노화 가속 마우스의 시냅스 형태 가소성에 대한 Cistanche의 배당체 효과
Mar 11, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
LIAN Juanqi1, WANG Lu2, ZHAO Fujun3, LIN Shuai3, YAN Xusheng4, JIA Jianxin4, CAI Zhiping4
(1. 중국 바오터우 014060 바오터우 의과대학 대학원 2014학년도)
(2. 바오터우 의과대학 2015학년도 임상의학 12반)
(3. 바오터우 의과대학 2013년 법의학 1급)
(4. 바오터우 의과대학 인체해부학과)
요약
목적: 의 효과를 조사하기 위해배당체시스탄체 (GCs) 노화 촉진 쥐 경향 8 (SAMP8)에서 해마 뉴런의 시냅스 가소성.행동 양식: 40 마우스를 대조군, 비히클 그룹, 저용량 그룹(투여 GC 2.5 mg/kg·d), 중간 용량 그룹(투여 GC 5.0 mg/kg)으로 무작위로 나누었습니다. d) 및 고용량 그룹(GC 10.0 mg/kg·d 투여). 대조군의 쥐에게는 어떠한 개입도 하지 않았습니다. 투여군 및 비히클군은 30일 동안 복강내 투여(GC/식염수) 또는 식염수를 투여받았다. 해마 CA1 영역의 정상 피라미드 뉴런의 수는 Nissl 염색에 의해 계산되었습니다. 시냅스의 수지상 가시 수는 골지 염색으로 계산하고 PSD{11}}의 단백질 발현은 면역조직화학으로 정량화했습니다.결과: 대조군과 비교하여 GC는 해마 CA1 영역에서 정상 피라미드 뉴런의 수를 유의하게 증가시켰습니다(P<0.05) and="" increased="" the="" number="" of="" dendritic="" spines="" in="" synapses="" (p=""><0.05). the="" expression="" levels="" of="" psd-95="" in="" administered="" groups="" were="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" control="" group="" (p=""><0.05), and="" the="" effect="" in="" the="" middle="" dose="" group="" was="" the="" most="" significant.="">결론: GC는 해마 피라미드 세포의 생존율을 향상시키고 시냅스 가소성을 향상시킬 수 있습니다.
키워드: cistanche(GC)의 배당체; 노화 가속 마우스; 수지상 척추; PSD－95
사회인구의 고령화가 심각해짐에 따라 유병률이알츠하이머병(AD) 점차 증가하여 환자 가족과 사회에 큰 부담
[1]. 알츠하이머병의 주요 임상 증상은 인지 장애와 기억 장애이며, 주요 증상은 세포외 아밀로이드 침착물과 세포내 신경섬유 엉킴에 의해 형성되는 노인반이다[2]. 알츠하이머병의 발병기전은 아직 확실하지 않습니다. 시냅스의 병리학적 변화는 알츠하이머병 기억과 인지 기능 장애의 신경생물학적 기초로 간주됩니다. 시냅스의 비정상적인 변화는 알츠하이머병 발병의 핵심 연결 고리일 수 있습니다. 노화 가속 마우스(SAM)는 근친교배 노화 모델 마우스입니다. 그것의 P8 서브라인은 균일하고 안정적인 노화 병리학적 특성을 가지며, 이는 개월이 증가함에 따라 학습 및 기억 및 인식의 점진적인 감소로 나타납니다. 알려진 기능 장애 및 병리학적 징후는 AD 환자와 유사하므로 SAMP8 마우스는 노화 관련 학습 및 기억 손상의 메커니즘을 연구하기 위한 이상적인 동물 모델입니다.
이 기사에서는 세포 생존율을 분석하고, 수지상 가시 밀도를 측정하고, 시냅스 후 압축을 감지하여 GC의 가능한 메커니즘을 탐구하려고 합니다.(배당체시스탄체)AD 관련 치료의 관점에서 빠르게 노화되는 마우스에서 해마 뉴런의 시냅스 형태학적 가소성에 영향시스탄체배당체(GC) 공간 학습 및 기억 장애는 이론 및 실험 기반을 제공합니다.
1 재료 및 방법
1.1 실험 동물 및 그룹화 깨끗한 환경, 주변 온도(24.{9}} ± 1.{11}}) 도, 습도(5{13}}.0 ± 5.0)퍼센트, 무료 음식과 물. 실험을 시작하기 위해 동물을 11개월까지 키웠습니다. 동물을 무작위로 5개 그룹(8마리/그룹)으로 나누었다: 블랭크 대조군(대조군), 용매 대조군(비히클),cistanche 총 배당체(GCs) 저용량군[2.5mg/(kg·d)], 중용량군[5. 0 mg / (kg · d)], 고용량 그룹 [10.{12}} mg / (kg · d)]. 대조군의 동물에게는 개입이 제공되지 않았습니다. 저용량 그룹의 동물에게는 GC 2.5mg/(kg·d), 중간 용량 그룹의 동물에게는 GC 5.{14}} mg/(kg·d), 고용량 그룹에는 GC가 제공되었습니다. 0 mg/(kg·d), 비히클 그룹의 동물에게 동일한 양의 생리 식염수를 제공했습니다. 30일 동안 약물 또는 생리식염수를 0.5mL/d로 지속적으로 복강내 주사합니다.
1.2 표본 준비 및 가공 동물은 마지막 투여 24시간 후 희생시키고 마취시킨 후 목을 희생시켰다. 심장을 노출시키기 위해 흉강을 절단하고, 혈액을 배출하도록 우심방 부속기를 절단하고, 좌심실에 관류 바늘을 삽입합니다. 생리 식염수 100mL를 주입한 후, 쥐의 사지가 뻣뻣해질 때까지 4% 파라포름알데히드를 계속 주입했습니다. 뇌를 가지고 4% 파라포름알데히드에 24시간 이상 두십시오.
1.3 약물 및 시약 GC(배당체시스탄체)는 China Academy of Traditional Chinese Medicine에서, 시냅스후밀도 －95, PSD －95는 Epitomic에서 구입했으며 Coomassie Brilliant Blue CBBG 250 키트는 Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd. Engineering Institute에서 구입했습니다. DAB 면역조직화학 키트는 다음에서 구입했습니다. 베이징 중산 Jinqiao 생명 공학 회사.
1.4 Nissl 염색 및 세포 수 24시간 이상 뇌 조직의 4% 파라포름알데히드 고정, 구배 알코올, 투명 자일렌, 왁스 침지, 기존 파라핀 포매, 5μm 두께 직렬 섹션으로 트리밍 및 탈수. 슬라이스와 탈랍을 물에 담가 1% 톨루이딘블루로 37도에서 60분간 염색, 5분×3회 세척, 95% 알코올, 100% 알코올로 감별 탈수, 투명한 자일렌, 중성검으로 장착, 아래 관찰 현미경. 각 그룹의 동일한 해마 단면의 CA1 영역은 3개의 관찰 필드(x100)에서 무작위로 선택하고, 1 mm 이내의 정상 피라미드 세포의 수를 세어 평균을 취하여 분석하였다.
1.5 변형 골지 염색 수리된 뇌 조직을 Golgi-Cox 염색 용액에 넣고 14일 동안 빛을 차단하고 2일마다 용액을 교체합니다. 뇌 조직을 30% 자당에 넣고 4도의 냉장고에 넣습니다. 조직은 바닥으로 가라앉은 후 절단할 수 있습니다. 절단 및 염색을 위한 진동 마이크로톰; 개발을 위한 해결사 솔루션; 마운팅 플레이트의 건조, 관찰 및 현미경으로 카운팅. 쥐의 각 그룹의 해마 CA1과 CA3의 뉴런 정점의 수지상 척추의 변화를 관찰하고 수지상 척추의 밀도를 계산합니다.
1.6 면역조직화학적 절편을 물로 탈파라핀화하고 10분 동안 3% H2O2로 배양하여 내인성 퍼옥시다제 활성을 제거하고 증류수로 5분 × 3회 세척하고 고압 마이크로파로 수리하고 PBS로 세척 5분 × 3회, 염소 혈청을 실온에서 30분 동안 차단하고, 토끼 항-마우스 PSD{13}} 1차 항체를 적가하고, 4도에서 밤새, PBS로 5분 동안 세척 × 3회, 비오틴 표지 이차항체를 적가하고, 37도에서 2시간 배양, PBS로 5분 x 3회 세척, 양고추냉이 퍼옥시다제 표지 스트렙타비딘을 적하, PBS로 5분 x 3회 세척, 세척 2분 동안 DAB, 헤마톡실린으로 대조염색, 구배 알코올로 탈수, 크실렌으로 투명하고 장착합니다. 1.7 이미지 처리 및 통계 분석. 관찰을 위해 각 그룹의 동일한 해마 단면을 선택했습니다. CA1 영역에서 3개의 시야(x100)를 무작위로 선택하여 1mm 이내의 정상 피라미드 세포의 수를 세고 평균을 분석하였다. 면역조직화학의 결과는 IPP 7.0 이미지 분석 소프트웨어로 측정하였다. 실험 데이터는 SPSS 17.0 소프트웨어로 분석하였고 일원 ANOVA는 다중 표본 평균 쌍별 비교에 사용되었습니다. 피<0.05 was="" considered="" statistically="">
항알츠하이머병
2개의 결과
2.1 총 배당체의 효과시스탄체SAMP8 생쥐의 해마 정상 피라미드 세포 수 Nissl 염색 Nissl 염색 결과 대조군의 CA1 영역에서 뉴런의 수가 감소하고 배열이 무질서하며 대부분의 세포가 형태가 비정상인 것으로 나타났다. 및 용해 및 괴사. GC에 있는 세포의 형태(배당체시스탄체)군은 비교적 명확하고 완전했으며 많은 돌출부가 눈에 띄었고 Nissl 몸체는 자주색이며 핵소체는 깊게 염색되고 투명하며 중앙에 있으며 핵은 염색되지 않았습니다. 비히클 그룹의 세포 형태는 대조군과 유사합니다. 세포 수는 투여군의 CA1 영역에서 정상 피라미드 뉴런의 수가 증가함을 보여주었다(P<0.05); the="" difference="" between="" the="" medium="" and="" high="" dose="" groups="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05), the number of normal pyramidal neurons To a certain extent, it shows an upward trend with increasing dose. There was no significant difference in the number of normal pyramidal cells between the vehicle group and the control group (P>0.05). 표 1을 참조하십시오.
표 1 SAMP8 마우스 해마 Nis 염색, 정상 피라미드 세포 수 및 수지상 가시 수(개)에 대한 시스탄체 배당체의 효과
a는 대조군 t=0.193, P=0.582와 비교됩니다. b는 대조군 t=13.621, P=0.008과 비교됩니다. c는 대조군 t=21.798 , P=0.005와 비교됩니다. d는 대조군 t=18.326, P=0.006과 비교됩니다. e는 대조군 t=0.244, P=0.463과 비교됩니다. f는 대조군과 비교 t=10.903, P=0.010과 비교; g는 대조군 t=21.817, P=0.005와 비교됩니다. h는 대조군 t=15.572, P=0와 비교됩니다. 007.
2.2총 배당체의 효과시스탄체 SAMP8 생쥐에서 수지상 가시의 밀도에 대한 골지 염색은 대조군에서 수지상 가시의 수가 감소하고 밀도가 감소함을 보여주었다. 동물에게 GC를 제공한 후 수지상 가시의 수와 밀도가 증가했으며 많은 수의 돌출이 나타났습니다(P=0.048). 중간 용량 그룹과 고용량 그룹 사이에는 통계적으로 유의한 차이가 없었습니다(P=0.853). 수상돌기의 수와 밀도 선량의 증가에 따라 정도가 증가하는 경향을 보인다. 차량 그룹 및 제어
그룹에서 수지상 가시의 수와 밀도는 통계적 유의성이 없습니다(P=0.764). 표 1을 참조하십시오.
2.3 효과시스탄체SAMP8 마우스에서 PSD{0}}의 발현에 대한 배당체 PSD-95의 면역조직화학적 정성적 검출은 대조군이 PSD-95의 발현이 적고 세포체 염색이 더 밝았으며, 긍정적인 표현률이 더 낮았다. 시험관 내에서 GC를 보충한 후 세포체가 더 깊게 염색되었고 PSD-95의 발현 및 양성률이 증가했습니다(t=5.751, P<0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" middle-dose="" group="" and="" the="" high-dose="" group="" (t="1.077," p="">0.05). 어느 정도 PSD-95의 표현은 선량 증가에 따라 증가하는 경향을 보였다. 차량
There was no statistically significant difference in PSD-95 expression between the control group and the control group (t = 0.585, P>0.05).
3 토론
PSD{0}}는 시냅스 후의 주요 구성 요소이며 이온 채널, 시냅스 활성, 세포 내 신호 전달 경로 등과 관련된 다양한 시냅스 기능과 관련이 있습니다. [3]. PSD-95는 NMDA 수용체 신호 전달 경로에서 관련 단백질을 클러스터링하여 신호 전달 경로에서 중요한 역할을 하는 수용체-신호 전달 분자-조절 분자-표적 분자 복합체[4]를 형성합니다. NMDA 수용체는 해마 CA1 영역의 장기 강화(LTP) 유도와 학습 및 기억 과정에 관여합니다[5]. PSD{10}}는 이 과정에서 핵심적인 조절 역할을 하며 단백질 함량은 시냅스 가소성을 측정하기 위한 또 다른 분자 마커로 사용될 수 있습니다. 이전 연구에서 우리는 GC가(배당체시스탄체)SAMP8 마우스의 학습 및 인지 장애를 개선할 수 있지만 가능한 세포 형태학적 메커니즘을 명확히 하지 않았습니다. 이 실험은 가능한 세포 형태학적 메커니즘을 연구하는 것을 목표로 합니다.
이 실험에서 GC의 피라미드 세포 생존율 및 시냅스 가소성의 개선(배당체시스탄체)그룹은 차량 그룹 및 제어 그룹보다 우수했습니다. GC가 피라미드 세포의 형태를 더 크게 개선했음을 알 수 있습니다. 실험 결과는 더 높은 용량의 GC가 더 나은 효과를 발휘할 수 있음을 보여줍니다. 중간 투여군과 고용량 투여군의 비교에서, 투여량이 특정 농도에 도달해도 효과가 크게 변하지 않음을 알 수 있다. 따라서 GC 사용 시 GC의 낭비와 부작용을 피하기 위해서는 가장 적절한 농도를 선택해야 한다[6].
이전 연구에서는 GC가(배당체시스탄체)피라미드 세포의 생존율을 향상시켜 SAMP8 마우스의 학습 및 인지 장애를 개선할 수 있습니다[7]. GC가 신경줄기세포의 증식과 분화를 촉진하여 신경퇴행성 질환을 개선할 수 있다는 데이터도 있습니다[8-10]. 저자는 GC가 AD를 개선하는 기전이 시냅스 형태의 가소성을 개선하고 피라미드 세포의 수를 유지함으로써 달성될 수 있다고 믿으며, 이는 임상 AD의 예방 및 치료에서 GC의 궁극적인 사용을 위한 토대를 마련합니다.
참고문헌
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