Cistanche Tubulosa의 모노테르펜 성분 - Kankanosides A-E 및 Kankanol의 화학 구조-

연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com

XIE 하이후이, 모리카와 토시오, 마츠다 히사시, 나카무라 세이코, 무라오카 오사무, 요시카와 마사유키

추상적인

4개의 새로운 이리도이드 배당체인 kankanoside A(1), B(2), C(3), D(4), 염소화 이리도이드인 kankanol(5) 및 비고리형 모노테르펜 배당체인 kankanoside E(6)가 분리되었습니다. Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)의 말린 줄기의 메탄올 추출물과 16개의 알려진 화합물에서 추출. 이 새로운 화합물(1-6)의 구조는 화학적 및 물리화학적 증거를 기반으로 결정되었습니다.

핵심어:시스탄체 튜불로사; 칸카노사이드; 칸칸올; 이리도이드; 모노테르펜; 오로반치과

시스탄체 튜불로사(SCHRENK) R. WIGHT (오로반치과)Salvadora 또는 Calotropis 종의 뿌리에서 자라는 다년생 기생 식물로 북아프리카, 아라비아 및 아시아 국가에 분포합니다.1) 이 식물의 줄기(일본어 Kanka-nikujuyou)는 전통적으로 발기 부전, 불임 치료에 사용되었습니다. , 요통 및 신체 약화.2) 이전에는 여러 가지 이리도이드, 모노테르페노이드, 페닐에타노이드 및 리그난이 중국 및 파키스탄 C. tubulosa에서 분리되었습니다. 1,3-7) 중국 천연 의약품의 생리 활성 성분에 대한 일련의 연구 과정에서,8-18) 4가지 새로운 이리도이드 배당체, kankanosides A(1), B(2), C(3), D(4 ), 염소화 이리도이드인 kankanol(5) 및 비고리형 모노테르펜 배당체인 kankanoside E(6)는 12개의 모노테르펜(7-18)을 포함한 16개의 알려진 화합물과 함께 이 약초의 메탄올 추출물에서 분리되었습니다. 이 논문은 새로운 모노테르펜 성분의 분리 및 구조 설명을 다룬다(1-6).

시스탄체 튜불로사

말린 줄기에서 추출한 메탄올 추출물시스탄체 튜불로사(이 약초에서 26.8%)를 순상 및 역상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 및 반복 HPLC에 적용하여 칸카노시드 A(1, 0를 제공했습니다.0{{1{13}} }}54퍼센트 ), B(2, 0.{19}}30퍼센트 ), C(3, 0.00 27% ) 및 D(4, {{4{44}}}}.0015% ), 칸칸올(5, 0.0{ {66}}34%) 및 칸카노사이드 E(6, 0.{85}}27%)와 무사에노사이드산19)(7, 0.020%) , geniposidic acid19)(8, 0.030%), 8-epiloganic acid7)(9, 0.033%), gluroside19)(10, 0.14%), antirrhide20)(11, 0.0079%ol,19), ajug 퍼센트 ), 바르시오사이드19)(13, 0.21%), 6-데옥시카탈폴19)(14, 0.11%), 아르글리올21)(15, 0.0030%), 시스타닌22,23)(16, 0.0040%)시스타클로린 17, 0.0035%), (2E,6Z){70}}bD-글루코피라노실옥시-2,6-디메틸{75}},{76}}옥타디엔산24) (18, 0.0028% ), D 만니톨25) (4.19p ercent), 우리딘25)(0.0069%), (3R)-3-하이드록시{89}} 피롤리디논26,27)(0.0020%) 및 (3R)-3-하이드록시{96}}메틸{ {97}}피롤리디논27)(0.0059%).

칸카노사이드 A(1)의 구조 칸카노사이드 A(1)는 무정형 분말로 얻어졌으며 음의 선광도([a]D 25 10MeOH에서 7.4도)를 나타냈다. 1의 IR 스펙트럼은 배당체 부분을 암시하는 341{210}} 및 1076 cm 1에서의 강한 흡수 밴드 외에 올레핀 기능에 할당할 수 있는 1647 cm 1에서 흡수 밴드를 보여주었습니다. 1의 양이온 및 음이온 고속 원자 충격(FAB)-MS에서 준분자 이온 피크가 m/z 369(M Na) 및 345(MH)에서 관찰되었으며, 고해상도 FAB-MS 분석에서 분자 1의 공식은 C16H26O8입니다. 1.0 M 염산(HCl)을 사용한 1의 산 가수분해는 D-글루코스를 유리시켰으며, 이는 광학 회전 검출기를 사용한 HPLC 분석에 의해 확인되었습니다.8,10-12,15-18) 1 H-(CD3OD, 표 1) 및 다양한 NMR 실험28)에 의해 할당된 1의 13C-NMR(표 2) 스펙트럼은 2개의 메틸에 할당 가능한 신호를 보여주었다[d 1.31(s, 10-H3), 1.51(br s, {{47} }H3)], 2개의 메틸렌[d 1.49, 2.02(m, 6a- 및 6b-H 모두), 1.64, 1.67(m, 7b- 및 7a-H 모두)], 2개의 메틴[d 2.21(dd, J 2.7) , 9.5Hz, 9-H), 2.71(m, 5-H)] 및 a,b-불포화 아세탈 그룹[d 5.33(d, J 2.7Hz, 1-H) ), 5.95(br s, 3-H)] b-글루코피라노실 부분[d 4.62(d, J 7.9Hz, 1-H)]과 함께. 도 1에 도시된 바와 같이, 1에 대한 1 H-1H 상관 분광법(1 H-1 H COSY) 실험은 굵은 선으로 작성된 부분 구조의 존재를 나타내었다. 1에 대한 이핵 다중 결합 상관 관계(HMBC) 실험에서 다음과 같은 양성자와 탄소({100}H, 1 -H 및 1-C; 11- H3 및 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 및 4- C ; 11-H3 및 5-C, 10-H3 및 7-C, 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 및 8-C, 10-H3 및 9-C, 7-H2 및 10-C) 그림 1과 같이 1의 b-글루코시다아제를 사용한 효소적 가수분해는 그림 3과 같이 aglycon인 kankagenin a(1a)를 생성했습니다. 1에 대한 13C NMR 스펙트럼과 1a에 대한 스펙트럼을 비교하면 1의 1- 위치 주변의 글리코실화 이동이 나타났습니다. [1: dC 94.1({147}}C), 134.6({150}} C), 53.3({153}} C); 1a: dC 92.9({157}}C), 135.3({160}} C), 54.7({163}}C)]. 따라서 1에 있는 bD-글루코피라노실 부분의 연결도 1a의 1-위치에 있는 것으로 밝혀졌습니다. 다음으로, 1의 상대 입체 구조는 핵 오버하우저 향상 분광법(NOESY) 실험에 의해 특성화되었으며, 이는 다음 양성자 쌍({170}H 및 10-H3, 3-H 및 11-H3, 5-H 및 6b-H, 9-H, 6b-H 및 7b-H, 7a-H 및 10-H3, 7b-H 및 {{ 190}}H) 그림 2에서와 같이. 마지막으로 1에서 1-위치의 절대 배열은 13C NMR 글리코실화 이동 규칙(1,1-disaccharide,29)을 적용하여 결정되었습니다. 헤미아세탈 화합물에 적용할 수 있습니다.30,31) NOESY 실험을 포함한 1 H-NMR 분석을 비교하여 1의 1-위치의 입체 구조가 1a에서 유지되는 것으로 확인되었습니다. 글리코실화 이동 값[Dd 1.2ppm(1-C) 및 0.9ppm({212}} C), in pyridine-d5]은 1의 절대 입체 구조에 해당하는 R, 레미아세탈 조합의 특징인 것으로 밝혀졌습니다. 결과적으로 1의 1- 위치에서의 절대 구성은 S 구성으로 결정되었고 1의 절대 입체 구조는 그림과 같이 해명되었습니다.

Kankanoside B(2) 및 C(3)의 구조 Kankanoside B(2)도 음의 광학 회전(MeOH에서 [a]D 26 118.7도)을 갖는 무정형 분말로 분리되었습니다. 2의 IR 스펙트럼은 3410, 1647 및 1{{5{{8{90}}}}}}85 cm 1 에서 하이드록실, 올레핀 및 에테르 기능에 기인한 흡수 밴드를 나타냅니다. 2의 분자식 C15H24O10은 양이온 FAB-MS의 준분자 이온 피크와 고해상도 FAB-MS에 의해 결정되었습니다. 1.0 M HCl 유리된 D-글루코스를 사용한 2의 산 가수분해, 이는 광학 회전 검출기를 사용한 HPLC 분석에 의해 확인되었습니다.8,10-12,15-18) 1 H-(CD3OD, 표 1) 및 13C-NMR( 표 2) 2개의 스펙트럼28)은 2개의 메틸렌[d 1.40(DDD, J 5.2, 7.3, 13.5Hz, 6a-H), 2.52(DDD, J 7.0, 9.2, 13.5Hz, 6b-H), 3 , 3.99(둘 다 d, J 11.9Hz, 10-H2)], 네 메틴[d 2.21(dd, J 6.4, 8.6Hz, 9-H), 2.83(m, 5- H), 4.02(dd, J 5.2, 7.0Hz, 7-H), 5.49(d, J 6.4Hz, 1-H)] 및 시솔레핀 쌍[d 4.95(dd, J 4.0) , 6.1Hz, 4-H), 6.22(dd, J 1.8, 6.1Hz, 3-H)], b-글루코피라노실 부분과 함께 [d 4.72(d, J 7.9Hz, 1 - 시간)]. 2의 1 H- 및 13C-NMR 데이터에서 proton 및 탄소 신호는 6- 및 8- 위치. 도 1에 도시된 바와 같이, 2에 대한 1 H-1 H COZY 실험은 굵은 선으로 쓰여진 부분 구조의 존재를 나타내었고, HMBC 실험에서 다음의 양성자와 탄소 쌍 사이에 장거리 상관관계가 관찰되었다({{ 122}}H, 1 -H 및 1-C, 1-H 및 3-C, 10-H2 및 7- C, 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 및 8-C; 7-H, 10-H2 및 9-C ; 7-H 및 10-C). 2의 상대적 입체구조는 NOESY 실험에 의해 특징지어졌으며, 이는 다음 양성자 쌍(1-H 및 10-H2; 3- H 및 4-H; 5-H 및 6b-H, 9-H, 6b-H 및 7-H, 7-H 및 9-H) 그림 2와 같습니다. 마지막으로, 5% 수성 수산화칼륨(KOH)으로 14를 알칼리 처리하여 2 및 19, 32)를 생성하여 2의 입체 구조가 명확해졌습니다.

Kankanoside C(3)는 음의 광학 회전(MeOH에서 [a]D 26 34.{3}}도)을 갖는 무정형 분말로 분리되었습니다. 음이온 FAB-MS 3에서는 m/z 399와 4{17}}1(MH)에서 한 쌍의 동위원소 준분자 이온 피크가 관찰되었습니다. 3의 분자식은 고해상도 FAB-MS 측정에 의해 C15H25ClO1{87}}인 것으로 확인되었다. 1.0 M HCl 유리 D-글루코스를 사용한 3의 산 가수분해는 광학 회전 검출기를 사용한 HPLC 분석에 의해 확인되었습니다.8,10-12,15-18) 1 H-(CD3OD, 표 1) 및 13C-NMR( 표 2) 3의 스펙트럼28)은 3개의 메틸렌[d 1.70(br dd, J ca. 3, 13Hz, 4a-H), 2.70(br dd, J ca. 6, 13Hz, 4b-H)에 할당할 수 있는 신호를 보여줍니다. , 1.68(br d, J 약 13Hz, 6a H), 2.44(m, 6b-H), 4.01, 4.04(둘 다 d, J 11.3Hz, 10-H2)], 5개의 메틴[d 2.47 (dd, J 2.5, 7.9Hz, 9-H), 2.61(m, 5- H), 3.94(br s, 7-H), 5.10(br d, J ca. 3Hz, 3-H), 5.48(d, J 2.5Hz, 1-H)] 및 b-글루코피라노실 부분[d 4.60(d, J 8.0Hz, 1-H)]. 3의 1 H- 및 13C-NMR 스펙트럼에서 proton 및 탄소 신호는 3- 및 4- 위치로 인한 신호를 제외하고 2의 것과 중첩 가능했습니다. 3에서 bD-glucopyranosyl의 위치와 염소 기능은 그림 1과 같이 H-H COZY와 HMBC 실험을 통해 밝혀졌다. 결과적으로 3의 평면 구조는 그림과 같이 구성되었다. 3의 상대적 입체구조는 NOESY 실험에 의해 결정되었으며, 여기에서 NOE 상관관계는 다음 양성자 쌍({104}H 및 3-H, 10-H2; 3- H 및 4a-H, 4b-H 및 5- H, 5-H 및 6b-H, 9-H, 6b-H 및 7-H, {{121} }H 및 9-H) 그림 2와 같습니다.

Kankanoside D(4) 및 Kankanol(5)의 구조 Kankanoside D(4)는 음의 광학 회전(MeOH에서 [a]D 25 30.6도)을 갖는 무정형 분말로 분리되었습니다. 4의 IR 스펙트럼은 올레핀 기능에 기인하는 1655cm 1 에서 흡수 밴드를 보여주었고 글리코시드 구조를 암시하는 341{92}} 및 1078cm 1 에서 강한 흡수 밴드를 보여주었습니다. 4의 양이온 FAB-MS에서는 m/z 341(M Na)에서 준분자 이온 피크가 관찰되었다. 4의 분자식 C15H26O7은 고해상도 FAB-MS 측정에 의해 결정되었습니다. 1.0 M HCl을 사용한 4의 산 가수분해는 D-글루코스,8,10-12,15-18)을 방출한 반면, (R)-회전도(4a) 33,34)는 b-글루코시다아제를 사용한 4의 효소적 가수분해에 의해 얻어졌다. 4의 1 H-NMR(표 3, CD3OD) 및 13C-NMR(표 4) 스펙트럼28)은 메틸[d 1.69(s, 10-H3)], 3개의 메틸렌[d 1.41, 2.06(m, 4-H2 모두), 1.51, 2.01(m, 6a- 및 6b-H 모두), 2.23(br dd, J 약 8, 15Hz, 7a-H), 2.37(br dd , J 약 8, 15Hz, 7b-H)], 메틴 [d 2.90(m, 5-H)], 산소 기능을 갖는 2개의 메틸렌{d [3.56(DDD, J 2.8, 7.4) , 13.2Hz), 3.97(DDD, J 4.9, 8.0, 13.2Hz), 3-H2], 4.04, 4.18(둘 다 d, J 12.2Hz, 1-H2)} b- 글루코피라노실 부분 [d 4.25(d, J 7.7Hz, 1-H)]. 4에서 bD-글루코피라노실 부분의 위치는 HMBC 실험에 의해 3-위치로 밝혀졌습니다(그림 1). 이러한 증거에 기초하여 4의 절대입체구조는 다음과 같이 결정되었다.

Kankanol(5)은 양의 선광도([a]D 25 11.1도)를 갖는 무정형 분말로서 수득되었다. 5의 화학 이온화(CI)-MS는 준분자 이온(MH)으로 인해 m/z 221 및 223에서 한 쌍의 동위원소 이온 피크를 보여주었습니다. 5의 고해상도 CI-MS 측정에서 분자식은 C9H13ClO4인 것으로 나타났습니다. 5의 1 H-NMR(표 1, CD3OD) 및 13C-NMR(표 2) 스펙트럼28)은 3개의 메틸렌[d 1.60(DDD, J 2.5, 5.5, 13.1) Hz, 4a-H), 1.80(br dd, J 약 3, 13Hz, 4b H), 1.83(br d, J 약 12Hz, 6a-H), 2.57(m, 6b-H), 3.75 , 3.88(둘 다 d, J 9.2Hz, 10-H2)], 5개 메틴[d 2.76(dd, J 4.3, 8.0Hz, 9-H), 2.50(m, 5- H), 3.80(brs, 7-H), 5.17(brd, J 약 3Hz, 3-H), 5.26(d, J 4.3Hz, 1-H) ]. 5의 평면 구조는 1 H-1 H COZY 및 HMBC 실험에 의해 확인되었습니다. 즉, 5에 대한 1 H-1 H COZY 실험은 굵은 선으로 표시된 부분구조의 존재를 나타내었고, HMBC 실험에서는 Fig. 1과 같이 장거리 상관관계가 관찰되었다. 5의 상대입체구조는 NOESY 실험에 의해 결정됨 93}} H, 5-H 및 6b-H, 9-H, 6b-H 및 {{100}H; 7-H 및 9-H) 표시된 대로 그림 2에서 5에 대한 1 H- 및 13C-NMR 데이터를 차트 1,35)에 표시된 대로 5% 수성 HCl로 14를 처리하여 얻은 14a에 대한 데이터와 비교하여 염소의 위치 5의 그룹이 3-위치로 지원되었습니다. 또한, 아세트산 무수물(Ac2O) 및 피리딘으로 5를 아세틸화하여 3,{119}}산화물(5a)을 생성한 반면, 14a는 동일한 아세틸화 조건에서 다이아세테이트(14b)를 생성했습니다. 이 증거는 또한 염소 기능의 위치가 3b 위치임을 확인하게 했습니다(차트 3). 결과적으로 5의 입체구조는 그림과 같이 결정되었다.

Kankanoside E(6)의 구조 Kankanoside E(6)는 음의 광학 회전(MeOH에서 [a]D 25 20.0도)을 갖는 무정형 분말로 분리되었습니다. 6의 IR 스펙트럼은 글리코시드 및 카르보닐 기능에 기인하는 3410, 1647, 1085 cm 1 에서 흡수 밴드를 보여주었으며, UV 스펙트럼은 211 nm(log e 4.63)에서 최대 흡수를 나타내어 b-불포화 카르복실산의 존재를 나타냅니다. 6의 분자식 C16H28O8은 양이온 및 음이온 FAB-MS와 고해상도 MS 측정에 의해 특징지어졌습니다. 6 유리된 D-포도당,8,10-12,15-18)의 산 가수분해 반면 (2E,6R){31}}히드록시{32}},{33}}디메틸{34}}옥탄산 (6a) 36)은 6을 b-글루코시다아제로 효소 가수분해하여 얻었다. 6의 1 H-NMR(표 3, CD3OD) 및 13C-NMR(표 4) 스펙트럼28)은 (2E,6R)-8-히드록시{51}},6- 디메틸{53}}옥탄산 부분[d 0.95(d, J 6.4Hz, 10-H3), 1.30, 1.48(both m, 5-H2), 1.45, 1.70(both m, { {70}}H2), 1.65(m, 6-H), 1.81(s, 9-H3), 2.22(2H, m, 4-H2), 3.61, 3.94(둘 다 m, 8-H2), 6.78(dd, J 1.2, 7.3 Hz, 3-H)] bD-글루코피라노실 부분과 함께 [d 4.26(d, J 7.6 Hz, 1-H)] . 6의 13C-NMR 스펙트럼의 탄소 신호와 6a의 탄소 신호를 비교하면 6의 8-위치 주변에서 글리코실화 이동이 관찰되었습니다. 글루코시드 결합의 위치는 하기 그림과 같이 HMBC 실험에서도 확인되었습니다. 그림 1. 결과적으로 6의 절대 입체 구조는 (2E,6R){115}b-D-글루코피라노실옥시{118}},{119}}디메틸{120}}옥탄산으로 밝혀졌습니다.

시스탄치 추출물의 이점

실험적

물리적 데이터를 얻기 위해 다음 기기가 사용되었습니다. 특정 회전, Horiba SEPA{0}} 디지털 편광계(l 5cm); UV 스펙트럼, Shimadzu UV{2}} 분광기; IR 스펙트럼, Shimadzu FTIR-8100 분광계; EI-MS, CI-MS 및 고분해능 CI-MS, JEOL JMS-GCMATE 질량분석기; FAB-MS 및 고해상도 MS, JEOL JMS-SX 102A 질량 분석기; 1 H-NMR 스펙트럼, JEOL EX{15}}(270MHz) 및 JNM-LA500(500MHz) 분광기; 내부 표준으로 테트라메틸실란을 사용하는 13C-NMR 스펙트럼, JEOL EX-270(68MHz) 및 JNM-LA500(125MHz) 분광기; 및 HPLC 검출기, Shimadzu RID-6굴절률 및 SPD- 10Avp UV-VIS 검출기. HPLC 컬럼, YMC-Pack ODS-A(250 4.6 mm id) 및 (250 20 mm id) 컬럼은 각각 분석 및 분취 목적으로 사용되었습니다.

크로마토그래피에 사용된 실험 조건은 다음과 같습니다. 순상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, 실리카겔 BW{1}}(Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 15{{1{14}}}}-35 0 메쉬); 역상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, Chromatorex ODS DM1020T(Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 100-200 메쉬); TLC, 실리카겔 60F254(Merck, 0.25mm)(일반상) 및 실리카겔 RP{12}} F254S(Merck, 0.25mm)(역상)가 있는 사전 코팅된 TLC 플레이트; 역상 HPTLC, 실리카 겔 RP{17}} WF254S(Merck, 0.25mm)가 있는 사전 코팅된 TLC 플레이트; 검출은 1% Ce(SO4)2-10% 수성 H2SO4를 분무한 후 가열하여 달성했습니다.

식물 재료

Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT의 말린 줄기는 2005년 1월 중국 신장성 우루무치에서 일본 오사카 Eishin Trading Co., Ltd.를 통해 구입했으며 식물 식별은 Xinjiang Institute of Chinese Institute의 Jia Xiaoguang 교수가 수행했습니다. 및 민족 의학. 이 식물의 바우처 표본(2005.01. Xinjiang-01)이 우리 연구실에 보관되어 있습니다.

추출 및 분리

C. tubulosa의 말린 줄기(5.{1}} kg)를 가루로 만들고 3시간 동안 환류 하에 메탄올로 3회 추출했습니다. 감압 하에서 용매를 증발시켜 메탄올 추출물(134{67}} g, 이 약초에서 26.8%)을 얻었다. 메탄올 추출물(16{71}} g)을 순상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 [3.2 kg, CHCl3-MeOH-H2O (10 : 3 : 1→7 : 3 : 1, 더 낮은 층 → 6 : 4 : 1)MeOH] 6개의 분획 [Fr. 1(5.{85}}4g), Fr. 2(9.84g), Fr. 3(7.8{91}} g), Fr. 4(13.28g), Fr. 5(113.6{{1{139}}4}} g) 및 Fr. 6(7.61g)]. 분획 1(5.{41}} g)을 역상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[15{148}} g, MeOH-H2O(40 6: 6{153}}→ 5{{ 162}} : 5{166}}→60 : 4{179}}, v/v)→MeOH] 5개의 분획 [Fr. {{50}} (83{{2{234}}1}} mg), Fr. 1-2 (59{238}} mg), Fr. 1-3 (18{242}} mg), Fr. 1-4(124mg) 및 Fr. 1-5 (3200 mg)]. 정말로. {{60}}(83{299}} mg)를 HPLC[MeOH-H2O(1{307}}: 90, v/v)]로 추가 분리하여 칸칸올(5, 20 mg, 0.0034%), 아르길(15, 18mg, 0.0030%), 시스타닌(16, 24mg, 0.0040%) 및 Fr. 1-1-2(62 mg), 이를 추가로 HPLC[MeOH-H2O(2:98, v/v)]로 분리하여 (3R)-3-하이드록시{84}}피롤리디논(0.0020% ) 및 (3R)-3-하이드록시{89}}메틸{90}}피롤리디논(0.0059%). 정말로. 1-2(590 mg)을 HPLC[MeOH-H2O(35:65, v/v) 및 CH3CN-H2O(20:80, v/v)]로 정제하여 시스탄클로린(17, 21 mg, 0.0035)을 얻었다. 퍼센트). 분획 2(9.72g)를 역상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[290g, MeOH-H2O(20:80→30:70→40:60→60:40, v/v)→MeOH]에서 af ford 일곱 분수 [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6(460mg) 및 Fr. 2-7 (336 mg)]. 정말로. 2-1(466 mg)을 HPLC[MeOH-H2O(5:95, v/v)]로 분리하여 우리딘(0.0069%)을 얻었다. 정말로. 2-2(535 mg)을 HPLC[MeOH-H2O(10:90, v/v)]로 분리하여 무지균(11, 15 mg, 0.0079%) 및 {{150}데옥시카탈폴(14, 214)을 얻었다. mg, 0.11%). 정말로. 2-3(535mg)을 HPLC[MeOH-H2O(20:80, v/v)]로 분리하여 글루로사이드(10, 110mg, 0.14%) 및 바르티오사이드(13, 164mg, 0.21%)를 제공했습니다. . 정말로. 2-4(375 mg)을 HPLC[MeOH-H2O(30:70, v/v)]로 분리하여 칸카노사이드 A(1, 32 mg, 0.0054%) 및 D(4, 9 mg, 0.0015%)를 얻었다. ). 정말로. 2-6(460 mg)을 HPLC[MeOH-H2O(45:55, v/v)]로 추가 분리하여 칸카노사이드 E(6, 161 mg, 0.027%) 및 (2E,6Z){192 }}bD-글루코피라노실옥시{195}},{196}}디메틸{197}},{198}}옥타디엔산(18, 17 mg, 0.0028%). 분획 3(7.60g)을 역상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[230g, MeOH-H2O(20:80→40:60→50:50→60:40, v/v)→MeOH]로 처리하여 다섯 분수 [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4(190mg) 및 Fr. 3-5 (336 mg)]. 정말로. 3-1(480 mg)을 HPLC[MeOH-H2O(10:90, v/v)]로 정제하여 칸카노사이드 B(2, 19 mg, 0.018%), 제니포시드산(8, 32 mg, 0.030)을 얻었다. 퍼센트 ) 및 아쥬골 (12, 12 mg, 0.011 퍼센트). 분획 4(13.10g)를 역상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[390g, MeOH-H2O(10:90→20:80→30:70→40:60→50:50, v/v)→ MeOH] 7개의 분획 [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6(1635 mg) 및 Fr. 4-7 (1064 mg)]. 정말로. 4-2(430mg)을 HPLC[MeOH-H2O(5:95, v/v)]로 추가 분리하여 2(70mg, 0.012%) 및 칸카노사이드 C(3, 16mg, 0.0027%)를 얻었다. . 정말로. 4-6(1058 mg)은 또한 HPLC[MeOH-H2O(15:85, v/v)]로 분리하여 무사에노사이드산(7, 116 mg, 0.020%) 및 8-에필로간산을 제공했습니다. (9, 193mg, 0.033%). 분획 5(15.15g)는 역상 실리카겔 컬럼 크로마토그래피[455g, MeOH-H2O(0:100→10:90→20:80→40:60→50:50, v/v)→MeOH ] 일곱 분수 [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6(1453 mg) 및 Fr. 5-7 (1106 mg)]. 정말로. 5-1(9311 mg)을 MeOH로부터 결정화하여 D-만니톨(3337 mg, 4.19%)을 얻었다.

알려진 화합물(7-18)은 물리적 데이터([a]D, IR, 1 H-NMR, 13C-NMR, MS)와 보고된 값1,7,19-24,26,27)을 비교하여 확인했습니다. 25) Kankanoside A(1): 무정형 분말, [a]D 25 107.4도(c 1.50, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C16H26O8Na(M Na)에 대한 계산치 369.1525; 369.1522를 찾았습니다. IR(KBr): 3410, 2940, 1647, 1076cm 1 . 1 H-NMR(500 MHz, CD3OD 및 피리딘-d5) d: 표 1에 제공. 13C-NMR(125 MHz, CD3OD 및 피리딘-d5) d C: 표 2에 제공. 양이온 FAB-MS: m /z 369 (M 나) . 음이온 FAB-MS: m/z 345(MH) .

칸카노사이드 B(2): 무정형 분말, [a]D 26 118.7도(c 0.10, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C15H24O10Na(M Na)에 대한 계산치 387.1267; 387.1261을 찾았습니다. IR(KBr): 3410, 2940, 1647, 1085cm 1 . 1 H-NMR(500 MHz, CD3OD) d: 표 1에 제공. 13C-NMR(125 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 제공. 양이온 FAB-MS: m/z 387(M Na). 음이온 FAB-MS: m/z 363(MH) .

칸카노사이드 C(3): 무정형 분말, [a]D 26 34.{3}}도(c 1.00, MeOH). 고해상도 음이온 FAB-MS: C15H24ClO10에 대한 계산(MH) 399.1058; 399.1077을 찾았습니다. IR(KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: 표 1에 기재. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 기재. 음이온 FAB-MS: m/z 399, 401 (MH) .

Kankanoside D(4): 무정형 분말, [a]D 25 30.6도(c 0.50, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C15H26O7Na(M Na)에 대한 계산 341.1204; 341.1210을 찾았습니다. IR(KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040cm 1 . 1 H-NMR(500 MHz, CD3OD) d: 표 3에 제공. 13C-NMR(125 MHz, CD3OD) d C: 표 4에 제공. 양이온 FAB-MS: m/z 341(M Na). 음이온 FAB-MS: m/z 317(MH) .

Kankanol(5): 무정형 분말, [a]D 25 11.1도(c 1.40, MeOH). 고해상도 CI-MS: C9H14ClO4(MH)에 대한 계산치 221.0580; 221.0582를 찾았습니다. IR(KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: 표 1에 기재. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 기재. ), 223(MH)(2), 185(88), 167(100), 149(71) 및 57(49).

Kankanoside E(6): 무정형 분말, [a]D 25 20.0도(c 2.00, MeOH). 고해상도 양이온 FAB-MS: C16H28O8Na(M Na)에 대한 계산치 371.1682; 371.1690을 찾았습니다. UV[MeOH, nm(log e)]: 215(4.16). IR(KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043cm 1 . 1 H-NMR(500 MHz, CD3OD) d: 표 3에 제공. 13C-NMR(125 MHz, CD3OD) d C: 표 4에 제공. 양이온 FAB-MS: m/z 371(M Na). 음이온 FAB-MS: m/z 347(MH).

시스탄치 추출물의 이점

1M HCl을 사용한 1-4 및 6의 산 가수분해

1 M HCl(0.5 ml) 중 1-4 또는 6(각각 1.5 mg)의 용액을 환류하에 3시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 반응 혼합물을 얼음물에 붓고 Amberlite IRA{9}}(OH 형태)로 중화하고, 수지를 여과에 의해 제거하였다. 그 다음, 여액을 EtOAc로 추출하였다. 수성 층을 하기 조건에서 HPLC 분석하였다: HPLC 컬럼, Ka sensor LC NH{{1{19}}}}, 4.6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan); 검출, 광학 회전 [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Japan)]; 이동상, CH3CN–H2O(75: 25, v/v); 동료 속도 0.8 ml/분; 컬럼 온도, 실온. 수성층에 존재하는 D-glucose의 머무름 시간 및 선광도를 정품 시료와 비교하여 확인: tR 12.3 min(positive optical rotation)

b-글루코시다아제를 사용한 1, 4 및 6의 효소 가수분해

H2O(1.5 ml) 중 1(7.7 mg)의 용액을 b-글루코시다제(5.0 mg, 아몬드, 오리엔탈 이스트 컴퍼니, 일본 도쿄)로 처리하고 용액을 37도에서 교반하였다. 3일 동안. 반응 혼합물에 EtOH를 첨가한 후, 용매를 감압하에 제거하고 잔류물을 HPLC[MeOH-H2O(55:45, v/v)]로 정제하여 칸카게닌 a(1a, 2.3 mg, 56%)를 얻었다. . 유사한 절차를 통해 (R)-rotundiol33,34)(4a, 1.2 mg, 69%) 및 (2E,6R)-8-하이드록시-2,6-디메틸{30} }옥탄산36)(6a, 6.8mg, 62%)은 각각 4(3.5mg)와 6(20.4mg)에서 얻었다.

칸카게닌 a(1a): 백색 분말, [a]D 25 18.4도(c{4}}.20, MeOH). 고해상도 EI-MS: C10H16O3에 대한 계산(M) 184.1099; 184.1106을 찾았습니다. IR(KBr): 3410, 2940, 1684cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: 표 1에 제공. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 제공 , 95(100).

5% 수성 KOH로 14의 알칼리 처리

5% 수성 KOH(1.{5}} ml) 중 14(23.0 mg)의 용액을 8{15}}도에서 2시간 동안 교반했습니다. 반응 혼합물을 Amberlite HCR-W2(H 형태)로 중화시켰다. 감압하에서 여액으로부터 용매를 제거하여 잔류물을 얻었고, 이를 HPLC[MeOH-H2O(5:95, v/v)]로 정제하여 2(4.0mg, 16%) 및 1932)(10.5mg)를 얻었다. , 43%).

5% 수성 HCl을 사용한 14의 산 처리

5% 수성 HCl(2.{5}} ml) 중 14(25.0 mg)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물에 붓고 전체 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. EtOAc 추출물을 포화 수성 NaHCO3 및 염수로 연속적으로 세척한 다음, 무수 MgSO4 분말로 건조시키고 여과하였다. 감압하에서 여액으로부터 용매를 제거하여 잔류물을 얻었고, 이를 HPLC[MeOH-H2O(2{14}}: 80, v/v)]로 분리하여 14a(4.0 mg, 25%)를 얻었다.

14a

백색 분말, [a]D 20 21.5도(c 0.30, MeOH). 고해상도 CI-MS: C9H14ClO4(MH)에 대한 계산치 221.0580; 221.0587을 찾았습니다. IR(KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: 표 1에 기재. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 기재. 7), 223(MH)(3), 203(M H2O)(97), 205(M H2O)(33), 185(7), 167(12), 159(32), 121(27), 110 (48), 95(64), 85(100), 67(56), 57(65).

5 및 14a의 아세틸화

피리딘(0.5 ml) 중 5(2.5 mg)의 용액을 아세트산 무수물(Ac2O, 0.4 ml)로 처리하고 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물에 붓고 전체 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. EtOAc 추출물을 5% 수성 HCl, 포화 수성 NaHCO3, 및 염수로 연속적으로 세척한 다음, 무수 MgSO4 분말로 건조시키고 여과하였다. 감압하에서 여액으로부터 용매를 제거하여 잔류물을 얻었고, 이를 HPLC[MeOH-H2O(35:65, v/v)]로 정제하여 5a(2.3mg, 77%)를 얻었다. 유사한 절차를 통해 14b(2.7mg, 87%)도 14a(2.1mg)로부터 HPLC[MeOH-H2O(55:45, v/v)]로 제조 및 정제하였다.

5a

백색 분말, [a]D 20 1.8도(c 0.18, MeOH). 고해상도 CI MS: C11H15O5에 대한 계산(MH) 227.0919; 227.0925를 찾았습니다. IR(KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: 표 1에 기재. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 기재. ), 209(M H2O)(4), 184(3), 166(45), 149(22), 138(38), 122(44), 94(31), 85(100) 및 57(34) ).

14b

백색 분말, [a]D 20 23.7도(c 0.06, MeOH). 고해상도 CI-MS: C13H18ClO6에 대한 계산(MH) 305.0792; 305.0790을 찾았습니다. IR(KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941cm 1 . 1 H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: 표 1에 기재. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) d C: 표 2에 기재. CI-MS: m/z (%): 305 (MH) ( 2), 307(MH)(1), 263(MH C2H3O)(6), 265(MH C2H3O)(3), 245(30), 203(8), 185(100), 167(7), 149 (33), 121(26), 95(15), 85(37), 57(93).

감사의 말

이 연구는 제21회 COE 프로그램, 아카데믹 프론티어 프로젝트 및 일본 문부과학성의 과학 연구 보조금의 지원을 받았습니다. 저자는 식물 재료의 식별을 위해 중국 우루무치에 있는 Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines의 Xiaoguang Jia 교수에게 감사합니다.

시스탄체 혜택

참조 및 참고 사항

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