추상적인

목표:Maclura pomifera(Rafin.) 슈나이더는 전 세계에 널리 퍼져 있으며 관상용으로도 자주 재배됩니다. 이전 연구에서는 M. pomifera 과일이 프레닐화 이소플라보노이드가 풍부하고 주목할만한 생물학적 활동을 나타내며 특히 국소 적용 시 이점이 있음을 밝혔습니다. 페놀화합물이 항노화 화장품 개발에 필수적인 원천이라는 점을 고려하여 본 연구에서는 항산화 및 세포외기질분해효소 억제 활성을 평가하여 M. pomifera 80% 메탄올 추출물(MPM)의 항노화 가능성을 조사하였다.

Cistanche의 배당체는 또한 심장 및 간 조직에서 SOD의 활성을 증가시킬 수 있으며 각 조직에서 리포푸신 및 MDA의 함량을 크게 감소시켜 다양한 활성 산소 라디칼(OH-, H₂O₂ 등)을 효과적으로 제거하고 이로 인한 DNA 손상으로부터 보호합니다. OH-라디칼에 의해. Cistanche phenylethanoid glycosides는 자유 라디칼의 강력한 소거 능력, 비타민 C보다 높은 환원 능력, 정자 현탁액에서 SOD의 활동을 개선하고 MDA의 함량을 감소시키며 정자 막 기능에 대한 특정 보호 효과가 있습니다. Cistanche 다당류는 D-갈락토스에 의해 유발된 실험적으로 노화된 쥐의 적혈구 및 폐 조직에서 SOD 및 GSH-Px의 활성을 향상시킬 수 있을 뿐만 아니라 폐 및 혈장의 MDA 및 콜라겐 함량을 감소시키고 엘라스틴 함량을 증가시킬 수 있습니다. DPPH에 대한 우수한 소거 효과, 노화된 쥐의 저산소증 시간 연장, 혈청 내 SOD 활성 개선, 실험적으로 노화된 쥐의 폐의 생리학적 퇴행 지연 피부 노화 질환을 예방하고 치료하는 약물이 될 가능성이 있습니다. 동시에 Cistanche의 echinacoside는 DPPH 자유 라디칼을 제거하는 상당한 능력이 있으며 활성 산소 종을 제거하고 자유 라디칼로 인한 콜라겐 분해를 방지하는 능력이 있으며 티민 자유 라디칼 음이온 손상에 대한 우수한 복구 효과도 있습니다.

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재료 및 방법:이 연구에서는 노화 과정과 관련된 다양한 효소에 대한 80% MPM의 억제 가능성을 평가했습니다. 노화에서 산화 스트레스의 분명한 역할을 감안할 때 시험관 내 항산화 테스트도 사용되었습니다. 또한 고성능 박층크로마토그래피 분석을 통해 오사진이 시료의 주요 생리활성 이소플라보노이드임을 확인하였다.

결과:기계적으로 다른 항산화 분석의 결과는 추출물의 상당한 항산화 가능성을 보여주었습니다. 노화 촉진과 직결되는 히알루로니다제, 콜라게나제 및 엘라스타제 효소에 대한 MPM의 억제 가능성을 조사한 결과 MPM이 위의 효소를 명시적으로 억제하는 것으로 밝혀졌습니다. MPM은 독특한 페놀 및 플라보노이드 함량을 가졌습니다. 각각 113.92 ± 2.26 mg 갈산 당량/g 및 66.41 ± 0.74 mg QE/g. 총 항산화 능력 분석을 고려했을 때 MPM이 유망한 노화 방지제임을 시사할 수 있습니다.

결론:결과적으로, 이 연구는 M. pomifera의 열매 추출물이 상당한 노화 방지 잠재력을 가지고 있으며 이러한 목적으로 사용될 수 있음을 밝힙니다.

키워드:맥클루라 포미페라, 안티에이징, 항산화, HPTLC, 오사진

소개

마찬가지로 인간의 피부를 비롯한 모든 장기는 나이가 들면서 다양한 생리적 변화를 겪게 됩니다.1 노화에는 두 가지 종류가 있습니다. 내적 노화는 유전학에 의해 제어되며 외적 노화는 자외선(UV ) 방사선, 화학 독소 및 흡연.1,2 혈관 및 선 구조 저하, 섬유 조직 손실 및 세포 재생 감소는 노화의 근본적인 요인3으로, 조직 변성 증가, 주름 및 세포 외 기질(ECM) 감소로 이어집니다. ).4

피부는 가장 큰 기관으로서 보호, 체온조절, 감각감지 등 여러 가지 역할을 한다.5 피부는 표피, 진피, 피하조직으로 구성되며 인체와 외부를 잇는 첫 번째 장벽이다. 환경6,7 ECM은 진피의 가장 큰 단위로 구조적 발판을 제공하여 성장과 탄력을 지원합니다.8 진피 섬유아세포에 의해 형성되는 콜라겐, 엘라스틴 및 피브로넥틴은 ECM을 구성하며 프로테오글리칸과 융합됩니다.5 콜라겐은 신체의 모든 단백질 함량의 약 25-35%를 구성하는 기본 단백질이며 다양한 유형의 동물 결합 조직의 세포외 공간에서 발견됩니다.3 피부 노화와 주름 형성의 주요 원인 중 하나는 콜라겐의 변화입니다. 구조.1 엘라스틴은 피부에 독특한 생리적 탄력성을 부여하는 단백질로 여러 결합 조직에 존재합니다.6 글리코사미노글리칸(GAG), 히알루론산은 이러한 활동에 중요한 역할을 합니다.8 이러한 중추 성분은 히알루로니다아제, 콜라게나아제 및 엘라스타아제 효소에 의해 분해되어 피부 노화를 촉진합니다. 또한 미생물, 오염, 전리 방사선, 화학 물질 및 독소에 대한 노출은 반응성 산소 종(ROS)의 형성으로 이어져 유해한 결과로 피부 노화를 가속화합니다.9 ROS는 복잡한 분자 경로를 개시할 수 있으며 결과적으로 콜라게나제, 엘라스타제 , 히알루로니다아제 활성이 증가하여 검출 가능한 ECM 분해 및 피부 질감 변형이 발생할 수 있습니다.10 언급한 이유로 ROS 형성을 감소시키고 ECM 분해 프로테아제를 억제하는 새로운 천연 제제는 피부 노화 과정을 지연시킬 수 있습니다.11

Maclura pomifera(Rafin.) Schneider는 뽕나무과 또는 뽕나무과에 속하며 거의 전 세계적으로 재배되는 오세이지 오렌지 나무로도 알려져 있습니다.12 M. pomifera는 항균, 항진균, 항바이러스, 세포독성, 항종양, 에스트로겐, 과일의 주요 대사산물로 간주되는 오사진 및 포미페린과 같은 프레닐화 이소플라본으로 인한 항말라리아13.14 노화 방지 화장품 생산에서 페놀 화합물은 중요한 천연 공급원입니다. 따라서 이러한 활동을 위해 M. pomifera와 같은 페놀 화합물이 풍부한 식물에 대한 연구에 대한 관심이 높아지고 있습니다. 이전 연구에서는 Maclura의 이소플라본이 콜라겐, 엘라스틴 및 피브릴린의 발현 수준을 동등한 레티놀 농도와 비슷하거나 더 높게 증가시킨다는 사실을 발견했습니다. 따라서 Maclura isoflavones가 강력한 ECM 단백질 자극제라고 가정할 수 있습니다.15 이러한 데이터를 고려하여 이 연구는 M. pomifera 80% 메탄올 추출물(MPM)의 항산화 활성 및 ECM 분해 효소. 또한 추출물의 주요 생리활성 성분인 오사진의 정량분석은 HPTLC(고성능박층크로마토그래피)로 측정하였으며, 보다 정확한 페놀릭 프로파일의 이해를 위하여 총페놀함량 및 총플라보노이드함량 분석을 실시하였다. 결과는 M. pomifera가 노화 방지 제품의 귀중한 공급원일 수 있음을 보여줍니다.

재료 및 방법

화학

Sigma Chemical Co.(St. Louis, MO, USA)는 테스트에 사용된 모든 효소, 화학 물질 및 참고 자료를 제공했습니다. 모든 화학 물질의 품질은 분석 등급이었습니다.

식물 재료

M. pomifera의 열매는 2020년 5월 Türkiye의 Uşak에서 수집되었습니다. Hilal Bardakcı 박사는 식물 샘플의 식물 식별 절차를 수행했습니다. 식물의 바우처 샘플은 Acıbadem University, 약학부 식물표본관(ACUPH 00002)에 기탁되었습니다.

추출물의 제조

과일을 작은 조각으로 분리하고 믹서기를 통과했습니다. 열매(6.45kg)를 80% 메탄올(MeOH) 3125mL에 진탕기로 3일 동안 실온의 어두운 곳에서 침지시켰다. 침연액을 여과하고 이 절차를 2회 반복하였다. 얻어진 여액을 모아 회전식 증발기에서 메탄올을 증발시켰다. 조 메탄올 추출물을 동결건조(수율 204.37g, 3.16%)하고 -20도(MPM)에서 보관하였다.

HPTLC에 의한 주요 생리 활성 화합물의 정량 절차

사용된 모든 화학물질 및 시약은 분석용 등급이었습니다. 클로로포름(CHCl3) 및 에틸 아세테이트(EtOAc)는 Sigma-Aldrich에서 구입했습니다. 시판되는 오사진 표준은 Sigma-Aldrich(SMB {{10}}0092)에서 구입했습니다. HPTLC 분석은 20 cm x 10 cm 유리 HPTLC 실리카 겔 60 F254 플레이트(Merck, Darmstadt, Germany)에서 수행되었습니다. MPM의 오사진 함량은 CAMAG HPTLC 분석 시스템으로 측정되었습니다. 현재 연구에서 사용된 이동상은 이전에 M. pomifera의 활성 원리를 분리하는 동안 Bozkurt et al.16에 의해 설명되었습니다. 10 mg/mL MeOH 추출물을 분석 시험액으로 사용하였다. 오사진 표준원액(0.5 mg/mL)은 아세톤 2 mL를 사용하여 준비하였다. 스톡 용액에서 아세톤으로 희석하여 표준 화합물 농도가 50μg/mL인 작업 용액을 준비했습니다. 각 샘플은 0.45μm 주사기 필터를 통해 여과되었습니다. 최소 5가지 농도의 표준 용액(3.3-4.7 μL)과 함께 10 μL의 추출물을 CAMAG 자동 장치가 있는 실리카 겔 유리 HPTLC 플레이트 60 F254에 8mm 길이의 밴드 형태로 적용했습니다. TLC 샘플러 IV. 개발은 CAMAG 자동 현상 챔버-2(ADC- 2)에서 수행되었으며 이동상은 CHCl3: EtOAc[8:2 (v/v)]였습니다. 챔버는 10분 동안 포화되었고 플레이트는 현상 전에 5분 동안 전처리되었습니다. 습도는 10분 동안 MgCl2(33% RH)를 사용하는 ADC-2에 의해 제어되었습니다. 밀도 측정 평가는 형광 모드에서 CAMAG TLC 스캐너 IV를 사용하여 수행되었습니다. 슬릿 치수는 5 × 0.2 mm, 마이크로로 유지하고 스캐닝 속도는 20 mm/s로 설정하였다. 표준 내용은 280 nm에서 표준의 보정 곡선과 수신기 작동 특성 곡선(AUC) 아래 영역을 비교하여 얻었습니다. 추출물에 있는 표준 물질의 존재는 유지 인자(Rf)와 각 추출물 및 표준 물질의 오버레이 UV 스펙트럼을 비교하여 확인했습니다. 오사진의 양은 추출물과 분획물의 난반사광 세기를 표준물질과 비교하여 결정하였다.

식물 조추출물의 오사진 함량은 HPTLC-densitometry를 이용하여 측정하였다. 오사진 표준의 Rf 값은 0.556으로 확인되었습니다. 테스트 샘플에서 오사진의 발생은 Rf 값을 비교하고 UV 스펙트럼을 중첩하여 확인했습니다(그림 1). 샘플의 AUC를 표준 화합물 osajin을 사용하여 얻은 검량선과 비교하여 정량화했습니다. 보정 함수는 y=2.268*10-8x였습니다. 보정함수의 상관계수(R)와 변동계수는 각각 0.998퍼센트와 1.06퍼센트였다. HPTLC 분석 결과 MPM에는 오사진이 0.22%(w/w) 포함되어 있는 것으로 나타났습니다. HPTLC 연구 결과는 표 1에 나와 있습니다.

페놀 프로필 분석

총 페놀 함량 분석

이 분석은 이전에 Kurt-Celep 등이 사용했던 Folin-Ciocalteu 방법으로 샘플의 총 페놀 함량을 평가하기 위해 수행되었습니다. 17 20 μL의 새로 희석된 샘플 용액을 75 μL Na2 CO3(20% ), 및 H2O(1:9)로 희석된 100μL FCR(Folin-Ciocalteu 시약). 45도에서 30분 동안 배양한 후 혼합물의 흡광도를 765nm에서 분광광도계로 판독했습니다. 결과는 추출물 g당 mg 갈산 당량(GAE)으로 표시되었습니다.

총 플라보노이드 함량 분석

분획의 총 플라보노이드 함량 측정은 이전에 Bardakci et al.18에 의해 보고된 방법으로 수행되었습니다. 간단히 말해서, 새로 준비한 1M CH3 COONa와 10% AlCl3를 샘플과 혼합했습니다. 그런 다음, 혼합물의 인큐베이션 30분을 실온 및 암실에서 수행하였다. 인큐베이션 과정 후, 415 nm에서 흡광도를 계산하였다. 결과는 샘플 1g의 mg 케르세틴 당량(QE)으로 주장되었습니다.

시험관 내 항산화 활성 측정

2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 소거 활성 시험

DPPH 라디칼 소거 활성을 결정하기 위해, 새로 희석된 샘플 용액(1 mg/mL 스톡 용액으로부터 제조된 다양한 농도)과 메탄올성 DPPH 용액(100mM)의 조합이 수행되었습니다. 실온에서 45분 동안 인큐베이션한 후, 517 nm에서 흡광도를 판독하였다. BHT(Butylated hydroxytoluene)를 기준 화합물로 사용하여 검량선을 얻었다. 결과의 IC50 값은 µg/mL로 표시되었습니다.19

철 환원 항산화력(FRAP) 테스트

FRAP 시약을 얻기 위해 25mL의 300mM 아세테이트 버퍼(pH 3.6), 2.5mL TPTZ[2,4,6-트리스(2-피리딜)-s-트리아진] , 및 2.5mL의 FeCl3·6H2O(20mM)를 혼합하였다. 그 후, 10 mL의 샘플을 260 mL의 FRAP 시약에 첨가하고 96 웰-플레이트에서 증류수로 300 mL로 희석하였다. 37℃에서 30분간 배양한 후 593 nm에서 흡광도를 측정하였다. BHT는 참조 화합물로 사용되었습니다. 염화 제1철 용액(0.252mM)을 사용하여 표준 곡선을 얻었고 결과는 1g 건조 추출물 중 FeSO4 mM로 표시되었습니다.20

구리 환원 항산화 능력(CUPRAC) 테스트

CUPRAC 테스트는 이전에 Barak 등이 설명한 방법에 따라 평가되었습니다.21 동일한 부피의 10mM CuSO4, 네오큐프라인 및 암모늄 아세테이트 버퍼(85mL)를 96-웰 플레이트에서 혼합했습니다. 그 후, 혼합물에 각각 51 mL의 증류수 및 43 mL의 시료 용액을 첨가하였다. 20분 동안 배양한 후, 450 nm에서 흡광도를 판독하였다. 결과는 건조 추출물 1g 중 mg 아스코르브산 당량으로 표시되었습니다.

총 항산화 능력(TOAC) 테스트 결정

총 항산화능 시험은 앞서 Barak 등이 설명한 phosphomolybdenum 방법에 따라 계산하였다.22 첫째, TOAC 용액을 얻기 위해; 28mM 제1인산나트륨, 4mM 몰리브덴산암모늄 및 600mM H2SO4를 혼합하였다. 그런 다음 300 μL의 TOAC 용액을 96 건강 플레이트에서 30 μL의 샘플 용액과 혼합했습니다. 90분 동안 95도에서 배양한 후 흡광도를 695 nm에서 읽었습니다. 아스코르브산을 사용하여 표준 곡선을 얻었고 결과는 1g 건조 추출물에서 mg 트롤록스 당량으로 계산되었습니다.

피부 노화 관련 효소 억제 활성

항콜라게나제 활성

MPM의 항콜라게나아제 활성을 측정하기 위해 50 mM 트리신 완충용액(pH: 7.5)(400 mM NaCl 및 10 mM CaCl2)을 준비하였다. Clostridium histolyticum(ChC - EC. 3.4.23.3)을 콜라게나제의 공급원으로 사용했으며, 이를 50mM 트리신 완충액에 용해하여 초기 농도 0.8U/mL를 달성했습니다. 트리신 완충액에 용해된 2mM의 N-[3-(2-푸릴)아크릴로일]-Leu-Gly-Pro-Ala(FALGPA)를 기질로 사용하였다. 추출물은 반응을 시작하기 위해 기질을 첨가하기 전에 15분 동안 완충 용액에서 콜라게나제 효소와 함께 배양되었다. 최종 반응 혼합물은 150μL의 총 부피를 포함했습니다. 트리신 완충액, 0.8mM FALGPA, 0.1단위의 ChC 및 25μL MPM. 빈 결과에는 물을 사용했습니다. 기질을 첨가한 후 즉시 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군은 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)를 수행했습니다.23

항엘라스타제 활성

항엘라스타제 활성에 대한 MPM의 평가는 0.2mM Tris-HCl 완충 용액(pH: 8.0)을 사용하여 수행되었습니다. 돼지 췌장에서 얻은 엘라스타제(PE, EC 3.4.21.36) 원액을 3.33 mg/mL 농도의 증류수로 준비하였다. 기질로 사용할 N-Succinyl-Ala-Ala-p-nitroanilide(AAAPVN)를 완충용액(1.6mM)에 녹였다. MPM 추출물은 기질을 첨가하기 전에 37도에서 15분 동안 1 μg/mL의 PE와 함께 배양되었습니다. 15분 전 배양이 끝나면 0.8 mM AAAPVN 기질을 1 mg/mL 식물 추출물을 함유하는 효소 혼합물에 첨가하고 다시 37도에서 15분 동안 배양하였다. 0.25 mg/mL EGCG를 양성 대조군으로 사용하는 동안 이 테스트 샘플은 MPM 대신 동일한 부피의 EGCG를 포함하고 테스트 설정을 반복했습니다. 배양 기간 후 Thermo Scientific Multiskan SkyHigh Microplate Spectrophotometer를 사용하여 365nm 여기 및 410nm 방출에서 5~30분 동안 4개의 다른 시점에서 측정을 수행했습니다.24, 25

항히알루로니다제 활성

항-히알루로니다아제 활성은 Kolayli et al.26 및 Lee et al.3에 의해 기술된 방법을 변형하여 수행하였다. 먼저 시판되는 히알루로니다아제(EC 3.2.1.35, Sigma-Aldrich)를 0에 용해시켰다. 0NaCl 및 소 혈청 알부민을 포함하는 2M 인산염 완충액(pH: 3.5). 그런 다음, 효소의 적절한 기질인 히알루론산을 아세테이트 완충액(0.1M, pH: 3.5)에서 준비하여 사용할 준비를 하였다. 1mg/mL 농도의 MPM 20μL, 히알루로니다아제 10μL 및 0.1M 아세테이트 완충액 60μL로 구성된 분석 혼합물을 37도에서 20분 동안 사전 배양했습니다. 인큐베이션 시간 후, 10 μL의 히알루론산을 혼합물에 첨가하고 다시 37도에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 총 배양 시간이 끝나면 Thermo Scientific Multiskan SkyHigh Microplate Spectrophotometer를 사용하여 600nm에서 여러 시점에서 측정을 수행했습니다. 블랭크 그룹은 실험 설정에서 효소를 포함하지 않았지만 대조군은 추출물을 포함하지 않았습니다. 항-히알루로니다아제 활성의 백분율은 다음 방정식을 사용하여 계산되었습니다.

노화 방지 활동(%)= [(Abs of control - Abs of sample)/ Abs of control] × 100

통계 분석

본 연구에 포함된 항엘라스타제, 항콜라게나제 및 항히알루로니다제 활성 실험은 독립적으로 3회 반복하였다. 통계적 차이는 GraphPad Prism 8 소프트웨어의 t-테스트를 ​​사용하여 분석되었습니다(p 0.05 이하).

결과 및 논의

노화 방지 잠재력의 결정

엘라스틴, 콜라겐 및 히알루론산은 피부의 젊은 모습에 중추적인 역할을 하는 ECM의 알려진 성분입니다. 엘라스틴은 피부의 탄력성을 유지하는 데 필수적인 단백질이므로 ECM의 엘라스틴 감소는 노화 과정을 가속화합니다.27 이전 문헌에서는 감소된 양의 엘라스틴과 피부 주름과 노화 사이의 직접적인 연관성을 나타냅니다.28 히알루론산은 소수성 GAG 분자로 히알루로니다제를 통해 해중합됩니다. 히알루론산은 피부의 부드러움과 수분을 안정적으로 유지하는 데 중요합니다. 따라서 과도한 분해는 피부의 건조와 주름을 유발하는 것으로 나타났습니다.29 시간이 지남에 따라 노화 과정을 통해 콜라겐 수치가 감소하면 진피가 얇아지는 현상이 현미경 검사에서 뚜렷한 징후로 간주됩니다.3{{23 }} 콜라게나제 억제제를 통해 콜라겐 분해를 지연시키면 결과적으로 피부 구조의 주름과 노화가 지연된다는 사실이 정확하게 밝혀졌습니다.5 이러한 정보를 고려할 때 엘라스타제, 콜라게나제 및 히알루로니다제를 억제하는 물질은 노화 방지 제품에 주목할만한 잠재력을 가지고 있습니다. 이전 연구에서는 다양한 이소플라보노이드가 앞서 언급한 효소에 대해 상당한 억제 생체 활성을 나타내는 것으로 나타났습니다. Addotey 등31은 4가지 다른 이소플라보노이드가 히알루로니다아제를 61.2%까지 억제한다는 것을 보여주었습니다. Kim et al.32은 Glycyrrhiza uralensis Fisch.에서 분리된 isoflavonoid인 licoricidine이 상당한 엘라스타제 억제 활성을 가지고 있음을 보여주었습니다. 감초의 IC50 값은 61.2 ± 4.2 μM로 계산되었으며 올레아놀산은 기준 화합물로 131.4 ± 11.4로 계산되었습니다. 결과는 이소플라보노이드가 엘라스타제 효소를 억제할 수 있음을 나타냅니다. 앞서 언급한 연구와 일관되게 Kim et al.33은 Flemingia philippinensis Merr의 뿌리에서 분리한 osajin과 상당히 관련된 구조인 9개의 다른 prenylated isoflavonoids를 연구했습니다. & 롤프. 연구자들은 5개의 프레닐화 이소플라본이 호중구 엘라스타제에 대한 강력한 억제 활성을 가지고 있으며, IC50 값은 1.9-12.0 μM 사이에서 다양하며 올레아놀산의 IC50 값은 28.4 μM이라고 보고했습니다. 다른 연구에서 Ergene Öz et al. 34는 Hyaluronidase, collagenase 및 elastase에 대한 Ononis spinoza L.의 뿌리에서 분리된 5가지 isoflavonoids의 in vitro 억제 활성을 조사했습니다. 이소플라본의 히알루로니다아제 억제 활성은 22.08-45.58% 사이인 것으로 보고되었으며, 동일한 농도에서 탄닌산은 88.32% 억제를 보였다. Collagenase 억제 결과는 20.41- 28.49% 사이로 계산되었으며 elastase 억제는 20.47-46.88%로 측정되었습니다. EGCG는 두 분석의 기준으로 사용되었으며 동일한 농도에서 억제 활성은 각각 41.18% 및 84.64%로 측정되었습니다. 또 다른 연구에서는 M. pomifera에서 직접 분리한 pomiferin의 국소 치료를 조사했습니다. 15 포미페린은 M. pomifera 열매에서 발견할 수 있는 프레닐화 이소플라보노이드이며 그 분자 구조는 오사진과 매우 유사합니다. 연구자들은 포미페린이 참조 화합물인 레티놀보다 우수하거나 동등한 콜라겐과 엘라스틴을 증가시켜 강력한 ECM 단백질 자극 활성을 나타냈다고 보고했습니다. 언급된 모든 연구는 이소플라본이 이러한 효소의 중등도에서 강력한 억제제이며 천연 노화 방지 물질로서 상당한 잠재력을 가지고 있음을 밝혔습니다.

본 연구에서는 MPM의 in vitro hyaluronidase, collagenase, elastase 억제활성을 조사하여 항노화능을 측정하였다. MPM과 참조 화합물인 EGCG 모두에 대해 20 및 40분과 같은 두 시점에서 콜라게나아제 억제 분석에 대한 비교 분석을 수행했습니다. 결과는 콜라게나제 억제 활성이 시간이 지남에 따라 증가함을 입증했습니다. 1 mg/mL MPM은 84.55 ± 1.99% 억제를 보인 반면, 25{{40}} µg/mL EGCG는 20분 배양 후 84.66 ± 1.83% 억제를 나타냈습니다. 억제 생체활성은 시간이 지남에 따라 증폭되었으며, MPM 40분 후 EGCG는 콜라게나제를 각각 94.68 ± 2.42% 및 94.98 ± 2.81% 억제했습니다. 문헌과 일치하게, MPM은 엘라스타제에 대해 상당한 억제 활성을 나타냈다. 결과는 4개의 시점(5, 10, 20 및 30분)에 대해 측정되었으며 시간이 지남에 따라 증가하는 것으로 나타났습니다(그림 2). EGCG(250 µg/mL)를 기준으로 하였으며, 억제 활성은 매 시점마다 증가하였다(44.07 ± 0.00 퍼센트 , 52.19 ± 0.00 퍼센트 , 64.69 ± 0.{{41 }}퍼센트 및 86.21 ± 0.00퍼센트 각각). 한편, 1 mg/mL 농도의 MPM은 더 높은 증진 및 억제 활성을 나타냈으며, 이는 5분에서 30분 사이에 34.70 ± 0.57%에서 97.40 ± 1.04%로 상승했습니다. 마찬가지로, 1 mg/mL MPM은 40분 배양 후 히알루로니다제 효소를 상당히 억제했습니다. 40분 후 83.91 ± 2.36% 억제율이 측정되었고, 80분 배양 후 억제율은 97.19 ± 0.45%로 증폭되었습니다. 전체 효소 억제 분석을 고려했을 때 결과는 MPM이 귀중한 천연 노화 방지제일 수 있으며 다양한 노화 방지 제품의 내용물에 사용될 수 있음을 눈에 띄게 입증했습니다. 따라서 M. pomifera는 추가적인 경제적 중요성을 얻을 수 있습니다.

항산화 잠재력의 결정

수많은 외인성 및 내인성 요인이 다양한 메커니즘을 통해 피부 노화를 유발합니다. 이러한 요인의 대부분은 피부의 ECM에서 ROS 형성에 의해 직간접적으로 영향을 받습니다.35 피부는 우리 몸의 바깥 부분을 덮고 있기 때문에 일상 생활에서 상당한 양의 UV 조사를 받습니다. 따라서 일광 화상, 과다 색소 침착 및 피부 발암과 같은 대부분의 피부 문제는 UV 방사선의 직접적인 영향에 기인하거나 관련됩니다. 마찬가지로, 광노화는 그 유해한 특성의 추가적인 결과입니다.36 더욱이, UV 광은 ROS 형성을 생성하고 결과적으로 광노화를 유발하는 가장 중요한 메커니즘 중 하나인 피부 조직에 산화 스트레스를 생성합니다.37 ROS 형성은 조기 피부 노화를 유발하며 상당한 항산화 능력을 가진 제제는 UV 방사선의 위험한 영향에 대한 유용한 도구가 될 수 있습니다. 따라서 임상 연구에 따르면 국부적인 항산화제 사용이 피부 보호 효과가 있음이 밝혀졌습니다.38

이전 문헌에서 잘 확립된 국소 항산화제 사용과 피부 노화 지연 사이의 상호 연관성 이후 MPM의 시험관 내 항산화 가능성을 조사하면 MPM이 국소적으로 적용될 때 노화 방지 가능성에 대한 귀중한 정보를 얻을 수 있습니다. 이전 문헌에서는 많은 수의 이소플라보노이드를 함유한 추출물이 귀중한 항산화제일 수 있음을 입증했습니다. 이전 연구에서 F. macrophylla 추출물의 이소플라보노이드가 풍부한 추출물은 ROS.39를 제거하여 UVB로 인한 피부 손상을 줄였습니다. Santos와 Silva4{{10}}는 프레닐화 이소플라보노이드가 플라보노이드 모이어티 및 프레닐 측쇄의 부가 효과. M. pomifera의 추출물과 이소플라보노이드의 항산화 잠재력은 이전 연구에서 평가되었습니다. 결과는 하이드로알코올 추출물과 순수한 오사진이 DPPH, FRAP 및 TOAC 분석에서 유의한 활성을 보였지만, 포미페린 및 에틸 아세테이트 분획이 더 높은 활성을 나타냄을 입증했습니다.41 이 연구를 위해 DPPH 라디칼 소거 활성, FRAP, CUPRAC 및 TOAC 분석은 MPM의 체외 항산화 가능성을 포괄적으로 측정하기 위해 수행되었습니다(표 2). MPM은 상당한 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타냈으며 IC50 값은 1998년에 측정되었습니다.86 ± {{20}}.02. FRAP 및 TOAC 분석은 또한 각각 0.191 ± 0.01 mM FeSO4 /DE 및 114.43 ± 0.02 AAE/g DE로 주목할만한 금속 환원 활성을 나타냈습니다. 이러한 결과는 Orhan 등이 발표한 이전 연구와 일치합니다.41 CUPRAC 분석은 우리가 아는 한 처음으로 M. pomifera 과일 추출물에 대해 수행되었습니다. 이에 따라 MPM은 CUPRAC 분석에서 주목할 만한 구리 감소 활성을 나타냈으며 결과는 73.928 ± 0.01 AAE/g DE로 측정되었습니다. 총 항산화 능력 분석을 고려했을 때 MPM이 유망한 노화 방지제임을 시사할 수 있습니다.

페놀 프로파일 및 HPTLC 분석

이소플라보노이드는 페놀성 물질로 항산화, 항암 및 부인과 문제와 같은 다양한 주목할만한 생물학적 활동을 담당하는 식물 성분으로 알려져 있습니다.42 이전 연구에서는 프레닐화 이소플라보노이드가 M. pomifera 과일의 주요 페놀 화합물임을 입증했습니다.43 수많은 연구에서 오사진이 확인되었습니다. M. pomifera 열매의 주성분인 pomiferin은 주로 생물학적 활성에 기인합니다.12 Osajin과 pomiferin은 하나의 하이드록실 그룹만 다른 매우 유사한 프레닐화 이소플라보노이드입니다.44 이전 보고서에서는 osajin과 pomiferin 함량에 대해 상충되는 결과가 나타났습니다. M. pomifera 과일. Kartal et al.45은 M. pomifera에서 osajin과 pomiferin을 측정하기 위해 LC-MS 방법을 개발했으며, 이는 Türkiye의 앙카라 지방에서 수집되었습니다. 결과는 과일 샘플의 다른 부분에서 포미페린 함량이 오사진 함량보다 약간 더 높다는 것을 입증했습니다. 또 다른 연구에서는 미국 중서부와 남부의 여러 지역에서 M. pomifera 과일 샘플을 수집하고 새로운 HPLC 분석 방법을 통해 osajin 및 pomiferin 함량을 측정했습니다. 결과는 지리적 차이가 샘플에서 이소플라보노이드 양의 상당한 변화로 이어진다는 것을 보여주었습니다.46 Tsao et al.47은 캐나다에서 수집한 과일의 오사진 및 포미페린 함량을 결정했고 포미페린 함량이 오사진 함량보다 약간 더 높다는 것을 발견했습니다. 대조적으로, Hwang et al.48은 다양한 추출물에서 포미페린 양보다 오사진 양이 더 많다는 여러 연구를 요약했습니다. M. pomifera 열매의 osajin 및 pomiferin 함량은 결정적으로 유사한 화학 구조로 인해 지리적 차이 및 추출 기술에 따라 예외적으로 가변적이라고 주장할 수 있습니다. 이 연구를 위해 MPM의 양은 우리가 아는 한 처음으로 HPTLC 분석을 통해 측정되었습니다. 분석 결과 osajin은 0 Uşak 지방에서 수집된 MPM의 주요 성분으로 나타났습니다. 샘플의 22%는 osajin으로 구성되었습니다(표 1). 또한, MPM의 페놀 프로필에 대한 추가 평가를 위해 총 페놀 및 총 플라보노이드 함량 분석을 수행했습니다. 결과는 MPM이 다음과 같이 주목할만한 페놀 및 플라보노이드 함량을 가지고 있음을 보여주었습니다. 각각 113.92 ± 2.26 mg GAE/g 및 66.41 ± 0.74 mg QE/g. 페놀 프로필 평가 결과 MPM이 새로운 천연 노화 방지제로서 탁월한 후보가 될 수 있음을 보여주었습니다.

결론

M. pomifera 과일의 국소 적용을 조사하는 연구는 비교적 새롭지만 고무적인 보고서로 인해 이러한 방식에 대한 관심이 높아지고 있습니다. 따라서 이 연구는 M. pomifera 열매 추출물의 가능한 항노화 가능성에 대한 포괄적인 평가를 설명하는 것을 목표로 합니다. HPTLC 분석은 총 페놀 프로필을 결정하기 위한 시험관 내 연구와 함께 우리가 아는 한 처음으로 이소플라보노이드 함량을 결정하기 위해 M. pomifera 과일에 사용되었습니다. 결과는 오사진이 샘플의 주요 성분임을 보여주었다. 또한, 추출물의 시험관 내 항산화 잠재력은 4가지 다른 분석으로 평가되었으며 결과는 MPM의 상당한 항산화 잠재력을 입증했습니다. 또한 노화와 관련된 효소에 대한 억제 활성을 측정한 결과 MPM이 현저한 효소 억제 활성을 가짐을 알 수 있었다. 결론적으로 이 연구는 새로운 스킨케어 제품의 생산으로 이어질 수 있는 정보를 제공합니다.

윤리학

윤리 위원회 승인:윤리위원회의 승인은 연구에 필요하지 않습니다.

동의:필요하지 않습니다.

피어 리뷰:외부 동료 검토를 거쳤습니다.

저자 기여

개념: THB, TBŞ., HB, 디자인: THB, İ.KC, EC, 데이터 수집 또는 처리: THB, İ.KC, HB, 분석 또는 해석: THB, İ.KC, 문헌 검색: THB, TBŞ., 쓰기: THB, EC

이해 상충:이해 상충은 저자에 의해 선언되지 않았습니다.

재정 공개:이 연구는 Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar University 과학 프로젝트 위원회(아니오: 2020/02/07)의 지원을 받았습니다.

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