많은 연구에서 알레르기 질환은 선천적 면역 활성화의 결과일 뿐만 아니라

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추상적인:비만 세포는 아토피 피부염과 건선을 포함한 피부 알레르기와 염증에 매우 중요한 역할을 합니다. 참고문헌은 과거에 피부에 항염, 항노화 효과가 있는 것으로 밝혀졌으나 비만세포에 대한 효과는 아직 구체적으로 연구되지 않았다. 이 연구에서 우리는 비만 세포(RBL-2H3 세포)와 마우스 모델을 사용하여 참조의 항알레르기 및 염증 효과를 연구했습니다. 첫째, 우리는 참조가 비만 세포의 탈과립화와 사이토카인의 발현을 억제한다는 것을 발견했습니다. 또한 비만 세포가 A23187/phorbol 12-myristate{7}}acetate(PMA)에 의해 자극되었을 때 참조에 의해 세포 내 칼슘 상승이 억제되었음을 관찰했습니다. MAPK/NF-KB 경로의 인산화도 참조 전처리에 의해 감소됩니다. 생체 내 연구 결과에 따르면 참조는 DNCB(디니트로클로로벤젠)로 인한 피부염 및 비만 세포 침윤의 외관을 개선할 수 있습니다. 또한 피부의 장벽 단백질 발현도 회복됩니다.시스탕마지막으로, 참조는 화합물 48/80으로 인한 긁힘 행동을 감소시킬 수 있음을 발견했습니다. 종합하면, 우리의 결과는 참조가 매우 우수한 항알레르기 및 항염증 천연 제품임을 나타냅니다. 비만 세포에 대한 효과는 약리학적 메커니즘에 기여합니다.

키워드:참조; 천연 제품; 비만세포; 피부염; 가려움

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1. 소개

많은 연구에서 알레르기 질환이 선천적 면역 활성화뿐만 아니라 적응 활성화의 결과임을 확인했습니다. 그 중 비만세포는 알레르기성 비염, 천식, 알레르기성 피부염 등 다양한 알레르기 질환에서 매우 중요한 역할을 합니다. 비만 세포는 세포막에 IgE 수용체(FceRI)를 발현하며, FceRI 수용체는 IgE 항체에 대해 높은 친화성을 갖는다[1,2]. 항원특이 IgE가 FceRI에 결합하면 상호작용이 일어나 알레르기 반응이 일어난다. FceRI의 응집은 수용체 티로신 키나제를 활성화하고, 다운스트림 반응을 시작하고, 다양한 주요 단백질(예: 미토겐 활성화 단백질 키나제, MAPK)의 인산화를 촉진하여 궁극적으로 칼슘 이온(Ca2 plus )의 유입을 유도할 수 있습니다. 비만 세포 탈과립의 주요 사건[3].시스탄체 오스트레일리아활성화된 비만 세포는 탈과립화되어 화학적 매개체를 방출합니다. 이러한 알레르기 반응에 사용되는 화학 매개체는 염증을 유발할 수 있으므로[4] 알레르기 증상의 치료에는 비만 세포 탈과립 억제제가 사용됩니다. 따라서 IgE 매개 비만 세포 탈과립의 억제는 알레르기 질환을 예방 및 치료하기 위한 새로운 화합물을 식별하는 데 종종 사용됩니다. 항-디니트로페닐(DNP)IgE 항체와 항원이 즉각적인 과민증의 전형적인 생체내 모델이자 항-항원 알레르기의 가능성에 대한 연구 약물로서 수동 피부 과민성(PCA) 반응을 유도할 수 있다는 것이 확립되었습니다[5,6 ]. 또한 비만 세포 탈과립은 화합물 48/80 및 A23187과 같은 비면역 자극제에 의해 유발될 수도 있습니다. A23187 칼슘 이온 전달 물질은 예를 들어 과립에서 히스타민과 같은 미리 형성된 매개체의 방출로 비만 세포 분비를 자극하는 것으로 오랫동안 알려져 왔습니다. [4]화합물 48/80은 p-메톡시-N-메틸페네틸아민의 혼합 중합체입니다. 비만 세포의 독립적인 자극에 널리 사용되는 포름알데히드에 의해 가교 [7,8] 따라서 적절한 양의 화합물 48/80 및 A23187이 알레르기 반응의 기전을 연구하기 위한 시약으로 일반적으로 사용되었습니다. 통계적 평가에 따르면 인구의 약 15-20%가 아토피 피부염을 앓고 있습니다. 아토피 피부염은 소아나 성인을 막론하고 적절한 치료 없이는 환자에게 심리적 고통을 주고 가족과 사회적 건강 비용을 부담시킬 수 있다[9]. 안타깝게도 알레르기성 피부염을 치료할 적절한 치료법은 없습니다. 현재의 치료 옵션은 여전히 ​​질병을 유발하는 알레르겐을 피하고 스테로이드의 지속적인 사용이 치료의 황금 표준입니다. 피할 수 없는 알레르겐과 약물의 부작용으로 인해 새로운 치료제의 개발이 시급합니다. 약초 및 식물에서 분리한 천연 화합물은 염증성 질환을 예방 및 치료하고 알레르기 질환 환자의 삶의 질을 향상시키는 치료제의 잠재적 공급원입니다.

Cistanche 캔 안티 에이징

참조는 식물 Nelumbo nucifera의 연핵(종자의 배)에서 유래하며 주요 비스벤질이소퀴놀린 알칼로이드입니다. 참고문헌이 많은 질병에서 항암, 항산화, 항염, 신경보호 효과와 같은 광범위한 약리학적 특성을 갖는다는 증거가 있습니다[10-15].시스탄체 혜택Khan et al. 참고문헌은 인간 각질형성세포와 섬유아세포에서 UV 매개된 ROS 및 malondialdehyde(MDA) 수치의 증가를 억제하여 항광노화 효과를 일으킨다는 것을 발견했습니다[16,17]최근, 우리는 참고문헌이 아토피 치료를 위한 대체 의학으로서 잠재력을 가지고 있음을 발견했습니다. 피부염 또는 기타 피부 관련 염증성 질환[18]. 그러나 참조가 비만 세포에서 항 피부 알레르기 효과를 발휘하는지 여부는 여전히 불확실합니다. 이 연구에서 우리는 인간 비만 세포주(RBL{8}}H3 세포)와 화합물 48/{11}}및 DNCB 유도 아나필락시스를 사용하여 비만 세포 매개 알레르기 질환에 대한 참조의 효과를 조사하는 것을 목표로 했습니다. 쥐 모델.

La referencencia proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un Importante alcaloide de bisbencilisoquinolina. Existe evidencia de que la referencene una amplia gama de propiedades farmacológicas, como efectos anticancerígenos, 항산화제, 항염증제, 신경보호제, en muchas enfermedades [{0}}]. Beneficios de la cistanche Khan et al. encontró que la referenceencia 생산 efectos anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos humanos [16,17] Recientemente, descubrimalencia de atópica dermatitis u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]. Sin embargo, sigue siendo incierto si la referencene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. En este estudio, nuestro objetivo fueInvestigar los efectos de referencencia en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos, utilizando líneas de mastocitos humanos(células RBL{5}}H3) yun modelo de latones con anafilacom .

2. 결과

2.1.쥐 비만세포(RBL-2H3)에 대한 네페린 세포독성 시험

쥐 호염기성 백혈병(RBL){0}}히스타민 방출 비만 세포 유사체인 H3 세포는 비만 세포 매개 염증의 효과를 조사하기에 적합한 세포이기 때문에[19], 우리는 이 세포를 사용하여 항알레르기성 참조의 효과. 먼저 참조가 비만 세포에서 세포 독성을 생성할 수 있는지 여부를 테스트했습니다. 세포가 24시간 동안 1~30μM의 참조로 전처리되면 세포의 세포 생존율은 참조 처리의 영향을 받지 않습니다(그림 1).

2.2.Neferine은 다양한 활성제에 의해 자극된 RBL-2H3의 탈과립화 효과를 감소시킵니다.

RBL{0}}H3 세포는 일반적으로 탈과립화의 시험관 내 연구에 사용됩니다. (HSA)는 탈과립을 유발합니다. 또한 비만 세포는 화합물 48/80 및 칼슘 이온 전달 물질 A23187과 같은 합성 화합물에 반응하여 탈과립화되는 것으로 알려져 있으며 이러한 화합물은 시험관 내 알레르기 반응의 메커니즘을 직접 연구하기 위한 편리한 시약으로 사용되었습니다[23, 24]. 그 결과 활성화제에 의해 활성화되지 않은 RBL{12}}H3의 세포질에는 제한된 분비 과립이 포함되어 있음을 보여주었습니다.시스탄체 콜레스테롤참조(10μM) 단독 처리는 RBL{1}}H3의 활성에 영향을 미치지 않았습니다(그림 2A, B). 그러나, 화합물 48/80, A23187 및 항-DNP/IgE와 DNP/HSA를 포함하는 다른 활성화제의 첨가는 세포질을 분비 과립으로 명확하게 채웠다. 전자현미경하에서 세포질에 많은 분비과립이 있고 일부 분비과립은 세포막과 융합하여 탈과립을 유도하는 것을 볼 수 있다(그림 2C-E). 참조 10 uM으로 전처리한 후, 세포질의 분비 과립이 유의하게 감소했습니다(그림 2F-H). 이러한 결과는 참조가 활성화제에 의해 자극된 RBL{13}}H3의 활성화 및 탈과립화를 효과적으로 억제할 수 있음을 나타냅니다.

2.3.네페린은 PMA/A23187-RBL-2H3에서 유도된 세포 내 칼슘 상승을 억제합니다.

칼슘 이온은 세포 활성화 과정에서 2차 전달자 역할을 합니다. A23187은 세포막을 통한 칼슘 이온의 침투를 증가시키고 비만 세포의 활성화를 자극하는 가장 효과적인 방법입니다. Phorbol myristate acetate (PMA)는 protein kinase Cand를 활성화하고 세포 내 칼슘 이온을 증가시켜 A23187의 효과를 향상시킬 수 있습니다. 비만 세포에서 칼슘 이온의 증가는 비만 세포 활성화를 유도하는 중요한 요인으로 간주되어 비만 세포의 탈과립에 영향을 미치고 더 많은 염증성 사이토카인 및 케모카인을 방출합니다.cistanche 데시 콜라 부작용,따라서 본 연구에서는 참조가 염증을 억제할 때 RBL{0}}H3의 칼슘 이온 농도를 억제할 수 있는지 여부를 모색했습니다. 실험군을 20분 동안 기준 전처리 유무에 관계없이 나누고, 1mM CaClz와 PMA/A23187을 첨가하여 RBL{5}}H3를 자극하고 활성화시켰다. 실험 결과에 따르면 RBL-2H3에 다른 농도의 참조 단독 처리는 세포 내 칼슘 이온 농도 증가에 영향을 미치지 않았습니다. PMA/A23187-유도 Ca2t 유입군에서 세포 내 칼슘 이온 농도가 유의하게 증가했습니다. RBL{11}}H3 세포는 참조(3μM 및 10μM)로 20분 동안 전처리되었으며 칼슘 이온 농도가 크게 감소했습니다(그림 3).

2.4.네페린은 RBL-2H3에 의해 자극된 PMA/A23187에서 염증성 사이토카인의 mRNA 발현을 감소시켰습니다.

피부의 면역 반응은 신체의 비만 세포 수를 증가시키고 비만 세포는 전염증성 사이토카인을 생성하여 질병의 진행을 가속화합니다. 전염증성 사이토카인, 특히 TNF-a, IL{3}}, IL-1 및 IL-8은 염증을 유발할 뿐만 아니라 백혈구 침윤, 육아종 형성 및 조직 섬유증을 유발합니다. PMA/A23187은 비만 세포에 작용하여 IL-16, IL{8}}, TSLP 및 TNF-를 생성하도록 유도하여 알레르기 관련 염증을 유발합니다. 따라서 우리는 참조로 RBL{12}}H3를 20분 동안 사전 처리하고 PMA/A23187로 6시간 동안 자극하여 참조가 IL{18}}, IL{{ 19}}, TSLP 및 TNF-a. 그 결과, reference 단독으로 처리한 군에서는 cytokine mRNA의 발현에 영향을 미치지 않았으며, PMA/A23187에 의해 염증을 유도한 군에서는 mRNA의 발현이 유의하게 증가하는 것으로 나타났다. 참조 처리군에서는 IL{22}} , IL{23}}, TSLP 및 TNF-a의 ​​mRNA 발현 수준이 유의하게 억제됨을 관찰하였다(도 4).

2.5.네페린은 PMA/A23187-RBL에서 MAPK 경로의 인산화 유도를 억제합니다-2H3

이전 연구에서는 비만 세포가 MAPK를 활성화하기 위해 세포 내 칼슘 이온을 방출해야 한다고 지적했습니다. 또한 MAPK 신호 전달 경로는 단핵구, T 림프구, B 림프구, 사이토카인 및 케모카인의 발현을 조절하고 자가면역을 유도합니다. 이 메커니즘은 PMA/A23187의 활성화 경로와 유사합니다. 이 연구에서 우리는 참조가 MAPK 경로의 조절에 참여할 수 있는지 여부를 조사했습니다. RBL-2H3에 대한 서로 다른 농도의 참조(1,3 및 10uM)를 20분 동안 처리한 다음 PMA/A23187로 30분 동안 자극하여 염증을 유도했습니다. 결과는 RBL-2H3에 다른 농도의 참조 단독으로 처리했을 때 p38, JNK 및 ERK 단백질의 활성화에 영향을 미치지 않았음을 보여주었습니다. PMA/A23187 단독 처리군에서 p38, JNK, ERK 단백질이 활성화되어 유의한 인산화가 있음을 확인하였다. 참조로 전처리된 그룹에서 참조 농도가 높을수록 p38, JNK 및 ERK 단백질의 인산화가 크게 감소하는 것으로 관찰되었습니다(그림 5A-C).

2.6.네페린은 PMA/A23187-RBL-2H3에서 NF-B 경로의 인산화 유도를 억제합니다.

전염증성 사이토카인의 발현은 비만 세포에서 전사 인자 NF-kB의 활성화에 달려 있습니다. IKB 단백질이 인산화 및 분해되면 NF-kB가 방출되어 핵으로 이동하여 해당 DNA 반응성 요소와 결합하고 염증 유발 매개체의 전사를 촉진합니다. 면역 반응, 분화 및 염증을 조절하는 많은 사이토카인과 케모카인이 생성되었습니다. 따라서 우리는 참조를 사용한 전처리가 PMA/A23187에 의해 유도된 단백질 인산화에 영향을 미치는지 여부를 조사했습니다. 우리는 RBL-2H3에 대해 서로 다른 농도의 참조(1,3, 10μM)를 처리했습니다. 20분 후 PMA/A23187은 1시간 또는 2시간 동안 RBL{12}}H3를 자극하여 염증을 유도했습니다. 결과는 다른 농도의 참조 단독으로 RBL{16}}H3를 처리하는 것이 IKBa 및 NF-KB의 인산화에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났습니다. PMA/A23187이 자극에 사용되었을 때, IkBo와 NF-KB의 인산화의 상당한 증가가 관찰되었습니다. 참고로 전처리한 군에서는 IkBa(도 6A)와 NF-KB(도 6B)의 인산화가 현저히 감소된 것으로 나타났다.

2.7.네페린이 2,{3}}디니트로클로로벤젠(DNCB) 유도 아토피 피부염에 미치는 영향

질병 연구를 위한 동물 모델인 DNCB는 아토피 피부염을 유발하는 대표적인 자극 물질이다[25]. 우리의 실험은 과민 반응의 첫 번째 단계를 유도하기 위해 75% 알코올에 용해된 1% 디니트로클로로벤젠(DNCB)을 사용합니다. DMSO에 녹인 기준(3mg/kg 및 10mg/kg) 및 덱사메타손(Dexa,{{1{15}}}}.2 mg/kg)을 5일째에 10일 동안 복강 내 투여 . 8일, 1일, 14일에는 염증유도 2단계로 DNCB 0.5%를 도포하였다. 마우스를 대조군, DNCB 군, 참조 처리군, 덱사메타손 처리군의 4개 군으로 나눈 후, 군간 비교 후 차이점을 기록하였다. 우리는 DNCB가 쥐의 피부에서 아토피 피부 염증 반응을 유도함을 관찰했습니다. DNCB를 적용한 후 쥐의 피부가 붉어지고 비듬이 증가하는 것으로 나타났습니다. 이는 모두 비정상적인 각질 세포 증식, 침윤 및 면역 세포의 응집 때문입니다. 4일 동안 기준 3mg/kg 및 덱사메타손 0.2mg/kg으로 치료한 그룹은 발적을 완화했습니다. 15일째까지 쥐의 등 피부 상태를 계속 관찰하였다. 대조군과 비교하여 DNCB군은 피부가 심하게 붉어지고 부어올랐고 가려움증과 통증으로 인한 비듬과 상처가 있는 것으로 나타났다. . 참조 및 덱사메타손 처리 후 정도가 감소하는 경향을 찾을 수 있습니다(그림 7A). 톨루이딘 블루 염색을 사용하여 응집된 비만 세포의 수를 관찰하였다. 비만세포는 현미경으로 관찰했을 때 보라색으로 보였다. DNCB 실험군의 진피에 침윤 및 축적된 비만세포가 대조군에 비해 유의하게 증가한 것을 정량적으로 확인할 수 있다. 참조 및 덱사메타손을 처리한 그룹에서 침윤, 응집 및 비만 세포 수가 감소했습니다(그림 7B, C).

2.8.네페린은 DNCB 처리 후 장벽 관련 분자의 mRNA 발현을 향상시킵니다

알츠하이머병으로 인한 피부 관련 염증은 비정상적인 피부 장벽 기능을 유발할 수 있습니다. 피부 장벽에 결함이 있으면 항원이나 자극 물질이 피부 표피를 관통하여 체내로 들어가 면역 관련 반응을 유도하기 쉽습니다. 동시에 필라그린, 로리크린, 인볼루크린 등 분화 단백질의 생성이 억제된다. 따라서 손상된 피부장벽을 회복시키는 것은 알츠하이머병 예방 및 치료에 매우 중요하다[26]. 우리 연구에서 우리는 DNCB 유발 아토피 피부염의 동물 모델에 개입하기 위해 참조를 사용했습니다. 마우스를 희생시킨 후, RI-qPCR 분석을 위해 등쪽 피부 조직을 접지하여 참조가 DNCB 처리 후 필라그린, 로리크린 및 인볼루크린의 mRNA 발현 감소를 개선할 수 있는지 여부를 평가했습니다. 그 결과, DNCB 실험군은 대조군에 비해 필라그린, 로리크린, 인볼루크린의 mRNA 발현이 유의하게 감소된 것으로 나타났다. 필라그린, 로리크린 및 인볼루크린의 mRNA 발현은 DNCB 그룹에 비해 참조 및 덱사메타손 처리 그룹에서 유의하게 증가했습니다(그림 8).

우리는 참조가 항 알레르기 긁힘 효과가 있음을 추가로 증명했습니다. 우리는 비만 세포 탈과립화제인 화합물 48/80을 사용하여 BALB/c 마우스에서 긁는 행동을 유도했습니다. 그림 9에서 볼 수 있듯이 참조 처리가 화합물 48/80(50ug/site)으로 인한 긁힘 행동을 억제한다는 것을 발견했습니다. 연속 5일 동안 더 낮거나 더 높은 용량의 참조(3 및 10 mg/kg)를 반복적으로 투여하면 화합물 48/80으로 인한 긁힘 수가 크게 감소했습니다.