천연 화장품 프로토타입에서 피부 미백 및 노화 방지제로 Hibiscus Cannabinus L. (kenaf) 잎 추출물의 적용
Mar 26, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
Yan Yi Sim & Kar Lin Nyam
요약
말레이시아에서는 산업폐기물이히비스커스 칸나비누스L.(케나프) 산업, 특히 이직은 지속가능성에 대한 도전을 야기합니다. 케나프 잎의 생물학적 활성은 몇 가지 이전 연구에서 보고되었으므로 케나프 잎 추출물(KLE)이 화장품 제형의 기능성 성분으로 사용될 수 있다고 믿을 수 있습니다. 이에 본 연구의 목적은 KLE를 함유한 천연화장품 제형을 개발하여 이화학적 특성, 미생물학적 특성, 저장안정성, 생물학적 활성(항산화, 항티로시나제,노화 방지), 시험관내 세포독성(정상 인간 진피 섬유아세포 및 B16F1{4}} 흑색종 세포) 및 멜라닌 생성 분석(세포내 티로시나제 활성 및 멜라닌 생성 감소). 결과는 15% 케나프 종자유(KSO)(F2)와 0.1% w/w KLE로 제조한 KLE 로션(KLEL)이 인간 세포에 대한 독성 없이 최고의 물리적 및 미생물학적 안정성을 제공한다는 것을 보여주었습니다. KLEL은 또한 최대 1.84 ± 0 항산화제 함량을 나타냈습니다.{20}}7 mg 카페인산 등가물(CAE)/g 및 21.62 ± 0.76 mg 카테킨 수화물 등가물(CHE)/g(총 페놀 함량(TPC)) ) 및 총 플라보노이드 함량(TFC). 또한 KLEL은 마이코페놀레이트(30.28 ± 3.90%) 및 디페놀(11.40 ± 0.29%) 형성 억제에 대한 항티로시나제 능력을 제시했으며, 처음으로노화 방지콜라게나제(36.41 ± 0.54% ) 및 엘라스타제(23.13 ± 1.56% ) 활성을 억제하여 속성을 개선합니다. 멜라닌 생성 억제 활성과 관련하여, KLEL은 B16F10 세포에서 세포성 티로시나제 활성 및 멜라닌 함량 억제에 높은 효능을 나타냈다. 전반적으로, 이 연구의 결과는 케나프 잎을 사용한 천연 화장품 프로토타입 개발에 매우 유망합니다.
1. 소개
최근에는 자원 부족과 환경 악화의 부정적인 결과를 줄이면서 폐기물 생산을 최소화하고 장기적인 가치를 유지함으로써 폐기물 관리의 지속 가능성을 높일 수 있는 순환 경제 모델이 대중의 관심을 받았습니다(Morseletto, 2020). 일반적으로 공업용 작물 산업에서는 매년 상당량의 경제적 가치가 낮은 부산물이 발생한다.히비스커스 칸나비누스L. KR9(케나프) 산업은 말레이시아 GDP(국내 총생산)에 기여하는 농업 부문 중 하나로 케나프 건조 줄기의 생산 중량이 2013년 7.1톤(000톤)에서 7.6톤({{7} } 톤), 2014년에는 세계 케나프 시장이 2025년까지 8억 5,400만 달러를 넘어설 것으로 예상됩니다(Abdelrhman et al., 2016). 그러나 케나프 종자 및 잎과 같은 많은 부산물이 발생하여 지속 가능성 문제에 기여합니다.
총 부산물 중 상당량을 차지하는 케나프 잎은 생성된 모든 부산물 중에서 특성과 가치가 가장 낮습니다. 순환적 접근 방식 때문에 케나프 잎을 재사용하거나 부가가치 제품으로 회수하는 것이 경제, 환경, 사회 분야에서 다양한 이점을 제공하기 때문에 중요합니다(Coderoni and Perito, 2019). 케나프 잎은 Kho et al에 의해 수행된 연구에 의해 입증된 바와 같이 클로로겐산, 카페인 보조제, 캠페롤 및 카테킨 수화물과 같은 생리 활성 화합물의 풍부한 공급원으로 구성됩니다. (2019); Sim과 Nyam(2019), Haw et al. (2020). 그러나 일반적으로 식이 섬유 및 동물 사료와 같은 경제적 가치가 낮은 제품의 생산을 목표로 합니다(Lim et al., 2020).
"자연으로의 회귀"라는 용어는 식물성 추출물의 사용이 소비자에게 좋은 호응을 얻었기 때문에 화장품 산업 연구 및 개발에서 광범위하게 사용되었습니다. Sim et al. (2019), 케나프 잎 추출물(KLE)은 유망한 항산화 및 항티로시나제 특성을 입증했으며 화장품 개발에서 부가가치 성분으로 사용될 가능성이 있습니다. KLE는 피부에 작용하는 폴리페놀 화합물이 많이 함유되어 있어 안정적이고 안전한 제형의 개발이 중요합니다.희게 함그리고노화 방지속성. 새로운 화장품 제형을 개발할 때는 제형 유형, 사용 목적, 제형에 사용된 성분 간의 잠재적 상호 작용과 같은 몇 가지 요구 사항을 고려해야 하며, 이는 전체적으로 안정성 및 안전성 연구의 필요성에 기여합니다. (가보사와 마이아 캄포스, 2016).
물리적, 화학적, 미생물적 특성에 대한 연구를 포함하는 안정성 연구는 개발 과정 이후의 화장품 제형에 필요합니다. 또한, 부작용이나 알레르기 반응을 방지하기 위해 화장품도 정상 인간 피부 세포주에 대한 시험관 내 세포독성 시험법을 사용하여 시험해야 합니다. 따라서 본 연구의 목적은 KLE(KLE 로션-KLEL)를 함유한 천연 화장품 제형을 개발하는 것이다. 그 다음, KLEL의 물리화학적 특성, 미생물학적 특성, 저장 안정성, 시험관 내 세포독성(정상 인간 진피 섬유아세포 및 B16F10 흑색종 세포에 대한) 및 멜라닌 생성 분석(세포내 티로시나제 활성 및 멜라닌 생성 감소)에 대해 평가하였다. 또한 이 연구를 통해 KLEL의 항산화 및 항티로시나제 활성뿐만 아니라 콜라게나제 및 엘라스타제에 대한 억제 활성도 처음으로 확인할 수 있었습니다.
2. 재료 및 방법
2.1. 식물 재료 및 화학 물질
신선한히비스커스 칸나비누스L. KR9(케나프) 파종 90일 후 잎과 종자는 Lembaga Kenaf & Tembakau Negara(LKTN, Malaysia)로부터 입수하였다. Span 20 및 Tween 80은 Sigma Aldrich(독일 뮌헨)에서, Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG, Emulgade® SE-PF는 BASF(말레이시아)에서, 글리세린은 Croda International Plc에서 구입했습니다. (영국). 정상 인간 진피 섬유아세포(NHDF) 세포주는 Lonza(Basel, Switzerland)에서 공급되었고 마우스 흑색종(B16F10)은 ATCC(Manassas, VA, USA)에서 구매했습니다. Dulbecco의 Modified Eagle Medium(DMEM)은 Nacalai Tesque(일본)에서 구입했습니다. 사용된 다른 모든 화학 물질은 분석 시약 등급(벨기에, 독일, 말레이시아)이었습니다. 분석 전반에 걸쳐 초순수(Millipore, USA)를 사용하였다.
2.2. 행동 양식
2.2.1. 케나프 잎 건조
케나프 잎을 초순수로 세척하고 건조시킨 다음 -8{2}} ◦C에서 밤새 보관하였다. 그 후 시료를 동결건조기(Christ, Germany)에서 0.0004 bar에서 48시간 동안 건조시킨 후 분쇄하여 진공포장하여 -20도에서 보관하였다.
2.2.2. 부분 정제 케나프 잎 추출물(KLE)의 제조
KLE의 펄스 초음파 보조 추출(PUAE)은 Sim et al. (2019). 샘플은 1:10의 비율로 추출 용매(에탄올)로 칭량되었습니다. 그런 다음, 혼합물은 50% 초음파 진폭, 1분 펄스 지속 기간 및 18-22 ± 3도에서 유지되는 온도로 1분 펄스 간격 기간에서 펄스 초음파 보조 추출(Sartorius, Germany)을 받았습니다(3주기 ). 그런 다음 추출물을 여과하고 진공 회전 증발기(Buchi, Switzerland)에서 농축하였다. KLE의 부분 정제는 Seabra et al.에 따라 수행되었습니다. (2010) 약간 수정되었습니다. 조 추출물을 실리카겔이 채워진 컬럼에 적용하고 n-헥산-에틸 아세테이트의 구배 용매(100:{26}}, 90:10, 80:20, 50:50 , 20:80, 10:90, 00:100) 및 에틸 아세테이트 메탄올(100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90) , 00:100). 부분적으로 정제된 KLE는 회전 증발기를 사용하여 농축 건조되었고 향후 사용을 위해 -20도에서 보관되었습니다.
2.2.3. 케나프씨유(KSO)의 용매추출
KSO는 Chew et al.에 따라 추출되었습니다. (2015). 케나프 종자를 분쇄기(Panasonic, Japan)를 사용하여 미세한 분말로 분쇄하고 헥산을 1:5의 비율로 첨가하였다. Soxhlet 추출기를 사용하여 60℃에서 3시간 동안 오일을 추출하고 회전 증발기를 사용하여 헥산을 제거하였다. 질소로 세척한 후 KSO는 향후 사용을 위해 -20도에서 보관되었습니다(Chew et al., 2015).
2.2.4. KLE 함유 로션 제형의 실험적 개발
처음에 로션 베이스 제형(KLE 제외)은 4가지 농도의 케나프 종자유(KSO)(10 퍼센트 , 15 퍼센트 , 20 퍼센트 , 25 퍼센트)를 사용하여 최적화되었습니다. 그런 다음 로션 베이스를 물리적 외관, 냄새, 균질성, pH, 점도, 원심분리 및 동결-해동 평가와 같은 다양한 매개변수에 대해 비교 평가하여 추가 연구를 위한 최상의 로션 베이스 제형을 선택했습니다. 위 매개변수의 결과와 관련하여 KLE(0.1% w/w)(KLEL)와의 통합을 위해 가장 적합한 로션 베이스 제형(15% KSO)이 선택되었습니다. 간단히 말해서, 비극성상(Emulgade® SE PF, Span 20 및 KSO) 및 극성상(물, Tween 80 및 글리세린) 성분을 75 ± 2도까지 가열했습니다. 그 후 극성상에 비극성상을 350rpm으로 마그네틱 스터러(Thermo Fisher Scientific, USA)를 이용하여 빠르게 교반하면서 적가하여 1차 에멀젼을 형성한 후 IKA T25 digital ULTRA를 이용하여 고전단 균질화를 진행하였다. -TURRAX®(IKA Laboratory Equipment, Germany)에서 3분 동안 3200rpm 및 40% 진폭에서 3분 동안 초음파 균질화. Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG 및 KLE를 첨가하고 실온에서 O/W 에멀젼으로 혼합하였다. KLE가 없는 KSO 로션 베이스는 대조군(KSOL) 역할을 합니다. 코직산(0.1% w/w)(KAL)이 첨가된 로션 베이스는 항-티로시나제 활성 및 멜라닌 생성 분석에 대한 양성 대조군으로 사용되었습니다. 카테킨 수화물(0.1% w/w)(CHL)이 첨가된 로션 베이스는 항콜라게나제 및 항엘라스타제 활성에 대한 양성 대조군 역할을 했습니다.
2.2.5. 이화학적 분석
2.2.5.1. 외관, 냄새 및 균질성.
Hanifah와 Jufri(2018)에 따르면 로션 제형의 색상, 냄새 및 균질성, 상 분리에 대해 검사했습니다.
2.2.5.2. pH. 표준 용액은 측정 전에 pH 미터 전극을 보정하는 데 사용되었습니다.
샘플의 pH는 실온에서 pH 측정기(Mettler Toledo, Switzerland)로 측정되었습니다.
2.2.5.3. 색깔.
색상은 비색계(Hunter Lab, United States)를 사용하여 평가됩니다. 결과는 색 공간 L*(밝기), a*(녹색), b*(노란색) 및 전체 색차(ΔE)에 따라 표현됩니다. 모든 샘플에 대한 총 색상 차동 (ΔE)은 다음과 같이 방정식을 사용하여 계산되었습니다. 2√
2.2.5.4. 점도.
샘플의 점도는 Gyawali et al.에 따라 LV{0}} 스핀들을 사용하여 Brook 필드 점도계에서 평가되었습니다. (2016) 약간 수정되었습니다. 샘플을 100rpm 회전 속도로 스핀들에 직접 담그고 점도(cP)를 측정했습니다.
2.2.5.5. 퍼짐성.
시료의 퍼짐성은 평행판법(Gyawali et al., 2016)에 의해 결정되었습니다. 샘플의 무게를 정확하게 측정하고(1g) 유리 슬라이드(20 × 20cm2) 중 하나 위에 둡니다. 그런 다음 샘플의 상단에 다른 슬라이드를 놓고 상단 슬라이드에 100g 추를 올려 샘플이 고르게 눌러지도록 하였다. 1분 후 추를 제거하고 퍼짐 직경(cm)을 측정하였다.
2.2.5.6. 원심분리 평가.
시료를 원심분리 튜브에 넣은 후 3750rpm에서 30분간 원심분리하였다(Eppendorf 5417R, USA). 이 원심분리 테스트({3}}년 중력과 동일)는 샘플의 안정성을 결정합니다(Hiola et al., 2018).
2.2.5.7. 동결-해동 평가.
동결-해동 연구는 몇 가지 수정을 가한 이전 방법에 따라 수행되었습니다(Krongrawa et al., 2018). 각 샘플은 밀폐된 유리 용기에서 6주기 동안 75% ± 2% RH(상대 습도)로 저온 4 ± 1ºC(24시간) 및 고온 45 ± 1ºC(24시간)에서 교대로 보관되었습니다. 샘플의 점도는 온도 스트레스 사이클 후에 결정되었습니다.
2.2.6. 항산화제 함량 결정인자
2.2.6.1. 총 페놀 함량(TPC).
총 페놀 함량은 Lim et al.에 따라 결정되었습니다. (2007). 샘플(10 mg/mL)을 10% Folin-Ciocalteu 시약 및 7.5%(w/w) Na2CO3와 혼합한 다음, 암실에서 30분 인큐베이션했습니다. UV-vis 분광 광도계(Secoman, France)를 사용하여 765 nm에서 흡광도를 측정했습니다. 카페인산의 보정 방정식은 y=0.0269 더하기 9.69x( r2=0.999)였습니다(Sim et al., 2019). 결과는 mg의 카페인산 당량(CAE)/g 샘플로 표시되었습니다.
2.2.6.2. 총 플라보노이드 함량(TFC).
총 플라보노이드 함량은 Ogbunugafo et al.에 따라 평가되었습니다. (2011). 일반적으로 샘플(1{11}}mg/mL)은 15% NaNO2, 10% AlCl3 용액, 초순수, 1M NaOH와 혼합되었습니다. 흡광도는 카테킨 수화물(0.02-0.1 mg/mL)을 사용하여 제조된 표준물질과 비교하여 510 nm에서 즉시 측정되었습니다. 카테킨 수화물의 보정 방정식은 y=0.004 + 3.1x( r2=0.999)였습니다(Sim et al., 2019). 총 플라보노이드 함량(TFC)은 샘플 g당 카테킨 수화물 등가물(CHE)의 밀리그램으로 표시되었습니다.
cistanche 추출물의 장점: 노화 방지
2.2.7. 항콜라게나제 활성
345 nm에서 콜라게나아제와 합성 기질(FALGPA-N-(3-[2-Furyl]-acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala) 간의 단백질 분해에 기반한 항콜라게나아제 활성 콜라게나아제 억제제의 존재는 Barrantes and Guinea(2{11}}03)에 따라 일부 수정으로 수행되었습니다. Clostridium histolyticum에서 유래한 0.25units/mL 콜라게나제(40μL)를 암실에서 10μL 테스트 샘플 및 20μL 50mM 트리신 완충액(pH 7.5, 100mM CaCl2 및 5mM NaCl 포함)과 반응시켰다. 사전 인큐베이션 후, 40 μL의 2 mM FALGPA 용액을 각 웰에 첨가하였다. 각 샘플에는 FALGPA를 제외한 모든 성분이 포함된 블랭크가 수반되었으며 20분 동안 인큐베이션한 후 흡광도가 결정되었습니다.
2.2.8. KLEL의 세균학적 저장 수명 분석
KLEL의 총 호기성 미생물 수(TAMC) 및 총 효모 및 곰팡이 수(TYMC)에 사용된 방법은 FDA 세균 분석 매뉴얼(BAM)에서 수정되었습니다(Huang et al., 2017). 샘플(1g)을 1mL 멸균 Tween 80과 혼합하고 멸균 펩톤수로 부피를 조정하여 10-1에서 10-3의 완전한 희석 시리즈를 얻었다. TAMC의 경우 샘플을 영양 한천에 접종했습니다. 확산 플레이트 방법을 적용한 다음 플레이트를 30 ± 2℃에서 48시간 동안 인큐베이션했습니다. TYMC의 경우, 샘플을 스프레드 플레이트 방법을 사용하여 감자 덱스트로스 한천 플레이트에 접종한 후 플레이트를 30 ± 2℃에서 7일 동안 배양하였다. 배양 기간 후의 미생물 성장에 대해 플레이트를 조사하였다.
2.3. 통계 분석
모든 결과는 Minitab 16.2.1 통계 패키지(Minitab Inc., Pennsylvania, USA)를 사용하여 분석되었으며 일원 분산 분석(ANOVA)을 수행한 후 Tukey의 테스트를 통해 유의미한 차이를 결정했습니다(p < 0="" .05).="" 평균="" ±="" 표준="" 편차(sd)(n="3)가" 데이터="" 분석을="" 위해="">
3. 결과 및 논의
3.1. 로션 베이스 제형 최적화
Hiola 등에 따르면 (2018), 로션 베이스(사전 제형)의 최적화는 우수하고 안정적인 제형을 얻는 데 중요한 역할을 합니다. 따라서 표 1과 같이 4가지 다른 비율의 KSO를 사용하여 로션 베이스를 최적화하였다. 외관, 냄새, 균질성, 물리적 안정성, pH, 퍼짐성, 점도 및 동결-해동 분석(보충재-S1 및 에스2). KSO를 사용하여 제조된 모든 로션 베이스 제형은 옅은 유황색 내지 유황색을 띠고 향이 좋았다(Chu and Nyam, 2020). 얻어진 결과에 따르면 모든 로션 베이스 제형의 pH 값은 피부 pH(4~6) 범위 내였으며, 이는 알레르기 반응을 최소화하고 화장품 제형의 보관 시간에 따른 안정성을 확보하는 데 중요하다(Chu and Nyam , 2020). 모든 로션 베이스 제형은 동결-해동 분석 후 점도가 감소했지만 여전히 좋은 로션(500–5000 cP) 범위 내에 있습니다(Kusuma et al., 2017). 퍼짐성은 KSO의 농도가 높을수록 점도가 높아 퍼짐성 직경이 작아집니다. 퍼짐성이 클수록 화장품 제형이 피부 표면에 더 쉽게 적용될 수 있다. 원심분리 저항성에 의한 안정성 시험에서 F2와 F3은 상분리가 나타나지 않아 두 제형 모두 1년 동안 안정한 것으로 나타났다. 그러나 F3는 F2에 비해 점도가 높아 쉽게 부을 수 없고 크림 제형과 유사한 제형을 보였다. 따라서 F2는 KLE와 통합하기에 최적화된 로션 베이스로 선택되었습니다.
cistanche는 무엇에 사용됩니까? 노화 방지
3.2. KLE 로션(KLEL) 제형 평가
3.2.1. 이화학적 분석
표 2의 결과에 따르면, KLE를 첨가한 로션 베이스는 기분 좋은 냄새와 함께 밝은 유백색을 나타내었고 상분리가 관찰되지 않았다. KLEL은 대조군보다 더 높은 pH 값을 보였으며, 이는 KLE를 화장품 제형에 첨가하면 pH 값이 증가할 수 있음을 나타냅니다. 샘플의 pH 값은 모두 피부 pH 범위와 호환되며 피부에 안전합니다. KLEL과 대조군 사이에 점도 및 퍼짐성에는 유의한 차이가 없었으며, 이는 KLE를 에멀젼에 첨가해도 점도 및 퍼짐성에 영향을 미치지 않음을 나타냅니다. 대조군과 비교하여 KLEL의 L*, a*, b* 값에서 유의한 변화가 관찰되었으며, 이는 로션의 색상이 케나프 잎의 자연스러운 녹색에 영향을 받음을 입증했습니다. KLEL은 * 값(-2.24 ± 0.03)이 가장 녹색이고 b* 값(15.54 ± 0)이 가장 노란색입니다.{13} }1). 대조군과 비교한 KLEL의 총 색차(ΔE)는 p<0.05, klel의="" 경우="" 6.82="" ±="" 0.04의="" 값으로="" 통계적으로="" 유의하였다.="" 이전="" 연구에서는="" δe="2를" 시각적="" 차별의="" 임계값으로="" 간주했습니다(zhou="" et="" al.,="" 2009).="" 따라서,="" δe의="" 결과는="" kle의="" 첨가가="" 화장료="" 제형의="" 색상에="" 영향을="" 미칠="" 수="" 있음을="">
3.2.2. 항산화제 함량 분석
표 3은 총 페놀(TPC) 및 플라보노이드 함량(TFC)의 양을 나타냅니다. 얻어진 결과는 KLE가 포함된 제형화된 로션 베이스가 대조군(1.64 ± 0)보다 TPC(1.84 ± 0.07 mgCAE/g)가 훨씬 더 높은 것으로 나타났습니다.{15}} 6 mgCAE/g). TFC의 경우 KLEL도 대조군(19.42 ± 0.27 mgCHE/g)에 비해 TFC(21.62 ± 0.76 mgCHE/g)에서 유의하게 더 높은 것으로 나타났습니다. 동일한 범위의 일부 식물 부산물에서 피부과를 기반으로 한 KLE의 포함은 여전히 높은 항산화 함량을 나타내어 화장품 산업에서 폴리페놀 화합물의 잠재적 공급원을 강조합니다(Adhikari et al., 2019; Rodrigues et al., 2014 ). Haw et al.의 연구에 따르면 (2020), 케나프 잎은 카페인산, 탄닌산, 카테킨, 클로로겐산과 같은 다양한 유형의 폴리페놀 화합물이 풍부합니다.
3.2.3. 항산화 활성 분석
DPPH와 ABTS assay를 이용하여 로션의 활성산소 소거능을 조사하였다. 표 3은 KLEL이 더 높은 DPPH(1.16 ± 0.18 mgTEAC/g) 및 ABTS(0.50 ± 0)를 나타냄을 나타냅니다.{11}} 4 mgTEAC/g) 대조군과 비교하여 라디칼 소거 활성. DPPH 및 ABTS 분석 결과는 로션 베이스에 KLE를 추가하여 항산화 활성을 크게 향상시킬 수 있는 TPC 및 TFC에서와 유사한 패턴을 나타냈으며, 이러한 결과는 KLE가 화장품 제형에 적용할 때 활성산소 제거제를 함유하고 있음을 시사합니다. 피부 노화를 유발하는 활성산소를 억제하는 1차 항산화제로서 중요한 역할을 합니다. 또한 KLEL(0.69 ± 0.20 mgTEAC/g)도 대조군(0.46 ± 0.09 mgTEAC/g)보다 제2철 이온 환원 능력에서 유의하게 가장 높은 것으로 나타났으며, 이는 다음과 일치합니다. DPPH와 ABTS. 피부 노화를 유발하는 ROS에 대한 개별 피부 항산화 방어 시스템을 회복하기 위해서는 화장품과 같은 외부 소스로부터 항산화 화합물을 지속적으로 공급할 필요가 있습니다(Działo et al., 2016). 또한, 라디칼 소거 활성 및 환원력이 있는 로션 제형으로 피부에희게 함하향 조절된 UV 유도 멜라닌 생성에 의한 에이전트(Działo et al., 2016).
3.2.4. 효소 억제 활성
시험관 내 항티로시나아제 활성 평가를 위해 멜라닌 생합성에 관여하는 구리 함유 금속단백질 효소인 티로시나아제에 대해 로션을 테스트했습니다. 표 5는 L-티로신을 기질로 사용할 때 KLEL(3{14}}.28 ± 3.90%)이 양성 대조군(34.05 ± 4.60%)과 항티로시나제 활성에서 유의한 차이를 나타내지 않았음을 보여줍니다. . 그러나 ALL(11.40 ± 0.29%)은 L-DOPA를 기질로 사용할 때 양성 대조군(15.01 ± 0.84%)보다 낮은 항티로시나제 활성을 나타냈습니다. 이는 KLEL이 디페놀보다는 마이코페놀레이트를 주로 억제함을 보여주었다. 시험관 내노화 방지콜라게나제 및 엘라스타제 억제 활성을 통해 특성을 평가하였다. 콜라게나제 및 엘라스타제와 같은 효소는 피부 무결성과 탄력을 담당하는 콜라겐 및 엘라스틴을 분해할 수 있습니다(Jesumani et al., 2{4}}19). 따라서 엘라스타제와 콜라게나제 활성을 억제하면 엘라스틴과 콜라겐의 분해가 감소하여 노화의 주요 징후 중 하나인 주름 형성을 예방할 수 있습니다. 표 5에 나타난 바와 같이 KLEL은 양성대조군(CHL)에 비해 현저한 항콜라게나제(36.41 ± 0.54%) 및 항엘라스타제(23.13 ± 1.56%) 활성을 나타냈다. KSOL은 또한 항티로시나제(18.82 ± 0.17%(기질로서의 L-티로신), 8.48 ± 0.29%(기질로서의 L-DOPA), 항콜라게나제(18.84 ± {{26 }}.63%) 및 항엘라스타제(5.78±0.59%) 활성을 나타내지만 ALL보다 낮습니다. 이는 KLE와 KSO의 조합이 더 나은 효소 억제 활성과 함께 상승적 효과를 나타냄을 나타낼 수 있습니다. 이는 다음에서 수행된 연구에 의해 뒷받침됩니다. Pascoal et al.(2015) 및 Chew et al.(2016)에서 KSO는 토코페롤이 풍부하고 KLE는 케르세틴 및 캠페롤 유도체가 풍부합니다.희게 함그리고노화 방지피부 과색소침착 및 주름 생성 감소에 관심이 있는 속성(Lin et al., 2007; Keen and Hassan, 2016).
3.2.5. 시험관내 멜라닌 생성 분석
피부를 더 탐구하기 위해희게 함KLEL의 특성, B16F10 흑색종 세포 모델을 사용하여 멜라닌 생성에 대한 억제 효과를 연구했습니다. 세포성 티로시나제 활성의 경우, 도 5a에 나타낸 바와 같이, 500 ug/mL에서 KLEL(32.35%)이 a-MSH와 비교할 때 KAL(14.85%) 및 KSOL(13.64%)보다 세포성 티로시나제 활성에 대한 훨씬 더 강한 억제를 나타냈다. 처리된 대조군 세포. 세포 외 및 세포 내 멜라닌 함량의 경우, KLEL은 B16F10 세포의 멜라닌 함량을 용량 의존적으로 감소시켰다(도 5b 및 c). ALL(500ug/mL)은 KAL(54.53%)과 함께 세포외 멜라닌 함량(56.13%)(MSH 처리된 대조군 세포와 비교)에 필적할만한 억제 효과를 갖는 것으로 밝혀졌습니다. 또한 KLEL(36.52%)은 KAL(7.98%)보다 세포내 멜라닌 함량에 대한 억제 효과가 더 강한 것으로 나타났다. 반면, KSOL은 세포외 멜라닌 함량에 대한 억제 효과(17.73%)를 나타내었지만 세포내 멜라닌 함량에는 영향을 미치지 않았다. KAL과 비교할 때, 멜라닌 생성 억제에 대한 KLEL의 더 강한 억제 영향은 KSO와 KLE 간의 상승 작용에 의해 명확해질 수 있으며, 이는 로션 베이스의 KLE 피부 미백 특성을 향상시킬 수 있습니다. 이러한 결과는 KLE가 천연 화장품 프로토타입에서 효과적인 피부 미백제로 사용될 수 있음을 추가로 입증했습니다.
3.2.6. 시험관내 세포독성 분석
KLEL의 생체 적합성을 평가함으로써(MTT 분석), 상이한 KLEL 농도(0.125-2 mg/mL)의 존재 하에 성장한 NHEF 세포 생존력(24, 48, 72시간 후)이 상기보다 높게 유지되었습니다. 95%(그림 4a). 이것은 KLEL이 인간에게 독성을 일으키지 않는다는 것을 보여주었습니다. B1610 흑색종 세포는 피부 연구에 널리 사용되는 반면희게 함에이전트(Chatatikun et al., 2019; Lee et al., 2019). KLEL이 B16F10 흑색종 세포에서 멜라닌 생성을 억제하는 능력을 측정하기 전에, KLEL의 세포독성을 평가하였다. 도 4b에 나타난 바와 같이, KLEL은 500 ug/mL 미만의 농도에서 B16F10 흑색종 세포에 독성이 없음을 확인하였다. 이와 같이 32.5-500 ug/mL KLEL을 다음 실험에 사용하였다.
4. 결론
이 연구는 케나프 잎이 화장품 산업의 스킨케어 특성, 즉 항산화제,노화 방지, 및 항 멜라닌 생성 활성. 연구에서 제시된 결과는 또한 15% KSO(F2)와 0.1% KLE로 제조된 로션 제형이 인간 세포에 대한 독성 없이 최고의 물리적 및 미생물학적 안정성을 제공한다는 것을 보여주었습니다. 계속해서 KLEL 미생물 챌린지 테스트 및 임상 효능에 대한 추가 연구가 집중되어야 합니다.
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