌(2), 시스타클로린(3), 6-데옥시카탈폴(4), 글루로사이드(5), 칸카노사이드 A(6), 아쥬골(7), 바르시오사이드(8) 및 {{9 }}에피-로간산(9). 화합물 9는 양성 대조군 케르세틴(4.3μmol·L-1)에 필적하는 5.2μmol·L-1의 IC50 값으로 NO 생성에 대한 강력한 억제를 나타냈다. 화합물 1은 새로운 이리도이드였으며 화합물 5, 6 및 8은 이 종에서 처음으로 분리되었습니다.

[키워드] 시스탄체 데저티콜라; 이리도이드; 구조 해명; 항염 작용

시스탄체 데저티콜라

소개

시스탄치스 허바(중국어로 Roucongrong) Orobanchaceae과에 속하는 식물로 북아프리카, 아라비아 및 아시아 국가에 주로 분포한다[1]. 중국 전통 의학(TCM)에서 잘 알려진 강장제로서,시스탄체데저스티콜라그리고시스탄체세뇨관중국과 일본에서는 신장 결핍증, 여성 불임, 병적 백질병, 신경쇠약 및 노인성 변비의 치료에 오랫동안 사용되어 왔습니다[2-3]. 이전의 파이토케미컬 조사는

[연구비 지원] 이 프로젝트는 중국 국가자연과학재단(No. 81222051), 중국 전통 중의학 과학 연구 프로젝트(No. 201307002), 국가 핵심 기술 R&D 프로그램 "신약 혁신"의 재정 지원을 받았습니다.

이 저자는 선언할 이해 상충이 없습니다. 발행: Elsevier BV All rights reserved.페닐에타노이드 배당체(PhGs), 이리도이드, 리그난 및 다당류시스탄체종 [4] 및 일부 분리주는 신경 보호, 간 보호, 항염증, 항박테리아, 항바이러스 및 항산화 효과를 나타냈습니다[5-6].

1990년대 후반, Tazhong 유전을 보호하고 사막을 통제하기 위해 모래 고정 공장 Haloxylon ammodendron(CA Mey.) Bunge,시스탄체데저스티콜라, 신장의 북쪽에서 남쪽으로 유입되었고 대량의C. 데저티콜라배양되었다. 남쪽의 기후 조건과 성장 환경은 신장 북쪽의 기후 조건과 매우 다릅니다. 의 화학 성분인지 여부시스탄체데저스티콜라남부 신장에서 문화가 다양하거나 명확하지 않습니다. 의 화학 성분을 결정하기 위해시스탄체데저스티콜라본 연구에서는 타림사막에서 배양된 미나리아재비를 체계적으로 식물화학적 조사를 하였다. 여기에서는 항염증 활성과 함께 알려진 8개의 알려진 유사체(2-9)와 함께 새로운 이리도이드 배당체(1)의 분리 및 구조 설명이 보고됩니다.

의 항염 효과시스탄체 데저티콜라

결과 및 논의

줄기의 85% 수성 에탄올 추출물시스탄체데저스티콜라H2O(10L)에 현탁시키고 EtOAc(10L × 3) 및 n-BuOH로 연속적으로 추출하였다. EtOAc 및 n-BuOH 추출물을 실리카겔, Sephadex LH{6}}, MCI 겔 및 ODS 컬럼 크로마토그래피(CC) 및 반 분취 HPLC에 적용하여 하나의 새로운(1) 및 8개의 알려진 이리도이드({ {9}}) (그림 1).

화합물 1은 음의 광회전을 갖는 백색 무정형 분말로서 분리되었다([a]20 -118.0, c 0.1, MeOH). 그것의 IR 스펙트럼은 약 3 393 cm−1에서 하이드록시 그룹에 기인하는 강한 흡수 밴드를 보여주었다. 분자식은 m/z 385.{13}} [M plus Na] plus (C16H26O9Na에 대한 계산, 385.{18}}) 및 m/z 401에서 준분자 이온에 의해 결정되는 C16H26O9의 분자식을 갖습니다. .122 8 [M 더하기 K] 더하기 (CHOK에 대한 계산, 401.{22}}) H-1에서 C-1′까지, H-10에서 C-7, C-8 및 C-9 및 H-11에서 C-3, C-4 및 C{{32 }}도 위의 설명을 지원했습니다.

화합물 1의 입체화학은 화학적 이동 및 커플링 상수를 문헌 데이터와 비교하고 NOESY 스펙트럼을 분석하여 결정되었습니다. H-5와 H-9의 관계는 커플링 상수(10.5Hz)[8-9]에서 cis로 결정되었습니다. 가장 자연스러운 이리도이드의 경우 C-1-OH, H-5 및 H-9의 구성은 이고 C{{10}의 13C NMR 화학적 이동은 } 및 C{11}}'는 일반적으로 각각 δC 93–98 및 97–1{103}}1에 있습니다. 반면 - 구성의 경우 C-1 및 C-1′의 공진은 평균 5–6개의 다운필드 이동 [10-11]입니다. ( plus )-HR-ESIMS에서 com{23}}의 13C NMR 데이터는 4개의 불포화도를 나타내는 13C NMR 데이터(표 1)에 의해 뒷받침됩니다. 산 가수분해-1표 1 1 2 mol, L의 트리플루오로아세트산을 사용한 화합물 1의 1(δ in ppm, J in Hz)의 H NMR(500 MHz) 및 13C NMR(125 MHz) 데이터는 D-글루코오스를 제공했습니다. 이는 GC 분석에 의한 실란 유도체 분석에 의해 확인되었습니다. 글루코실의 아노머 중심에서의 상대적 구성은 8.0Hz의 커플링 상수에서와 같이 지정되었습니다. 다양한 2D NMR 실험에 의해 명확하게 지정된 화합물 1의 1H 및 13C NMR 데이터(표 1)는 δH 1.23(3H, s, H{48}}) 및 1.52(3H, br s, H-11), δH 1.70(1H, dt, J{56}}.5, 5.5 Hz, H-6) 및 1.92–1.98(1H, m, H)에서 1개의 메틸렌 -6 ), δH 2.47에서 3개의 메틴(1H, br d, J= 10.5 Hz, H{72}}), 2.67–2.72(1H, m, H{78}} ) 및 3.62(1H, t-유사, J= 5.5 Hz, H{85}}) 및 α-불포화 아세탈 기 δH 5.40(1H, d, J{90}}. 0 Hz, H{92}}), 5.92(1H, br s, H{96}}), δH 4.61(1H, d, J{102}}에서 -D-글루코피라노실 아노머 양성자와 함께). 0Hz, H{104}}′). 화합물 1의 1H 및 13C NMR 데이터는 H{109}} [δH 3.62(1H, t-like, J{114}} .5 Hz)] 및 C{116}}(δC 79.8), C{119}} 위치 [7]의 하이드록실화를 나타냅니다. 이 공제는 1H{122}}H COZY of H{123}}/H{124}}/H{125}}/H{126}}/H{127} 분석에 의해 뒷받침되었습니다. } 및 H{128}}에서 C{129}}, C{130}}, C{131}}, C{132}}, C{133}}로의 HMBC 상관 관계( 그림 2). 다른 HMBC

여기에 보고된 파운드 1(표 1)은 C-1-OH, H-5 및 H-9에 대한 구성이 정상임을 나타냅니다. H-7 및 H3-10의 상대적 구성은 NOESY 스펙트럼(그림 2)에서 결정되었으며, 여기서 H-1와 H3-10 사이의 NOE 상관 관계, H{11}}와 H{12}} 사이는 이러한 양성자가 모두 같은 면에 있음을 나타냅니다. H3-10와 H{14}} 사이에 NOESY 상관 관계가 없다는 것은 H-9와 H{16}}가 분자의 반대 면에 있음을 시사합니다. 따라서, 화합물 1의 구조는 7-hydroxyl- Lankan side A로 명명되었습니다.시스타데세르토사이드A.

알려진 화합물은 특정 (2) [12]로 확인되었습니다.시스타클로린(3)[12], 6-데옥시카탈폴(4)[13], 글루코사이드(5)[14], Lankan사이드 A(6)[7], Lugol(7)[15], bartsioside(8) [16] 및 8-에피-유기산(9)[17]을 NMR 데이터와 문헌에 보고된 데이터와 비교합니다. 이 분리된 이리도이드의 항염증 활성은 BV{19}} 소교세포에서 LPS로 유도된 NO 생성에 대한 억제 효과에 대해 평가되었으며, 이들의 세포독성은 24시간 동안 LPS 처리된 BV{20}} 세포에서 먼저 테스트되었습니다. 시간. 분리물의 순도는 모두 1 H NMR 분광 분석에 기초하여 95% 이상입니다. 모든 분리주는 BV-2 세포에서 40 μmol·L-1 농도에서 유의한 세포독성을 나타내지 않았다(표 2). 화합물 9는 5.2μmol·L-1의 IC50 값으로 NO 생성에 대한 강력한 억제 효과를 나타내었으며, 이는 양성 대조군 케르세틴(4.3μmol·L-1)에 필적하는 반면, 나머지는 테스트에서 현저한 효과를 나타내지 않았습니다. 40 μmol·L-1의 농도(표 2). 예비 구조-활성 관계 분석은 화합물 9의 C{40}} 위치에 카르복실기의 존재가 상당한 활성과 관련될 수 있음을 나타냅니다. 요약하면, 1개의 새로운 이리도이드와 8개의 알려진 이리도이드가 줄기에서 분리되었습니다.C. 데저티콜라타림 사막에서 배양한 화합물 9는 BV{2}} 소교세포에서 LPS로 유도된 NO 생성에 현저한 억제 효과를 나타냈습니다. 알려진 모든 이리도이드는 이전에 야생에서 보고되었습니다.C. 데저티콜라[7, 12-17], 따라서 이리도이드와 페닐에타노이드의 화학적 구성에는 뚜렷한 차이가 없습니다.C. 데저티콜라우리의 마지막 보고서 [19]를 종합하여 다른 서식지와 함께 타림 사막에서 양식되었습니다.

시스탄체 데저티콜라: 항염 효과

실험적

일반 실험 절차

IR 스펙트럼은 Nicolet Nexus 470 FT 적외선 분광계에서 기록되었습니다. NMR 스펙트럼은 Varian Inova{1}} 분광계에서 얻었습니다. HR 질량 스펙트럼은 ESI 소스가 장착된 Bruker APEX IV FT-MS(7.{15}} T) 질량 시스템에서 측정되었습니다. ESI-MS는 Agilent 6320 이온 트랩 MS 분광계에서 측정되었습니다. Rudolph AUTOPOL IV 편광계에서 광학 회전을 측정했습니다. 융점은 X{7}} 디지털 디스플레이 마이크로 융점 장치(보정되지 않음)에서 측정되었습니다. 반정제 HPLC는 ODS 컬럼(Alltech, 250mm x 10mm ID, 5μm)이 있는 Waters 600 기기에서 수행되었습니다. GC 분석은 DB{14}} 컬럼(0.25mm × 30m)이 있는 VARIAN CP{13}} 가스 크로마토그래피에서 수행되었습니다. 컬럼 크로마토그래피는 실리카겔(200-300 mesh, Qingdao Marine Chemistry Ltd., 중국), MCI겔(CHP20P, 75-150 μmol·L-1, Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Japan), Sephadex LH{24 }}(Amersham Biosciences, 스웨덴) 및 ODS C18(40–63 μm; Merck, 독일). TLC는 유리로 미리 코팅된 실리카 겔 GF254 플레이트에서 수행되었습니다. 스팟은 UV 광선 또는 5% 황산 에탄올 용액을 분사하여 시각화되었습니다.

식물 재료

C. Deserticola의 줄기는 중국 신장 위구르 자치구 타림 사막에서 채집되었으며 TU Peng-Fei 교수에 의해 확인되었습니다. 바우처 표본(No. CD201011)은 북경대학 현대중의학연구센터 식물표본관에 기탁되었습니다. 추출 및 분리 C. Deserticola(15.3kg)의 건조된 줄기를 잘게 자르고 85% 수성 에탄올(120L x 1h x 3)로 추출했습니다. 농축된 잔류물(4.5kg)을 H2O(10L)에 현탁시키고 EtOAc(10L x 3) 및 n-BuOH(10 NAN Ze-Dong, et al./Chin J Nat Med, 2016, 14(1) ): 6165 – 64 – L × 3) 연속적으로. 화합물 2-6은 EtOAc 추출물에서 얻었고, 화합물 1과 7-9는 n-BuOH 추출물에서 얻었다.

EtOAc 추출물(65.8g)은 CHCl3/MeOH( 50: 1, 20: 1, 10: 1, 6: 1, 2: 1 및 1: 1), 10개의 분수를 제공하기 위해(Fr. 1– 1부{190}}). 정말로. 2(5.3g)를 CHCl3/MeOH(1:1)로 용리하는 Sephadex LH-20 CC로 분리하여 3개의 주요 분획(Fr. 2-1, Fr. 2-2 및 2-3 신부). 정말로. 2-3를 PE/Me2CO(50:1, 20:1, 10:1, 5:1, 2:1, 1:1, 및 0:1)를 사용하여 실리카겔 CC로 분리하여 4개의 분획( 신부 2-3-1–Fr. 2-3-4). 정말로. 2-3-2를 PE/CHCl3/MeOH(8:8:1)로 용리시키면서 실리카겔 CC로 분리하여 화합물 3(20.6 mg)을 수득하였다. 화합물 2는 Fr. 2-3-3 PE/CHCl3/MeOH(5:5:1)로 용리하는 실리카겔 CC 크로마토그래피로 정제한 후. 정말로. 4(2.5g)를 CHCl3/MeOH(1:1)로 용리하는 Sephadex LH-20 CC로 분리하여 3개의 분획(Fr. 4-1, Fr. 4-2 및 4-3 신부). 정말로. 4-2 MCI 겔 CC(MeOH/H2O, 10:90 내지 90:10, V/V)에 적용하여 3개의 주요 분획(Fr. 4-2-1, Fr. 4-2-2, 및 Fr. 4-2-3). 정말로. 4-2-1를 반정제 HPLC[CH3CN-H2O(10:80)]로 정제하여 화합물 4(32.3 mg) 및 5(15.0 mg)를 얻은 반면 Fr. 4-2-2를 반정제 HPLC[CH3CN-H2O(10:80)]로 정제하여 화합물 6(8.3 mg)을 얻었다. n-BuOH 추출물(536g)은 CHCl3/MeOH의 구배 용매 시스템(20:1, 10:1, 6:1, 2:1, 1: 1, 0:1), 10개의 주요 분수(Fr. D1–Fr. D10)를 제공합니다. 정말로. D5(3.0g)를 MCI 겔 CC(MeOH/H2O, 10:90 ~ 80:20, V/V)에 적용하여 3개의 분획(Fr. D{130}}-Fr. D{131}} ). 정말로. D{132}}(120 mg)를 실리카겔 CC(200-300 메쉬, 10.0 g; PE/EtOAc/MeOH 3:3:1)로 분리하여 화합물 8(12.5 mg)을 제공했습니다. 정말로. D8(4.5g)을 MeOH로 용출하는 Sephadex LH{147}} CC로 분리하여 3개의 분획(Fr. D8-1-Fr. D8-3)을 생성했습니다. 정말로. D{150}}를 개방 ODS 컬럼(MeOH/H2O, 20:80에서 80:20, V/V)으로 분리하여 3개의 분획(Fr. D{156}}–Fr. D{157 }}). 정말로. D{158}}를 반-분취 HPLC[CH3CN-H2O(8:90)]에 적용하여 화합물 1(2.3 mg)을 얻었다. 정말로. D9(10.1g)를 MeOH로 용리하는 Sephadex LH{171}} 컬럼으로 분리하여 세 가지 주요 분획(Fr. D{172}}-Fr. D{173}})을 생성했습니다. 정말로. D{174}}를 MCI 겔 컬럼(MeOH/H2O, 0:100 내지 50:50, V/V)에 적용하여 화합물 7(15.3mg) 및 9(45.5mg)를 얻었다. Cistadesertoside A (1): 백색 무정형 분말. [] 20 D -118.0 (c 0.1, MeOH); IR(KBr) νmax: 3 393, 1 071, 1 028 cm−1 ; ( 더하기 )-HRESI-MS m/z 385.{199}} [M 더하기 Na] 더하기 (C16H26O9Na에 대한 계산, 385.{204}}) 및 m/z 401.{206}} [M 더하기 K] 더하기(C16H26O9K에 대한 계산, 401.{211}}); 1 H NMR 및 13C NMR 데이터, 표 1 참조.

화합물 1의 산 가수분해

화합물 1(1.0 mg)을 2 mol·L-1 CF3COOH(EtOH: H2O, 1:1, 2 mL)와 함께 9{13}}도에서 5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용액을 감압 농축하였다. 잔류물을 0.1 mol·L-1 L-시스테인 메틸 에스테르 염산염과 함께 2 mL의 피리딘에 용해시키고 6{26}}도에서 1.5시간 동안 교반하였다. 냉각 및 농축한 후, 혼합물을 피리딘(2 mL) 중 트리메틸클로로실란(TMSCl) 및 헥사메틸디실라잔(HMDS)(1:2, V/V, 0.5 mL)으로 처리하고 60℃에서 교반하였다. 0.5 시간 동안 정도. 그런 다음, 용액을 농축 건조하고, 잔류물을 H2O 및 n-헥산(2 x 3 mL)으로 분배했습니다[18]. n-헥산 분획은 DB{34}} 컬럼(0.25mm × 30m)을 사용하여 GC로 분석했습니다. 인젝터와 검출기의 온도는 모두 220도로 설정되었습니다. 1분 동안 140도에서 시작하여 4도·min-1의 속도로 250도까지 증가하는 온도 구배 시스템이 오븐에 적용되었습니다. TMSCl/HMDS로 유사한 처리 후 D-glucose의 정품 시료(19.24분)와 머무름 시간을 비교하여 당 유도체 가수분해물의 피크를 확인했습니다.NO 생성 억제

분리된 화합물의 NO 억제 활성은 이전에 기술된 바와 같이 NO 분석 키트(Nanjing-Jiancheng BioTech Institute, Nanjing, Jiangsu, China)를 사용하여 Griess 방법에 의해 LPS 유도 BV{1}} 소교세포에 대해 평가되었다[19], 및 케르세틴을 양성 대조군으로 사용하였다. 또한, 세포 생존율은 MTT assay로 평가하였다.

Cistanche 혜택: ​​항염

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