시험관 내 소 난모세포에 대한 우롤리틴 A의 노화 방지 효과 2

2.8.통계분석

배아 생산 및 품질 세션의 데이터는 이진 분포와 로짓을 연결 함수로 사용하여 SAS(Statistical Analysis Systems, SAS Inst., Inc., SAS Inst., Inc., Cary, NC, USA)의 Proc Glimmix를 사용하여 분석했습니다. 일반화된 선형 혼합 모델은 치료(UA 투여량, 노화 효과, 여성 연령 및 이들의 상호작용)를 고정 효과로 포함하고 무작위 효과로 복제합니다. 또한 PDIFF 검정을 이용하여 각 처리에 대한 평균을 계산하고 군간 비교를 수행하였다. JC{0}} 데이터, mRNA 전사 수준 및 mt-DNA 사본 수는 SAS의 Proc Mixed를 사용하여 처리(UA 효과, 노화 효과 및/또는 여성 연령 및 이들의 상호 작용)를 포함하는 모델을 사용하여 분석했습니다. 고정 효과로. 세션은 무작위 효과로 간주되었습니다. 염색체 구성의 데이터는 2 x 2 분할표에서 정확한 Fisher 테스트를 사용하여 그룹 간에 비교되었습니다. 결과 분석은 p<>

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3. 결과

3.1.이전 분석 - 용량 반응 연구

성숙 배지가 보충된 UA의 용량-반응 연구 동안 관찰된 난자 성숙 상태는 그림 1에 나와 있습니다. 이 보충은 난모세포의 핵 성숙 단계에 상당한 영향을 미쳤습니다. 50 UA 그룹(38.9±{9}}.5%)은 대조군(1{14}}.8±{{ 15}}.5퍼센트 ,P{11}}.{16}}3)및 1{17}} UA(0.0±{41}}.{{ 45}} 퍼센트 ,p{18}}.{66}}006) 그룹입니다. 이 단계에서 25UA(17.2±0.5퍼센트 ,p{25}}.05) 그룹에서 10 UA 그룹도 확인되었습니다. 또한 50개 UA군과 1개 UA 사이에서 경향이 나타났습니다(14.3±2.0%,p{34}}.08). 최고 투여량에서도 중기-II에서 분류되는 난모세포의 수를 감소시키는 유해한 영향을 보였습니다. (MII) 단계(50 UA, 44.4 ±2.0%) 대조군과 비교할 때(86.5±7.0%,p{46}}.003),1 UA(82.1±2.5%,p{{ 53}}.01), 10 UA(89.3±6.5%,p{60}}.002) 및 25UA(82.8±9.0%,p{67}}.01)그룹. 나머지 그룹 간에는 차이가 관찰되지 않았습니다. 난자 성숙 단계. GV 및 CCl 성숙 단계는 이러한 범주에서 평가된 난모세포가 없기 때문에 그림 1에 표시되지 않았습니다.

용량 반응 테스트는 분열 및 부화 배아 비율에 대한 UA 농도의 유의한 영향을 나타내지 않았습니다. 그러나 7일째에 생성된 배아의 비율은 UA의 다양한 농도에 의해 영향을 받았습니다. 5{19}} UA 그룹(7.2±2.7%)은 1 UA(28.5±4.8%,p{13}}.004),10 UA(20.4±4.0%)에 비해 7일째 배아 비율이 낮았습니다. , p=0.03) 및 25개의 UA(18.5±4.7% ,p{27}}.05) 그룹. 대조군과 50개의 UA 그룹 사이에 유의미한 차이는 발견되지 않았지만 경향(p{30}}.06)이 확인되었습니다. 더욱이, 7일째 배아율은 대조군과 비교하여 1 UA 용량 보충 후 더 높은 경향이 있습니다(p =0.07). 또한 1 UA 그룹은 대조군(34.6%,n{43}}) 및 10 UA(26.8% 퍼센트 ,n=10). 25UA그룹(15.4%,n{52}}) 및 50UA(35.4%,n{56}})와 같은 더 높은 용량에서 1등급 배아의 수가 적었습니다. 이상의 결과를 바탕으로 1 uM UA를 선정하여 다음과 같은 연구를 진행하였다.

3.2. 실험 1 - 노화 및 생리학적으로 성숙한 난모세포의 난모세포 품질 및 발달 잠재력

3.2.1.핵성숙

우리는 사춘기 이전 및 성인 여성에서 수집한 노화 및 생리학적으로 성숙한 난모세포의 염색체 성숙 상태에 대한 UA 보충의 효과를 조사했습니다. UA 효과와는 별도로 난모세포 노화와 여성 연령은 성숙에 상당한 유해한 영향을 유발했습니다. 대조군 난모세포에서 나이가 많은 난모세포에 비해 MII 단계의 더 높은 비율이 확인되었습니다(22h=93.2±5.4% vs.30h=77.6±4.1%, p {{11 }}.02). 또한 AI/TI 단계(22h=3.4±{31}}.5% vs. =17.9±{47}}.6% ,p{23}}.01 및 사춘기 이전=21.1±1.1% 대 성인=6.8±0.7% p =0.03). 또한 IVM 30시간 후 퇴행성 난모세포의 수가 22시간 후보다 더 많이 확인되었습니다(7.1 ±1.39% vs. 4.1±0.89%, p =0.02). . 여성 연령과 UA 보충은 퇴행성 난모세포의 수를 방해하지 않았습니다(p 0.05).

시험관 내 노화와 성숙 배지에 대한 UA 보충 모두 사춘기 이전 및 성인 여성에서 난모세포의 염색체 구성에 상당한 영향을 미쳤습니다(p<0.05, figure="" 2).="" on="" the="" al/ti="" phase="" of="" the="" maturation="" status,="" higher="" rates="" of="" oocytes="" were="" found="" in="" this="" stage="" in="" the="" control="" aged="" 30="" h="" prepubertal="" group="" (46.7±0.5%)="" when="" compared="" to="" control="" prepubertal="" (0.0±0.0%,p="0.05)" and="" ua="" aged="" 30h="" prepubertal="" (0.0="" ±0.0%,p="0.02),and" both="" adult="" control="" (5.6±0.5%,p="0.01" and="" ua="" adult,0.0±0.0%,="" p="0.0002)and" control="" aged="" 30h="" adult="" (9.1±10%,p="0.02)groups." a="" trend="" was="" also="" identified="" between="" ua="" adults="" and="" ua="" aged="" 30="" h="" adult="" (p="">

완전한 핵 성숙에 해당하는 MII 단계와 관련하여 그룹 간에도 상당한 차이가 발견되었습니다(그림 2). MII 단계의 난자 비율은 사춘기 이전 대조군(10{{2{ {27}}}}.{41}}±1.5% ,p{10}}.05), UA 연령 30시간 전 사춘기(100.0±2.5%, p{17}}.02) 및 UA 성인(100.0 ±10.5%, p=0.0002) 및 대조군 30세 성인(86.0±5.5% p =0.056) 그룹. 또한, UA 성인 그룹은 UA 30시간 성인(76.2±11.3%, p{37}}.01), 30시간 성인 대조군(86)에 비해 성숙한 난모세포(MII)의 비율이 더 높았습니다. 0±5.5%, p=0.08) 및 대조군(83.3±4.5%, p=0.057).

난자 성숙의 나머지 단계 사이에는 차이가 관찰되지 않았습니다.플라보노이드,요약하면, UA 보충은 특히 사춘기 이전 여성에서 노화 과정에 제출된 난모세포의 시험관 내 성숙 진행을 개선했습니다. 따라서 UA의 중요한 노화 방지 효과가 확인되었습니다.

3.2.2.미토콘드리아 막 잠재력

여성의 노화된 난모세포에서 미토콘드리아 기능 장애의 관련성과 UA 및 산모의 연령의 영향을 분석하기 위해 다양한 그룹의 난모세포에서 미토콘드리아 막 전위(MMP)를 평가했습니다.

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Cistanche 캔 안티 에이징

여성 연령 및 UA 효과와는 별도로, 난모세포 노화는 측정된 적색 및 녹색 형광의 비율로 평가되는 MMP에 상당한 유해한 영향을 미쳤습니다(22시간 비율 =0.54±1.8% 대 30시간 비율{{6} }.47±1.5% ,p{10}}.002).

여성 연령, 노화 효과 및 성숙 중 UA 보충의 조합은 유의미하게(p{{0}}.{{10}}07) MMP에 영향을 미쳤습니다. (그림 3). 그림 3에서 볼 수 있듯이 난모세포가 22시간 동안 성숙된 UA 성인(비율=0.55±0.04) 및 UA 성인(비율=0.63±0.04) 그룹에서 더 높은 MMP 비율이 얻어졌습니다. , 30세 성인 대조군(각각 비율{14}}.45±0.04,p{18}}.04 및 p{20}}.0007) 및 30세 성인 UA(비율{ {23}}.45±0.03,p{27}}.03 및 p{29}}.0003) 그룹입니다.헤스페리딘 사용또한, MMP의 상당한 증가를 나타내는 JC{0}} 응집체/단량체 비율의 상당한 증가가 대조군 성인과 비교할 때 UA 성인 그룹에서 관찰되었습니다(비율 =0.47 ±0.{16}}4,p =0.{23}}031), 사춘기 이전(비율=0.52±0.04, p{11}}). 03), 30세 성인 대조군(비율{14}}.48±0.03,p{18}}.003) 및 30세 성인 UA(비율=0.47±0.03,p{25 }}.001)그룹. 또한 사춘기 이전 UA와 30시간 이전 UA 사이에서 경향이 확인되었습니다(p{28}}.07).

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요약하면, UA는 생리학적 성숙 동안 MMP를 개선했지만 사춘기 이전 및 성인 난모세포 모두에서 노화의 부정적인 영향을 극복할 수 없었습니다.

3.2.3.배아 발달

배아 발달 잠재력은 성숙하는 동안 사춘기 이전 및 성인 여성의 COC에 적용된 다른 처리(노화 및 UA 보충)로 얻은 분열, D7 및 부화한 배아 비율을 통해 평가되었습니다. 여성 연령 및 UA 효과와는 별도로 난자 노화는 분열에 상당한 유해한 영향을 미쳤습니다(22h=79.5±1.7% 대 30h=68.6±2.0% , p{11}}.0001) 및 D7배아 비율(22시간{15}}.6±1.9%

vs.30h=12.1±1.7% ,p{5}}.{15}}1). UA 보충은 또한 D7 배아 비율을 향상시키는 것으로 나타났습니다(대조군{ {8}}.1±1.5% 대 UA{12}}.0±2.0% ,p{16}}.0009).

여성 연령, 노화 효과 및 성숙 중 UA 보충의 조합은 유의하게(p {{0}}.{{30}}1) 배아 발달, 즉 분열 및 D7 배아 비율(표 2). 성체 난모세포가 UA 보충 여부에 관계없이 22시간 동안 성숙된 경우 더 높은 분열율이 달성되었습니다(대조군 성인=1.4±3.2% 및 UA 성체=80). 9±3.4% ) 및 UA 보충(UA prepubertal{14}}.6±3.2% )으로 22시간 동안 성숙된 사춘기 전 난모세포는 3세 UA 성인(66.5±4.2%,p 미만) 또는 0.01), 대조군 연령은 사춘기 이전 30시간(66.9±3.9%, p 0.02 이하) 및 UA 30시간 이전(67.2±4.0%, p 0.01 이하)군(표 2). 대조군 성인과 대조군 30시간 성인 그룹 사이에서도 경향(p{40}}.09)이 확인되었습니다.

Another parameter that was significantly (p=0.01) influenced by the combination of the female age, the supplementation with UA, and COCs aging was the rate of embryos produced at day 7(Table 2). Exceptions were made for the UA prepubertal and UA 30 h prepubertal groups, the UA adult group presented the highest rates of the embryo at day7 (26.8±4.3%,p≤0.05). Moreover, lower D7 embryo rates were produced from aged oocytes from both adult and prepubertal females without the supplementation of UA (control aged 30hprepubertal=7.7±2.6% and control aged 30h adult=7.7±2.6%)compared to those that were supplemented with UA, respectively (UA aged 30 h prepubertal=18.9±4.0%,p=0.03 and UA aged 30 h adult=15.9±4.0%,p=0.09). The supplementation of UA to the maturation medium did not significantly (p>0.05) 1, 2 및 3등급의 생산된 배아의 품질 비율에 영향을 미치며 노화 효과 또는 연구된 모든 효과를 함께 사용하지도 않았습니다(표 3). 그러나 UA를 22시간 동안 성숙된 난모세포에 보충했을 때 생성된 우수한/양질의 배아의 수는 두 배로 증가했습니다(표 3).

3.3.실험 2

3.3.1.유전자 발현 수준

Nrf2 신호 전달 경로에 대한 UA 효과 및 산모 연령 영향을 연구하기 위해 사춘기 이전 및 성체 소의 GC 배양에서 NFE2L2 및 NQO1 유전자 발현 수준의 분석을 RT-qPCR로 평가했습니다. 연구된 다른 요인과는 별개로, 여성 연령은 NFE2L2 유전자 발현에 상당한 영향을 미쳤으며, 이는 사춘기 이전 여성의 GC에서 NFE2L2 전사체의 높은 수준을 반영합니다(mRNA 수준은 사춘기 이전=0).{11}}0015 ±0.0012% 대 성인{13}}.00011±0.0012,p{17}}.048).

The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly(p>0.05) NFE2L2, NQO1 및 mt-ND5 유전자의 유전자 발현 수준에 영향을 미칩니다. 그림 4는 UA로 처리된 사춘기 이전 및 성인 GC에서 각각의 대조군으로 정규화된 이러한 유전자의 발현 수준을 나타냅니다.

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3.3.2.mt-DNA 복제 번호

Analysis of mt-ND5 DNA content in GC culture from prepubertal and adult cows was assessed by qPCR. The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly (p>0.05) mt-ND5 유전자의 카피 수에 영향을 미칩니다.잃어버린 제국그림 5는 UA 처리된 사춘기 이전 및 성인 GC 모두에서 각각의 대조군으로 정규화된 이 유전자의 카피 수를 나타냅니다.

4. 토론

지난 수십 년 동안 가축에서 ART 적용에 대한 수요 증가가 관찰되었습니다[8,46,47]. 또한, 산모의 고령과 관련된 출산 지연은 이제 여성들이 ART에 의존하게 만드는 주요 요인이 되었습니다[5]. 난모세포의 품질은 성공적인 수태의 발생에 중요하며 여성 배우자의 노화는 ART 성공의 주요 관심사입니다. 이 분야의 발전이 증가하고 있음에도 불구하고 적용된 기술은 아직 생물학적 시계를 되돌려 생식력을 회복할 수 없습니다[7]. 현재 연구에서, 소 난모세포의 연령 관련 불임 연구를 위한 모델이 개발되었습니다. 인간 임신, 난포 및 내분비 사건[48,49]과의 유사성으로 인해 이 모델은 인간 연구에도 유용할 수 있으며 인간 난모세포에서 이러한 연구를 방해하는 윤리적 및 물리적 제한을 피할 수 있습니다. 노화된 여성 배우자에 대한 우리의 모델은 현재 세계에서 가장 중요한 문제 중 하나인 생식 노화 및 생식력 장애와 관련된 다양한 문제를 연구하는 데 매우 효율적이고 적합한 것으로 판명되었습니다. 또한, 현재 연구에서 연구된 바와 같이, 여성 배우자 노화에 의해 유발되는 불임을 예방할 수 있는 잠재력을 가진 새로운 다가오는 항산화 요법에 대한 검색도 마찬가지로 가장 중요합니다.

ART 결과에서 UA의 유익한 효과가 처음으로 보고된 결과를 발표했습니다. UA는 미토파지를 유도하고 세포의 수명을 연장하여 노화 관련 기능 장애 미토콘드리아의 축적을 방지할 수 있는 식품 대사 산물입니다[28]. UA는 이전에 소 생식에서 테스트된 적이 없기 때문에 항암, 항염 및 노화 방지 효과를 나타내는 다른 세포주에 성공적으로 적용된 용량이 사용되었습니다[28,35,39]. 우리 연구에서 이전 용량- 반응 분석이 수행되었고 1 uM UA의 농도가 가장 유망한 것으로 명확하게 확인되었습니다. 더욱이, 더 높은 용량, 특히 50 uM UA 용량에서 유해한 효과가 입증되어 MII까지 핵 성숙의 진행에 해를 끼쳤습니다. 이 효과는 배아 발달 장애에 반영되었습니다. 따라서 Liu와 동료들(2019)은 UA 농도 50uM에서 인간 노화 피부 섬유아세포의 세포 생존력과 증식이 크게 감소한 것으로 나타났습니다. 그들은 높은 UA 용량이 세포 생존력을 감소시켜 G/M 세포 주기에서 체포된 세포의 수를 증가시킨다고 언급했습니다[35]. 반대로, 다른 용량과 비교할 때 성숙 배지에 1 uM UA를 보충한 후 7일째에 더 높은 비율의 배아가 생성되었습니다. 여성 생식에서 UA 작용의 잠재적인 메커니즘을 더 탐구하기 위해 난모세포 노화 동안의 연구와 다양한 연령의 암컷을 난모세포 기증자로 사용하는 연구가 구현되었습니다. Yamamoto와 동료(2010)는 노령 암소의 수정률이 연령과 관련하여 감소한다고 보고했으며, 이러한 난모세포는 성숙하는 동안 첫 번째 감수 분열을 재개하는 경향이 더 있었고 종종 난자 수집에서 이미 감수분열 성숙을 시작한 것으로 나타났습니다[50] 이 데이터는 나이든 소의 난모세포가 더 낮은 난모세포 능력으로 인해 젊은 암컷의 난모세포보다 더 빠른 핵 성숙 진행을 갖고 MII 단계에 더 빨리 도달함을 시사했습니다[51]. 따라서 우리의 연구는 여성 기증자의 나이와 난자 노화 과정이 성숙 과정에서 난모세포의 염색체 구성에 유의한 영향을 미친다는 것을 보여줍니다. 사실, 사춘기 이전 소의 난모세포는 Al/TI 단계(사춘기=21.1% 대 성체 =6.8%)와 같은 지연된 단계의 비율이 더 높았으며, 이는 핵의 더 느린 진행을 나타냅니다. Soto-Heras 및 동료(2018)가 제안한 바와 같이 난자 능력이 낮기 때문일 수 있습니다. 노화된 난모세포는 또한 생리학적 기간(93.2%)에 비해 30시간 동안 MII 단계에 도달한 난자의 비율(7.6%)이 더 낮습니다. 또한 생리적 성숙 과정에서 UA 치료로 긍정적인 효과가 확인되었으며 사춘기 전 여성과 성인 여성 모두에서 노화 방지 효과가 확인되었습니다.

우리의 연구 결과와 일치하게, 연구에서는 자궁내 성숙 동안 멜라토닌 보충이 소 COC에서 감수 분열 재개를 자극할 수 있는 반면, 호르몬 없이 배양된 대조군 난모세포는 감수 분열 재개 속도가 더 느리다는 것을 보여주었습니다[52]. 반대로 케르세틴, 비타민 C 또는 레스베라트롤과 같은 다른 항산화제를 보충하면 ROS 수준이 감소하거나 항산화 효소 수준이 증가하는 경우에도 핵 성숙 속도에 영향을 미치지 않았습니다[53,54].미분화 정제 플라보노이드 분획 1000 mg 사용반대로, 우리의 결과는 UA가 나이 든 성인과 사춘기 이전 여성 모두에서 노화 효과로부터 난모세포를 구출할 수 있음을 보여줍니다.

난자 품질에 영향을 미치는 불임 결과의 주요 원인 중 하나는 미토콘드리아 기능과 관련이 있으며, 이는 산모의 고령 및 배란 후 노화로 인해 손상됩니다[21,55]. MMP는 다양한 모델에서 광범위하게 연구되어 배란 후 노화된 배우자와 산모의 노화가 모두 미토콘드리아 기능의 손실을 유도한다는 사실이 밝혀졌습니다[56]. 결과적으로, MMP의 손실은 난모세포 및 배아 발달에 부정적으로 반영되었다[26,57]. 이러한 결과에 따르면, 우리 연구에서 사춘기 이전과 성체 소의 노화된 난모세포에서 감소된 MMP 비율이 발견되었습니다. 더욱이, 배양 배지에 대한 UA 보충은 22시간 동안 성숙된 사춘기 이전 및 성인 난모세포의 MMP 증가를 유도하여 더 높은 분열 속도에 반향을 일으켰습니다. 이러한 데이터는 소 난모세포에 22시간 동안 멜라토닌을 보충했을 때 MMP 향상을 관찰한 Liang과 동료(2017)가 발견한 결과와 일치합니다[26]. 그러나 우리는 또한 UA가 보충된 노화된 난모세포에서 MMP의 감소를 확인했으며, 이는 UA가 MMP에서 노화의 부정적인 영향을 되돌릴 수 없을 수도 있음을 나타냅니다. 노화된 난모세포에 항산화 화합물을 보충한 후 MMP와 관련하여 불일치 결과가 관찰되었습니다. 실제로 몇몇 저자들은 멜라토닌[26]과 라미나린[21]을 보충한 후 난모세포의 MMP 수치가 더 높아졌다고 보고한 반면, 다른 저자들은 L-카르니틴[58]과 멜라토닌[38]으로 치료한 노화된 난모세포에서 감소된 MMP를 관찰했습니다. 또한 Ryu 및 동료(2016)는 UA로 배양된 마우스 근모세포에서 MMP의 감소를 보여주었습니다[28]. 우리의 결과와 관련하여 난모세포 미토콘드리아에서 UA의 작용 기전에 대한 지식을 심화하고 노화되고 생리학적으로 성숙한 난모세포에 대한 식별된 차등 효과를 설명하기 위한 추가 연구가 다루어야 합니다.

난모세포의 고유한 품질은 후속 배아 발달의 주요 결정 요인으로 널리 보고되었습니다. 축적된 증거에 따르면 체외 성숙 기간과 배란 후 노화 기간 동안 여러 세포 및 분자 이상이 발생합니다. 또한, 이러한 이상은 배아 생산에 반향하는 난모세포 품질에 적절한 영향을 미칠 수 있습니다[52]. UA가 노화 방지 화합물로 작용하고 난자의 품질을 개선하여 난자의 노화를 지연시킬 수 있음을 입증하기 위해 우리는 시험관 수정 후 노화된 난자의 발달 능력을 조사했습니다. 우리 연구에서 분열 및 7일차 배아 생산 속도에 대한 배우자 노화의 유의미한(p 0.01 이하) 유해한 영향이 관찰되었습니다. 따라서 여러 저자들은 노년 여성이 나이와 관련하여 생식 능력이 감소하며, 이는 낮은 출산율과 낮은 배아 품질에 반영된다고 언급했습니다[44,55]. 다른 한편으로, 노화된 난모세포를 구제하기 위해 다른 항산화제 분자를 시험한 이전 연구에서는 체외 성숙 동안 이러한 화합물 중 일부가 소[58], 돼지[58]와 같은 다른 종의 나이든 암컷의 배 발달에 유익한 효과가 있다고 보고했습니다. 38] 및 마우스 [6]. 예를 들어, L-카르니틴은 소 노화된 난모세포에서 테스트되었으며 얻은 절단 속도에서 유의미한 차이가 발견되지 않았습니다. 그러나 L-카르니틴이 없는 나이든 난모세포와 비교하여 배반포 단계로 발달된 접합자 비율의 상당한 증가가 확인되었습니다. [59] 우리의 결과는 생리학적 성숙 동안 UA 보충이 사춘기 이전 및 성인 여성의 분열율을 개선했음을 보여줍니다. UA 노화 난모세포의 분열율은 대조군 난모세포와 크게 다르지 않았지만, 사춘기 이전 및 성인 여성 모두의 UA 노화 난모세포에서 더 높은 D7 배아 비율이 확인되었습니다. 이러한 결과는 이전에 다른 세포 배양에서 확인된 UA의 노화 방지 효과[28,35]가 난모세포와 배아에 유효함을 지적했습니다. 난모세포 노화는 배아의 발달을 손상시키는 다인자적 과정이며, 노화된 난모세포의 발달 능력을 회복시키는 것은 본 연구에서 달성한 중요한 목표입니다.

또한, 우리는 배아 품질에 대한 연령 관련 악화에서 UA의 예방 역할도 평가했습니다. 이 연구에서는 배아 품질 비율에서 유의한 차이가 발견되지 않았지만 UA를 보충한 난모세포는 처리되지 않은 배아에 비해 이식 가능한 배아의 수를 증가시켰습니다. 이전 연구에 따르면 L-카르니틴 치료는 ROS 수준의 감소와 글루타티온 및 기타 항산화 효소의 높은 수준을 통해 노화된 소 난모세포에서 발생된 배아의 품질을 향상시킬 수 있다고 보고했습니다[58]. 이러한 결과와 우리의 결과 사이의 차이는 배아 품질을 평가하기 위해 적용된 다른 기술 때문일 수 있습니다. 배아 품질의 형태학적 평가는 관찰자의 경험에 의존하는 주관적인 방법으로 남아 있습니다. 앞으로 배아의 질을 정확하게 평가하기 위해 다른 기술을 사용하여 더 많은 연구가 다루어져야 합니다.

산화 스트레스가 연령 관련 출산율 감소에 중요한 역할을 한다는 것은 널리 알려져 있습니다. 산화 스트레스는 낮은 난자 성숙 효율과 난자의 품질 저하의 주요 원인 중 하나이며, 이에 따라 후속 배아 발달을 저해합니다[11]. 배우자와 체세포 간의 세포 간 통신은 고품질 난모세포의 적절한 발달에 중요합니다. 노화된 난소의 미세 환경 변화가 보고되었습니다. 예를 들어 항산화 효소 활성이 감소하여 ROS 소거 효율이 손상되는 것으로 나타났습니다.오테플라보노이드또한 젊은 여성과 나이든 여성의 GC는 항산화 활성 및 산모 연령과 관련된 유전자를 다르게 발현하는 것으로 나타났습니다[2,13]. 따라서, 발견된 메커니즘이 노화로부터 난모세포를 구출하고 불임 문제를 극복하기 위해 산화 스트레스를 관리하는 것이 매우 중요합니다. Nrf{2}}Keapl 경로는 산화 스트레스의 해로운 영향에 대처하고 항산화 특성을 발휘하는 능력으로 인해 광범위하게 연구되었습니다. [60]소 GC에서 Nrf2 신호 전달 경로의 활성화를 추가로 연구하기 위해 우리는 NFE2L2 및 그 다운스트림 항산화제(NQO1)의 mRNA 발현 수준. 우리의 결과는 나이가 들수록 감소하는 NFE2L2 전사체의 수준에 여성 연령의 상당한 영향을 보여주었습니다. 실제로, 성인과 비교할 때 사춘기 이전의 젖소에서 더 큰 mRNA 발현 수준이 관찰되었습니다. 이것은 22세에서 49세 사이의 가임기 어린 마우스와 여성의 난소 조직에서 Nrf2 단백질과 mRNA의 고도로 발현된 수준을 보고한 이전 연구와 일치하는 반면, 나이든 마우스와 여성에서는 더 낮은 발현이 발견되었습니다. Nrf2의 감소된 발현은 노년 여성의 생식 능력 감소와 관련될 수 있으며 그 조절은 난소 노화 지연에 중요한 의미를 가질 수 있다고 제안되었습니다[15,61]. 또한 Akino와 동료(2019)는 디메틸 푸마레이트 투여를 통한 Nrf{18}}Keapl 경로의 활성화가 ROS 수준을 감소시키고 불임 지연을 유발할 수 있음을 보여주었습니다[18]. 노화된 인간 피부 섬유아세포에서 ROS를 감소시키는 UA의 효과에 관한 유사한 결과가 보고되었습니다. 이들 세포를 UA로 처리했을 때, SOD1, NQ01, GCLC 및 HMOX1과 같은 Nrf2 표적 유전자의 mRNA 발현의 상당한 증가가 보고되었다. [35]. 우리 연구에서 우리는 GC에서 NFE2L2 및 NQO1 유전자의 발현 수준이 UA 보충에 의해 크게 영향을 받지 않는다는 것을 관찰했습니다. 그러나 노화된 난모세포에서 앞서 언급한 유전자의 mRNA 발현에 대한 UA 효과뿐만 아니라 ROS의 감소 및 생성된 배반포의 후속 개선을 확인하기 위한 추가 연구가 다루어져야 합니다.

미토콘드리아 DNA(mt-DNA) [25,57]의 손상 외에도 미토콘드리아 유전자 발현의 장애는 나이가 들면서 미토콘드리아 기능 장애에 기여하는 것으로 나타났습니다. Zhang과 동료(2019)는 OXPHOS와 관련된 일부 유전자, 즉 mt-ND2, mt-ND3, mt-ND4, mt-ND4L 및 mt-ND5가 나이든 마우스의 난모세포의 GV 단계에서 유의하게 하향조절되었다고 보고했습니다. 어린 쥐와 비교[62]. 우리의 연구에서 사춘기 이전 소와 성체 소에서 검색된 GC 사이에 mt-ND5 mRNA 발현에서 유의미한 차이가 발견되지 않았습니다. 또한, 우리는 GC의 mt-DNA 함량이 난모세포 품질 및 배아 발달과 긍정적인 관련이 있기 때문에 mt-DNA 복제 수를 평가했습니다[63,64]. 우리 연구에서 사춘기 이전 소와 성체 소의 GC에서 mt-DNA 복제 수 사이에 유의미한 차이가 확인되지 않았거나 UA로 처리했을 때 처리되지 않은 그룹과 비교하여 배반포 단계로 발달한 더 많은 수의 난모세포를 관찰했습니다. 또한 Ryu와 동료(2016)는 UA가 보충된 마우스 근모세포에서 호흡 복합체의 mt-DNA 함량과 단백질 수준이 변하지 않았다고 보고했습니다[28]. 여성의 생식 능력을 향상시키는 데 있어 UA의 작용 기전을 밝히기 위한 추가 연구가 수행되어야 합니다.

5. 결론

이 연구에서 얻은 결과는 난모세포 노화가 발달 능력에 미치는 해로운 영향을 확인했습니다. 더욱이, 노화된 여성 배우자에 대한 우리의 모델은 생식 노화 및 그에 따른 생식력 손상과 관련된 다양한 문제를 연구하는 데 매우 효율적이고 유용한 것으로 입증되었습니다. 또한, 노화된 난모세포의 성숙 과정에서 UA를 보충하면 성숙 속도가 향상되고 배아가 생성됩니다. 따라서 노화 된 배우자를 구하는 UA의 노화 방지 효과가 처음으로 확인되어 배반포 발달이 향상되어 수혜자 여성에게 이식 할 배아 수가 증가했습니다. 생리적 성숙, MMP 및 배아 발달에 대한 UA의 긍정적인 효과도 확인되었습니다. 결론적으로, UA 치료는 배우자 노화를 예방하거나 지연시키고 ART에서 후속 배반포 형성 및 생식 결과를 개선하는 새로운 치료 접근법을 제공합니다.

이 기사는 Animals 2021, 11, 2048에서 발췌했습니다. https://doi.org/10.3390/ani11072048 https://www.mdpi.com/journal/animals