Morin은 병아리의 이종성 세포외 트랩 방출, 산화 스트레스 및 염증 반응을 억제하여 아플라톡신 B{0}}유도 간 및 신장 손상을 완화합니다.

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요약Aflatoxin B1(AFB1)은 Aspergillus favus와 기생 aspergillus에 의해 생성되는 2차 대사산물로 주로 곡물, 땅콩, 옥수수 및 기타 작물에 존재하며 가금류, 인간의 건강 및 환경을 심각하게 위협합니다. 뽕나무과 식물에서 추출한 플라보노이드 화합물인 모린은 항산화, 항균,항염증효과. 그러나 morin이 AFB{0}}유도에 보호 효과가 있는지 여부간그리고신장 손상병아리에서 구체적으로 보고되지 않았습니다. 이 연구에서 우리는 주로 병아리의 AFB{0}유도된 간 및 신장 손상에 대한 morin의 보호 효과를 확인하고 그 메커니즘을 설명했습니다. 모린은 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST) 및 크레아티닌(CRE) 및 요소 질소(BUN) 수준의 신장 지표의 간 생화학적 지표를 상당히 감소시킬 수 있음이 밝혀졌습니다. 한편, 조직병리학적 검사에서 morin은 AFB{1}}를 유발하는 간세포 파괴, 부종, 염증 세포 침윤을 비롯한 간 손상을 효과적으로 완화하고 신장 세포 괴사, 박리, 공포화를 포함한 신장 손상을 효과적으로 완화하는 것으로 나타났습니다. 그 기전에 대한 추가 조사는 morin이 AFB1-유도된 heterophil extracellular traps(HETs) 방출을 유의하게 억제하고 malondialdehyde(MDA) 수준을 감소시켰지만 superoxide dismutase(SOD), glutathione peroxidase(GSH- Px) 및 생체내 카탈라제(CAT). 또한 정량적 실시간 PCR(qRT-PCR) 분석에서 morin이 종양 괴사 인자-(TNF-), 인터루킨-6(I{{10} }) 및 인터루킨{11}}(IL{12}}), 유도성 산화질소 합성효소(iNOS), 사이클로옥시게나제{13}}(COX{14}}), 카스파제{15}}, 카스파제{ {16}} 및 caspase{17}}. 결론적으로 모든 결과는 morin이 HET 방출을 억제하고 산화 스트레스를 조절하며 염증 반응을 억제함으로써 간 및 신장 손상을 유발하는 AFB를 보호할 수 있음을 확인했습니다. morin은 가금류 사육 산업에서 아플라톡신증의 예방 및 치료를 위한 잠재적 약물로 활용될 수 있습니다.

키워드:모린,아플라톡신B1,헤테로필 세포외 트랩,염증반응,산화스트레스

소개

아플라톡신은 독성, 변이원성, 발암성이 강한 Aspergillus flavus, Parasitic aspergillus, specific aspergillus와 같은 진균류가 생산하는 고독성 저분자 2차 대사산물의 일종으로, 그 중 aflatoxin B1(AFB1)이 가장 독성이 강하다. (Rawal et al, 2010). AFB1 오염은 사료 안전, 동물 생산 및 식품 안전과 관련이 있으며 심지어 인간의 건강을 위협합니다. 따라서 사료 내 AFB1의 오염과 동물 및 축산물의 잔류 문제를 해결하는 것이 중요하다. 임신 중 아플라톡신에 노출되면 태아의 건강에 위협이 되며, 이는 제대혈과 모유를 통해 산모에서 태아로 전염될 수 있습니다(Denning et al., 1990). 신생아의 6-포스포글루코스 탈수소효소 결핍증이 있는 황달 혈청의 AFB1 수치가 보고되었으며 신생아의 58%와 산모의 75%가 양성 반응을 보였다(Raafat et al, 2021). 가장 중요한 간세포 발암물질인 AFB1은 세계에서 간세포암종(HCC)의 주요 원인이며 연구에 따르면 AFB1과 B형 간염 바이러스(HBV)가 함께 작용하여 간세포암종의 발병률을 더욱 높이는 것으로 나타났습니다(Rushing and Selim, 2019 ).AFB{14}}유도산화 스트레스독성이 발휘되는 중요한 방법 중 하나입니다(Abdel-Wahhab and Aly, 2003). 그러나 아플라톡신증의 근본적인 메커니즘과 예방 및 치료를 위한 보다 효율적인 약물은 여전히 ​​조사되어야 합니다.

모린(화학 구조는 그림 1 참조)은 뽕나무과 식물에서 추출한 천연 색소의 일종으로 플라보노이드에 속하며 항염(Wei et al)을 포함한 생물학적 특성을 가지고 있으며(Li et al, 2020), 및 항산화제 2015), 항균제(Wei et al, 2015), 항동맥경화증(Zhou et al, 2017), 저혈당 및 항스트레스 작용이 있으며 관상 동맥 심장 질환, 당뇨병 및 암의 임상 치료에 널리 사용되었습니다. morin은 세균의 DNA 합성을 방해하고 adenosine triphosphate(ATPase)의 활성을 억제하여 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 바실러스(Bacillus), 미크로코커스 플라부스(Micrococcus flavus)에 항균 효과를 나타낼 수 있다고 보고되어 있다(Xu et al.2001). 일부 연구에서는 모린이 TLR4/NF-xB를 억제하고 Nrf2 및 HO 신호 전달 경로를 활성화하여 LPS로 유발된 급성간 손상마우스에서(Tian et al, 2017). Morin은 또한 Hippo/YAP 및 TGF{2}}/Smad 신호 전달을 조절하여 쥐의 디에틸 암모늄 니트레이트 유도 간 섬유증을 효과적으로 개선할 수 있습니다(Perumal et al,2017). 현재 비타민 A, Cand E(Alpsoy and Yalvac, 2011), eugenol과 같은 다양한 화합물이 저항할 수 있다고 보고되고 있다.산화 스트레스AFB1의 응답. 그러나 전통적인 항산화제로서 모린이 간과신장 손상아플라톡신증이 있는 병아리에서 보고된 바 없습니다.

호중구 세포외 트랩(NET)은 최근에 발견된 외부 병원체에 대한 신체의 첫 번째 방어선입니다. NET은 DNA를 골격으로 하고 시트룰린화 히스톤 3(citH3)과 엘라스타제에 의해 변형된 네트워크 구조입니다(Wei et al.,

2019b), 항균(Brinkmann et al., 2004), 항바이러스(Saitoh et al, 2012) 및 항기생충(Wei et al., 2016) 효과가 있습니다. Heterophil extracellular traps(HETs)은 HETs가 myeloperoxidase(MPO)의 발현을 가지지 않는다는 점을 제외하고 NETs와 유사한 기능을 가지고 있습니다(Chuammitri et al., 2009). N. canine은 시험관 내에서 개 NET의 방출을 유도하여 감염에 저항할 수 있음이 입증되었습니다(Wei et al, 2016). 또한 PI3K-ERK 신호 전달 경로의 활성화를 억제하여 잉어에서 NET의 방출을 억제함으로써 아바멕틴(AVM) 잉어의 호흡 폭발을 줄일 수 있다는 연구도 확인되었습니다(Zheng et al, 2020). abamectin과 유사하게 morin은 치료 효과가 NET의 방출과 관련이 있는지 여부에 관계없이 인정된 치료 약물입니다. 이를 위해서는 더 많은 연구가 필요합니다.

따라서 본 연구에서는 AFB{0}}유도 병아리의 간 및 신장 손상에 대한 morin의 기전을 조사하고 보호 효과를 조사했습니다. 이는 morin의 수의 임상 시행을 위한 실험적 기반을 제공하고, 진균독 중독의 예방 및 통제를 위한 실험 데이터 및 참고 자료를 제공할 것으로 기대됩니다.

재료 및 방법 시약 및 재료

AFB1(A6636, 순도 98% 이상, Sigma-Aldrich [Shang-hail Trading Co., Ltd., Shanghai, China). Morin(순도 98% 이상)은 Chengdu Pusi Biological Co., Ltd.(Chengdu, China)에서 구입했습니다. Pico Green dsDNA 분석 키트(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). AST, ALT, BUN 및 CRE 키트는 Nanjing Jiancheng (Nanjing, China)의 생물 공학 연구소에서 얻었습니다. GSH-Px SOD, CAT 및 MDA 키트는 Nanjing Jiancheng(Nanjing, China)의 생물 공학 연구소에서 입수했습니다. RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit는 Thermo.qPCR master mix는 Roche(Mannheim, Germany)에서 구입했습니다.

동물모델 확립

1일령 병아리 25마리를 불산 사육장(광동성 불산시)에서 구입하여 1일 동안 적응 급이하였다. 감염된 병아리 모델의 구축은 둘째 날부터 시작되었다. 시험 병아리를 대조군, AFB1군(5mg/kg), 모린 처리군(20mg/kg, 40mg/kg, 80mg/kg)의 5개 군으로 무작위 배정하였다. 모델링 첫날 처리 그룹은 예방을 위해 morin을 복강 내 주사하고 16 시간 후에 다시 주사했습니다. 24시간 후에 혈액을 채취하고 병아리를 죽이고 간과 신장 조직을 채취했습니다. 실험의 모든 수행은 포산대학교 동물연구윤리위원회 지침(FSUaeae2019112501)에 따라 수행되었습니다.

혈청 내 HET 검출

채혈한 혈액을 정지시키고 12,{1}} rpm에서 10분간 원심분리한 후 상부 혈청을 추출하고 TE 염료로 5-배 희석한 후 동일한 양의 Pico Green을 첨가하였다. 마지막으로 형광 마이크로플레이트 리더기로 실험 결과를 관찰하였다.

혈청 내 ALT 및 AST 검출

키트를 이용한 혈청 내 ALT 및 AST 수치 측정 및 실험 결과는 마이크로플레이트 리더기로 파장 510 nm에서 검출하였다.

혈청 내 BUN 및 CRE 검출

혈청 내 CRE 및 BUN 수준을 해당 키트로 검사하고 실험 결과는 마이크로플레이트 판독기로 510 nm의 파장에서 검출했습니다.

간 및 신장 조직의 조직병리학적 평가

수집된 간 및 신장 조직 샘플은 10% 포르말린에 고정되었습니다. 그런 다음 조직을 탈수하고 포매하고 헤마톡실린과 에오신으로 염색했습니다(Wet al, 2021). 마지막으로 리볼브의 하이브리드 현미경을 사용하여 병리학적 변화를 관찰했습니다.

Oxidase 활성 및 항산화 효소 활성 검출

Oxidase MDA 및 항산화 oxidase GSH-Px, SOD 및 CAT 수준을 해당 키트로 검사했습니다(Guo et al, 2021). 그 중 SOD와 CAT는 혈청으로, MDA와 GSH-Px는 간 조직으로 측정하였다. 또한 샘플의 단백질 농도를 정량적으로 분석하려면 TBD 시약을 사용해야 합니다(Cao et al., 2020).

정량적 Real-Time PCR 분석

QRT-PCR을 사용하여 의 mRNA 발현을 검출했습니다.염증성요인 TNF-a, IL-1, IL{2}}, 염증 매개체 COX-2, iNOS 및 caspase 신호 전달 경로 주요 요인 caspase-1,caspase{{6} } 및 카스파아제-11. CFX Connect Real-Time System 기기는 실시간 PCR 형광 정량에 사용되었습니다. 표적 유전자의 프라이머는 표 1에 있다. qRT-PCR 검출은 Roche 25 μL 시스템을 채택하고, 조건은 50도, 2분, 95도, 10분, 95도, 15초, 60도, 60도, 총 40주기. GAPDH를 내부 참조로 사용했으며 AACT를 사용하는{22}데이터 처리 방법이었습니다(Qianru et al., 2021).

통계 분석

모든 데이터는 Tukey 다중 비교 테스트와 함께 일원 분산 분석(ANOVA)을 사용하여 GraphPad Prism 5.{1}} 소프트웨어로 계산되었습니다. 그룹 간의 차이는 P 수준에서 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.<>

결과

병아리의 체중 및 간 계수의 변화

각 병아리의 체중을 기록하고 간 계수(간 계수 =간 중량/체중]×100)를 계산했습니다. 그 결과 AFB1군에 비해 모린 처리군(20mg/kg, 80mg/kg)의 체중 증가율이 유의하게 증가하는 것으로 나타났으며(그림 2A), 모린이 체중에 일정한 영향을 미치는 것을 확인하였다. 병아리. 그러나, 병아리의 각 그룹의 간 계수는 크게 변하지 않았습니다(그림 2B).

Morin은 혈청 내 ALT 및 AST 수치를 현저히 감소시킵니다.

ALT와 AST는 간 손상의 지표입니다. 데이터에 따르면 AFB1은 ALT 및 AST 수준을 크게 높이는 반면 morin은 AFB1과 완전히 반대되는 경향을 나타냈으며(그림 3A 및 B), 이는 예비적으로 morin이 병아리에서 AFB{3}}유도 간 손상에 유익한 영향을 미친다는 것을 시사합니다. .

Morin은 AFB{0}} 병아리의 간 손상을 크게 완화합니다.

간 손상을 유발한 AFB{0}}에 대한 morin의 효과를 추가로 확인하기 위해 조직병리학적 검사를 수행했습니다. 도 4에서 보는 바와 같이 AFB1 처리로 인한 간세포의 부종, 단편화, 염증성 세포 침윤이 간에서 나타났으나 모린(20,40, 80 mg/kg)은 간 조직 손상을 효과적으로 완화시켜 morin이 병아리의 AFB{7}}유도 간 손상에 대한 완화 효과.

Morin은 혈청 내 BUN 및 CRE 수치를 현저히 감소시킵니다.

BUN과 CRE는 신장 손상의 중요한 지표로, AFB1은 대조군에 비해 BUN과 CRE 수치를 유의하게 증가시킨 반면, morin은 AFB1과 비교하여 완전히 반대되는 경향을 나타냄을 발견했습니다(그림 5A 및 B). AFB{3}}에 대한 유익한 효과는 병아리에서 신장 손상을 일으켰습니다.

Morin, AFB를 크게 완화{0}} 병아리의 신장 손상 유발

AFB로 인한{0}신장 손상에 대한 morin의 효과를 추가로 확인하기 위해 조직병리학적 검사를 수행했습니다. AFB1 처리군의 신장은 신세포 괴사, 박리, 공포화를 보인 반면, 모린 처리군은 모린 농도(20,40,80 mg/kg) 증가에 따라 신장 조직 손상을 효과적으로 완화시켰다(그림 6). ), 추가로 morin이 AFB{6}}로 인해 병아리의 신장 손상을 완화하는 효과가 있음을 확인했습니다.

모린혈청 내 AFB{0}}유도 HET의 수준을 현저히 감소

AFB{0}}유도 조직 손상에 대한 morin 보호의 기본 메커니즘을 조사하기 위해 Pico Green에서 혈청에서 방출된 HET를 검출했습니다. 혈액 샘플을 수집하여 HET 수준을 감지했습니다.혈청. 실험 결과 AFB1은 혈청 내 HET 생성을 현저하게 유도한 반면, morin은 AFB1 그룹과 비교하여 HET 생성을 유의하게 억제함을 나타냈다(Figure 7). 따라서 우리는 먼저 morin이 HET의 방출을 억제하여 간 및 신장 손상을 유발하는 AFB{3}}를 완화한다는 것을 확인했습니다.

Morin, AFB{0}} 병아리의 산화 스트레스를 크게 완화

산화 스트레스는 AFB1의 독성 효과에 중요한 기전이라고 보고되었으며, AFB에 대한 morin의 기능은{1}}산화 스트레스로 인한 것으로 감지되었습니다. 결과는 AFB1이oxidase MDA는 항산화 효소 GSH-Px, SOD 및 CAT의 수준을 현저히 감소시킵니다. 그러나 AFB1과 비교하여 morin은 oxidase와 항산화 효소 간의 불균형을 효과적으로 완화했습니다(그림 8).

AFB{0}}유도 조직 손상에 대한 morin 보호의 기본 메커니즘을 조사하기 위해 Pico Green에서 혈청에서 방출된 HET를 검출했습니다. 혈액 샘플을 수집하여 HET 수준을 감지했습니다.

Morin은 간에서 AFB{0}유도 염증 매개체 및 염증 인자의 mRNA 수준을 유의하게 억제했습니다.

그만큼염증성반응은 AFB1의 독성 효과에서 중요한 메커니즘입니다. AFB{1}} 유발 염증 반응에 대한 morin의 효과를 조사했습니다. qRT-PCR 분석을 이용하여 염증 매개체 COX{3}} 및 iNOS 및 염증 인자 TNF-의 발현을 검출하였다. 일{5}} . 일{6}}. 실험 결과는 AFB1이 이들 사이토카인의 발현 수준을 현저하게 개선한 반면, 모린은 이들 사이토카인의 발현을 현저하게 억제함을 나타내었다(그림 9).

Morin은 AFB를 유의하게 억제{0}}Caspase-1, Caspase-3 및 Caspase-11의 mRNA 발현을 유도했습니다.

카스파제 신호전달 경로는 또한 산화 스트레스 및 염증 반응의 과정에 관여하는 것으로 보고되었습니다. ROS는 미토콘드리아 막 손상을 유도하여 시토크롬 c 유출을 유도하고 카스파제 신호 전달 경로를 활성화할 수 있습니다. 따라서 우리는 caspase 신호 전달 경로의 핵심 인자의 mRNA 발현을 감지했습니다. 그 결과 AFB1은 caspase-1, caspase-3 및 caspase-11의 mRNA 발현을 현저하게 증가시킨 반면, morin은 이들 인자의 발현을 현저하게 감소시키는 것으로 확인되었습니다(그림 10).

논의

AFB1은 아스페르길루스증의 주요 원인인 가장 독성이 강한 진균독입니다. 간독성, 신경독성 및 발암성을 포함하여 AFB1의 독성에 대한 많은 연구가 있었습니다. 간은 동물의 주요 해독 기관이자 물질 대사 변형의 주요 부위로서 AFB1 손상에 극도로 취약하며, 이는 주로 사이토크롬 P450(CYP450) 효소계, 미토콘드리아, 면역계 및 자유 라디칼의 4가지 기전에 의해 매개됩니다. . AFB1은 체내에 들어간 후 소화관의 십이지장에서 흡수되어 문맥을 통해 간으로 들어가고 간세포의 1단계 대사 효소 CYP450 효소계에서 CYP1A2와 CYP3A4에 의해 AFBO로 변환됩니다(Yang et al. ..2013). 위의 과정은 AFB1이 신체 장애를 유발하고 독성 및 발암 효과를 일으키는 가장 중요한 이유입니다. AFB1은 또한 사멸 수용체 F AS 및 TNFR1의 발현을 상향 조절하고 항아폽토시스 수용체 XIAP 및 Bcl{18}}(Mughal et al., 2017)의 발현을 하향 조절하여 간세포 사멸을 유도할 수 있습니다. 이전 실험에서 , 우리는 AFB1이 병아리에서 간 및 신장 손상을 일으킬 수 있음을 확인하고 그 기전을 예비 해명했습니다.

모린은 천연 항산화 구조를 가진 천연 플라보노이드의 일종입니다. 산화에 의해 형성된 퀴논은 강력한 항산화 활성을 가지고 있어 세포막의 불포화 지방산을 산화로부터 보호할 수 있습니다(Xie et al, 2003). 연구에 따르면 모린은 산화 스트레스를 억제하여 생쥐에서 IFOS로 인한 간 손상에 특정 보호 역할을 할 수 있음을 확인했습니다. 염증 및 세포 사멸(Ozdemir et al2020). Morin은 또한 PI3K/AKT, MAPK, NF-kB를 억제하여 LPS로 인한 유방염을 완화할 수 있습니다. 및 NLRP3 신호 전달 경로(Jiang et al..2020). 그러나 AFB{8}}로 인한 손상에 대한 morin의 관련 보호 효과는 알려지지 않았습니다. 따라서 이 실험은 주로 간 및 신장 손상을 일으키는 AFB{9}}에 대한 morin의 보호 효과를 조사하고 그 메커니즘을 해명했습니다.

morin의 복용량과 효과에 대한 보다 정확한 평가를 바탕으로 복강 내 주사를 선택했습니다. 또한, 모린 투여 방법은 생쥐 및 쥐의 투여 방법과 일치했습니다(Jiang et al..2020;

Khamchai et al, 2020). 먼저, AFB1 독성 모델이 성공적으로 확립되었음을 확인하기 위해 혈청 내 AST, ALT, BUN 및 CRE의 수준을 조사하였다. AFB1 그룹의 간 및 신장 손상 지수는 유의하게 증가한 반면, morin 그룹은 이들 효소의 발현을 현저히 억제하여 AFB{3}}가 병아리의 간 및 신장 손상을 유발하는 것을 방지하는 morin의 역할을 사전에 확인했습니다. 동시에 간지수는 군간 유의한 차이가 없었으나 morin 처리군(20 mg/kg, 80 mg/kg)에서 체중증가율이 현저히 개선됨을 확인하여 식이요법의 효과를 확인하였다. 병아리의 무게에 대해 morin. 또한, 조직병리학적 검사에서 morin이 AFB{6}}를 효과적으로 완화하여 간세포 파괴, 부기, 염증 세포 침윤 및 신장 세포 괴사, 박리 및 공포화를 유발하는 것으로 확인되었으며, 이는 병아리의 간 및 신장 손상에 대한 morin의 보호 효과를 더욱 확인시켜 주었습니다. . 다음으로, 우리는 병아리에서 AFB1-로 인한 간 및 신장 손상에 대한 morin의 보호 메커니즘을 연구했습니다.

선천성 면역을 위한 첫 번째 방어선인 NET은 유기체에 대한 양날의 검입니다. 한편으로, 그것은 병원체에 대한 신체의 방어에서 중요한 역할을 합니다. 반면에 조직 손상을 일으키고 죽상 동맥 경화증 및 혈전증과 같은 일부 질병의 형성에 참여할 것입니다 (Moschonas and Tselepis, 2019). 이 연구는 NET과 히스톤이 BMEC(bovine mammary epithelial cell)의 손상에 중요한 역할을 하며 과도한 NET의 형성을 억제하면 유방염 관련 손상을 완화할 수 있음을 확인했습니다(Wei et al.2019a). 우리는 또한 AFB1이 HET의 방출을 유도하여 병아리에서 간 및 신장 손상을 일으킬 수 있음을 발견했습니다. AFB1에 대한 morin의 보호 효과가 병아리의 부상을 유발하는지 여부도 HET와 관련이 있는지 여부도 우리 실험의 중요한 목표입니다. HET는 닭의 중요한 타고난 면역 반응으로 작용하며 혈청에서 HET를 검출하는 가장 좋은 시간은 24시간 이내이므로 연구 시기를 선택했습니다. morin은 혈청에서 HET의 형성을 유의하게 감소시켰으며, morin은 AFB{7}}HET의 방출을 억제하여 병아리의 부상을 유발하는 것을 처음으로 확인했습니다.

신체의 정상적인 대사 과정에서 산화 환원은 동적 평형 상태에 있지만 신체의 활성 산소 종 (ROS) 생성이 항산화 제의 양을 초과하면 산화 스트레스가 발생합니다. 산화 스트레스는 간 섬유증식성 질환, 알코올성 간 질환 및 비알코올성 지방간 질환과 같은 많은 간 질환에 관여합니다(Cichoz-Lach and Michalak, 2014). MDA는 ROS에 의해 생성되는 지질 과산화의 최종 산물로서 막계의 손상 정도와 세포에 대한 활성산소의 공격 정도를 독립적으로 반영할 수 있어 산화적 스트레스를 평가하는 좋은 지표로 여겨진다(Wang et al. , 2019). SOD는 활성산소를 제거하는 신체의 능력을 간접적으로 보는 ROS 활성산소에서 슈퍼옥사이드 음이온을 제거하는 특정 항산화 효소로, 간 손상 연구에서 매우 중요한 기능을 합니다(Zhang et al..2018) . GSH-Px는 세포의 산화환원 상태를 측정하는 중요한 지표로 H plus를 직접 공급하여 산소 라디칼의 독성을 상쇄할 수 있으며,

간의 산화적 손상. CAT는 동물의 다양한 조직, 특히 간에 높은 농도로 존재하며 과산화수소를 효과적으로 이산화탄소와 물로 분해하여 산화적 손상으로부터 세포를 보호할 수 있습니다(Alfonso-Prieto et al., 2009). 그 결과 AFB1은 항산화 효소 GSH-Px, SOD, CAT의 수치를 현저히 감소시켰고 항산화 효소 MDA의 수치도 증가시켰으며, morin 그룹은 반대 경향을 나타내어 oxidase와 항산화 효소 간의 불균형을 효과적으로 완화시키는 것으로 나타났습니다. morin은 AFB1-로 인한 산화 스트레스를 효과적으로 억제할 수 있습니다.

ROS는 염증성 사이토카인의 발현과 핵인자 카파 B(NF-xB) 및 미토겐 활성화 단백질 키나아제(MAPK) 경로의 활성화를 유발할 수 있다고 보고되었습니다(Li et al.2014). NF-xB 단백질은 일반적으로 p65와 p50에서 homo/heterodimer를 형성하고, IkB 억제 단백질과의 trimer complex 형성으로 인해 세포질에서는 불활성 상태이다(Pantano et al., 2006). 병원체에 의해 자극을 받은 IkB는 삼량체로부터 해리되고, NF-kB 이량체는 핵 국소화 서열(NLS)에 노출되어 세포질에서 핵으로 빠르게 진입하여 핵 DNA의 특정 서열에 결합하여 관련 유전자의 전사(Zhang and Ghosh, 2001).TNF-는 NF-B의 활성화에 관여하는 가장 중요한 전염증성 사이토카인으로, IL{12}}, IL{13}}, COX의 발현을 유도합니다. -2, iNOS 및 기타 다운스트림 염증 매개체(Rajendran et al 2018). 우리의 결과는 AFB1이 염증 인자인 TNF-, IL{18}}, IL{19}} 및 염증 매개체 COX{20}} 및 iNOS의 mRNA 발현을 유의하게 촉진시켰지만, morin 그룹은 발현을 유의하게 억제하는 것으로 나타났습니다 이는 morin이 병아리의 AFB 유도 염증 반응을{21} 효과적으로 억제할 수 있음을 나타냅니다.

연구에 따르면 산화 스트레스는 세포 사멸을 유도하는 인자 중 하나이며(Chandra et al., 2000), 세포 사멸을 유도하는 많은 물질은 일반적으로 세포 산화 대사의 산화제 또는 자극입니다. NF-kB의 활성화는 proapoptotic factor 유전자의 전사를 유도하거나 anti-apoptotic protein의 발현을 억제할 수 있습니다. 한편, caspase 신호 전달 경로와 염증 반응은 나란히 있습니다. Caspase-1는 Il-1 분비에서 중요한 역할을 하며 caspase-11는 인간 염증성 caspase-4와 가족 구성원 caspase-4 caspase{{9 }} (Van Opdenbosch 및 Lamkanfi, 2019). AFB1은 caspase{12}}, caspase{13}} 및 caspase{14}}의 발현을 현저히 증가시키는 반면 morin은 이들 인자의 발현을 유의하게 감소시켜 morin이 활성을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인했습니다. AFB{15}}는 병아리에서 카스파제 신호 전달 경로를 유도했습니다.

위의 결과를 바탕으로 우리는 morin이 AFB{0}}로 인한 병아리의 간 및 신장 손상을 효과적으로 완화할 수 있음을 확인했으며, 이는 morin의 실제 적용을 위한 실험적 근거와 이론적 참고 자료를 제공할 수 있습니다. 다음 연구에서는 음용수와 같이 모린을 사용한 급이 방식을 선택해야 하며, 가금류 사육에서 모린의 효과를 확인하기 위해서는 더 많은 병아리와 노령의 닭이 필요합니다.

결론

모린은 한약재와 건강 보조 식품에서 흔히 볼 수 있는 천연 화합물로서 충분한 연구를 거쳐 안전성이 확인되었으며 만족스러운 결과를 얻었습니다. 우리의 실험은 추가로 morin이 HET의 방출, 산화 스트레스, 염증 반응을 억제하여 AFB{0}}로 인한 간 및 신장 손상을 효과적으로 완화할 수 있음을 보여주었습니다. 따라서 이 연구에서는 모린이 가금류의 간과 신장을 보호하고 사료의 유해 물질을 방지하며 가금류의 성능을 향상시키는 사료 첨가제로서의 잠재력이 있음을 보여줍니다.