Pistacia atlantica subsp.의 항 멜라닌 생성 및 항 티로시나아제 특성. B16F10 뮤린 흑색종 세포에 대한 뮤티카 추출물
Mar 19, 2022
연락처: ali.ma@wecistanche.com
Samira Eghbali-Feriz1, Akram Taleghani2, Hadi Al-Najjar3, Seyed Ahmad Emami1, Homa Rahimi4, Javad Asili1, Samira Hasanzadeh1 및 Zahra Tayarani-Najaran5,*
추상적인:Pistacia atlantica (P. atlantica) subsp. mutica는 전통 의학에서 사용되어 왔으며 의약 특성으로 유명합니다. 이 연구의 목적은 P. atlantica subsp.의 메탄올(MeOH), n-헥산, 디클로로메탄(CH2Cl2), n-부탄올(BuOH), 에틸 아세테이트(EtOAc), 물 추출물 및 에센셜 오일의 효과를 평가하는 것이었습니다. B16F10 흑색종 세포주에서 멜라닌 합성 및 산화 스트레스에 대한 mutica. 다양한 식물 추출물(0.{9}} µg/mL)로 처리한 후 B16F10 세포 생존율을 레자주린을 사용하여 측정했습니다. 에센셜 오일 조성은 GC-MS(gas-chromatography-mass spectrometry) 분석 및 멜라닌, 버섯 합성 억제 효과를 통해 확인되었습니다.티로시나제활성, 세포성 티로시나아제 및 산화 스트레스는 비색 및 형광 측정 방법으로 평가되었습니다. 데이터에 따르면 농도가 0.{1}} µg/mL인 추출물은 흑색종 세포에 심각한 독성을 나타내지 않았지만 200 µg/mL 농도의 에센셜 오일은 세포독성 효과가 있었습니다. 피스타시아 아틀란티카 subsp. mutica는 버섯을 억제할 수 있습니다티로시나제활동. 또한 B16F10 세포의 멜라닌 양이 감소했습니다. 또한, P. atlantica subsp. 흑색종 세포에서 활성 산소 종의 양을 감소시키는 뮤티카 추출물이 현저한 것으로 밝혀졌습니다.항산화제활동. 또한 모든 농도의 에센셜 오일은 이 연구에서 유의미한 영향을 미치지 않았습니다. 그만큼멜라닌 생성억제 및항산화제P. atlantica subsp.의 효과 B16F10 세포의 mutica는 피부과용 스킨케어 제품에 사용하고 화장품 산업에서 피부 노화를 예방하기 위한 식물의 잠재적 미백 활성을 시사할 수 있습니다.키워드:안티티로시나제; 멜라닌 생성; P. atlantica subsp. 뮤티카.
소개
멜라닌은 멜라노솜에서 합성되어 생리학적 과정을 거쳐 각질형성세포로 전달되는 피부색소멜라닌 생성. 멜라닌은 UV 손상으로부터 보호하는 데 중요한 역할을 하며 피부, 모발 및 눈의 색상을 결정합니다. 멜라닌의 과잉 생산은 흑색종 및 피부의 비정상적인 색소 침착(1-3)에 기인합니다. 멜라닌 생합성의 핵심 효소는 3,{2}}디하이드록시-페닐알라닌(DOPA)의 도파퀴논으로의 산화 및 L-티로신의 DOPA로의 하이드록실화라는 두 가지 개별 반응을 촉매하는 티로시나제입니다(4).티로시나제또는 폴리페놀 산화효소는 미생물, 동물 및 식물에서 발견되는 구리 함유 혼합 기능 효소입니다(5). Tyrosinase는 과일과 채소의 갈변에 가장 큰 영향을 미치는 인자입니다. 멜라닌의 과잉 생산과 축적은 기미, 주근깨, 일광 흑색증 및 검버섯을 비롯한 많은 피부 질환을 유발할 수 있습니다(6). 그러므로,티로시나제억제제는 식품 및 화장품 산업에서 많은 관심을 불러일으켰습니다. 많은 살아있는 유기체에서 산화는 생물학적 과정에 연료를 공급하는 에너지 생산에 필수적입니다.
그러나 과산화수소(H2O2) 및 기타 반응성 산소종(ROS)은 멜라닌 생성 과정에서 UV 조사에 따른 ROS 증가를 비롯한 많은 생리학적 및 병리학적 현상에서 세포 사멸 및 조직 손상을 유발합니다. 또한 UV에 의한 ROS 생성은 노화, 주름, 광과민성 및 악성종양을 포함한 여러 피부 상태의 발병기전에 관여하는 것으로 잘 알려져 있습니다(7). 따라서 천연 자원을 찾는 것은항산화제안티와 함께티로시나제활동은 과잉과 관련된 피부 손상을 수정하는 데 도움이 됩니다.멜라닌 생성 (4).
Pistacia속은 Anacardiaceae과에 속하는 약 9종으로 주로 지중해 지역, 유럽, 아시아 일부 지역에 분포한다(8,9). Pistacia atlantica (P. atlantica)Desf. P. atlanticasubsp라는 3개의 아종이 있습니다. 쿠르디카(Zohary) Rech. f., P. atlanticasubsp. mutica(Fischer & CA Meyer) Rech. 에프. 및 P. atlantica subsp. cabulica (주식) Rech. 에프. 언급된 P. atlantica, P. khinjuk Stocks 및 P. vera L.의 세 가지 아종은 이란에서 자랍니다(10). P. atlanticasubsp의 열매. mutica 즉 Baneh는 직경이 0.{6}}.7cm인 원형에서 타원형입니다. P. atlantica 껍질의 항산화 및 항암 활성은 식물의 높은 총 페놀 함량과 관련이 있습니다. P. atlantica는 전통적으로 상복부 불편감과 통증, 소화 불량 및 소화성 궤양(11-13)을 완화하는 데 사용되었습니다. 그러나 P. atlantica subsp.의 멜라닌 생성 억제 활성에 대한 연구는 없다. 뮤티카. 따라서 이 프로젝트에서 우리는 P. atlantica subsp.의 항산화 및 항멜라닌 생성 특성을 연구하기 위해 B16F10 흑색종 세포를 선택합니다. 뮤티카 추출물. 이 연구의 목적은 P.P.의 메탄올(MeOH), n-헥산, 디클로로메탄(CH2Cl2), n-부탄올(BuOH), 에틸 아세테이트(EtOAc), 물(H2O) 추출물 및 정유의 억제 효과를 조사하는 것이었다. 대서양 뮤티카 과일멜라닌 생성그리고 잠재력을 평가하기 위해항산화제B16F10 흑색종 세포에 대한 식물의 용량.
재료 및 방법
화학
버섯티로시나제Agaricus bisporus, 코직산, 레자주린, L-3,{1}}디하이드록시페닐알라닌(L-DOPA), 디클로로 디하이드로-플루오레세인 디아세테이트(DCFH-DA), 에그타지산(EGTA), 디메틸 설폭사이드(DMSO) ), 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 글리세로포스페이트, α-메르캅토에탄올, 포스페이트-완충 식염수(PBS), 소듐 오르토바나데이트, Sigma(미국)에서 구입한 트리스-완충 식염수 트윈 20(TBST). 태아 소 혈청(FBS), 페니실린, 스트렙토마이신 및 트립신-EDTA는 GibcoBRL(미국 그랜드 아일랜드)에서 입수했습니다. 흑색종 세포주(B16F10, 카탈로그 번호 C540)는 이란 파스퇴르 연구소(테헤란, 이란 IR)에서 구입했습니다. 다른 모든 화학 물질과 용매는 Merck(독일)에서 구입했습니다.
추출물의 제조
P. atlantica subsp. mutica는 2014년 5월 이란 북동부의 Khorasan Razavi 지방 Bardaskan Mountains에서 수집되었으며 Ms. Souzani가 확인했습니다. 바우처 표본(No:13069)은 이란 이란 마슈하드에 있는 마쉬하드 의과대학 약학대학 식물표본관에 기탁되었다. P. atlantica subsp.의 설익은 열매. mutica(200g)를 블렌더(Toos chekan Co, IR Iran)로 분쇄한 다음 이전에 보고된 프로토콜(14)에 따라 실온에서 24시간 동안 MeOH로 침투시켰다. 추출 후 회전 증발기를 이용하여 용매를 증발시킨 후 동결 건조하였다. 메탄올 추출물(94g)을 용매-용매 분배에 의해 추가로 분획화하여 MeOH, n-헥산, CH2Cl2, BuOH, EtOAc 및 H2O를 포함하는 5개의 상이한 분획을 수득하였다.
에센셜 오일의 분리
P. atlantica subsp.mutica(150 g)의 덜 익은 열매를 Clevenger-type 장치를 사용하여 3시간 동안 수소화 증류했습니다. 무색 오일을 0.8%(v/w)의 수율로 얻었다. 얻어진 에센셜 오일을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 추가 시험이 있을 때까지 암소에서 4도에서 보관하였다.
가스 크로마토그래피 및 가스 크로마토그래피 질량 분석
가스 크로마토그래피(GC) 분석은 FID 검출기가 장착된 Varian CP{{0}}를 사용하여 용융 실리카 컬럼(CP-Sil 8CB, 50 m × 0.25 mm, 필름 두께 0.12 µm) 다음 조건에서: 오븐 온도 50-250도, 3도/분의 속도로; 인젝터 온도 260도, 분할 비율 1:5, 캐리어 가스 포함, N2 유속 2mL/분; 검출기 온도 280도 .
기체 크로마토그래피 질량(GC-MS) 분석은 HP-5 MS 컬럼(30 m × 0.25 mm id, {{ 14}}.25 µm 필름 두께) 4중 질량 검출기 및 Wiley 7n.L 라이브러리가 장착된 컴퓨터와 인터페이스. 오븐 온도 50-250도, 3도/분의 속도로, 인젝터 온도 250도, 주입 부피: 0.1µL, 1:50의 분할 비율로 분할 주입, 캐리어 가스(헬륨) 유량 1mL/ 최소, 이온 소스: 70 eV, 이온화 전류: 150 µA, 스캔 범위: 35-465. 에센셜 오일 성분의 식별은 HP-5MS 컬럼의 n-alkanes 시리즈(C{23}}C20)를 참조하여 얻은 머무름 가스 크로마토그래피를 기반으로 했으며, 보고된 질량 스펙트럼 및 단편화 패턴 비교 Wiley 7n.L 라이브러리(15)와 일치하는 문헌 및 컴퓨터. 미숙과일 개별성분의 상대적인 정량은 보정계수를 고려하지 않고 면적백분율법에 따라 수행하였다.
세포 배양
흑색종 세포주 B16F10은 5% CO2를 포함하는 습한 대기(90%)에서 37도로 유지되었습니다. 세포는 10%(v/v) FBS, 100IU/mL 페니실린 및 100μg/mL 스트렙토마이신이 포함된 RPMI{6}}(Bioidea, Iran)에서 배양되었습니다. P. atlantica subsp.의 원액. mutica는 DMSO에 50 µg/mL로 준비하고 -40도에서 보관했습니다. 코직산(2 및 4mM)은 모든 실험에서 양성 대조군으로 사용되었습니다. 세포는 105개 세포/mL의 밀도로 {{14}웰 플레이트에서 배양되었습니다. 각 실험에서 추출물의 활성은 다음 방정식을 사용하여 계산되었습니다.
활동 비율=샘플의 흡광도/대조군*100의 흡광도
세포 생존력 분석
레사주린은 살아있는 세포의 환원력을 이용하여 레소루핀으로 전환시키는 세포 건강 지표입니다. Resazurin은 청색, 무독성, 비형광 및 세포 투과성 화합물로, 살아있는 세포에서 적색 및 고형광성 레소루핀으로 전환됩니다(16). 약 1{7}}4개의 B16F10 흑색종 세포를 96-마이크로웰 플레이트의 각 웰에 파종하고 다양한 농도의 P. atlantica subsp. 추출물과 에센셜 오일을 처리했습니다. 뮤티카 (0.2-200 µg/mL). 4시간 배양 후, H4 Hybrid Multi-Mode microplate reader(BioTek, Winooski, USA)를 사용하여 570 nm와 600 nm에서 resazurin과 resorufin의 흡광도를 측정하였다. 각 실험은 삼중으로 수행되었습니다. 농도-효과 곡선(log 농도 대 반응)에서 GraphPad 소프트웨어를 사용하여 최대 억제 농도의 절반(IC50)을 계산했습니다.
버섯 티로시나아제 활성 분석
버섯의 활동티로시나제L-DOPA의 산화에서 일부 수정과 함께 이전에 설명한 대로(17) 분광광도계로 측정되었습니다. 간단히 말해서, 160 μL의 5 mM L-DOPA(100 mM 인산나트륨 완충액 pH 6.8) 및 P. atlanticasubsp가 있거나 없는 동일한 완충액 20 μL. mutica 추출물과 에센셜 오일(10-1000 µg/mL)을 20 µL의 버섯 티로시나아제(200 units/mL)와 혼합한 다음 37도에서 30분 동안 배양했습니다. 흡광도는 Synergy H4 Hybrid Multi-Mode microplate reader(BioTek, Winooski, USA)를 사용하여 475 nm에서 측정되었습니다.
흑색종 세포의 멜라닌 함량 측정
흑색종 세포인 B16F10을 96-웰 배양 플레이트에 웰당 105개 세포의 밀도로 시딩하고 24시간 동안 배양했습니다. 그런 다음 다른 농도(0.{6}} µg/mL)의 P. atlantica subsp. 뮤티카 추출물과 에센셜 오일을 24시간 동안 멜라닌 함량은 이전에 설명한 대로 측정되었습니다(18). 처리 후 트립신을 사용하여 세포를 수집하였다. 그들은 PBS로 세척했습니다. 세포 펠릿을 60도에서 60분 동안 수산화나트륨(2M)의 50μL 용액에 용해시켰다. 멜라닌 함량은 Synergy H4 Hybrid Multi-Mode microplate reader(BioTek, Winooski, USA)로 405 nm에서 흡광도를 측정하여 측정하였다.
세포 티로시나제 활성 분석
DOPA의 DOPA 크롬으로의 산화는티로시나제활동(18). 10B16F10 흑색종의 6개 세포를 96-웰 플레이트의 각 웰에 밤새 도말했습니다. 다른 농도(0.{6}} µg/mL)로 세포를 처리한 후 P. atlantica subsp. 뮤티카 추출물 및 에센셜 오일 24시간 동안 트립신을 사용하여 세포를 분리했습니다. PBS로 세척하고 1% 트리톤 X{13}} 및 0.1mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드를 함유하는 인산나트륨 완충액(pH 6.8, 100mM) 50μL로 용해했습니다. 용해물을 4도에서 20분 동안 10,{17} rpm에서 원심분리했습니다. 100μL의 각 용해물(각각 100mg 단백질 함유)을 96웰 플레이트에서 30μL의 5mM DOPA와 혼합하고 37도에서 2시간 동안 인큐베이션하고 Synergy H4 Hybrid Multi-Mode 마이크로플레이트 판독기로 475nm에서 흡광도를 측정했습니다. (BioTek, Winooski, USA).
세포 활성 산소 종 수준의 결정
반응성 산소 종 수준은 이전에 설명된 대로 약간의 수정으로 측정되었습니다(19). 흑색종 세포 B16F10(2 × 104)을 96-웰 플레이트에 밤새 접종한 다음 P. atlantica subsp의 다양한 농도(0.{7}} µg/mL)로 처리했습니다. . 뮤티카 추출물과 에센셜 오일을 24시간 동안 그런 다음 세포를 30분 동안 37도에서 50μL H2O2(24mM)와 함께 배양했습니다. 그런 다음 50 μL의 DCFH-DA를 세포에 첨가하고 Synergy H4 microplate reader(BioTek, USA)를 사용하여 504 nm 방출 및 524 nm 여기에서 DCF의 형광 강도를 측정했습니다.
웨스턴 블로팅 분석
흑색종 세포인 B16F10은 메탄올 추출물(0.{5}} µg/mL)이 있거나 없는 75cm3 플라스크에서 24시간 동안 배양되었습니다. 그런 다음 세포를 완충액(5{29}}m tris-HCl, pH 7.4, 2mM EGTA, 1mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 10mM 글리세로포스페이트, 10mM -메르캅토에탄올, 1mM 소듐 오르토바나데이트, 0.1% 데옥시콜산 나트륨염). 동일한 양의 단백질(50㎍)을 12% 나트륨 도데실 설페이트(SDS)-폴리아크릴아미드 겔 전기영동에 로딩하고 폴리비닐리덴 디플루오라이드 막으로 옮겼다. 막을 실온에서 TBST(20mM tris-HCl pH 7.4, 100mM NaCl 및 0.1% 트윈 20) 완충액 중 10% 탈지유에서 2시간 동안 차단했습니다. TBST 완충액으로 세척한 후, 막을 1차 항체: 1:300(토끼 항-티로시나제항체(Santa Cruz Biotechnology, CA)). TBST 완충액으로 3회 헹군 후, 막을 항토끼 IgG(1:2000)를 이차 항체로 사용하여 2시간 동안 인큐베이션했습니다(세포 신호전달). TBST 완충액으로 3번 헹구고 단백질 밴드를 ECL(Enhanced chemiluminescent) 프라임 웨스턴 블로팅 검출 시스템(BioRaD, USA)을 사용하여 검출했습니다(20). 항{7}}액틴 항체를 로딩 대조군으로 사용했습니다.
통계 분석
실험의 상대적 결과는 세 가지 독립적인 측정의 평균 ± SD로 표시되었습니다. 분산 분석 및 IC50 계산은 일원 분산 분석 테스트를 사용하여 GraphPad Prism 6.0으로 수행되었으며 평균은 Dunnett 테스트로 비교되었습니다. P < 0.05는="" 추출물="" 처리="" 세포와="" 대조군="" 사이의="" 통계적으로="" 유의한="" 차이를="" 나타냅니다.="" 양방향="" anova="" 테스트와="" bonferroni="" 비교="" 사후="" 테스트를="" 사용하여="" 각="" 분석에서="" 서로="" 다른="" 추출물의="" 효과를="">
결과
에센셜 오일 조성
가스 크로마토그래피는 정량화에 사용되었으며 Gc-Mass는 화합물 식별에 사용되었습니다. GC 및 GC-MS 분석 결과는 화합물의 정량 및 정성 식별 표에 나와 있습니다. P. atlanticasubsp. mutica에서 68가지 성분이 에센셜 오일에서 확인되었으며 전체 오일 구성의 99.8%를 차지했습니다(표 1). 에센셜 오일의 그룹화된 화합물은 모노테르펜 탄화수소 86.5%, 산소화 모노테르펜 3.7%, 세스퀴테르펜 탄화수소 8.7%, 산소화 세스퀴테르펜 0.1% 및 기타 0로 결정되었습니다. .8퍼센트. 에센셜 오일의 주요 성분은 -E-ocimene 29.7%, myrcene 17.1%, -Z-ocimene 17.{26}}%, -pinene 10.2% 및 E-caryophyllene 7.1%였습니다.
세포 생존에 대한 추출물의 효과
세포의 생존력을 레자주린으로 모니터링하였다. 흑색종 세포인 B16F10을 96-웰 플레이트에 접종했습니다. 24시간 후 세포를 P. atlantica subsp.의 다른 농도(0.2-200 µg/mL)로 처리했습니다. mutica 추출물의 결과는 이 연구에 사용된 농도에서 추출물이 B16F10 세포에 유의한 세포독성 효과를 나타내지 않았음을 보여주었습니다(그림 1). 양성 대조군인 독소루비신은 유의하게 세포사를 유도하였다(P <>
버섯 티로시나아제 활성에 대한 추출물의 효과
L-DOPA의 산화에서 버섯 티로시나아제의 억제에 대한 P. atlantica의 효과를 평가하였다. 결과는 버섯이티로시나제활성은 모든 다른 추출물에 의해 억제되었지만 1{4}}00 µg/mL의 n-헥산 추출물 농도는 이 테스트에서 유의한 영향을 미치지 않았습니다. Kojic acid(2 및 4mM)를 양성 대조군으로 사용했습니다(P < 0.05)(그림="">
추출물과 에센셜 오일이 멜라닌 합성에 미치는 영향
P. atlantica subsp.의 다양한 추출물과 에센셜 오일의 효과를 연구합니다. mutica on melanin synthesis, 추출물 처리한 B16F10 흑색종 세포의 멜라닌 함량을 평가하였다. 코직산(2 및 4mM)을 양성 대조군으로 사용했습니다.
그 결과 MeOH, CH2Cl2, EtOAc 추출물(0.2-200 µg/mL), n-헥산(2-200 µg/mL), H2O 추출물(2{{9 }} 및 200 µg/mL)은 멜라닌 합성을 억제하는 효과가 있었습니다(P < 0.05)(그림="" 3).="" 그러나="" 모든="" 농도의="" 에센셜="" 오일과="" buoh="" 추출물은="" 멜라닌="" 합성에="" 유의한="" 억제="" 효과가="" 없었습니다.="" 에센셜="" 오일의="" 결과는="" 그림에="" 표시되지="">
세포 티로시나아제 활성에 대한 추출물의 효과
P. atlantica subsp.의 억제 효과의 메커니즘을 평가하기 위해. 뮤티카 추출물멜라닌 생성특히, 우리는 세포 내티로시나제B16F10 흑색종 세포에서의 활성. 결과는 MeOH, EtOAc 및 BuOH 추출물(0.{3}} µg/mL), n-헥산(0.2 µg/mL) 및 CH2Cl2(20 및 200 μg/mL) P. atlantica subsp. mutica는 세포의 tyrosinase 활성을 유의하게 억제할 수 있었지만(P < 0.05)(그림="" 4),="" 물="" 추출물은="" 세포의="" tyrosinase="" 활성에="" 대한="" 억제="" 효과가="">
세포 활성 산소 종 수준에 대한 추출물의 효과
다음을 나타내는 세포 내 ROS 수준항산화제P. atlantica subsp.mutica의 용량은 B16F10 흑색종 세포에서 24mM H2O2 단독 또는 다른 추출물로 처리된 세포에서 측정되었습니다. 결과는 모든 추출물이 P. atlanticasubsp. 0.2 µg/mL의 CH2Cl2 추출물을 제외한 mutica는 H2O2에 의해 유도된 산화 스트레스를 유의하게 억제할 수 있었습니다(P < 0.05)(그림="">
세포 티로시나아제 단백질 수준에 대한 추출물의 효과
P. atlanticasubsp.의 세포내 효과 티로시나아제와 같은 멜라닌 생성 관련 단백질에 대한 mutica멜라닌 생성웨스턴 블롯으로 평가하였다. 도 6에 도시된 바와 같이,티로시나제단백질 수준은 P. atlantica subsp.에 의해 유의하게 감소되었습니다. {{0}}.5 및 10 µg/mL의 농도에서 mutica 추출물 처리(P < 0.05).="" -액틴은="" 내부="" 대조군으로="">
다양한 매개변수에 대한 에센셜 오일의 효과
0.{1}} µg/mL의 에센셜 오일은 흑색종 세포에 대한 세포독성 효과를 나타내는 농도 200 µg/mL를 제외하고는 위에서 언급한 모든 매개변수에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났습니다. 따라서 에센셜 오일의 결과는 억제 효과가 관찰되지 않았기 때문에 결과 섹션에 포함되지 않았습니다.
논의
천연 기반 화장품은 안전성과 다기능성으로 인해 상업 기관에서 널리 광고됩니다. 새로운 멜라닌 생성 방지제 찾기항산화제천연 공급원으로부터의 활성은 과색소침착 장애에 사용되는 제품의 제형에 대한 관심 중 하나입니다. 피부 미백제로 사용되는 의약 및 화장품에서 멜라닌 형성 억제, 활성산소 소거 및 활성산소 억제티로시나제관련 피부 질환 치료에 중요한 활동(21).
이 연구에서 P. atlantica subsp의 다른 추출물의 항산화 활성. mutica를 평가하고 tyrosinase 활성과 멜라닌 합성에 미치는 영향을 분석했습니다. P.의 MeOH 및 EtOAc 추출물. 대서양 연안 뮤티카는 유의미한항산화제식물에서 널리 발견되는 폴리페놀과 플라보노이드에 기인할 수 있는 2, 20 µg/mL 및 20, 200 µg/mL에서의 활성. 결과는 모든 추출물, 특히 MeOH, EtOAc 및 H2O 추출물이 버섯을 유의하게 억제할 수 있음을 보여주었습니다.티로시나제활동. 또한, MeOH, EtOAc 및 BuOH 추출물은 세포내 멜라닌 생성 감소에 따른 세포내 티로시안아제 활성을 감소시킬 수 있었다. 이 연구에서 모든 농도의 에센셜 오일은 세포성 티로시안, 멜라닌 합성 및항산화제활동. 다른 추출물과 비교하여 다른 실험에서 MeOH 추출물의 더 많은 활성으로 인해 우리는 웨스턴 블롯 분석을 위해 언급된 추출물을 선택했습니다. 요약하자면, 이 추출물의 항멜라닌 생성 효과는 B16F10 세포의 모든 분석에서 확인되었으며, 이는 양성 대조군 코직산과 유사합니다(표 2).
MeOH, CH2Cl2 및 EtOAc 추출물은 세포티로시나제활동, 멜라닌 함량 및 ROS. 반극성 자연 분획은 폴리페놀 및 플라보노이드와 같은 멜라닌 생성 활성을 담당하는 식물화학물질을 추출할 수 있습니다. n-헥산 분획과 에센셜 오일은 덜 활성적이어서 비극성 및 휘발성 성질을 가진 식물 파이토케미컬이멜라닌 생성프로세스(22,23).
폴리페놀과 플라보노이드는 ROS 생성 억제제로 작용하며 식물 추출물(24-27)의 항멜라닌 생성 특성을 담당할 수 있습니다. P. atlantica subsp. 추출물의 주요 화합물. mutica는 케르세틴, 루테올린, 이소케르세틴, 루틴, 루테올린 7-락테이트 및 p-쿠마르산, 카페산 및 갈산과 같은 페놀 화합물입니다.항산화제활동(28). 루틴은 티로시나제의 활성을 억제하는 것으로 보고되었으며 수산기의 존재로 인해 강력한 항색소제입니다(29). 흥미롭게도 케르세틴, 루테올린 및 이소케르세틴은 구조에 많은 수산기를 갖고 있어 티로시나제와 상호작용하여 항티로시나제 활성을 유발합니다(21,30). 최근에 루테올린과 케르세틴과 같은 플라보노이드의 효과는 주로 다음의 전사 인자의 조절을 통해 매개되는 것으로 나타났습니다.멜라닌 생성-관련 전사 인자(MITF) 및/또는 멜라닌 생성 효소티로시나제, DCT 또는 티로시나제 관련 단백질 1(TYRP-1)(31). P-coumaric acid와 caffeic acid는 버섯 tyrosinase 활성을 억제하였고 kojic acid보다 10- 및 3-배 더 강력했습니다(32).
갈산은 아스코르브산과 유사하게 티로시나제 억제 활성을 나타내고 산화환원 순환을 통해 도파퀴논을 L-DOPA로 환원시킵니다(33). 유사하게, 본 연구에서 P. atlantica subsp. mutica는 식물의 케르세틴, 루테올린, 이소케르세틴, 루틴 및 기타 폴리페놀의 존재와 밀접한 상관관계가 있는 세포의 티로시나제 단백질 수준을 감소시켰습니다.
피부 질환의 치료에 높은 잠재력을 가질 수 있는 산화 스트레스를 감소시키는 항멜라닌 생성 및 항산화 활성을 갖는 식물에 대한 많은 보고가 있습니다. 예를 들어, P. atlantica의 공중 부분의 다른 추출물은 산화 스트레스를 감소시켰는데, 이는 식물에서 널리 발견되는 폴리페놀, 플라보노이드 및 안토시아닌 때문일 수 있습니다(34). 다른 연구에서 P. vera의 MeOH 추출물은 멜라닌 분비를 감소시켰는데, 이는항산화제이 식물의 화합물. 이 연구는 양성 대조군인 코직산이 0.05mg/mL의 IC5{1}} 값을 보여주었고 더 높은 농도의 P. vera가 흑색종 암과 같은 피부 질환 치료에 효과적인 약제로 사용될 수 있음을 보여주었습니다(35 ). Gourine, et al. P. atlantica의 공중 부분이 강력한 항산화 특성을 가지고 있음을 보여주었습니다(36). 또한 Nepeta satureioides의 MeOH 및 CH2Cl2 분획은 B16F10 흑색종 세포에서 멜라닌 생성에 대한 잠재적인 영향을 나타내며 스킨케어 제품의 화장품 제형에 기여할 수 있습니다(37). kojic acid의 유도체는티로시나제. 이 화합물에 유리 히드록실기 및 메틸 치환기가 존재하여 억제 활성이 확인된 것으로 보인다. 이 연구에서 코직산(양성 대조군)은 0.28mM(38)의 IC5{1}}값을 나타냈습니다. Teucrium polium L. var.에서 분리된 페닐프로파노이드 배당체 및 플라보노이드. gnaphalodes는 항산화 및 tyrosinase 억제 활성을 보였다. 저자는 jaranol이 가장 높은 티로시나제 억제 활성(IC{4}}.041mM)을 보였고 폴리우모사이드가 테스트된 화합물 중에서 최고의 항산화제임을 보여주었습니다. 코직산은 0.02mM(39)의 IC50값을 나타냈다.
의 단백질 수준 감소티로시나제P. atlantica subsp. 뮤티카와항산화제특성 및 감소된 ROS는 이 약제를 멜라닌 생성 방지제로 사용하는 것을 확인했습니다. 이 연구는 처음으로 P. atlanticasubsp의 억제 효과를 확인했습니다. 뮤티카 온멜라닌 생성B16F10 흑색종 세포에서. 멜라닌이 피부에 축적되어 과잉 생성되는 것을 방지하기 위해티로시나제중요한 역할을 합니다. 따라서, P. atlantica subsp.mutica의 보고된 항산화 효과와 관련하여, 플라보노이드 및 페놀 화합물은 P. atlantica subsp. 뮤티카. P. atlantica subsp.의 항산화 및 항멜라닌 생성 활성. mutica는 피부 미백 제제에 적합한 제제를 제공할 수 있으며 피부 관리 제제를 위한 화장품에 포함될 수 있습니다.
결론
결론적으로, 본 연구는 처음으로 P. atlantica subsp. 무티카는 강하다티로시나제멜라닌 감소에 따른 억제 활성. 또한, P. atlanticasubsp. mutica는 또한 높은 소거 활성을 나타내었고항산화제이는 주로 높은 수준의 플라보노이드와 총 폴리페놀 때문일 수 있습니다. 결과는 P. atlanticasubsp. 멜라닌 생성을 감소시키는 mutica는 세포 ROS의 고갈 및 신호 전달 경로 조절에 대한 억제 작용과 관련이 있을 수 있습니다.티로시나제활동. 반극성 추출물은 항티로시나아제와 항염증 작용을 하기 때문에멜라닌 생성따라서 우리는 이러한 효과의 원인이 되는 화합물이 에센셜 오일이 아니라 추출물에 축적된다는 결론을 내렸습니다.
