스트렙토조토신-니코틴아미드로 유도된 당뇨병 쥐의 수컷 생식 기능에 대한 Cistanche Tubulosa 추출물의 효과

키워드:당뇨병; 불모;시스탄체 튜불로사발췌(CTE);에키나코사이드(ECH);항염증활동;항산화제활동;스테로이드 생성효과

cistanche 추출물 분말 혜택에 대한 자세한 정보

1. 소개

당뇨병(DM)은 혈액 내 포도당 수치가 증가된 상태입니다.췌장이 충분한 인슐린을 생산하지 못하거나 신체가 그것을 사용하지 못하는 경우효과적으로. WHO에 따르면 당뇨병 환자의 수는 1980년 1억 800만 명에서 증가했습니다.2014년 4억 2200만 [1]. 네 가지 주요 범주가 있습니다: 당뇨병 전단계(당뇨병 전 단계), 제1형(췌장이 인슐린을 생산하지 못하는 경우), 제2형(신체가 인슐린을 사용하지 못하는 경우) 및 임신성당뇨병(임신 중에 발생). 간의 불균형으로 인해 산화 스트레스가 발생합니다.활성산소(ROS) 및 항산화제 생성 [2] 결국 당뇨병 상태로 이어집니다.당뇨병의 합병증에는 신부전, 신경 손상, 실명, 뇌졸중, 심장 마비 등이 있습니다공격, 태아 사망 및 불임. [1]. 연구에 따르면 정자 핵, 데옥시리보핵산(DNA),남성 당뇨병 환자에서 미토콘드리아가 현저하게 손상되었습니다.3]. 동안 산화 스트레스정자의 이동은 남성 생식계의 과정을 변화시킬 것입니다.4,5]. 

정자 생성 과정은 시상하부-뇌하수체-생식샘(HPG)에 의해 제어됩니다.중심선. 시상하부에 의해 생성되는 성선자극호르몬 방출 호르몬(GnRH)은황체형성호르몬(LH)과 난포자극호르몬(FSH)의 생성. 라이디히 세포가 발견된다.정세관에 인접하여 LH의 통제하에 테스토스테론을 생성합니다. FSH 트리거남성 호르몬을 전달하는 데 도움이 되는 항원 결합 단백질(ABP)의 생산. 따라서 불임기타 문제는 주로 HPG 축에서 발생하는 외란으로 인해 발생합니다. 관리streptozotocin-nicotinamide의 조합은 실험 쥐에서 당뇨병을 유발합니다. 스트렙토조토신인슐린 생성에 유독한 화합물입니다. 췌장의 세포와 니코틴아미드는보호하는 수용성 비타민 완전한 손상으로부터 세포 [6]. 시스탄체 튜불로사"Rou Cong-Rong"이라고도 알려진 사막 식물 종 [7]. 이것은주로 뿌리에서 자라는 비엽록소 기생 식물칼로트로피스 프로세라나무와 이다간쑤, 칭하이, 신장, 몽골, 이란, 인도의 건조한 땅에 널리 분포한다. 일반적인~의 이름시스탄체 튜불로사"사막 히아신스"입니다. 그것은 중국 전통 의학에서 널리 받아 들여지고 있습니다."사막의 인삼"이라는 이름을 얻었습니다. 의약 분야에서 널리 사용되어병적인 백반증, 과다한 메트로과민, 만성 신장 질환, 변비, 발기 부전 및불모. 의 화학 성분시스탄체 튜불로사비휘발성 페닐에타노이드 배당체로 구성(PHG), 이리도이드, 리그난, 휘발성 오일, 알디톨, 올리고당 및 다당류 [8]. 연구이 허브의 에키나코사이드는 ROS 수준을 조절하여 손상된 섬유아세포를 보호한다는 것을 보여줍니다.9]. 이 화합물은 항산화, 혈관 이완 및 항염 작용을 하며,신경보호 및 골다공증 예방 [10,11]. 이 연구는 의 효과를 조사하는 것을 목적으로 하였다.시스탄체 튜불로사발췌ECH를 포함하는streptozotocin-nicotinamide로 유도된 당뇨병 쥐의 생식 기능 장애.

2. 재료 및 방법

2.1. 재료

ECH 및 CTE는 Sinphar Pharmaceutical Co., Ltd(Yilan, Taiwan)에서 구입했습니다. 고급의당화 최종 산물(AGEs)은 Biovision(San Francisco, CA, USA)에서 구입했습니다. LC{0}}및 TM3 세포주는 식품 산업 연구 및 개발 연구소에서 구입했습니다.(신주, 대만). 5주 된 Sprague-Dawley(SD) 수컷 쥐를 구입했습니다.국립 실험 동물 센터(대만 타이페이). 피드 랩 다이어트® PMI에서 구입했습니다Nutrition International, Inc.(대만 타이페이). 2,{1}}디페닐{2}}피크릴히드라질(DPPH)을 얻었다Sigma(미국 미주리주 세인트루이스). 메탄올 및 4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산(HEPES)도 Sigma에서 구입했습니다. Dulbecco의 수정된 Eagle 중형/F12 및트립신-EDTA는 GIBCO(New York, NY, USA)에서 입수했습니다. 3-(4, 5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드(MTT), 디클로로-디히드로-플루오레세인 디아세테이트(DCFH-DA), 디메틸설폭사이드(DMSO) 및 니트로블루 테트라졸륨(NBT)은 Sigma에서 구입했습니다. 포도당 효소키트는 일본 도쿄의 Kyokutoseiyaku에서 구입했습니다. 인슐린 ELISA 키트를 구입했습니다.Mercodia AB Inc., Sylveniusgatan 8A(스웨덴 웁살라)로부터. T-PER 조직 단백질 추출시약은 Thermo Scientific(미국 일리노이주 시카고)에서 구입했습니다. 인간/마우스/쥐 핵인자-카파 B NF-κB 다클론 항체는 Santa Cruz Biotechnology, Santa미국 캘리포니아주 크루즈 고급 당화 최종 산물(RAGE) 폴리클로날용 항-마우스/쥐 수용체항체, 항-인간/마우스/쥐 StAR 폴리클로날 항체, 및 항-인간/마우스/쥐Cytochrome P{0}}A1 단일클론 항체는 Gene Tex(Irvine, CA, USA)에서 구입했습니다.항-인간/마우스/쥐 CYP11A1 다클론 항체는 Cell Signaling에서 얻었다기술(미국 펜실베니아주 비벌리). easy-Blue 시약은 Invitrogen, Thermo Fisher에서 구입했습니다.Scientific(미국 캘리포니아주 칼즈배드). Agarose 및 DNA 마커 100bp는 Promega에서 얻었고,Corporation (미국 위스콘신주 매디슨). RNeasy Lipid Tissue Mini Kit는 QIAGEN에서 구입했으며,독일 힐덴.

5% CO2 인큐베이터(CO2 인큐베이터, Napco 5410, 대만). TM3 세포주는 Dulbecco's에서 배양되었다.포도당(4.5g/L), 피루브산나트륨(0.5mM)이 보충된 변형된 독수리 배지(DMEM),L-글루타민(2.5mM), 중탄산나트륨(1.2g/L), 4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산37에서 산(HEPES, 15mM) 및 태아 송아지 혈청(FCS, 10%) 또는 말 혈청(5%)◦C 5%CO2 부란기.

에키나코사이드(ECH)의 세포 생존력 측정: 3-(4, 5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) 시약은 세포 생존력 분석에 사용되었습니다. 세포 농도2로 조정되었습니다× 10596-웰 플레이트의 세포/mL 그런 다음 20µECH의 L(배지의 2%로 희석)첨가하고 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다.◦5% CO의 C2 부란기. 나중에 100µMTT 시약의 L은첨가하고 37에서 4시간 동안 인큐베이션◦C 어두운 조건에서. 흡광도는 570 nm에서 측정되었습니다.(ELISA 리더, Dynatech MR5000, Kloten, Switzerland).상대적 세포 생존율(%)=[(A570 nm에서 샘플− A570 nm에서 공백)]/[(A570에서 제어− A570에서 공백)] × 100.

반응성 산소 종(ROS) 함량 분석:

셀 번호는 다음으로 조정되었습니다.2 × 105세포/mL2% FBS가 포함된 12-웰 플레이트에 그럼 50µL/mL의 ECH, RES 및 AGEs플레이트에 첨가하고 37℃에서 인큐베이션하였다.◦C에서 24시간 동안 24시간 후, 20 ,70 -디클로로플루오레세인-디아세테이트(DCFH-DA)를 첨가하고 37℃에서 인큐베이션하였다.◦C에서 30분 동안 원심분리 후(400× g, 5 분),

AGE를 첨가하고 37℃에서 인큐베이션하였다.◦5% CO의 C2 24시간 동안 인큐베이터. 이후 400µL of T-PER첨가하고 세포를 긁어내고 125도에서 원심분리했습니다.{1}}× g 20분 동안 (4◦씨). 상등액에 수집되어 보관되었다.−80 ◦C (−80 ◦C 냉동고, Nuaire, Plymouth, MN, USA) 추가 분석을 위해.

Bicinchoninic acid(BCA) 키트는 단백질 정량에 사용되었습니다. 그런 다음 10µ표준 세포 용액의 L그리고 200µL의 BCA 시약을 8-웰 플레이트에 첨가하고 37℃에서 인큐베이션했습니다.◦5% CO의 C2 부란기30분 동안 흡광도는 562 nm에서 측정되었습니다. 단백질 식별 분석을 수행했습니다.나트륨 도데실 설페이트(SDS)-폴리아크릴아미드 겔(SDS-PAGE) 전기영동에 의해. 샘플은protein loading buffer에 protein lysate를 첨가하여 제조한 western blot 분석특정 단백질을 검출합니다.

2.2.2. 생체 내 분석

동물 모델 디자인: 4-주된 수컷 Sprague-Dawley(SD) 쥐 60마리를국립 실험 동물 센터(대만 타이페이). 각 쥐는 소독제에 개별적으로 보관되었습니다.제어된 온도에서 스테인리스 스틸 케이지(23± 1 ◦C) 12시간 동안 습도(40–60%)라이트/12시간 다크 사이클. 음식과 물은 임의로 제공되었습니다. 각 쥐는 처음에 길들여졌다.주 식단으로 실험용 설치류 식단 5001을 제공했습니다. 모든 절차는 표준을 따랐습니다국가 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC 승인 번호 101026)대만해양대학교, 대만. 가축화 후 쥐를 두 그룹으로 나누었습니다.실험 식단 5001을 먹인 그룹(Con)과 고지방식이를 먹인 당뇨병 환자 그룹(HFD, 40%) 전체 실험에 ​​대해. 4주 동안 HFD를 먹인 후, 당뇨병 그룹은쥐에게 스트렙토조토신(65mg/kg)(STZ)을 주사하여 진성 당뇨병(DM)을 유도했습니다. 이내에STZ 주사 15분 후 니코틴아미드(230mg/Kg 체중)를 주사했습니다. 주사 일주일 후,당뇨병의 성공적인 유도를 확인하기 위해 경구 포도당 내성 검사(OGTT)를 실시했습니다.멜리투스(DM). 그 후, 동물을 6개 그룹으로 나누었습니다.5001); DM 그룹(DM + 45% HFD); DMR 그룹(DM + 로시글리타존: 0.571 mg/kg BW) + 45% HFD;DME1 그룹(DM + CTE: 80 mg/kg BW) + 45% HFD; DME2 그룹(DM + CTE: 160mg/kg BW)플러스 45% HFD; 및 DME4 그룹(DM + CTE: 320 mg/kg BW) + 45% HFD. 로시글리타존(RSG)은양성 대조군으로 삼았다. 3가지 용량의 CTE(80, 160 및 320 mg/kg)가 다음 기준에 따라 사용되었습니다.대만 식품의약국(TFDA) 건강기능식품 추천평가 지침. 실험이 끝날 때까지 치료가 주어졌다. 모든 실험용 쥐6주 후에 희생되었다. 쥐에서 채취한 혈액을 3000rpm에서 원심분리하여4시에 15분◦C. 다음 분석을 위해 상등액을 조사했습니다.총 포도당, 중성지방 및 콜레스테롤

결정:

포도당 측정은포도당 효소 키트에 의해 수행됩니다. 그런 다음 20µL의 혈장 샘플을 추가했습니다.시약 및 37에서 유지◦C에서 5분 동안 총 중성지방과 총콜레스테롤 농도는트리글리세리드 및 콜레스테롤 효소 키트를 사용하여 결정합니다. 그런 다음 10µ혈장의 L은시약에 첨가하고 제조자의 지시에 따라 실험을 수행하였다.흡광도는 510 nm에서 측정되었습니다.혈장 총 포도당/중성지방/콜레스테롤(mg/dL) =(A견본− A공백)/(A기준− A공백) × 200. 표본: 혈액 시료의 흡광도, A공백: 시료가 없는 키트의 흡광도 값, 표준: 표준시약의 흡광도 값, 200 : 농도에서 표준시약200mg/dL.인슐린, 렙틴 및 항상성 모델 평가 - 인슐린 저항성(HOMA-IR) 결정:인슐린 수준은 인슐린 ELISA 키트에 의해 결정되었습니다. 여기, 25µL의 혈장이 추가되었습니다.시약 및 흡광도는 450 nm에서 측정되었습니다. 총 렙틴 함량은 다음을 사용하여 결정되었습니다.렙틴 효소 면역 측정 키트. 그럼 100µ혈장의 L을 분석하고 흡광도ELISA 판독기를 사용하여 450 nm에서 측정했습니다. 전체 실험은 에 따라 수행되었습니다.제조업체의 지침. HOMA-IR 값은 항상성 모델에서 결정되었습니다.평가 방정식=공복 혈장 인슐린 농도(mU/mL)× 공복혈당농도(mmol/L)/22.5.혈장 지질 과산화: 여기에서 0.5mL의 혈장을 1mL의 시약(15%,{{0}}.25N 염산(HCl) 및 0.375% 중 w/v 트리클로로아세트산,w/v 티오바르비투르산0.25 N HCl) 및 100℃의 수조(Water Bath, BUCHI 461, Zürich, Switzerland)에 넣었다.◦C에 대한15 분. 냉각 후 n-부탄올 1mL를 가하고 세게 흔든 다음 1500℃에서 원심분리한다.× g 10분 동안 상등액을 수집하고 532 nm에서 흡광도를 측정하였다 [12]. 말론디알데히드(MDA) 농도(nM/mL)=[(샘플532nm에서− A532 nm에서 공백)/ (기준532nm에서− A532 nm에서 공백)] × 5. 혈장 테스토스테론 및 황체형성 호르몬(LH) 수치 측정: 테스토스테론ELISA 키트를 사용하여 혈장 내 테스토스테론 수치를 측정했습니다. RIA 키트를 사용하여LH 농도를 결정합니다. 그럼 50µL의 플라즈마가 추가되었고 계산은 다음을 기반으로 했습니다.호르몬 LH-RP-3(표준)의 농도. 에 따라 추가 단계를 수행했습니다.제조업체의 지침에 따릅니다.종양 괴사 인자(TNF)의 측정- 및 인터루킨-6(IL-6) 농도:포획된 항체를 코팅 완충액에 250배 희석하고 {{1}웰 플레이트(100µL/잘),그리고 4로 유지◦C. 하룻밤. 상층액을 흡인하여 15회 세척하였다.버퍼(1배 PBS, 0.05% Tween 20). 200과 인큐베이션(1시간) 후µ분석 희석제 g, 세포는세척 완충액 및 100으로 5회 세척µL의 TNF- 표준 용액 또는 테스트 샘플은각 웰에 첨가하고 2시간 동안 배양하였다. 세탁 후 100µL의 IL{0}} 검출된 항체가 추가되었습니다.그리고 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 상층액을 흡인하고 5회 세척하였다. 그 다음에,480 µAvidin-horseradish peroxidase(HRP) 효소 L을 첨가하고 실온에서 30분 동안 인큐베이션했습니다.온도. 상층액을 흡인하고 세척 완충액으로 5회 세척하였다. 그럼 100µL 기질 용액을 첨가하고 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 나중에 50µ중지의 L용액(1M 인산)을 각 웰에 첨가하고 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.정자 및 고환 매개변수 분석정자 샘플 수집: 정자 샘플 수집은 다음 지침에 따라 수행되었습니다.이전에 보고된 방법 [13]. 상층액에서 정자를 채취하여 사용하였다.추가 분석.정자 수, 정자 운동성 및 비정상 정자 수:혈구계산기와 트립판 블루 용액을 사용하여 계산합니다. 그럼 100µL의 정자 액체는트리판블루 용액과 혼합하여 정자수, 운동성, 비정상정자수를 측정하였다.혈구계와 현미경을 사용하여 계산 [14]. 정자와 고환의 니트로 블루 테트라졸륨 NBT 감소 및 지질 과산화: 지질과산화 및 NBT 환원은 플라즈마 분석과 동일한 절차에 따라 분석되었습니다.

슈퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD) 및 카탈라제 활성 측정: 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD) 활성은 RANSEL 키트를 사용하여 분석되었습니다. 여기에서 0.05mL의 고환 균질물1.7mL의 반응 용액(0.05mM 크산틴, 0.025mM 2-(4-요오도페닐)-{{0}}(4-니트로페놀)-5-페닐테트라졸륨 클로라이드(INT)). 혼합 후, 0.25mL xanthine oxidase(80U/L)를 첨가하고 상온에서 30초 동안 상온에서 반응시켰다. 흡광도는505 nm에서 측정되었습니다. 고환 균질물의 단백질 농도는Bio-Rad DC 단백질 분석 키트 및 비활성(U/mg 단백질)을 계산했습니다. 카탈라아제(CAT) 활성은 이전에 보고된 방법에 따라 결정되었습니다 [15]. H&E(헤마톡실린 및 에오신) 염색고환을 10%의 포르말린에 24시간 동안 담그고 4℃에서 보관했습니다.◦C. 조직을 조각으로 자른다.마이크로 사이즈로 슬라이드에 부착되어 있습니다. 고정(95% 메탄올 + 5% 아세트산) 후 슬라이드를헤마톡실린에 3분간 담그고 흐르는 물에 5분간 씻은 후1분 동안 50%, 70% 및 90% 알코올. 그 후, 슬라이드를 10초 동안 eosin으로 염색하고,100% 알코올에 1분간 담궈서 색이 바래도록 합니다. 마지막으로 슬라이드를 자일렌에 1회 담가두었습니다.분. 나중에 슬라이드를 공기 건조하고 밀봉했습니다. 염색된 튜브를 역위상차로 배치했습니다.현미경(도위 위상차 현미경, Olympus CK-2, Tokyo, Japan)으로 관찰형태학.시상하부의 분석마우스 KISS1, G-단백질 결합 수용체(GPR) 54, 사이토카인 신호전달 억제인자 3(SOCS-3)및 시르투인 1(SIRT1)유전자 서열은 NCBI(National Center for Biotechnology정보) 유전자 데이터베이스 및 특정 프라이머는 Primer 5를 사용하여 설계되었습니다.{1}} PREMIER Biosoft,팔로 알토, 캘리포니아, 미국.). 실험에 사용된 프라이머는 표에 나열되어 있습니다.1.

시상하부에서 리보핵산(RNA) 추출. RNA 추출뇌의 시상하부는 RNeasy Lipid Tissue Mini Kit를 사용하여 수행되었습니다. 얻은mRNA는 역전사(RT) 및 중합효소 연쇄 반응에 의해 정량적으로 측정되었습니다.(PCR). RT 분석에서 얻은 보완 DNA는 다음 위치에 저장되었습니다.−20 ◦나중에 사용하기 위해 C.추출된 DNA는 Taq 중합효소를 이용하여 중합효소연쇄반응(PCR) 분석을 수행하였다.그럼 5~10µPCR 산물의 L을 취하여 1.5% 한천에서 전기영동으로 분석했습니다.콜로이드. 이미지는 UVP BioDoc-It 이미징 시스템에서 촬영되었습니다. 역전사 보완deoxyribonucleic acid(cDNA)를 채취하고 IQ SYBR Green Supermix를 사용하여 PCR을 수행했습니다.전부. 나중에 iQTM 5 광학 시스템 소프트웨어로 분석했습니다. 를 이용하여 단백질을 추출하였다.단백질 추출 시약(T-PER). 그런 다음 고환 균질액 20mg을 400mg에 첨가했습니다.µL T-PER 및 원심분리기(High-Speed ​​Centrifuge, Hettich CR-12, Tuttlingen, Germany) at 4◦C (125,000× g) 20분 동안 다음 방법은 "식별 및 정량화"와 유사했습니다.시험관 내 분석에서 "단백질 분석".2.3. 통계 분석실험 결과는 평균으로 표현되었습니다.± 표준편차(평균± SD) 및데이터는 Statistical Product & Service Solutions(SPSS) 11.{1}} 소프트웨어, IBM, Armonk,미국 뉴욕주 뉴욕. 그룹 간의 차이는 다음의 일원 분석으로 분석되었습니다.분산(ANOVA). 다른 그룹의 다중 비교는 Duncan의 테스트에 의해 분석되었습니다.가치p < 0.05="" as="" the="" signifificant="">

3. 결과

3.1. 체외 분석

3.1.1. ECH, CTE 및 RES의 항산화 활성 비교

장기간의 높은 산화 스트레스와 만성 염증은 당뇨병의 주요 원인입니다.합병증 [16]. CTE는 에키나코사이드와 같은 다양한 페닐에타노이드 배당체를 포함합니다.(ECH) 및 액테오사이드, 잠재적인 항산화 활성 [17]. DPPH 라디칼 소거ECH의 항산화 활성을 평가하기 위해 assay를 수행하였다. 트롤록스와 레스베라트롤(3,5,4'-트리히드록시스틸벤, RES)을 각각 표준 및 양성 대조군으로 취하였다. 보여진 바와 같이그림에서1, ECH는 더 나은 라디칼 소거 활성을 보였고 활성은 유의하게 더 높았습니다.양성 대조군(RES)보다

3.1.2. LC-540 및 TM3 Leydig 세포에서 ECH의 세포 생존율다른 농도의 ECH의 세포 생존력을 평가하기 위해 MTT 분석을 수행했습니다.LC{0}} Leydig 세포 및 TM3 Leydig 세포는ECH(그림2). 다른 농도에 비해 100-µM 농도(100의 희석)µM 2% FBS에서) ECH는 TM3 Leydig 세포에서 더 나은 세포 생존력을 보여주었습니다. 결과는 다음과 같다.증가된 ECH 농도는 세포에 대한 어떠한 유의미한 독성에도 기여하지 않습니다.

3.1.3. LC-540 및 TM3에서 NBT 분석에 의한 AGE 유도 과산화물 생성에 대한 ECH의 영향라이디히 셀

AGEs는 포도당의 산화와O와 같은 자유 라디칼2-, 히드록실 라디칼 및 카르보닐기 [18]. 로 자극을 받은 후50 µg/mL의 AGE, LC-540(그림3a) 및 TM3(그림3b) 세포를 ECH 및 RES로 처리(5 µ엠과 10µ남). 그 결과 슈퍼옥사이드 음이온의 생성이 증가한 것으로 나타났습니다.대조군(자극된 AGEs)에서, 그러나 슈퍼옥사이드 음이온의 생성은ECH 및 RES로 치료. 그림에서3, ECH 및 RES가 레벨을 감소시키는 것으로 이해되었다.과산화물 생성을 억제하고 세포를 산화적 손상으로부터 보호합니다. LC{0}} 세포의 경우,10 µM ECH는 정상군과 거의 유사한 활성을 보였다. 두 지역 모두에서 과산화물 생산세포는 ECH와 RES의 농도가 증가함에 따라 감소했습니다.3.1.4. H에 대한 ECH의 영향2O2 AGE-자극된 LC{1}} Leydig 세포에서 생산DCFH-DA 분석은 산화 종의 존재를 검출하기 위해 실행되었습니다. 에 들어간 후세포에서 FL 형광 염료 DCFH-DA는 세포 내 H에 의해 산화됩니다.2O2 디클로로플루오레세인을 형성(DCF). 그림과 같이4, 세포 내 H의 유의한 증가가 있었습니다.2O2 생산AGE-자극군(대조군)에 10을 추가한 반면µM ECH 및 RES 대폭 감소H2O2 세포에서 생산. 10의 관리µM ECH는 H의 약 47.1%만을 초래했습니다.2O2 생산, 통제 그룹에 비해 현저히 낮습니다.

3.1.5. RAGE 및 NF-에 대한 ECH의 영향κAGE 자극 LC의 B 단백질 발현 수준-540라이디히 세포

LC{0}} Leydig에서 RAGE의 존재를 확인하기 위해 웨스턴 블롯 분석을 수행했습니다.세포. RAGE에 대한 ECH의 효과(그림5a) 및 NF-κB(그림5b) 단백질 발현 수준AGEs 자극 Leydig 세포에서 그림에 표시5. 그 결과, 50µg/mLAGEs의 농도는 더 높은 RAGE와 NF-를 유도했습니다.κLC{0}} Leydig 세포에서의 B 발현 및10 µECH 및 RES의 M 농도는 RAGE 및 NF-의 발현을 현저히 감소시켰습니다.κB. NF-의 표현κB는 RAGE 길항제보다 RES와 ECH에서 유의하게 낮았다. 그래서, 결과ECH는 RAGE와 NF-의 수준을 감소시켜 염증 수준을 감소시키는 것을 확인했습니다.κB.

.1.6. AGE 자극 LC-540 Leydig 세포에서 테스토스테론 합성 경로에 대한 ECH의 효과.

정자 형성 및 남성 불임의 과정은 테스토스테론의 존재에 달려 있습니다.그림과 같이6, StarAR의 표현(그림6a), CYP11A1(그림6b), CYP17A1(그림6c), 및 HSD17 3(그림6d) 단백질은 AGE-자극된 LC-540 Leydig에서 유의하게 감소했습니다.세포(대조군). StAR, CYP11A1, CYP17A1 및 HSD17의 표현 3개의 단백질은RAGE 길항제, RES 및 ECH가 추가되었을 때 유의하게 증가했습니다. 증가ECH 및 RES 처리군 모두에서 StarR 및 CYP11A1 단백질의 발현이 관찰되었다.CYP17A1의 발현 수준은 RES 및 ECH 그룹에서 거의 유사했습니다. 의 표현들HSD17 ECH 처리된 Leydig 세포의 3 단백질은 RES 및 RAGE보다 훨씬 높았습니다.길항제 처리된 세포. StarR, CYP11A1, CYP17A1 및 HSD17의 발현 증가 3 단백질테스토스테론의 정상적인 생산을 나타냅니다.

5세포/mL 및 RES 및 ECH 처리(10µM) 24시간 동안 투여하였다. -액틴을 내부 대조군으로 사용했습니다. 일반 그룹(Nor)배지를 처리하고 대조군(Con)은 AGEs(50µg/mL).

결과평균으로 나타내었다±SD(n = 3). 상당한 차이(p < 0.05)="" were="" represented="" by="" letters="">Duncan의 다중 범위 테스트에 의해 분석되었습니다.