HPLC를 통한 Cistanche Herba 물 추출물의 에키나코사이드 측정
Jul 16, 2024
추상적인: 목적물 추출물의 에키나코사이드 측정을 위해 HPLC 방법이 확립되었습니다.시스탄체 허브.행동 양식에키나코시드(Echinacoside)는 HPLC에 의해 측정되었습니다. 분리는 Inertsil ODS-에서 수행되었습니다.SPC18 아세토니트릴로 구성된 이동상이 있는 컬럼(A)및 0.4% 인산 용액(B), 그라데이션으로용출. 검출 파장은 333nm로 설정되었습니다., 컬럼 온도는 30 도였습니다. 유속은 1.0이었습니다.mL·분-1 주입량은 10μL. 결과선형 관계에키나코시드농도 내에서범위 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 좋았어(r = 0.999 8). 회수율은 94.59%-105.31%였습니다.(RSD=2.93%,n = 9). 시스탄체 허브 물 추출물의 에키나코사이드 함량은 15.527이었습니다.,7.347,12.267mg·g-1.
결론반복성이 좋은 확립된 HPLC 방법은 정확합니다., 간단하고 실행 가능합니다. 적합하다에키나코사이드의 검출을 위해시스탄체 허브 물추출물.
키워드:HPLC;시스탄체 허브 물추출물; 에키나코시드; 내용의 결정
시스탄체 데세르티콜라임상에서 일반적으로 사용되는 강장제 전통 한약재로 "사막 인삼"으로 알려져 있습니다[1]. 그만큼시스탄체 데세르티콜라2015년판에 기록된중국약전비늘 모양의 잎이 달린 말린 다육 줄기입니다.Cistanche Deserticola YC Ma또는Cistanche tubeulosa(Schenk) 와이트. 따뜻하고 달콤하며 짠맛이 있어 신장과 대장경으로 돌아간다. 신장양을 보하고 정혈을 보하며 장과 하제를 보습하는 효능이 있다[2]. "신농의 약재"는 "중간을 튼튼하게 하고, 오장부에 영양을 공급하며, 음기를 강화하고 정수에 영양을 공급한다"고 말합니다. Cistanche Deserticola는 주로 페닐에타노이드 배당체, 이리도이드 및 배당체, 리그난 및 배당체, 다당류, 에스테르 화합물 및 알칼로이드를 포함합니다 [3].
페닐에타노이드 배당체는 시스탄체 데저티콜라의 주요 유효성분이며, 그 중 에키나세아사이드와 베르바스코사이드는 중국 약전에서 시스탄체 데저티콜라의 식별 및 함량 결정을 위한 지표 성분입니다. 약리학적 연구[4]에서는 Cistanche Deserticola가 완하제, 간 보호, 항골다공증, 항산화, 항노화, 항피로 등 다양한 약리 효과를 갖는 것으로 나타났습니다. Cistanche Deserticola 수성 추출물은 쥐의 조골세포에서 뼈 형태형성 단백질 2 유전자를 촉진할 수 있을 뿐만 아니라 난소를 절제한 쥐의 혈청에서 타르타르산 저항성 산성 포스파타제와 뼈 칼슘을 촉진할 수 있습니다.
골수 및 골수에서 Smad1, Smad5 유전자, 형질전환 성장인자- 등의 발현은 항골다공증 효과를 갖는다[5-6].
에키나시아는 조골세포의 증식을 촉진하고, in vitro에서 배양된 골수 중간엽줄기세포의 조골세포로의 분화를 촉진할 수 있습니다[7-9]. 최근에는 Cistanche Deserticola 에탄올 추출물 및 그 복합제제[10-12]에서 echinacoside와 verbascoside의 함량 정량에 관한 많은 연구보고가 있으나, Cistanche Deserticola의 지표성분 함량 정량에 관한 보고는 거의 없다. 수성 추출물. 본 연구에서는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여에키네시아사이드의 함량에서Cistanche Deserticola의 수성 추출물.
1 재료
1.1 악기
LC-20AT 고성능 액체 크로마토그래프, SPD-20검출기, SIL-20자동 샘플러, CTO-10ASvp 컬럼 오븐, LC 솔루션 액체 크로마토그래피 워크스테이션, Shimadzu Corporation, 일본; MES125P-OCE-DU 전자 분석 천칭(독일 Sartorius); SHZ-D (III) 순환수 다목적 진공 펌프, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 회전 증발기 냉각 순환 시스템, RV 10 D S96 회전 증발기, IKA, 독일; DK-S26 전기 항온 수조, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; UPR 시리즈 초순수 기계, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.
1.2 약용재료 및 시약
Cistanche Deserticola 약재는 광저우 Lingnan Chinese Medicine Pieces Co., Ltd.에서 구입했으며 배치 번호: 1801001, 1806001 및 181001입니다. 중국 수석에 의해 Orobanchaceae 계통의 Cistanche Deserticola YCMa 비늘잎이 있는 건조된 다육 줄기로 확인되었습니다. 광저우 중의과대학 제3부속병원 약사 투싱밍(Tu Xingming). 샘플은 광저우중의과대학교 제3부속병원 약물검사실에 보관되어 있습니다. 에키나코시드 참조 물질, 함량은 89.7%, 배치 번호: 중국 식품약품검사연구소의 111670-201706; 아세토니트릴은 크로마토그래피상 순수함(Merck, Germany); 메탄올과 인산은 분석적으로 순수하다(Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.). 물은 초순수합니다.
2 방법 및 결과
2.1 시스탄체 데데티콜라 수추출물의 제조
시스탄체데데티콜라 조분말에 10배의 증류수를 가하고 열을 가하고 환류하여 2회 추출하고 1시간 동안 추출한 다음 여과하고 여액을 합하고 여액을 0.100 g·mL로 농축한다. 회전증발기로 생약 -1을 회수하고 나중에 사용하기 위해 4도에 보관한다.
2.2 크로마토그래피 조건 및 시스템 적합성
크로마토그래피 컬럼: Inertsil ODS SP C18 컬럼(150 mm × 4.6 mm, 5 μm); 이동상: 아세토니트릴(A)-0.4% 인산 용액(B), 구배 용출: 0 ~ 5분, 17%A; 5~25분, 20%A; 25~30분, 17%A; 검출 파장: 333 nm; 컬럼 온도: 30도; 유속: 1.0mL·min-1; 주입량: 10μL. 이 크로마토그래피 조건에서 에키나코사이드와 인접 성분 피크 사이의 분리는 1.5보다 크고, 에키나코사이드 피크를 기준으로 한 이론적 단수는 4,000 이상이어야 합니다. 크로마토그램은 그림 1에 나와 있습니다.
그림 1 에키나코사이드(A)와 시스탄체 허브 물 추출물(B)의 HPLC 크로마토그램
2.3 용액 준비
2.3.1 참조 솔루션
에키나코사이드 표준품 적당량을 달아 정밀하게 달아 10 mL 메스플라스크에 넣고 메탄올을 넣어 녹인 후 에키나코사이드 898.794 ug/mL를 함유하는 표준액을 제조하고 4도에서 보관한 후 사용한다.
2.3.2 시험 용액
시스탄체데데티콜라 물추출물 2.0mL를 정확하게 달아 수욕상에서 증발건고한 후 메탄올을 가하여 녹인 후 10mL 메스플라스크에 그 용량을 채우고 잘 흔들어 섞은 다음, 0.22 μm 미세다공성 필터막을 통해 여과하여 용액을 얻습니다.
2.4 선형 관계 조사
2.3.1에서 기준 용액의 {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 mL를 정확하게 측정합니다. 5 mL 메스플라스크에 넣고 메탄올을 넣어 부피를 채우고 잘 흔들어 농도구배 44.939 7, 89.879 4, 179.{의 대조액을 얻는다. {21}}, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1,0.22 μm 미세다공성 막을 통해 여과합니다. 2.2의 크로마토그래피 조건에 따라 측정하고 피크 면적을 기록합니다.
기준 질량 농도를 가로축(X, ug·mL{{0}}), 피크 면적을 세로축(Y)으로 하여 선형회귀를 수행하고 회귀식 Y{{1 }}.0X-32 273.0, r=0.999 8. 그 결과, 에키나코사이드는 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1 농도 범위에서 좋은 선형 관계를 갖는 것으로 나타났습니다.
2.5 정밀도 시험
539.276 4 ug ·mL- 1 표준액을 취하여 2.2 이하의 크로마토그래피 조건에 따라 연속적으로 주입하여 6회 측정하여 피크면적을 기록한다. 에키나코사이드 피크 면적의 RSD는 1.81%로 기기의 정밀도가 양호한 것으로 나타났습니다.
2.6 안정성 테스트
시스탄체데세르티콜라 물추출물 2.0mL를 정확하게 칭량하여 수욕에서 증발건고하고 메탄올에 녹인 후 10mL 메스플라스크에 희석하고 잘 흔들어 섞은 후 0로 여과한다. .22 μm 미세다공성 필터막을 주입하고 2.2의 크로마토그래피 조건에 따라 0, 2, 4, 8, 12, 24시간에 주입하여 측정하고 피크 면적을 기록합니다. 결과 에키나코시드 피크 면적의 RSD는 1.16%였으며, 이는 테스트 용액이 24시간 이내에 우수한 안정성을 가짐을 나타냅니다.
2.7 반복성 테스트
시스탄체데데티콜라 물추출물 2.0mL를 6개로 정밀하게 달아 2.3.2의 방법에 따라 검액 6개를 병행하여 제조하고 2.2의 크로마토그래피 조건에 따라 주입하여 측정한다. 피크 면적을 기록합니다. 결과 에키나코사이드 질량 농도의 RSD는 1.28%였으며 이는 해당 방법의 반복성이 우수함을 나타냅니다.
2.8 시료 회수 시험
Cistanche Deserticola 물추출물 1.0mL를 9개로 정확하게 칭량하고, 0.8, 1.0 및 대조용액 1.2mL(1.552mg·mL{{11)를 첨가한다. }}) 각각 수조에서 증발 건조시키고 메탄올에 용해시킨 후 10 mL 용량 플라스크에 희석합니다. 잘 흔들어 섞은 후 0.22 μm 미세다공여과막으로 여과하여 고농도, 중농도, 저농도의 검액을 취하고 각 농도별로 3부를 병렬로 제조하여 2.2의 크로마토그래피 조건에 따라 측정하고 피크면적을 기록하여 계산한다. 샘플 회수. 결과를 표 1에 나타내었다.
2.9 샘플 함량 결정
시스탄체 데세르티콜라 물추출물 2.0mL를 3회에 걸쳐 정확하게 칭량하고 수욕에서 증발건고한 후 메탄올에 녹인 후 메스플라스크에 10mL로 희석하고 잘 흔들어 섞은 후 물로 여과한다. 0.22 μm 미세다공성 필터막을 사용하여 2.2의 크로마토그래피 조건에 따라 결정하고 피크 면적을 기록하고 에키나코사이드 함량을 계산합니다. 결과를 표 2에 나타내었다.
