Cistanche Deserticola의 품질 관리 방법

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Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei & et al.

한의학시스탄체의 즙이 많은 줄기이다.시스탄체 데저티콜라YC Ma 또는 Cisanche tubulosa (Schenk) 마른 비늘 모양의 잎을 가진 와이트. 신양(腎陽)을 튼튼하게 하고 정혈(血血)을 보양하고 장(腸)과 하제(藥藥)를 촉촉하게 하는 등의 기능이 있다. 주로 신양(腎陽)결핍, 정혈(血血)결핍, 발기부전, 불임, 허리와 무릎의 쓰림과 허약, 허약에 쓴다. 근육과 뼈, 장 건조 및 변비. 현대 약리학 연구에 따르면시스탄체성기능 향상, 알츠하이머 병 및 파킨슨 병 저항, 학습 및 기억 능력 향상, 노화 방지, 피로 방지, 간 보호, 완하제 등 많은 기능이 있습니다 [4]. 많은 연구에서 페닐에타노이드 배당체가시스탄체 데저티콜라학습 및 기억 능력 향상, 알츠하이머 병 및 파킨슨 병 저항에 명백한 효과가 있습니다 (4, 올리고당 및 폴리올은 완하제 및 완하제의 효과가 있습니다 64 ). "중화인민공화국 약전"은 페닐에타노이드 배당체 에키나코사이드 및 버바스코사이드의 함량만 측정합니다.시스탄체데저스티콜라, 그러나 완하제 효과의 유효성분을 측정하지 않아 의약재에 대한 종합적인 분석이 어렵다시스탄체데저스티콜라. 품질 관리. 이러한 한계를 극복하고 주요 기능 및 지표와 관련된 다지표 품질 평가 시스템을 구축하기 위해시스탄체데저스티콜라, 본 연구는 HPLCELSDP4를 사용하여 의약 물질의 베타인, 만니톨, 과당, 포도당 및 자당에 대한 정량 분석 ​​방법을 확립했습니다.시스탄체데저스티콜라. 또한, 58개의 배치시스탄체데저스티콜라다양한 원산지의 약재와 10개의 배치의 약재시스탄체신장 호탄 지역에서 테스트를 거쳐 종합적인 품질 관리 및 의약 재료 평가에 대한 참고 자료를 제공할 수 있습니다.시스탄체데저스티콜라미래에.

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1 기기 및 시약

1.1 도구

Sartorius 전자 저울 BT25 S, BS 124 S(Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 고성능 액체 크로마토그래피; ALLTECH 2000ES 증발 광산란 검출기(EISD); 초음파 세척기 KQ 250(Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 시약

대조 물질: 베타인(배치: {{0}}, 순도: 99.2%), 만니톨(배치: 10053-201304, 순도: 99.0%), D-과당(배치: 111504-201703 , 순도: 99.8%), D - 무수 포도당(배치 번호: 110833-201506, 순도: 99.9%), 자당(배치 번호: 111507-201303, 순도: 99.8%), 모두 중국 국립 연구소에서 구입 식품의약품안전처.

의 약재시스탄체데저스티콜라내몽고, 신장, 간쑤 및 기타 지역에서 총 58개 배치로 수집되었습니다. 북경대학교 약학대학의 Tu Pengfei 교수가 말린 다육질 줄기로 확인했습니다.시스탄체데저스티콜라Lidangaceae 식물의 YCMa는 표 3에 나와 있습니다.

의 약재시스탄체데저스티콜라신장 호탄 지역에서 총 10개 배치로 수집되었습니다. 북경대학교 약학대학의 Tu Pengfei 교수는 표 4와 같이 Liedangaceae 식물의 Cistanche tubulosa (Schenk) Wight의 비늘 잎이 있는 말린 다육질 줄기로 확인했습니다.

1.3 시약

아세토니트릴은 크로마토그래피 순수(Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), 메탄올은 크로마토그래피(Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.), 물은 초순수입니다.

2 방법 및 결과

2.1 크로마토그래피 조건

크로마토그래피 컬럼은 ShodexAshaipak NH2P-50 4E 폴리머 겔 컬럼(250 mm × 4.6 mm, 5 μm)이었습니다. 이동상은 아세토니트릴-물(77∶23); 유속은 0.7mL·min{11}}입니다. 컬럼 온도는 25도; 광산란 검출기(ELSD): 드리프트 튜브 온도는 100도, 운반 가스 유량은 3L·min{15}}입니다.

2.2 참조 용액의 준비

베타인, 만니톨, 과당, 포도당, 자당기준물질 적당량을 취하여 정확하게 달아 물을 넣어 0.25 mg의 베타인, 만니톨, 과당, 포도당, 자당을 함유하는 혼합액을 만든다. 1 mL를 잘 흔들어 취한다.

2.3 시험용액의 조제

약 1.{1}}g 섭취시스탄체약용 분말(4호체에 통과)을 정확하게 달아 1{12}0mL 갈색 메스플라스크에 넣고 50% 메탄올 50mL를 정밀하게 넣고 마개를 단단히 닫고 흔들어 흔들어 칭량한다. 그것을 30분 동안 담그고 40분 동안 초음파(전력 250W, 주파수 35kHz)로 40분 동안 꺼내서 식힌 다음 다시 무게를 잰 다음 50% 메탄올을 넣어 질량을 줄이고 잘 흔든 다음 그대로 두십시오. 그것은 서. 상청액 5mL를 정밀하게 흡인하여 25mL 메스플라스크에 넣고 50% 메탄올로 표시선까지 희석하고 잘 흔든 다음 0.2μm 미세다공막으로 여과한다.

2.4 결정 방법

표준액 5, 10μL, 검액 5μL를 각각 정밀하게 취하여 액체크로마토그래프에 주입하고 피크면적을 기록하고 외부표준 2점법의 대수식에 따라 계산한다.

2.5 시스템 적합성 테스트

2.1항의 크로마토그래피 조건에 따라 대조용액과 시험용액을 각각 5μ씩 정확하게 취하여 고성능 액체크로마토그래피에 주입하여 그림 1과 같이 크로마토그램을 측정하여 기록한다. 의 시료는 표준물질 크로마토그래피 피크와 동일한 머무름 시간을 보였고, 분해능도 양호했으며, 크로마토그래피 조건이 실현 가능했습니다.

주: 가. 대조 물질; 비.시스탄체49번 샘플; 1. 베타임 ; 2. 프누키즈 ; 3. 만니볼 ; 4. 포도당 ; 5. 수크레브

그림 1 Cistanche No. 49의 기준 물질과 시료의 HPLC 프로필

2.6 선형 관계의 검토

베타인, 만니톨, 과당, 포도당, 자당을 표준물질로 하여 적당량을 취하여 정확하게 달아 물을 넣어 각각 1mL로 하여 베타인 0을 함유한다.496 0 mg, 만니톨 {{3} }.994 0 mg, 과일 1.0126 mg, 포도당 1.{11}}882 mg, 자당 0.9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0.9920, 1.9840, 2.9760μ, 만니톨 0.1988, 0.4970 , 0.9940, 1.9880, 3.9760, 5.9640μ, 과당 0.5063, 1.{38}}. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. 크로마토그래피 조건을 주입하여 검출하고 피크 면적을 기록했습니다. 횡축은 각 기준물질 주입량의 대수값 X(ug), 종축은 피크면적의 대수값 Y로 하여 표준곡선을 그었다. 결과는 표 1에 나와 있습니다.

표 1 선형 관계 조사 결과

2.7 정밀 테스트

위의 크로마토그래피 조건에서 시험용액(시료번호 49)을 정확하게 취하여 6회 연속주입하고 각 크로마토그래피 피크의 피크면적을 측정하여 RSD값을 계산한다. 결과 베타인, 만니톨, 과당, 포도당 및 자당의 피크 면적의 RSD는 각각 0.84%, 2.56%, 1.27%, 2.62% 및 1.52%로 사용된 기기의 정밀도를 나타냅니다. 이 연구는 좋았다. 2.8 반복성 시험

6개의 샘플을 가져옵니다.시스탄체데저스티콜라(시료번호 49) 2.3항의 방법에 따라 시험용액을 조제하고 각 크로마토그래피피크의 피크면적을 측정하여 해당하는 함량을 구한다. 결과 베타인, 만니톨, 과당, 포도당 및 자당(n=6)의 평균 함량은 7.93%, 7.27%, 8.74%, 2.75% 및 4.81%였으며 RSD는 2.83%, 1.94%, {{ 18}} 각각 .97%와 2.60%입니다. 백분율 , 1.40% , 방법의 반복성이 양호함을 나타냅니다. 2.9 안정성 시험

시험용액(시료번호 49)을 취하여 측정준비 후 0, 4, 8, 12, 16, 24시간에 주입하고 각 크로마토그래피 피크의 RSD 값을 계산한다. 결과 베타인, 만니톨, 과당, 포도당 및 자당의 RSD는 각각 0.61%, 1.92%, 1.34%, 2.83% 및 0.69%로 시험용액이 양호함을 나타냅니다. 24시간 이내 안정. 2.10 회복 시험

6개의 샘플을 가져옵니다.시스탄체데저스티콜라함량을 알고 있는 것(시료 번호 49)으로 0.25g을 정확하게 달아 50mL 갈색 메스플라스크에 넣고 농도 1의 혼합표준용액 25mL를 정확하게 취한다. 1(베타인 {{10}}.7900mg 포함). mL-, 과당 0.7236 mg"mL{12}}, 만니톨 0.8812 mg·mL{15}}, 포도당 0.2708 mg·mL{18}}, 자당 0.4883 mg'mL-')를 샘플에 첨가하고, 시험 용액은 2.3의 방법에 따라 준비하고 위에서 언급한 크로마토그래피 조건에 따라 검출하고, 회수율을 계산하고, 그 결과를 표 2에 나타내었으며, 이는 방법의 정확도가 양호함을 나타냅니다.

표 2: 테스트 대상 5개 성분의 샘플 회수율 측정 결과(n=6)

3 토론

3.1 지표 구성 요소의 선택

총 올리고당시스탄체의 효과적인 부분입니다시스탄체완하제. 저자는 이 부분의 화학적 조성을 LC-MS와 기준물질로 분석한 결과 이 ​​부분이 주로 베타인, 만니톨, 과당, 포도당, 자당으로 구성되어 있음을 확인했다. 따라서 이 5가지 구성 요소를 의 지표 구성 요소로 선택했습니다.시스탄체데저스티콜라, 내용 결정 방법을 확립했습니다.

3.2 크로마토그래피 컬럼의 선택

테스트할 5가지 성분인 베타인, 만니톨, 과당, 포도당 및 자당은 상대적으로 극성이며 역상 Cn 컬럼에 유지될 수 없습니다. 일반적으로 피크는 1-2분 이내에 나타나며 구성 요소를 분리할 수 없습니다. 당 및 폴리올 분리용 아미노 컬럼 Waters Bonoapar NH(300mm × 4.6mm, 10μm) 및 Phenomenex Bondclone 10 NH(300mm × 3.9mm, 10μm) 및 폴리머 기반 아미노 컬럼 Prevail Carbohydrate ES( 250mm) ×4.6mm, 5μm), ShodexAshaipak NH2P{17}}E(250mm × 4.6mm, 5μm). 결과는 폴리머 매트릭스 아미노 컬럼이 이러한 5가지 성분을 효과적으로 분리할 수 있음을 보여줍니다.

3.3 검출기 선택

테스트할 5가지 구성 요소는 명백한 UV 흡수가 없으며 UV 검출기의 함량을 직접 결정할 수 없습니다. 따라서 본 논문에서는 당알코올 성분의 정량적 분석 방법을 확립하였다.시스탄체데저스티콜라HPLC-EISD를 사용합니다. 결과는 이 방법이 높은 감도, 좋은 반복성 및 높은 정확도를 가지며 품질 관리에 사용할 수 있음을 보여줍니다.시스탄체데저스티콜라및 베타인 및 당 알코올을 함유하는 기타 의약 물질.

3.4 시험용액의 조제방법 조사

물, 30% 메탄올, 50% 메탄올, 70% 메탄올, 메탄올 등의 다른 추출 용매를 각각 비교했습니다. 그 결과 70% 메탄올과 메탄올 용매의 약간 더 낮은 추출율을 제외하고는 다른 용매와 큰 차이가 없어 직접 선택을 하였다. 50% 메탄올을 "함량 측정" 항목에서 용매로 사용했습니다.시스탄체중화인민공화국 약전에서 해당 시험액의 조제법에 따라 조제하고 5배로 희석하여 당알코올 성분을 구한다.

3.5 염기가 다른 시료의 검출 및 분석

본 연구에서는 58개 배치의 5개 성분의 함량을시스탄체데저스티콜라그리고 10개 배치시스탄체데저스티콜라약재를 결정했다. 58개 배치에서 베타인, 만니톨, 과당, 포도당 및 자당의 질량 분율시스탄체데저스티콜라샘플은 2.73% -17.65% , 2.46% -16.34% , 2.52% {{1{12}}}}.74% , 0.97% -14.06%였습니다. , 3.15% -27.16% ; 만니톨, 과당 및 포도당은 10개의 배치에서 1.{21}} 퍼센트 -13.04퍼센트, 2.98퍼센트 -8.85퍼센트, 1.09퍼센트 -5.33퍼센트였습니다.시스탄체각각, 베타인과 자당은 검출되지 않았다. 원료의약품의 함량은 배치별로 큰 차이가 있고 따라야 할 규정도 없어 원료의약품의 품질관리를 위한 함량판정기준을 마련할 필요가 있음을 시사한다. 또한, 이 방법은 두 가지 유형을 효과적으로 구별할 수 있습니다.시스탄체기본 식물, 즉,시스탄체베타인과 자당을 포함하지 않는 반면, 이 두 성분의 함량은시스탄체 데저티콜라. 이것은 또한 두 가지 의약 물질의 질감과 서식지의 차이를 분석하는 기초를 제공합니다.시스탄체 데저티콜라. 의약재에 비해시스탄체 데저티콜라, 질감이 더 부드러워 현지에서는 "부드러운 다윤"으로 알려져 있지만,시스탄체자당(3.15%~27.16%)을 함유하고 있어 '채다윤'이라고 부른다. ).시스탄체 데저티콜라주로 내몽골 알크사에 분포하며,시스탄체알사 지역보다 기온이 높은 신장 호탄 지역에 주로 분포하며 지방에서는 점적 관개를 자주 이용하지만 일단 기온이 떨어지면시스탄체심각한 피해를 입게 됩니다. 동결 피해는 한편으로는 높은 수분 함량과 특정 관계가 있고 다른 한편으로는 포함된 성분과 관련이 있습니다. Betaine 243은 중요한 삼투압 조절 물질로 염분, 가뭄, 저온, 강한 빛에 대한 저항성 등 식물의 스트레스 저항성을 높이는 중요한 역할을 합니다. 그것은 바로 베타인의 함량이 높기 때문입니다.시스탄체 데저티콜라염 알칼리, 가뭄 및 동결 손상에 대한 저항성이시스탄체, 그리고 비교적 넓은 분포를 보입니다.

3.6 분석시스탄체데저스티콜라다른 출처의 샘플

사막의 58 배치 중시스탄체의약 재료 샘플, 내몽골 Alxa League에서 45개, 내몽골 Wangyedi(Dengkou County)에서 3개, 1개는 알 수 없음. 49개의 의약재 배치는 모두 5개 성분의 함량이 서로 달랐다. 그러나 큰 차이는 없습니다. 분석의 이유는 약재가 모두 동일한 사막 지역에서 생산되고 생태와 지리적 환경이 유사하며 제품 품질이 비교적 균일하고 안정적이기 때문일 수 있습니다. 간쑤성 민친현에서 3개, 신장에서 6개가 생산된다. 도 2의 분석에 따르면 내몽골에서 생산되는 약재와 비교하여 주요 차이점은 과당과 자당의 함량에 반영된다. 약재의 자당 함량이 상대적으로 가장 높았으나 두 원산지의 검체 양이 적기 때문에 이 결론은 더 많은 검체를 채취하여 검증할 필요가 있다. 3.7 요약

본 연구에서는 완하제의 5가지 활성 성분을 동시에 측정하기 위해 HPLC Wang ISD를 구축하여 보다 편리하고 효율적이며 정확한 완하제의 품질 관리 방법을 제공했습니다.시스탄체 데저티콜라, 품질 표준을 개선하고시스탄체데저스티콜라. 의미있는 참조.

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