덴드리머-테사글리타자르 접합체는 소교세포의 표현형 변화를 유도하고 아밀로이드 식세포작용을 향상시킵니다† 파트 1
Jul 15, 2024
질병을 악화시키는 '전염증' 상태에서 신경 보호, '항염증' 표현형으로 미세아교세포를 전환하는 것은 여러 신경퇴행성 질환을 해결하기 위한 유망한 전략입니다.
소교세포(Microglia)는 주로 뉴런의 건강과 기능을 유지하는 일을 담당하는 중추신경계의 세포 유형입니다. 다양한 성장인자와 신경영양인자를 분비할 수 있으며, 신경세포 주변의 노폐물을 제거하여 신경세포의 정상적인 대사 활동을 유지할 수 있습니다. 최근 몇 년간의 연구에 따르면 소교세포는 기억과 밀접한 관련이 있는 것으로 나타났습니다. 함께 살펴보겠습니다.
첫째, 소교세포는 뉴런을 자극하고 뉴런의 활성화를 촉진하여 기억력을 향상시킬 수 있습니다. 글루타메이트 및 알라닌과 같은 일련의 신경 전달 물질을 방출함으로써 미세아교세포는 뉴런 간의 신호 전달을 촉진할 수 있으며 시냅스전 막 사이의 신경교-뉴런 신호 공명을 향상시켜 뉴런의 흥분성과 기억 형성을 더욱 촉진할 수 있습니다.
둘째, 소교세포는 뉴런 주변의 노폐물을 제거하고 뉴런의 정상적인 대사 활동을 유지하며 뉴런 사망률을 감소시켜 기억력 향상을 촉진할 수도 있습니다. 신경세포 주변에 쓰레기가 너무 많이 쌓이면 신경세포의 정상적인 대사 활동에 영향을 미쳐 신경세포 사멸과 기능 약화로 이어져 기억력 저하를 초래하게 된다. 소교세포는 뉴런의 정상적인 대사 환경을 유지하고, 주변 노폐물을 삼키고 분해하여 뉴런 사망률을 감소시켜 기억력을 향상시킬 수 있습니다.
요약하면, 소교세포는 기억과 밀접한 관련이 있습니다. 뉴런의 흥분을 촉진하고 주변 폐기물을 제거함으로써 소교세포는 기억력을 더욱 향상시키고 뇌를 건강하고 활동적으로 유지할 수 있습니다. 더 나은 기억력을 얻으려면 소교세포의 건강을 보호하는 데 주의를 기울여야 합니다. 기억력 향상이 필요하다는 것을 알 수 있는데, 시스탄체는 기억력 향상이라는 독특한 효능이 많은 중국의 전통 약재이기 때문에 기억력을 크게 향상시킬 수 있습니다. 시스탄체의 효능은 탄닌산, 다당류, 플라보노이드 글리코사이드 등 포함된 다양한 활성 성분에서 비롯됩니다. 이러한 성분은 다양한 방식으로 뇌 건강을 증진할 수 있습니다.
전염증성 소교세포는 신경독성 물질을 방출하고 병원성 단백질 축적을 가속화함으로써 질병 진행에 기여합니다. PPAR 및 PPAR 작용제는 모두 소교세포를 전염증성('M1-like')에서 대안적으로 활성화된('M{2}}like') 표현형으로 전환시키는 것으로 나타났습니다. 이러한 전략은 알츠하이머병 및 파킨슨병과 같은 신경 질환에 대한 임상 시험에서 탐구되었지만 혈액 뇌 장벽(BBB) 침투가 좋지 않아 실패했을 가능성이 높습니다.
하이드록실 말단 폴리아미도아민 덴드리머(표적 리간드가 부착되지 않음)는 신경염증 부위에서 손상된 BBB를 통과하여 활성화된 소교세포에 축적되는 것으로 나타났습니다.
따라서, PPAR/이중 효능제의 덴드리머 접합은 활성화된 소교세포의 표적화된 표현형 전환을 가능하게 할 수 있습니다. 여기에서는 새로운 덴드리머-PPAR/이중 작용제 접합체(D-tesaglitazar)의 합성 및 특성 분석을 제시합니다.
시험관 내에서 D-테사글리타자는 'M1에서 M2' 표현형 전환을 유도하고, 활성 산소종의 분비를 감소시키며, 식세포작용을 위한 유전자 발현과 병원성 단백질(예: -아밀로이드, -시누클레인)의 효소적 분해를 증가시키며, -아밀로이드 식균작용을 증가시킵니다.
이러한 결과는 다양한 신경퇴행성 질환, 특히 알츠하이머병 및 파킨슨병에 대한 번역을 향한 D-tesaglitazar의 추가 개발을 뒷받침합니다.
소개
미국에만 현재 알츠하이머병(AD) 환자가 530만 명이 넘고 파킨슨병(PD) 환자가 100만 명이 넘습니다.1 연령 증가가 많은 신경퇴행성 질환의 가장 큰 위험 요인이므로 이러한 질병의 유병률과 치료 비용이 증가합니다. 인구가 계속해서 노령화됨에 따라 계속해서 증가할 것입니다.
더욱이, 최근 이러한 질병을 치료하기 위한 새로운 약물 개발의 성공이 부족하여 혁신적인 치료법 개발의 필요성이 강조되었습니다.2,3 이러한 임상적 실패는 충분한 농도의 약물을 뇌에 전달하지 않고 효능을 발휘하는 것을 포함하여 약물 개발의 어려움을 강조합니다. 불리한 부작용을 일으키게 됩니다.
AD 및 PD와 같은 신경퇴행성 질환은 신경염증, 병원성 단백질 축적, 신경사멸이라는 세 가지 주요 신경병리학적 구성요소를 공유합니다.4-7 건강한 사람의 경우 뇌의 선천적 면역 세포(미세아교세포)는 잘못 접힌 단백질(예: -아밀로이드, -시누클레인)을 지속적으로 식균합니다. )이 생성될 때 신경 세포 사멸을 유발하여 특징적인 집합체가 형성되는 것을 방지합니다.
그러나 결국 신경퇴행성 질환이 발병하는 사람들의 경우 소교세포는 더 이상 이러한 단백질을 효과적으로 제거하지 못하고 질병을 악화시키는 전염증성 표현형(일반적으로 M1으로 지정됨)으로 전환됩니다.
소교세포 활성화의 주로 전염증성/항염증성(M1/M2) 분류는 대식세포 분극 스펙트럼을 지나치게 단순화한 것이지만, 신경염증 및 치료에 대한 반응에서 소교세포의 지배적인 표현형을 설명하기 위한 광범위한 명명법으로 여전히 사용됩니다.
M1-미교세포는 병원성 단백질(예: -아밀로이드, -시누클레인)의 생성을 증가시켜 신경세포 사멸을 유도하고 질병 병리를 악화시키는 활성 산소종과 기타 염증 매개체를 방출합니다.
더욱이, AD 발병의 주요 유전적 위험 인자(TREM2 및 APOE)는 소교세포에서 높은 수준으로 발현되며, TREM2/APOE 경로는 AD, 근위축성 측삭 경화증(ALS) 및 다발성 경화증에서 소교세포 표현형 변화를 유발하는 것으로 나타났습니다. 동물 모델.8
이러한 발견은 다양한 인간 신경퇴행성 질환의 병리학에서 소교세포의 역할을 더욱 입증합니다. 미세아교세포의 표현형을 조작하는 접근법을 통해 연구자들은 잠재적으로 효과적인 치료법이 될 수 있을 뿐만 아니라 신경퇴행성 질환에서의 역할을 이해할 수 있습니다.
미세아교세포를 M1에서 항염증 및 신경보호성(M2) 표현형으로 전환하는 것이 여러 신경퇴행성 질환을 치료하기 위한 치료 전략으로 제안되었습니다.5,6 현재 FDA가 승인한 두 가지 PPAR 작용제인 제2형 당뇨병 약물인 로시글리타존과 피오글리타존은 다음을 유도하는 것으로 나타났습니다. 시험관 내 및 생체 내에서 대식세포와 미세아교세포의 M1에서 M2 표현형으로의 변화.
9,10 PPAR 작용제는 NF-κB분해를 유도하고 핵으로부터의 수출과 리간드 의존적 전사억제를 유도하여 NF-κB의 활성을 감소시킴으로써 LPS에 의한 활성 산소종의 분비를 감소시키는 것으로 나타났습니다.11
또한, 역학 연구 결과에 따르면 로시글리타존 또는 피오글리타존을 복용하는 당뇨병 환자는 AD 및 PD 발병 위험이 감소하는 것으로 나타났습니다.12 이후 로시글리타존과 피오글리타존은 AD에 대한 3상 임상 시험을 통해 조사되었으나 실패했습니다.13
앞서 언급한 임상 실험이 실패한 이유 중 하나는 혈액뇌관문(BBB)을 통과하는 약물의 수송이 좋지 않아 임상 실험에 등록한 환자의 뇌에 도달하는 약물의 수가 제한된다는 점입니다.14
실제로 BBB는 모든 소분자 약물의 약 98%가 뇌에 도달하는 것을 방지하고 뇌에 들어가는 약물의 일부만이 소교세포에 도달하는 것으로 추정됩니다.15
또한, PPAR은 PPAR 계열의 또 다른 핵 수용체입니다.16 이는 지질 항상성과 염증 조절에 역할을 하며, PPAR 작용제는 소교세포에서 항염증 효과도 나타내는 것으로 나타났습니다.
신경 영상, 사후 조직 분석 및 CSF 바이오마커를 사용한 임상 연구는 AD 및 PD뿐만 아니라 기타 신경퇴행성 질환에서 BBB가 손상된다는 증거를 제공했습니다.
17세대-4 하이드록실 말단 폴리아미도아민(G4-PAMAM-OH) 덴드리머는 다양한 신경염증 질환 모델에서 전신 투여 후 손상된 BBB를 본질적으로 우회하고 표적 리간드 없이 활성화된 미세아교세포에 축적되는 것으로 나타났습니다. 설치류, 토끼, 개 및 인간이 아닌 영장류를 포함합니다.18-28 중요한 점은, G4-PAMAM-OH는 전신적으로 투여될 수 있으며 Rett 증후군과 같은 경미한 BBB 장애가 있는 질병 모델에서 BBB를 통과할 수 있다는 것입니다.29
또한 G4-PAMAM-OH가 뇌로 흡수되는 정도는 뇌성마비 토끼 모델의 질병 심각도에 정비례합니다.30 하이드록실 말단 덴드리머는 매우 침습적인 국소 전달에 비해 비침습적으로 전달된다는 장점이 있습니다. 폴리-ε카프로락톤 및 PEG와 같은 다른 나노입자, 음전하를 띤 PAMAM 덴드리머, 양자점 및 폴리에틸렌이민(PEI) 및 덱스트란 황산염으로 구성된 나노제형을 사용한 이전 연구에서 요구되는 두개골.31-35
또한, 이러한 하이드록실 PAMAM 덴드리머는 확장성과 내약성이 좋은 생체 내 안전성 프로파일로 인해 번역에 이상적인 위치에 있습니다.36-38 긍정적인 전임상 효능 데이터로 인해 (G4-PAMAM-OH)-N- 아세틸-시스테인 결합체는 현재 소아 뇌부신백질이영양증(NCT03500627) 및 중증 코로나바이러스 질환2019(COVID{11}}) 관련 염증(NCT04458298)에 대한 초기 임상 시험에서 평가되고 있습니다.
우리는 세대-4 수산기 말단 PAMAMdendrimer에 부착된 tesaglitazar(Tesa)의 덴드리머-약물 접합체를 연구했습니다. Tesaglitazar는 PPAR 및 PPAR 작용제의 유익한 효과를 결합한 강력한 PPAR/이중 작용제입니다. 이는 덴드리머에 대한 공유 결합 및 후속 방출을 위한 카르복실산 작용기를 함유합니다.
추가 기타가 개발되어 임상적으로 테스트되었지만 PPAR 대 PPAR 활성 비율이 더 크고 상대적으로 단순한 화학 구조 및 안전성 프로필로 인해 Tesa가 선택되었습니다.39-43
Tesa는 이전에 미국에서 제2형 당뇨병에 대한 제3상 임상 시험에 도달했지만 용량 의존적 독성으로 인해 실패했습니다. 이는 조절된 덴드리머 전달을 통해 필요한 투여 용량을 줄임으로써 예방할 수 있습니다.39,40,44Tesa는 PPAR/이중 작용제, 신경염증 부위의 활성화된 소교세포에 대한 표적 전달이 매우 유익할 수 있습니다.
여기에서 우리는 덴드리머-테사글리타자르 접합체(D-Tesa)의 합성 및 특성화를 입증하고 소교세포에서 'M1에서 M2' 표현형 이동을 유도하고 형광 표지된 -아밀로이드의 식세포작용을 향상시키는 이 화합물의 능력을 입증합니다.
재료 및 방법
재료
1-[3-(디메틸아미노)프로필]-3-에틸 카르보디이미드 메티오다이드(EDC), 4(디메틸아미노)피리딘(DMAP), CuSO4·5H2O, 아스코르브산나트륨, 헥시노산 및 소 혈청 알부민 (BSA)는 Sigma Aldrich US에서 구입하여 받은 대로 사용했습니다(미주리주 세인트루이스).
Tesaglitazar는 AstaTech Inc.(Bristol, PA)로부터 구입했습니다. 에틸렌디아민-코어 PAMAM 덴드리머(64개의 하이드록실 말단기를 갖는 4세대)는 Dendritech Inc.(Midland, MI)로부터 메탄올 용액으로 입수되었습니다.
덴드리머를 4도의 메탄올에 보관하고 사용하기 전에 메탄올을 증발시켰습니다. MWCO(분자량 기준)가 1 kDa인 투석막은 Spectrum Laboratories Inc.(New Brunswick, NJ)에서 구입했습니다.
다른 모든 용매는 무수 형태로 사용되었습니다. 구리(I), 촉매 알킨-아지드 고리 첨가(CuAAC) 클릭 반응을 제외한 모든 반응은 불활성 질소 하에서 오븐 건조된 유리 제품이 포함된 유기 매질에서 무수 조건에서 수행되었습니다. 대기.
세포 배양용:Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM), fetal bovineserum(FBS), penicillin-streptomycin(P/S), 0.05% trypsin-EDTA 및 MTT 시약은 Invitrogen(Carlsbad, CA)에서 구입했습니다. , 미국).
Griess 시약은 Promega(Madison, WI)에서 구입했고 TNF-ELISA는 R&D Systems(Minneapolis, MN)에서 구입했습니다. 분석 등급 메탄올은 Sigma-Aldrich에서 구입했습니다. Trypan blue는 Corning(Manassas, VA, USA)에서 구입했습니다.
D-Tesa 접합체의 합성 절차
테트라에틸렌 글리콜 모노 아지드(2)는 이전에 발표된 프로토콜을 사용하여 합성되었습니다.45
Tesa-TEG-azide(3)의 합성 및 정제.
Tesa(950 mg, 2.32 mmol)를 디메틸포름아미드(DMF) 10 ml에 용해시켰습니다. 이 교반된 용액에 DMF(1 ml) 중의 테트라메틸렌 글리콜 모노-아지드(2, 662.1 mg, 3.02 mmol)를 적가하였다. 이어서, DMAP(255.4mg, 2.09mmol) 및 EDC(577.5mg,3.02mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 반응물을 질소 퍼지 하에 실온에서 24시간 동안 교반하였다.
반응은 박층 크로마토그래피와 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 모니터링되었습니다. 반응 혼합물을 디클로로메탄(DCM) 100ml로 희석하고 조 반응 혼합물을 분별 깔대기로 옮기고 유기층을 포화 중탄산나트륨 용액, 이어서 포화 염화암모늄 용액, 마지막으로 염수로 3회 세척했습니다.
그 후, 유기층을 무수황산나트륨으로 건조시켰다. 그런 다음 회전 증발기를 사용하여 유기층의 용매를 제거하고 용액을 3 ml DCM에 재용해시킨 후 실리카 겔에 흡수시키고 용매로서 에틸 아세테이트/헥산을 사용하는 구배 방법을 사용하여 CombiFlash® 크로마토그래피 시스템으로 정제하여 투명한 3을 생성했습니다. -노란 기름.
원하는 순수한 생성물은 약 30-40% 에틸 아세테이트에서 용출됩니다. (수율: 70%.) 1H NMR (500MHz, CDCl3) δ 7.27 (d, J=8.6Hz, 2H), 7.15(d, J=1.9Hz, 2H), 7.08(d, J=8.6Hz, 2H), 6.73(d, J=8.6Hz,2H), 4.25~4.14(m, 2H), 4.07(t, J {{ 33}}.8Hz, 2H), 3.94(dd, J =7.8, 5.2Hz, 1H), 3.67~3.47(m, 14H), 3.30(dd, J=8.7 , 3.8Hz, 2H), 3.06(초, 3H), 3.02(t, J=6.7Hz, 2H), 2.91~2.84(m, 2H), 1.08(t, J=7 .0Hz, 3H).ESI-MS: 이론상 C28H39N3O10S: 609.24, 획득량(M+ 1):610.13.
DYNE(5)의 합성 및 정제.
(480 mg, 4.22 mmol)을 20 ml 무수 DMF에 녹인 G4-PAMAM-OH(2.5 g, 0.176 mmol)의 교반 용액에 첨가했습니다. 이 혼합물에 DMAP(430mg, 3.52mmol) 및 EDC(1g,5.28mmol)를 첨가하였다.
반응 혼합물을 질소 퍼지 하에 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되면 반응 혼합물을 1000 MWCO 투석관으로 옮기고 24시간 동안 DMF 투석을 실시하였으며, 약 6시간마다 DMF를 교체하였다.
그런 다음 탈이온수(DI water)를 이용한 투석을 24시간 동안 수행하였고, 물은 약 6시간마다 교체하였다. 마지막으로, 생성된 투석 튜브 내용물을 48시간 동안 동결건조시켜 흰색의 푹신한 분말을 얻었다.(수율: 61%.) 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.10-7.67 (m, dendrimerinternal amide H), 4.72 (s, 덴드리머 표면 OH), 4.01(t,에스테르 –CH2), 3.32(m, 덴드리머 –CH2), 3.06(m, 덴드리머 및 링커 –CH2), 2.85–2.58(m, 덴드리머 –CH2), 2.56–1.89(m, 덴드리머 및 링커 –CH2), 1.78–1.61(m, 링커 –CH2). D-Tesa(6)의 합성 및 정제.
Tesa-TEG-아지드(3,177.8 mg, 0.3{{1{15}}}}3 mmol)를 D-YNE(5, 35{{2{{27})의 교반 혼합물에 첨가했습니다. }}} mg, 0.023 mmol)을 전자레인지 반응기 안전한 20 ml 바이알에 담긴 테트라히드로푸란(THF)과 물과 0.5 ml의 DMF의 1:1 혼합물 5 ml에 용해합니다. CuAAC 클릭 반응을 위해, 황산구리 5수화물(11.6mg, 0.0467mmol) 및 (+)-나트륨-라스코르베이트(9.3mg, 0.0467mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다.
바이알을 밀봉하고, 반응 용기를 Biotage® Initiator 마이크로파 반응기에 놓고 50도에서 8시간 동안 교반하면서 20W 마이크로파 방사선 하에 반응시켰습니다. 반응 혼합물을 1000 MWCO 투석 튜브로 옮기고 약 4시간마다 DMF를 새로운 용매로 교체하면서 24시간 동안 DMF 투석을 수행하였다.
그 후, 투석용 튜브의 내용물을 아팔콘 튜브로 옮기고, 동량의 DI수를 첨가하였다. 또한, 팔콘 튜브의 내용물에 에틸렌디아민테트라아세트산 이나트륨염 용액 200 μl를 첨가하였다.
이어서, 이 혼합물을 새로운 1000 MWCO 투석 튜브에 넣고, EDTA 용액이 첨가된 1000 ml DIwater에서 12시간 동안 투석을 수행한 후, 12시간 동안 물 투석을 수행하였다.
이어서, 혼합물을 48시간 동안 동결건조시켜 백색의 푹신한 분말을 생성하였다. (수율: 64%.) 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.2–7.6 (m, 덴드리머 내부아미드 H), 7.36 (d, Tesa ArH), 7.21 (d, Tesa ArH), 7.03 (d, TesaArH), 6.76(d, Tesa ArH), 4.37(s, Tesa H), 4.18–4.04(m, 링커H), 3.96(dd, Tesa 및 링커 H), 3.70(m, Tesa 및 링커 H) ,3.58–3.14 (m, 덴드리머 –CH2), 3.14–2.86 (m, 덴드리머 –CH2), 2.87–2.49 (m, 덴드리머 및 링커 –CH2), 2.25 (m, 덴드리머 –CH2) , 1.82–1.67 (m, 링커 –CH2), 0.97 (t, Tesa –CH3).
특성화 기술
핵자기공명(NMR). NMR 스펙트럼은 실온에서 Bruker 500 MHz 분광계로 기록되었습니다. 양성자 화학적 이동(δ)은 ppm 단위로 보고됩니다.
1H NMR은 δ 7.6~8.2ppm에서 덴드리머의 내부 아미드 양성자의 피크를 δ 7.36~6.76ppm에서 Tesa의 방향족 양성자와 지방족 영역의 Tesa. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC).
a1525 바이너리 펌프, In-Line degasser AF, 717 plus 자동 샘플러, 2998 포토다이오드 어레이 검출기 및 Waters Empower 소프트웨어와 인터페이스된 2475 다중 λ형광 검출기가 장착된 HPLC(Waters Corporation, Milford, Massachusetts)를 사용했습니다.
입자 크기가 5μm, 길이가 25cm, 내부 직경이 4.6mm인 Symmetry C18 역상 컬럼(Tosoh, Japan)을 사용했습니다. 화합물은 PDA 검출기를 사용하여 210 nm 및 254 nm에서 모니터링되었습니다.
용매 A는 0.1% 트리플루오로아세트산(TFA)을 함유한 HPLC 등급 물이었고, 용매 B는 5% 물과 0.1% TFA를 함유한 아세토니트릴(ACN)이었습니다. 사용된 방법은 1{에서 시작되었습니다. {7}}0 : 0(ACN: 물), 5분 만에 10:90(물: ACN)으로 감소하고, 15분 동안 해당 극성에 머물렀다가 5분 만에 100:0(ACN: 물)으로 돌아옴 분. 유속은 1 ml min-1로 유지되었습니다. 질량 분광법.
ESI-MS는 용매 시스템으로 아세토니트릴/물(9:1)을 사용하여 BrukermicroTOF-II 질량 분석기에서 수행되었습니다. 양성자화된 피크[M + nH]n+ 또는 부가물 [M + nX]n+(X=Na, K 또는 NH4)인 분자 이온을 사용하여 실험식을 확인했습니다.
동적 광 산란 및 ζ 전위. 50 mW He-Ne 레이저(633 nm)가 장착된 Zetasizer NanoZS(Malvern Instrument Ltd, Worchester, UK)를 사용하여 입자 크기 및 ζ 전위 분포를 결정했습니다. D-Tesa를 DI 물에 DLS의 경우 0.2 mg ml-1 농도로, 10 mM 염화나트륨에 ζ-전위의 경우 0.1 mg ml-1 농도로 용해했습니다.
이전에 설명한 대로 173도의 산란 각도를 사용하여 25도에서 측정을 수행했습니다.27,46약물 방출 연구. D-Tesa는 리소좀 조건을 모방하기 위해 혈장 조건을 모방한 인산염 완충 용액(pH 7.4) 또는 구연산 나트륨 용액(pH 5.5)에 1 mg/ml의 농도로 용해되었습니다.
돼지 간에서 추출한 에스테라제(Sigma Aldrich 제품)를 방출 연구 시작 시 구연산나트륨 용액에 첨가하고 연구 기간 동안 대략 3일마다 보충했습니다.
각 바이알에는 15ml 샘플이 들어 있으며 실험 기간 동안 37도에서 계속해서 흔들렸습니다. 서로 다른 시점에서 각 pH에서 이중 200μl 샘플을 수집하고 이어서 200μl의 메탄올을 첨가하여 에스테라제 활성을 중단시켰습니다. 0시간 시점 샘플이 대조군으로 사용되었습니다.
가수분해를 더 피하기 위해 샘플을 -80도에서 보관했습니다. 샘플을 HPLC로 추가로 분석하고 유리 약물 피크에 대한 곡선 아래 면적(210nm)을 계산했습니다. 곡선 아래의 면적은 알려진 농도의 유리 Tesa를 HPLC에서 210nm로 실행하는 보정 곡선을 활용하여 방출된 약물의 양과 상관 관계가 있습니다.
For more information:1950477648nn@gmail.com
