Citrus Reticulata Blanco Peel의 피부 노화 방지 가능성 평가
Feb 27, 2022
연락처:jerry.he@wecistanche.com
Vinita D. Apraj1, Nancy S. Pandita2
1생물학과, 2화학과 Sunandan Divatia School of Science, SVKM의 NMIMS, Vile-Parle(W), Mumbai, Maharashtra, India
요약
배경: Citrus reticulata Blanco의 껍질은 전통적으로 강장제, 위장제, 수렴제 및 구충제로 사용됩니다. 스킨케어에도 유용하다. 목적: 공부하기 위해노화 방지체외 항산화 및 항효소 분석을 사용한 C. reticulata Blanco 껍질의 알코올 추출물의 잠재력.
재료 및 방법: 식물 추출물은 Soxhlation(CR HAE-Citrus reticulata의 뜨거운 알코올 추출물)과 침용법(CR CAE-Cold Alcoholic Extract of Citrus reticulata)으로 얻었습니다. 정성적 및 정량적 식물화학적 분석을 수행하였다. 또한, 시험관 내항산화제, 항효소 및 가스 크로마토그래피 질량 분석법(GC‑MS) 분석을 수행했습니다. 결과: CR HAE의 총 페놀 및 플라보노이드 함량은 CR CAE보다 높은 것으로 나타났습니다. 1,1‑Diphenyl‑2‑picrylhydrazyl, Superoxide 음이온 및 2,2'‑azino‑bis(3‑ethylbenzothiazoline‑6‑sulfonic acid) 분석에 대한 CR HAE 및 CR CAE의 EC5{51}} 값은 25{ {55}}.33 ± 40.16 µg/ml 및 254.73 ± 15.78 µg/ml, 221.27 ± 11.25 µg/ml 및 354.20 ± 23.79 µg/ml 및 59.16 ± 2.19 µg/ml 및 ± 2.17 µg/ml 및 5 CR HAE 및 CR CAE에 대한 산소 라디칼 흡광도 값은 각각 물질의 g당 1243 및 1063μmol의 6-하이드록시-2,5,7,8-테트라 메틸크로만-2-카복실산 당량인 것으로 나타났습니다. CR HAE 및 CR CAE 모두에 대해 항콜라게나제 및 항엘라스타제 활성을 평가했습니다. 항콜라게나아제 및 항엘라스타아제에 대한 CR HAE 및 CR CAE의 EC50 값은 각각 329.33 ± 6.38 µg/ml, 466.93 ± 8.04 µg/ml 및 3.22 ± 0.24 mg/ml, 5.09 ± 0.30 mg/ml였습니다. CR HAE는 CR CAE보다 더 강력한 항콜라게나제 및 항엘라스타제 활성을 나타냈습니다. CR HAE가 더 높게 나타났기 때문에 CR HAE의 GC-MS 분석을 수행했습니다.항산화제및 CR CAE보다 항효소 잠재력. 결론: C. reticulata 껍질은주름 방지스킨케어 제형.
키워드: 1,1‑Diphenyl‑2‑picrylhydrazyl, 2,2'‑azino‑bis(3‑ethylbenzothiazoline‑6‑sulfonic acid), 주름 개선, 엘라스타제, 가스 크로마토그래피 질량 분석, 산소 라디칼 흡광도
요약
• Citrus reticulata Blanco 껍질의 피부 노화 방지 잠재력은 다음을 통해 평가되었습니다.
• 시험관 내항산화제및 항효소 분석
• 2가지 추출법을 시행하였으며, 추출물에 대하여 정성적, 정량적 식물화학적 분석을 실시하였다. Soxhlation(CR HAE)으로 얻은 추출물은 침용(CR CAE)으로 얻은 추출물보다 총 페놀과 플라보노이드 함량이 더 높았습니다.
• CR HAE는 강력한 DPPH와 Superoxide 자유 라디칼 소거 활성을 보인 반면, 두 추출물의 ABTS 소거 활성은 유사한 것으로 나타났습니다. CR HAE의 ORAC(Oxygen Radical Absorbance Capacity)는 더 많은 것으로 나타났습니다. 강력한 항산화 잠재력을 나타냅니다.
• 두 추출물 모두 시험관 내 콜라게나제 및 엘라스타제 효소 억제 활성을 평가했으며 CR HAE는 강력한 항콜라게나제 및 항엘라스타제 잠재력을 보여 노화 방지 능력을 나타냈습니다.
• CR HAE의 GC‑MS 분석을 통해 다양한 화합물의 존재가 밝혀졌습니다.
주로 폴리메톡시플라본을 포함합니다. CR HAE는 유망한 항산화 및 항효소 활성을 나타냈으며 잠재적으로 사용될 수 있습니다.주름 방지에이전트노화 방지스킨 케어 제형.
사용된 약어: ECM: 세포외 기질, UV: 자외선, ROS: 반응성 산소 종, MMP: 기질 금속단백분해효소, Chc: Clostridium histolyticum 콜라게나제, DPPH: 2, 2‑diphenyl‑ 1‑picrylhydrazyl, GC‑MS: Gas Chromatography‑ Mass 분광법, RT: 실온, µg GAE/ mg: 마이크로그램 갈산 등가물/밀리그램, W/V: 부피별 중량, µg QE/
mg: 마이크로그램 퀘르세틴 등가물/밀리그램, CR HAE: 감귤 Blanco의 뜨거운 알코올 추출물, CR CAE: Citrus reticulata Blanco의 차가운 알코올 추출물, EC50: 절반의 최대 유효 농도, PMS NADH: 페나진 메토설페이트 니코틴아미드: 테트라니트로블루 뉴클레오티드, NBT , DMSO: Dimethyl sulfoxide,APS:Ammonium Persulphate, AAPH: 2,2 ‑azobis(2‑amidino‑propane) dihydrochloride,TROLOX: (±) 6‑hydroxy‑2,5,7,8‑ tetramethyl chromane‑2‑carboxylic acid, ORAC: 산소 라디칼 흡수 용량, FALGPA: N‑[3‑(2‑Furyl) 아크릴로일)]‑Leu‑Gly‑Pro‑Ala, SANA: Succinyl‑Ala‑ Ala‑Ala‑p‑nitroanilide, Rf: 지연 Factor, MSD: 질량 선택적 검출기
소개
인간에게 피부의 가장 중요한 역할은 신체의 내부와 외부 환경 사이에 장벽을 만드는 것입니다. 피부는 내부적으로는 생명에 필요한 전체 물리화학적 현상을 보호하고 보호하며, 외부적으로는 기계적 힘에 대한 장벽입니다. 피부는 신체에서 가장 큰 기관입니다.[1] 매우 민감한 기관이며 감염과 질병에 쉽게 손상될 수 있습니다.
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피부 트러블은 환경오염, 과도한 자외선 노출, 개인의 연령, 유해 미생물, 식습관, 스트레스, 화학물질 등 다양한 요인으로 인해 발생할 수 있습니다. 피부 치료와 관리는 건강한 피부를 가질 뿐만 아니라 사람의 전반적인 웰빙을 위해 필수적입니다.[2]
오늘날 세계의 주요 피부 문제 중 하나는 조기 피부 노화입니다. 피부 노화의 과정은 내인성 노화와 외인성 노화의 두 가지 범주로 나뉩니다. 내인성 피부 노화 또는 자연 노화는 시간이 지남에 따라 피부 탄력의 변화에 의해 발생합니다. 외부 피부 노화는 주로 태양 복사에 노출된 결과입니다(광노화). 산화 스트레스로 인해 형성된 자유 라디칼은 내인성 및 외인성 노화 과정에서 중요한 역할을 합니다.[3] 피부는 세 가지 주요 층으로 구성됩니다. 표피, 진피, 피하조직. 진피의 주성분은 콜라겐과 엘라스틴 섬유입니다. 콜라겐과 엘라스틴이 감소하면좋은 생각형성.[4] 피부가 처지고 형성되기 시작하는 주요 원인주름엘라스틴과 콜라겐의 분해입니다. 콜라게나제 및 엘라스타제 효소는 세포외 기질(ECM)의 다양한 성분, 즉 콜라겐 및 엘라스틴의 분해를 담당합니다. 엘라스틴은 피부를 유연하고 탄력 있게 유지하는 데 도움이 되는 단백질입니다. 피부가 늘어나면 엘라스틴이 원래 위치로 돌아갑니다. 콜라겐은 섬유질 단백질입니다. 콜라겐은 피부에 탄력을 제공하는 인장 강도가 크기 때문에 단백질 중에서 특별합니다.주름내인성 및 외인성 노화와 콜라게나아제 및 엘라스타아제 효소 수치의 증가로 인한 결과입니다.[5]
화장품은 아름다움을 향상시키기 위해 정기적으로 그리고 보편적으로 다양한 형태로 사용됩니다. 스킨 케어 화장품은 처리하지 않은 피부보다 환경에 대한 더 나은 보호 기능을 제공하여 피부 표층을 처리합니다.[6] 페이셜 스킨 케어 화장품에 대한 수요가 증가하고 있습니다. 데이터 모니터에 따르면 2012년 스킨 케어 제품에 대한 전 세계 지출은 820억 달러였으며 지출의 3분의 2가 페이셜 스킨 케어로 구성되었습니다. 연구 및 시장 보고서에 따르면 2018년에는 전 세계 스킨 케어 제품 산업 수익이 1,000억 달러를 넘어설 것으로 예상합니다. 페이셜 케어 부문은 계속해서 시장을 지배할 것으로 예상됩니다. 에 대한 수요 증가노화 방지제품 및 천연 및 유기농 스킨 케어 제품 사용에 대한 관심 증가는 스킨 케어 산업을 이끄는 주요 요인입니다.[7] 화장품만으로는 피부와 신체 부위를 관리하기에 충분하지 않습니다. 그것은 피부의 손상과 노화를 확인하기 위해 활성 성분의 결합이 필요합니다. 활성 성분을 함유한 이러한 허브 활성 성분은 피부 건강을 유지하는 데 매우 중요합니다. 현재 문제에 대한 적절한 해결책으로 한방 활성 화장품이 부상하고 있습니다.[8] 본 연구에서는 피부노화 방지Citrus reticulata Blanco 껍질의 알코올 추출물의 잠재력은 시험관 내 항산화, 항콜라게나제 및 항엘라스타제 분석에 의해 평가되었습니다. C. reticulata Blanco(Rutaceae)는 일반적으로 Narangi 또는 Santra(Orange)로 알려져 있습니다. 과일은 완하제, 최음제, 수렴제, 강장제이며 구토를 완화합니다.[9] 과일 껍질은 전통적으로 강장제, 위장제, 수렴제, 구충제 및 항혈전제로 사용됩니다. 감귤류 껍질은 감귤류 산업의 부산물로 간주되어 왔지만 펄프보다 훨씬 높은 농도로 여러 활성 성분을 함유하고 있는 것으로 보고되었습니다.[10] 과일 껍질은 피부 관리에도 유용합니다.
재료 및 방법
화학물질 및 시약
아스코르브산, 케르세틴, 염화제이철, 탄산나트륨(Na2CO3), 아질산나트륨(NaNO2), 수산화나트륨(NaOH), 염화알루미늄(AlCl3), 1,1‑Diphenyl‑2‑picrylhydrazyl(DPPH), 돼지 췌장 엘라스타제(EC) .3.4.21.36), Succinyl‑Ala‑Ala‑P‑nitroanilide(SANA), Clostridium histolyticum 콜라게나제(ChC)(EC.3.4.23.3), N‑(3‑[2‑Furyl]acryIoyl)‑Leu‑ Gly‑Pro‑Ala(FALGPA), 플루오레세인 나트륨 염, 2,2‑azobis(2‑methyl propionamidine) dihydrochloride(AAPH) 및 갈산은 Sigma Chemical Co.(St. Louis, USA.)에서 구입했습니다. 2, 2 '‑azino‑bis(3‑ethylbenzothiazoline‑6‑sulfonic acid) 디암모늄
염(ABTS), (±) 6-하이드록시-2,5,7,8-테트라 메틸크로만-2-카복실산(TROLOX), 미국 Fluka에서 구입. 니트로 블루 테트라졸륨(NBT), 페나진 메토설페이트(PMS) 및 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 - 환원된 이나트륨 염(NADH)은 SRL Pvt. Ltd., 인도 뭄바이 황산 과 암모늄(APS)은 인도 Rankem에서 구입했습니다.
식물 재료 수집
C. reticulata Blanco, Rutaceae의 열매는 뭄바이(인도)에서 2013년 1월에 획득했습니다. 식물 재료의 분류학적 식별은 University of Mumbai의 CS Latto 박사에 의해 확인되었습니다. 인증은 푸네의 Agharkar Research Institute에서 수행되었습니다.
식물 재료 추출
과일은 물로 철저히 씻었습니다. 과일에서 껍질을 분리하고 그늘에서 말렸습니다. 그 후, 건조된 물질을 분말 형태로 처리하여 밀폐 용기에 실온에서 보관하였다. 약 50g의 건조 분말을 300ml의 메탄올로 추출하였다. 식물 추출물은 Soxhlation(CR HAE-Citrus reticulata의 뜨거운 알코올 추출물) 및 침용법(CR CAE-Cold Alcoholic Extract of Citrus reticulata)으로 얻었습니다. 속슬렛 추출은 65도에서 10-12시간 동안 수행되었습니다. 일정한 진탕에 의해 저온 침용을 수행하였다; 식물 분말과 메탄올의 혼합물을 회전식 진탕기(REMI CIS-24 PLUS)에 보관하고 실온에서 72시간 동안 100rpm으로 설정했습니다. 추출물은 Whatman 여과지 no. 1, 여과액을 감압증발하고 50도에 설정된 회전증발기(R-205, Buchi Laboratory Equipment, Flawil, Switzerland)를 이용하여 건조하였다. 건조된 추출물은 추가로 사용할 때까지 라벨이 붙은 멸균 캡이 있는 병에 4도에서 보관했습니다.
추출물의 예비 식물화학적 분석
위에서 언급한 추출물은 설명된 방법에 따라 식물 재료에 존재하는 화학 성분의 확인을 위해 다양한 정성적 식물화학적 테스트를 거쳤습니다.[11]
총 페놀 함량 측정
총 페놀 함량(TPC)은 주어진 방법을 사용하여 Folin - Ciocalteu 시약으로 측정되었습니다.[12] 각 샘플의 0.5ml에 Folin - Ciocalteau 시약의 1:10 희석액 2.5ml와 Na2CO3(7.5% w/v) 2ml를 첨가하고 자외선 가시 분광 광도계를 사용하여 765nm에서 배양했습니다. 결과는 추출물 mg당 갈산 당량 μg으로 표시되었습니다(GAE/mg 추출물).
총 플라보노이드 함량 측정
총 플라보노이드 함량(TFC)은 AlCl3 비색 분석에 의해 측정되었습니다.[13]
퀘르세틴(20, 4{13}}, 60, 80 및 100µg/ml)의 추출물 또는 표준 용액의 분취량(1ml)을 4ml의 증류수. 플라스크에 0.30ml의 5% NaNO2를 첨가하고 5분 후에 0.3ml의 10% AlCl3를 첨가하였다. 5분 후 1M NaOH 2ml를 가하고 증류수로 부피를 10ml로 하였다. 용액을 혼합하고 510 nm에서 블랭크에 대한 흡광도를 측정하였다. TFC는 추출물 mg당 케르세틴 등가물의 μg으로 표시되었습니다(μg QE/mg 추출물).
항산화 분석
1, 1-디페닐-2-피크릴히드라질 자유 라디칼 소거 분석
자유 라디칼 소거 활성은 약간의 수정을 가하여 주어진 방법으로 평가하였다.[14] 자유 라디칼 소거 활성은 약간의 변형을 가하여 주어진 방법으로 평가하였다. 1ml의 다양한 농도(1{5}}0–800µg/ml)의 테스트 샘플을 200µl(0.36mg/ml)의 DPPH 메탄올 용액과 혼합했습니다. 진탕 후 암실 상온에서 30분간 배양한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. Ascorbic acid를 양성 대조군으로 사용하였다.
페나진 메토설페이트-NADH 시스템 슈퍼옥사이드 음이온 소거 분석
과산화물 소거 활성은 주어진 방법으로 평가하였다.[15] 0.75ml NBT(5{8}} µM) 용액, 0.75ml NADH( 78 µM) 용액과 0메탄올에 녹인 추출물(50–350 µg/ml)의 0.3 ml 샘플 용액을 혼합했습니다. 0.75ml의 PMS 용액(10μM)을 혼합물에 첨가했을 때 반응이 시작되었다. 반응 혼합물을 5분 동안 25도에서 인큐베이션하고, 상응하는 블랭크 샘플에 대해 560 nm에서 흡광도를 판독하였다. Ascorbic acid를 표준으로 사용하였다.
2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-술폰산) 라디칼 소거 분석
분석은 주어진 방법에 따라 수행됩니다.[16] ABTS 라디칼 양이온은 ABTS와 APS를 반응시키고 혼합물을 실온의 암실에서 16시간 동안 인큐베이션함으로써 생성되었다. 간단히 말해서, 총 반응 부피는 다양한 농도의 10mM PBS pH 7.4(양성 대조군 또는 시험 용액)를 포함했습니다. ABTS 라디칼 용액을 0.219mM의 최종 농도로 첨가하였다. 반응 혼합물을 혼합하고 마이크로플레이트 리더(VERSA max, Molecular devices, USA)를 사용하여 734 nm에서 즉시 판독하였다. 대조 반응은 시험 시료 없이 진행하였다. 갈산은 양성 대조군으로 사용되었습니다.
DPPH, PMS-NADH 라디칼 및 ABTS 자유 라디칼을 소거하는 추출물의 능력은 다음 공식으로 계산되었습니다.
라디칼 소거 활성(%) =([대조군 Abs - 시료 Abs]/대조군 Abs) ×100, 여기서 Abs는 시험 추출물의 존재 또는 부재하에 언급된 파장에서의 흡광도입니다.
산소 라디칼 흡광도 분석
이 분석은 설명된 방법에 따라 수행되었습니다.[17] 140µl의 사전 배양 혼합물에는 −20µl의 테스트 용액 또는 다양한 농도의 TROLOX가 포함되어 있습니다. 75mM 인산나트륨 완충액, pH 7.4; 120 μl의 소듐 플루오레세인(117 nM)을 혼합하고 37도에서 10분 동안 인큐베이션했습니다. 사전 인큐베이션 후, 60㎕의 AAPH(40mM)를 첨가하고 15초 동안 혼합하였다. 반응은 37도에서 90분간 진행하였다. 형광 측정은 485 nm 여기 및 520 nm 방출 필터에서 수행되었습니다.
효소 분석
항콜라게나제 분석
콜라게나제 억제 분석은 FA-Leu 및 Gly-Pro-Ala를 생성하기 위한 콜라게나제에 의한 FALGPA의 가수분해를 기반으로 하는 [18] 앞에서 설명한 방법으로 수행되었습니다. 검정은 50mM Tricine 완충액(4{18}}0mM NaCl 및 10mM CaCl2, pH 7.5)에서 수행되었습니다. ChC는 0.8units/ml의 초기 농도로 사용하기 위해 버퍼에 용해되었습니다. 합성 기질인 FALGPA를 Tricine 완충액에 2mM로 용해시켰다. 샘플 추출물을 기질을 첨가하여 반응을 시작하기 전에 완충액에서 효소와 15분 동안 인큐베이션하였다. 최종 반응 혼합물(총 부피 75µl)에는 50mM Tricine 완충액 25µl, 시험 추출물(250–4000µg/ml) 25µl 및 0.1단위의 효소 ChC 25µl가 포함되어 있습니다. 50mM Tricine 완충액을 시험 추출물로 사용하여 수행한 대조군은 Tricine 완충액(50mM)에 용해시켰고 카테킨은 양성 대조군으로 사용했습니다. 50μl의 2mM FALGPA 기질을 첨가한 후, 콜라게나제 활성은 96웰 마이크로 플레이트 리더(Bio‑Tek M Quant, FLX 800)를 사용하여 20분 동안 340nm에서 즉시 측정되었습니다.
항엘라스타제 분석
사용된 분석은 문헌의 방법을 기반으로 했습니다.[19] 이 분석은 0.2mM Tris‑HCL 완충액(pH 8.0)에서 수행되었습니다. 돼지 췌장 엘라스타제(PE – EC 3.4.21.36)를 용해하여 {{1{12}}}.2mM Tris‑HCL 완충액에 1mg/ml 스톡 용액을 만들었습니다. 기질 N‑Succinyl‑Ala‑Ala‑Ala‑p‑nitroanilide(SANA)는 0.8mM의 완충액에 용해되었습니다. 시험 추출물(0.156–10 mg/ml)은 반응을 시작하기 위해 기질을 추가하기 전에 20분 동안 효소와 함께 배양되었습니다. 최종 반응 혼합물(총 250μl)은 50μl 식물 추출물, 160μl 완충액, 20μl 효소 및 20μl 기질을 포함했습니다. 카테킨을 양성 대조군으로 사용하였다. 음성 대조군은 Tris‑HCL 버퍼를 사용하여 수행되었습니다. 흡광도는 410nm에서 즉시 측정한 다음 96웰 마이크로 플레이트 판독기(Bio‑Tek M Quant, FLX 800)를 사용하여 20분 동안 연속적으로 측정했습니다. 두 분석 모두에 대한 억제 백분율은 다음과 같이 계산됩니다. 효소 억제 활성(%)=(1-[B/A]) ×100
여기서, A=시료가 없는 효소 활성, B=시료가 있는 경우의 활성.
가스 크로마토그래피 질량분석법 분석
기체 크로마토그래피-질량 분석기(GC‑MS) 분석을 위해 다음 조건이 채택되었습니다.[20]TripleAxis Detector가 있는 5975 C inert Mass Selective Detector(MSD)와 결합된 Agilent 7890 A 기체 크로마토그래피를 사용하여 구성요소를 식별했습니다. 시료는 Agilent에서 주입했습니다. 7693 자동 샘플러를 Agilent 19091S‑433으로: HP‑5MS 컬럼(30m × 250µm × 0.25µm). 헬륨을 캐리어 가스로 사용했습니다(1 ml/분). 주입기 및 검출기 온도는 250도를 유지했습니다. 컬럼 온도는 60도에서 3분 동안 프로그래밍한 다음 10도/분으로 2분 동안 160도까지 올렸습니다. 추가로 온도를 300도까지 올렸다(15도/분에서). 질량 스펙트럼은 EI 모드에서 40–500 amu 범위에서 획득되었습니다. 용출된 화합물은 질량 스펙트럼 데이터를 국립표준기술원(National Institute of Standards and Technology) 라이브러리에 있는 표준 데이터와 비교하여 식별되었습니다. C. reticulata Blanco Peel(CR HAE)의 Soxhlet 메탄올 추출물의 주요 성분은 GC-MS 분석을 통해 확인되었습니다.
통계 분석
EC50 값은 평균 ± 표준편차로 표시하였고, 통계적 분석은 분산의 일원 분석에 이어 Tukey의 다중 비교 테스트(P < 0.05)로="" 수행되었으며,="" 여기서="" 모든="" 샘플,="" 즉="" 테스트="" 추출물="" 및="" 양성="" 기준을="" 서로="" 비교하였다.="" 모든="" 계산은="" graphpad="" prism(버전="" 5.0,="" graphpad="" software,="" usa)을="" 사용하여="">
결과 및 논의
추출물의 예비 식물화학적 분석
C. reticulata Blanco의 메탄올 추출물에 대한 예비 식물화학적 분석은 탄수화물, 아미노산, 플라보노이드, 탄닌 및 페놀 유도체, 스테로이드 등의 존재를 나타냅니다[표 1].
표 1: Citrus reticulata Blanco 껍질의 메탄올 추출물의 예비 식물화학적 분석
FeCl3: 염화 제2철; CR HAE: Citrus reticulata Blanco의 뜨거운 알코올 추출물; CR CAE: Citrus reticulata Blanco의 차가운 알코올 추출물
총 페놀 함량 측정
페놀, 특히 폴리페놀은 항바이러스, 항균, 면역 자극, 항알레르기, 항고혈압, 항허혈, 항부정맥, 항혈전, 저콜레스테롤, 항지과산화제를 포함하여 포유류에서 매우 다양한 유익한 생물학적 활성을 나타냅니다. , 간 보호, 항염증 및 항암 작용.[21,22] 여러 연구에서 플라보노이드가 과산화물 음이온, 일중항 산소, 하이드록실 라디칼 및 지질 과산화 라디칼의 제거제로 작용하는 것으로 나타났습니다.[23,24] TPC 및 TFC 표준 곡선을 사용하여 두 추출물에 대해 결정되었습니다[그림 1]. CR HAE는 CR CAE, 즉 58.66 ± 2.40 µg GAE/mg 추출물보다 187.93 ± 4.69 µg GAE/mg 추출물로 더 높은 페놀 함량을 보였습니다. CR HAE 및 CR CAE에 대한 TFC는 거의 유사한 것으로 밝혀졌습니다. 즉, 각각 171.72 ± 4.13 μg QE/mg 추출물 및 169.88 ± 9.79 μg QE/mg 추출물입니다.
총 플라보노이드 함량 측정
항산화 활성은 단일 기준에 근거하여 결론지어서는 안 됩니다.항산화제테스트 모델. 실제로, 몇 가지 시험관내 시험 절차가 평가를 위해 수행됩니다.항산화제관심 샘플 활동.[25] 본 연구에서 우리는 다음을 평가했습니다.항산화제다양한 CR HAE 및 CR CAE의 잠재력항산화제DPPH 자유 라디칼 소거 검정, 슈퍼옥사이드 음이온 소거 검정, ABTS 라디칼 소거 검정 및 산소 라디칼 흡광도(ORAC) 검정을 포함하는 검정.
항산화 분석
1, 1-디페닐-2-피크릴히드라질 자유 라디칼 소거 분석
DPPH유리 라디칼 소거 분석은 식물 추출물의 예비 라디칼 소거 활성을 테스트하는 데 가장 일반적으로 사용되는 분석 중 하나입니다. 그만큼항산화제폴리페놀 성분을 함유한 식물 추출물의 활성은 수소 원자 또는 전자를 제공하고 자유 라디칼을 제거하는 능력 때문입니다.[26] 따라서 DPPH의 보라색은 , -diphenyl- -picrylhydrazine(노란색)으로 감소합니다. 결과는 CR HAE 및 CR CAE가 DPPH 자유 라디칼 소거의 최대 85%를 나타냄을 나타냅니다[그림 2]. Ascorbic acid는 양성대조군으로 사용하였으며 최대 92%의 소거활성을 보였다. CR HAE가 약간 더 높게 나타났습니다.항산화제CR CAE보다 활성. EC50 값(㎍/ml)은 표 2에 나타내었다.
Phenazine methosulfate-NADHsystem superoxide anion scavenging assay 슈퍼옥사이드 음이온은 약한 산화제이지만 궁극적으로
표 2: DPPH, 슈퍼옥사이드, ABTS, 항콜라게나제 및 항엘라스타제 분석에 대한 감귤류 망상 블랑코 껍질의 메탄올 추출물의 EC 값
강력하고 위험한 하이드록실 라디칼과 일중항 산소는 둘 다 산화 스트레스에 기여합니다.[27] PMS-NADH 커플링에 의해 용존 산소로부터 생성된 슈퍼옥사이드 라디칼은 NBT를 감소시키는 능력으로 측정할 수 있습니다. 식물 추출물의 560 nm에서의 흡광도 감소는 반응 혼합물에서 슈퍼옥사이드 라디칼을 소멸시키는 능력을 나타냅니다. CR HAE는 CR CAE보다 강력한 슈퍼옥사이드 소거 활성을 보였다[그림 3]. Ascorbic acid는 양성 대조군으로 사용되었으며 최대 52%의 초과산화물 음이온을 제거합니다. EC50 값(µg/ml)을 계산하여 표 2에 표시했습니다. CR HAE는 EC50 값(µg/ml)이 낮고 강력하기 때문에 CR CAE보다 더 효과적인 것으로 나타났습니다(P <>항산화제활동.
2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-술폰산) 라디칼 소거 분석
ABTS 분석은 ABTS 라디칼에 의한 빛의 제거를 기반으로 합니다. 안항산화제수소 원자를 기증할 수 있는 능력을 가진 원자는 안정한 자유 라디칼을 소멸시킬 것이며, 이는 분광광도계로 따를 수 있는 흡수의 변화와 관련된 과정입니다.[28] ABTS 활성은 ABTS 자유 라디칼 양이온의 억제 백분율로 정량화되었습니다.항산화제각 샘플에서. CR HAE, CR CAE, gallic acid의 ABTS 값은 Table 2와 같다. CR HAE와 CR CAE는 농도 의존적으로 ABTS 라디칼 소거 활성을 나타내어 59%까지 관찰되었다. 갈산은 ABTS 소거능의 79%까지 나타났다[그림 4]. CR HAE 및 CR CAE에 대해 얻은 EC50 값(µg/ml)은 유의한 차이가 없었으며(P < 0.05)="" 두="" 추출물="" 모두="" abts="" 소거="" 가능성이="" 거의="" 유사함을="">
산소 라디칼 흡광도 분석
ORAC 분석은 다른 측정 방법보다 생물학적으로 더 관련성이 높은 분석으로 간주됩니다.항산화제수소 원자 이동 반응을 측정하고 생체 내에서 시뮬레이션하기 때문에 효능항산화제행동.[29] 또한 천연 물질의 수용성 및 지용성 성분이 퍼옥실 아질산염, 하이드록실 라디칼, 슈퍼옥사이드 음이온 및
일중항 산소와 비교하여 점수를 생성합니다.항산화제본 연구에서는 CR HAE 및 CR CAE에 대한 ORAC 값을 측정하고 TROLOX(mmoles TROLOX Equivalent/g of substance)로 표시했습니다[그림 5]. CR HAE는 CR CAE(1063 µmole TROLOX Equivalent/물질 g)보다 더 높은 ORAC 값(1243 mmoles TROLOX Equivalent/g 물질)을 보여주었습니다[표 2].
효소 분석
항콜라게나제 분석
MMP(Matrix Metalloproteinases)는 ECM의 다양한 구성요소를 분해하는 단백질 분해 효소 계열입니다. 콜라게나아제는 MMP 계열의 구성원 중 하나이며 콜라겐 분해를 담당합니다. 박테리아 C. histolyticum(ChC)(C 3.4.24.3)의 콜라게나제는 생리학적 조건 및 시험관 내 조건에서 합성 펩타이드를 기질로 사용하여 천연 콜라겐의 삼중 나선 영역을 분해할 수 있는 몇 안 되는 프로테이나제 중 하나입니다. 콜라게나제 효소에 대한 식물 추출물의 보호 효과는 ChC 및 합성 기질 FALGPA를 사용하여 연구할 수 있습니다.[31] 본 연구에서는 CR HAE 및 CR CAE에 대한 콜라게나제 억제 활성을 평가하였다. 카테킨을 양성 대조군으로 사용하였다. 결과는 CR HAE 추출물이 CR CAE보다 콜라게나제 효소를 억제하는 데 더 효과적이며 최대 76%까지 억제하는 것으로 나타났습니다[그림 6]. 효능은 EC50 값(μg/ml)으로 측정하여 표 2에 나타내었다.
항엘라스타제 분석
엘라스타제는 엘라스틴을 분해할 수 있는 유일한 효소입니다. 엘라스타제 효소의 억제는 피부의 탄력과 유연성을 유지할 수 있습니다.[32] 면에서노화 방지, 엘라스타제 효소의 억제제를 찾는 것이 유용할 수 있습니다.
피부 탄력의 손실과 그에 따른 피부 처짐을 방지하기 위해. Anti-elastase assay에서는 [N‑Succ‑(Ala) 3‑p‑nitroanilide]를 기질로 하여 돼지 췌장 엘라스타제를 분광광도계로 분석하였고, p-nitroaniline의 양은 41{{ 6}} nm. 엘라스타제 활성에 대한 CR HAE 및 CR CAE의 억제 효과를 조사하였다. 카테킨을 양성 대조군으로 사용하였다. CR HAE는 CR CAE에 비해 강력한 퍼센트 엘라스타제 억제 활성을 보였고 최대 80% 억제가 관찰되었습니다[그림 7]. EC50 값(mg/ml)은 표 2에 표시되었으며 CR HAE가 CR CAE보다 더 강력한 것으로 관찰되었습니다(P < 0.05).="" 카테킨에="" 대해="" 얻은="" ec50="" 값은="" 카테킨의="" 강력한="" 항엘라스타제="">노화 방지요소. Kim et al., 2004는 녹차(Camellia sinensis)에서 분리된 카테킨과 에피갈로카테킨 갈레이트가 강력한 항엘라스타제 억제제임을 보여주었습니다.
가스 크로마토그래피 질량분석법 분석
CR HAE가 더 높게 나타났습니다.항산화제및 CR CAE에 비해 노화 방지 능력; 따라서 CR HAE에 대한 GC-MS 분석을 수행하여 CR HAE에 존재하는 성분을 이해했습니다. 총 20개의 서로 다른 화합물이 식별되어 표 3에 나와 있습니다. 크로마토그램은 2.95분에서 44.45분 범위의 머무름 시간에서 20개의 피크를 보여주었습니다[그림 8]. 44.11분에 44.37% 면적의 가장 큰 피크는 부틸포스폰산, 펜틸 4-(2-페닐프로프-2-일) 페닐 에스테르로 확인되었습니다. Zab et al., 2012[33]은항산화제및 C.reticulata의 에탄올 추출물에 존재하는 부틸포스폰산, 펜틸 4-(2-페닐프로프-2-일) 페닐 에스테르의 항종양 활성. dihydro) 또는 4-Chromanone(21.43% 면적)
플라바논. Di Majo et al., 2005[34]는 감귤류에서 플라바논을 분리하고 구조 의존성을 보였습니다.항산화제활동. 기타 화합물 3', 4', 5, 7, 8-Pentamethoxyflavone 및 4', 5, 7, 8-Tetramethoxyflavone은 폴리메톡시플라본(PMF)의 유형입니다. PMF는 광범위한 생물학적 활성을 나타냅니다. 최근 Ho et al., 2012[35]는 감귤 껍질에서 수산화된 PMF를 분리 및 확인하고 항염 및 암 화학 예방 특성을 포함한 생물학적 활성을 조사했습니다. 확인된 기타 화합물에는 D‑Limonene(1.46% 면적), 4H‑Pyran‑4‑one, 2, 3‑dihydro‑3, 5‑dihydroxy‑6‑methyl(1.46% 면적), 2‑Methoxy‑4‑vinylphenol( 1.67% 면적) 및 n-헥사데칸산(2.51% 면적)과 관련될 수 있습니다.노화 방지C. reticulata Blanco 껍질의 가능성. 확인된 모든 화합물의 구조는 그림 9에 나와 있습니다.
결론
C. reticulata Blanco 추출물은 in vitro를 통해 피부 노화에 대해 평가되었습니다.항산화제, 항콜라게나제 및 항엘라스타제 분석. 이 연구는 메탄올 추출물(Soxhlation)이 유망한 것으로 나타났습니다.항산화제및 항 효소 활성 및 강력한주름 방지에이전트노화 방지스킨케어 제형.
승인
저자들은 GC‑MS 분석을 위해 인도 방갈로르에 있는 Underwriters Lab(UL)에, ORAC 분석을 위해 인도 방갈로르에 있는 자연 요법에 감사드립니다.
재정 지원 및 후원
무.
이해 상충
이해 상충이 없습니다.