한의학 시스탄체 화학성분 및 체내성분 분석 Ⅲ

제2장 Cistanche Deserticola의 화학적 조성에 관한 정성적 연구

시스탄체(Cistanche)는 마른 비늘 모양의 잎 다육질의 줄기입니다.Cistanche Deserticola YC.Ma그리고 Cistanche tubeulosa (Schenk) R.Wight. 한의학의 유명한 신장양자양약 중 하나이다. 그것은의 기능을 가지고 있습니다영양신장양, 진과 혈액을 보충하고 습윤하게 하는 완하작용이 있어 발기부전, 불임, 허리와 무릎의 쓰림, 근육과 뼈의 허약, 장마름과 변비 등을 치료하는데 흔히 사용된다. 치매, 항파킨슨병, 뇌허혈로부터 보호, 학습 및 기억 능력 향상. 물질적 근거를 명확히 하기 위해시스탄체 데저티콜라의 효능, 이 장에서는 HPLC 및 LC-IT-TOF-MS를 사용하여시스탄체의 화학성분. 다양한 유형의 화학 성분의 분해 규칙에 대한 체계적인 요약을 바탕으로 Cistanche Deserticola의 특성을 체계적으로 분석합니다. 신뢰할 수 있는 소스로부터 풍부한 데이터를 제공하기 위한 화학 성분심층적인 설명의학적 특성 중시스탄체 데세르티콜라생체 내.

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CISTANCHE가 작동하는 데 얼마나 걸리나요?

섹션 1 실험 재료

1. 악기

Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS 액체 질량 분석기(2 LC-20ADXR 펌프 장착, SIL-20AC 자동 샘플러, CTO-20AC 컬럼 오븐, SPD-M20A UV 검출기, DGU-20A3R 오염 제거 가스 기계, CBM-20컨트롤러, ESI 이온 소스, Shimadzu Company, 일본), Milli-Q 초순수 정수 시스템(Milipore Company, 미국): Mettler ME204 전자 분석 저울( Mettler Toledo Company, 스위스).

2. 시약

크로마토그래피 등급 및 질량 분석 등급 메탄올, 아세토니트릴 및 질량 분석 등급 포름산은 Thermo-Fisher Company(미국 펜실베니아주 피츠버그)에서 구입했습니다. 물은 실험실(Millipore, Bedford, MA, USA)에서 제조한 Milli-Q 초순수를 사용하였다. 나머지 시약은 모두 분석등급입니다.

Salidroside, 6-deoxycatalpol, 8-epi-loganic acid, echinacoside, acteoside, isoside Verbascoside(isoacteoside,) 및 피노레시놀- -D-글루코피라노사이드(pinoresinol- -D-glucopyranoside) 두 가지 모두 북경 대학교 천연 및 생체 모방 약물 핵심 연구소의 Tu Pengfei 교수 연구 그룹에서 제공한 것입니다. Sarcoside F(cistanosideF)는 Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.에서 구입했으며, cistanoside A(cistanoside A), 2'-아세틸액티오사이드(2'-아세틸액티오사이드), 2'-아세틸폴리우모사이드(2'-아세틸폴리우모사이드), 시스타노사이드 폴리글루코사이드(poliumoside) ), 시스타노사이드 E(cistanosideE), 이소시스타노사이드 E(isocistanosideE), 시스타노사이드 C(cistanosideC), 이소시스타노사이드 C(isocistanosideC) 및 시스타노사이드 D(cistanosideD)는 모두 Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd.에서 구입했으며, 튜불로사이드 A(tubulosideA) 및 튜불로사이드 B(tubulosideB)는 Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.에서 구입했습니다.

섹션 2 실험 내용

1. 샘플 준비

1.1 기준물질의 제조

위 "제1절 실험재료"의 각종 대조물질을 적당량씩 정밀하게 달아 DMSO를 첨가한 10mM 원액을 준비한다. 각 원액 2mL를 정확하게 피펫팅하고 25% 아세토니트릴로 희석하여 2μM 혼합 대조 용액을 만듭니다. 1.2 시험용액의 조제

Cistanche Deserticola의 수용성 추출물은 우리 연구실에서 제조되었으며, 샘플은 북경중의약대학교 중의학부 한의학 현대화 연구센터에 보관되어 있습니다. 시스탄체데데티콜라 분말 20 mg을 취하여 물 40 mL를 넣어 녹인 후 와류혼합한 후 10000 rpm으로 10분간 원심분리하고 상등액을 취한다. 즉, 시험용액을 얻는다.

3. 질량분석 조건

ESI(Electrospray Ion Source) 스캐닝 모드는 양이온과 음이온을 동시에 스캔하고 다중 레벨 질량 분석법을 자동으로 트리거하는 것입니다. MS'~MS'의 질량 스캐닝 범위는 양이온의 경우 m/z50~800이고, 음이온의 경우 m/z100~1000입니다. 스프레이 챔버의 전압은 각각 4.5kV 및 -3.5kV입니다. 분무 가스(Nz) 유량은 1.5Lmin입니다. 건조 가스 압력은 110MPa입니다. 검출 전압은 1.55kV이다. 곡선형 탈용제 튜브(CDL)와 가열 모듈의 온도는 모두 200도입니다. 충돌실 압력은 1.5e-Pa입니다. 이온 트랩 압력은 2.8e-Pa이고; 양성 및 음성 첫 번째 단계의 반복 횟수는 1이고 이온 축적 시간은 30ms입니다. 양극 및 음극 두 번째 단계의 반복 횟수는 2이고 이온 축적 시간은 20ms입니다. ; 충돌 유발 해리(CID) 에너지는 50%입니다.

섹션 3 결과 및 논의

열 선택

더 나은 크로마토그래피 분리를 얻기 위해 우리는 ACEUltraCore 2.5 SuperC8 크로마토그래피 컬럼(3.0x150mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Scotland)과 같은 다양한 제조업체 및 사양의 크로마토그래피 컬럼을 광범위하게 스크리닝했습니다. Shiseido Capcell Core Ci8(2.1mm x 150mm, 2.7μm), Waters Acquity UPLC HSS T3 컬럼(2.1 x 100mm, 1.8μm, Milford, MA, USA) 및 Capcell Core ADME 컬럼(2.1x150mm, 2.7μm, Shiseido Corporation, 일본). 체계적인 비교를 통해 Capcell Core ADME 크로마토그래피 컬럼(2.1x150mm, 2.7μm, Shiseido Co., Ltd., Japan)을 사용할 경우 각 크로마토그래피 신호를 더 잘 분리할 수 있는 것으로 나타났습니다(그림 3-1).

2. 액상 조건의 선택

주요 화학 성분이기 때문에시스탄체 데세르티콜라페닐에탄올 배당체, 리그난, 이리도이드 및 기타 화합물이며 일반적으로 음이온 조건에서 더 잘 반응합니다. Cistanche Deserticola의 물 추출물에서 미량의 화학 성분을 확인하기 위해서는 이동상에 산을 첨가하여 출력을 향상시켜야 할 것으로 추측됩니다. 따라서 본 실험에서는 조사를 위한 이동상 시스템으로 물-메탄올, 물-아세토니트릴, 0.1% 포름산 물-메탄올 및 0.1% 포름산 물-아세토니트릴을 사용했습니다. 0.1% 포름산수-아세토니트릴이 분리 효과가 가장 좋고 피크 모양이 양호하고 피크 용량이 큰 것으로 확인되었으므로 0.1% 포름산수와 아세토니트릴을 선택했습니다. 이동상. 3. 화학성분의 정성분석. 19개의 기존 참조 물질을 사용하여 Cistanche Deserticola의 다양한 유형의 화합물에 대한 질량 분석 단편화 규칙을 탐색합니다. 혼합된 기준 물질은 ADME 열의 340nm에서의 PDA 크로마토그램과 양이온 및 음이온 모드의 BPC 차트입니다. 그림 3-1을 참조하세요. PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP, Wanfang 등을 통해 관련 문헌을 검토하고 Cistanche Deserticola의 화학 성분에 대한 자체 제작 데이터베이스를 구축했습니다. 질량분석법 단편화 규칙과 알려진 화합물의 유지 시간을 비교하여 Cistanche Deserticola에서 45개의 화합물을 예비 식별했습니다. 표 3-1에 표시된 대로 31개의 페닐에탄올 글리코사이드, 9개의 이리도이드, 3개의 벤질 글리코사이드 및 2개의 리그난을 포함하는 화합물.

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기준물질의 기밀성 시간, MS 스펙트럼과 MS 스펙트럼을 비교하여 화합물 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 genipin, cistanchein F, cistancheoside E, echinaceaside, chrysantoside, cistanchein A, tuberosin A, larchresinol 4-0- -D glucoside, mullein 배당체, isocannabinoid 배당체, pinoresin 모노메틸 에테르 배당체, 2'아세틸 베르바스코사이드, cistanche 배당체로 순차적으로 정확하게 식별되었습니다. C, 이소시아스탄코사이드 C, 투베로신 B, 시스탄체 글리코사이드 D.

본 실험에서는 HPLC-IT-TOF-MS 기술을 사용하여 시스탄체 데저티콜라 물 추출물의 복잡한 화학 성분을 빠르고 정확하게 체계적으로 분석하여 시스탄체 데데티콜라의 종합적인 품질 분석 및 생체 내 약리학적 물질 연구의 기반을 제공합니다.

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