한약재의 항우울제 및 인지 개선 활성 Ⅰ
Jun 23, 2022
추상적인
10% 이상의 사람들이 일생에 적어도 한 번은 우울증 및 관련 정신 장애를 앓고 있으며 우울증 및 관련 정신 장애는 세계에서 가장 큰 공중 보건 문제 중 하나입니다. 다중 시스템 이론은 다중 시스템의 조절 장애가 우울증 및 관련 정신 장애의 발병 기전의 기초가 되며 다중 시스템 조절 장애 이론에 기반한 새로운 치료법이 시급하다고 주장합니다. 이 연구에서 한약재의 항우울 효과시스탄체 데저티콜라YCMa 및시스탄체 튜불로사조사되었다. 목초시스탄체달임은 마우스 꼬리 서스펜션 테스트에서 부동 기간을 크게 줄였습니다. 허브 달인을 처리한 쥐는 Morris 수중 미로 테스트에서 공간 학습 및 기억력이 개선된 것으로 나타났습니다. 허브 즙을 처리한 그룹은 하향조절된 모노아민 산화효소(MAO) 활성을 나타냈습니다. 뇌의 도파민(DA) 농도가 상향 조절되어 허브를 나타냅니다.시스탄체달인은 신경 흥분성을 개선했습니다. 코르티코스테론(CORT)의 혈청 농도가 하향 조절되었으며, 이는 마우스가 스트레스 수준 감소로부터 이익을 얻었다는 것을 보여줍니다. 따라서 항우울제의 효능과 기전은중국 전통 허브시스탄체이 연구에서 탐구되었습니다. 목초시스탄체우울증에 대한 보완 및 대체 요법으로 개발될 가능성을 보여주었습니다.
1. 소개
우울증 및 관련 기분 장애는 인구의 12~17%가 일생에 한 번 이상 경험하는 것으로 추정되며 정신 장애의 주요 원인 중 하나이며 전 세계적으로 주요 공중 보건 문제 중 하나로 간주됩니다. 특히, 우울증 환자의 상당수는 기억 상실, 집중력 문제, 에너지 또는 피로 감소, 취미 및 활동에 대한 흥미 또는 즐거움 상실, 수면 장애, 이른 아침 기상 또는 과다 수면으로 고통받습니다. 우울증 및 관련 증후군의 이상에 대한 신경 기질이 불분명하지만 일반적으로 신경 가소성 및 세포 회복력의 손상이 우울증의 병태 생리를 유발하고 성공적인 치료는 신경 전달 물질 수준의 개입에 달려 있다는 것이 인정됩니다. 우울증 약물에 대한 접근은 기본적으로 모노아민, 특히 세로토닌(5-HT)과 노르에피네프린(NE)의 조절장애가 우울증 발병에 기여하고 신경전달물질 시스템과 도파민의 개입에 기여한다고 주장하는 고전적인 모노아민 시스템 가설을 기반으로 합니다. 작용제와 도파민-노르아드레날린 조절제는 주요 우울증 장애의 증상을 완화시킬 것입니다. 널리 처방되고 있지만 항우울제의 치료 효과가 의심스럽고 환자의 상당수가 모노아민 시스템 조작에 반응하지 않기 때문에 부작용을 무시할 수 없습니다. 최근 우울증 발병에 대한 새로운 이론은 염증 경로, 산화 스트레스 경로, 시상하부-뇌하수체-부신(HPA) 축, 대사 및 생체 에너지 시스템, 신경 영양 경로, 글루타메이트 시스템, 아편유사제 시스템 및 콜린성 시스템은 우울증 발생과 밀접한 관련이 있습니다. 증거는 다중 표적 중재가 하나의 단일 표적 중재보다 더 나은 효능을 생산했음을 보여줍니다. 다계통 조절장애 이론에 기반한 새로운 치료법이 시급합니다.
보고에 따르면 허브 제품은 미국 인구의 절반 이상을 소비했습니다. 우울증을 치료하는 보조 방법으로 허브 또는 허브 제품에 대한 관심과 수요가 전 세계적으로 증가하고 있습니다. 여러 약용 식물이 우울증 완화에 유익한 효과를 나타내는 것으로 밝혀졌습니다. 우울증 억제 및 인지 기능 개선 효과가 있는 것으로 보고된 허브로는 갈매나무,은행 나무,파이퍼 니그룸,천공과,그리포니아 심플리폴리아. ferulic acid와 piperine의 병용 투여는 monoaminergic system을 조작하여 생쥐에서 상승적인 항우울제와 같은 효과를 나타냈습니다. Albiflorin은 신경전달물질 수용체와 수송체에 대한 높은 선택적 친화성과 자유롭게 움직이는 쥐의 시상하부에 있는 5-HT와 NE의 세포외 농도를 크게 증가시키는 것이 특징입니다. 약초멜리사 오피시날리스L.은 세로토닌성 신경전달물질 수치에 영향을 주어 쥐의 우울한 행동을 완화시켰다. 우울증에 대한 대체 요법으로 개발된 이러한 약초 또는 달인은 우울증 증상을 완화하고 항우울제 개발을 위한 새로운 소스를 제공합니다. 목초시스탄체중국 북부의 건조한 땅과 사막에 분포하는 이 종은 중국에서 1년 이상{1}} 다양한 질병을 치료하는 데 널리 사용되는 한약재입니다. 허브의 다양한 효능시스탄체최음제 범위 [14], 면역 증진 [15], 항산화제 [16] 및 간 보호 [17] 속성.C. 데저티콜라달인은 고환 스테로이드 생성 효소를 유도합니다.18], 음경 발기 반응 촉진, 거세 쥐의 발기 반응 잠복기 단축 [19]. 목초시스탄체억제성 세포사멸 유전자와 신경영양 인자를 조절하여 도파민성 뉴런의 활동을 억제하는 것으로 보고되었습니다.20].C. 튜불로사달인은 A로 인한 인지 기능 장애를 수정했습니다. 1-42 아밀로이드 침착을 차단하고 콜린성 및 해마 도파민성 뉴런 기능을 되살리며 [21]. 허브의 신경 보호 속성시스탄체인지 관련 질병의 치료 가능성을 의미합니다. 우울증은 건망증과 인지 저하가 흔한 증상으로 나타나는 감정 반응의 일반적인 혼합 모드입니다.22]. 목초시스탄체건망증을 치료하기 위해 중국 전통 의학으로 일반적으로 사용되었습니다. 또한, 최근 보고서는C. 튜불로사비척추동물의 장수 촉진 및 후각 관련 학습 및 기억력 향상에 도움이 됩니다.초파리모델 [23]. 이러한 사실은 허브의 인지 개선 특성을 나타냅니다.시스탄체; 여기 이 연구에서 우리는 모노아민 시스템과 HPA 축을 조절하여 포유류 모델에서 항우울제 특성과 인지 개선 활동과의 관계를 처음으로 특성화했습니다. 허브의 항우울 특성 및 예비 메커니즘 조명시스탄체허브의 응용 범위를 확장할 수 있습니다.시스탄체, 우울증에 대한 대체 치료법으로 개발될 수 있습니다.
2. Cistanche의 항우울 기능 재료 및 방법
2.1. Cistanche의 식물 재료 및 달인 준비
C. 데저티콜라YCMa는 중국 Nei Mongol Autonomous Region에서 얻었습니다.C. 튜불로사중국 신장 위구르 자치구에서 입수했다. 달이기 전에 허브(C. 데저티콜라YCMa 또는C. 튜불로사)는 HPLC(high performance liquid chromatography)(Milford, MA, Waters, USA)를 사용하여 echinacoside 및 verbascoside 함량을 검출하기 위해 검사하였고, 적격 제품(중화인민공화국 약전에 따름)을 동물 실험에 사용하였다. . 이 달인은 국부 교육부의 식품 및 건강 공학 연구 센터에서 개발한 수증기 기화 방법을 기반으로 하여 얻은 것입니다. 건조한시스탄체 데저티콜라YCMa 125g을 분쇄하여 120-망체로 체과한 후 분말을 3L의 초순수에 녹이고 1{9}}0도에서 2시간 가열한 후 상온으로 냉각하여 체과하였다. ; 상층액을 재활용하였다. 그런 다음 침전물을 2L 초순수에 용해시킨 다음 1.5시간 동안 가열하고 위에서 언급한 대로 냉각하여 상등액을 재활용했습니다. 그런 다음 침전물을 상등액을 재활용하는 데 사용했습니다. 모든 상층액의 함량은 60도에서 회전식 진공 증발기로 농축되었습니다. 최종적으로 조 약물 농도를 0.5g/ml로 설정하고 생성물을 -20도에서 보관하였다.
2.2. HPLC 분석에 의한 Echinacoside 및 Verbascoside 분석
HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)를 사용하여 에키나코사이드 및 버바스코사이드의 정성 및 정량 분석을 측정했습니다. verbascoside(순도 > 93%) 및 echinacoside(순도 > 93%)는 National Institutes for Food and Drug Control(Beijing, China)에서 구입하여 표준 대조군으로 활용했습니다.
2.3. Cistanche에 대한 동물 관리 및 실험 수행
대상은 광동성 의료실험동물센터에서 제공한 SPF(특정 병원체 무함유) 수컷 쿤밍 마우스(21~25g)였다. 동물을 플라스틱 케이지(케이지당 10마리)에 수용했습니다. 환경 조건은 습도 40~70%, 실온 21±1도, 12시간 : 12시간 명암으로 설정하였다. 모든 동물 실험은 Sun Yat-sen University의 동물 윤리 위원회의 승인을 받았습니다.
2.4. Cistanche의 테일 서스펜션 테스트
꼬리 서스펜션 테스트는 Cryan et al.에 의해 설명된 프로토콜에 따라 수행되었습니다. [24] 약간의 변경이 있습니다. 간단히 말해서, 21일째에, 머리는 바닥에서 50mm 높이에 있는 나일론 카테터로 묶인 금속 교수대를 사용하여 꼬리에 쥐를 매달았습니다. 쥐는 꼬리 끝에서 10~20mm 떨어진 접착 테이프의 고리에 매달려 있고 물막이 판자로 음향 및 시각적으로 격리되었습니다. 마우스의 신체 움직임은 기록되었고 호흡 움직임은 무시되었습니다. 실험 전날, 마우스는 적응을 위해 8분 동안 정지시켰다.
2.5. Cistanche에 대한 Morris Water Maze 테스트
수중 미로 테스트는 Vorhees et al.의 설명에 따라 수행되었습니다. [25–27] Chinese Academy of Medical Sciences에서 개발한 장치를 사용합니다. 물이 채워진 원형 풀장(직경 150cm)(26 ± 1도 ; 림 높이(물 표면에서 벽 림까지의 거리): 10cm) 사용, 원형 구조 플랫폼(직경: 11cm; 플랫폼 중심점과 수영장 사이의 거리) 벽: 27cm)는 수면 아래 1-1.5cm에 잠겼고 테스트 영역은 반사를 피하기 위해 간접 조명(50 ± 10lux)으로 조명되었습니다. N, S, E 및 W의 4가지 시작 위치가 사용되었습니다. 공간 학습 테스트를 위해 동물은 고정된 시작 위치에서 9-11일에 매일 훈련되었습니다. 탈출 잠복기는 마우스의 공간 기억과 학습 능력을 표시하기 위해 측정됩니다. 마우스가 플랫폼을 찾거나 올라갈 수 없으면 마우스를 플랫폼으로 이끌고 10초 동안 머무릅니다. 60초 동안 휴식을 취한 후 다음 훈련 세션이 시작됩니다. 마지막 공간 학습 테스트에서 얻은 데이터를 성형의 기본 값으로 사용했습니다. 23~28일에는 장소탐색과 공간탐사를 실시했다. 장소 탐색 테스트는 6일 동안 지속되었으며 오후 1시에 수행되었으며, 동물의 머리가 수영장 벽을 시계 방향으로 향하도록 물에 넣고 잠복기(2분 이내)를 기록했습니다. 장소 탐색 테스트가 완료된 후 플랫폼이 제거되었습니다. 마우스를 임의의 위치에서 머리가 수영장 벽을 향하게 하여 물에 넣고 플랫폼이 2분 이내인 곳에서 마우스가 헤엄치는 움직임 및 빈도를 기록했습니다. 동작 궤적은 마우스 동작의 다기능 자율 기록 장치(YLS{21}}A, Yiyan Technology, Jinan, China)로 기록되었습니다.
2.6. MAO 활동 감지
MAO 활성은 MAO 검출 키트(A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China)를 사용하여 측정하였고 검출은 제조사의 프로토콜에 따라 수행하였다. 뇌 조직으로부터 균질물을 얻었다; 500μ내가 300과 혼합μl 에이전트 1 및 300μAgent 2의 l을 37도에서 3시간 동안 배양한 다음 300μl, 에이전트 3, 에이전트 4 3ml, 2분 동안 소용돌이. 반응 혼합물을 3,{5}} rpm으로 10분 동안 원심분리하고, 상층액의 광학 밀도를 242 nm 여기광을 사용하는 자외선 및 가시광선 분광광도계(Lambda 25, PerkinElmer, USA)로 측정했습니다.
2.7. 신경전달물질과 ACTH 및 CORT의 효소 결합 면역흡착 분석
도파민(DA), 노르에피네프린(NE) 및 5-하이드록시트립타민(5-HT)에 대한 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA) 검출 키트는 BLUE GENE, Shanghai에서 구입했습니다. ELISA 검출 키트는 Qiyun Biotech, Guangzhou에서 구입했습니다.
절차는 다음과 같습니다. 실험은 실온에서 수행되었습니다. 1-10에서 캡처 항체로 PVC 마이크로타이터 플레이트의 웰을 코팅합니다.μ탄산염/중탄산염 완충액(pH 9.6)의 g/mL 농도. 플레이트를 밀봉하고 밤새 4도 배양합니다. 플레이트를 PBS/tween으로 3회 세척하고 비특이적 결합 부위를 Block Solution으로 차단하고; 그런 다음 PBS/트윈으로 플레이트를 3회 세척합니다. 표준물질과 검체는 Blocking Solution에 희석하여 100μl을 플레이트의 웰에 첨가하고 플레이트를 밀봉하고 37도에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 100 추가μl 희석된 검출 항체 및 플레이트를 37도에서 1시간 동안 배양합니다. PBS/Tween으로 플레이트를 3회 세척합니다. 50 추가μl 발색 용액과 플레이트를 빛으로부터 멀리 유지하고 실온에서 15분 동안 배양합니다. 50μl 반응을 멈추기 위해 stop buffer를 첨가합니다. 30분 내에 405 nm로 설정된 마이크로플레이트 판독기로 각 웰의 광학 밀도(OD)를 측정합니다.
2.8. 통계 분석
모든 데이터는 평균 ± SEM(평균의 표준오차)으로 표시하였으며, 유의한 차이는 다음과 같이 분석하였다. t-test 또는 일원 분산 분석(one-way ANOVA)에 이어 SPSS 16.0을 사용한 Duncan의 다중 범위 테스트 및 그룹 간의 차이P< 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.
