1부 페닐에탄올 글리코시드 리포솜은 FAK/PI3K/Akt 신호 전달 경로의 조절을 통해 PDGF 유도 HSC 활성화를 억제합니다

Shi-Lei Zhang 1, Long Ma 1, Jun Zhao 2, Shu-Ping You 1, Xiao-Ting Ma 1, Xiao-Yan Ye 및 Tao Liu 1,*

1 중국 우루무치 830011, Xinyi Road No.393, Xinjiang Uyghur Autonomous Region, Xinjiang Uyghur Autonomous Region, Xinjiang Medical University, 공중 보건 학교, 독성학과

2 위구르 의학을 위한 핵심 연구실, 신장 위구르 자치구 신장 위구르 자치구 신화 남로 140호, 우루무치 830004, 중국

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추상적인: 시스탄체 튜불로사면역 조절에 널리 사용되는 한약재로,페닐에타노이드 배당체(CPhGs)는 이 활동을 담당하는 주요 구성 요소 중 하나입니다. 그러나 CPhGs의 적용은 낮은 흡수율과 낮은 경구 이용률로 인해 부정적인 영향을 받습니다. 표적 약물 전달은 의약품의 중요한 개발 방향입니다. 이전 연구에 따르면 CPhG는 TGF-p1/smad에서 신호 전달 경로의 전도를 차단하고 간 성상 세포(HSC)의 활성화를 억제할 수 있습니다. 이 연구의 목적은 초점 접착 키나아제(FAK)/포스파티딜이노시톨에서 HSC 활성화 억제, 세포자멸사 촉진, 세포 주기 차단, 신호 전달 경로 억제를 통해 CPhG 리포솜의 항간 섬유증 효과를 평가하는 것이었습니다{3}} kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt), 그리고 그것들이 시험관내 간보호 활성임을 결정합니다. 시험관 내 방출 연구는 CPhG 리포솜이 약물 CPhG와 비교하여 지속 방출 효과가 있음을 보여주었습니다. HSC 증식은 CPhG 리포솜(29.45, 14.72, 7.36㎍/mL)으로 처리한 후 억제되었으며, MTT 분석에서 IC50 값은 42.54Rg/mL였습니다. 다양한 농도의 CPhG 리포솜은 HSC 증식을 억제하고 세포자멸사를 촉진하며 세포 주기를 차단할 수 있습니다. MTT 방법은 CPhG 리포솜과 재조합 쥐 혈소판 유래 성장 인자-BB(rrPDGF-BB) 처리 후 HSC 증식의 명백한 억제를 보여주었다. 콜라겐{17}}, 메탈로펩티다제 억제제 1(TIMP{19}}), 평활근 액틴(a-SMA) 및 인산화된 PI3K/Akt의 수준이 하향조절되었고 기질 메탈로프로테이나제{22}}(MMP{ {23}}) 상이한 농도의 CPhG 리포솜으로 전처리함으로써 상향조절되었다. 더욱이, 29.45 Rg/mL의 CPhG 리포솜은 FAK 유전자의 과발현에 의해 FAK 단백질 및 인산화된 PI3K 및 FAK 다운스트림 Akt 단백질의 발현을 감소시킬 수 있다. 이 실험은 CPhG 리포솜이 FAK를 억제한 다음 인산화된 Akt/PI3K의 발현을 감소시켜 HSC의 활성화를 억제할 수 있음을 시사하며, 이로써 간 섬유증에 대한 CPhG의 적용에 대한 새로운 통찰력을 제공합니다.

키워드: 페닐에타노이드 배당체리포솜; 간 성상 세포; 분아 증식; 아폽토시스; 세포주기; FAK/PI3K/액트,

TGF-p1, 알코올, 독소 및 지방증과 같은 요인은 HSC의 활성화를 초래할 수 있습니다. PDGF는 또한 HSC의 활성화로 이어질 수 있습니다[4]. 현재 간섬유화를 예방하기 위해 HSC를 표적으로 하는 치료 전략에는 HSC의 활성화, 증식 및 세포 주기의 억제와 HSC의 세포자멸사 자극이 포함된다[5].

시스탄체 튜불로사기생식물인 Orobanchaceae과(과)는 중국 신장 남부 지역에서 널리 자랍니다.C. 튜불로사유기체 면역 강화, 유기체 지구력 향상, 신장 영양, 발기 부전 치료 및 지능 증가를 포함한 다양한 활동을 나타내는 것으로 나타났습니다.

1. 소개

또한 항산화 및 노화 방지 특성이 있습니다[6]. 이 식물에는 페닐에타노이드 배당체(CPhGs), 이리도이드 및 다당류가 포함되어 있으며, 이 중 CPhG는 주요 활성 생리 활성 종입니다[7]. 이전 연구에서 우리는 CPhG가 TGF-p1/smad에서 신호 전달 경로의 전도를 차단하고 HSC의 활성화를 억제하며 쥐의 소 혈청 알부민 유도 간 섬유증에 예방 효과를 발휘할 수 있음을 발견했습니다[7,8]. 그러나 CPhG는 물에 대한 용해도가 좋고 지용성이 낮고 산도, 분해효소 등 외부요인의 영향을 받아 CPhG의 안정성과 유효성을 저하시킨다[9]. 위내 투여 후 CPhGs는 쥐의 위장관에서 불안정하고 배당체 결합의 가수분해가 쉽게 일어날 수 있습니다. 쥐의 경구 생체이용률은 0.83%에 불과하여 치료적 역할을 결정하기 어렵습니다[10]. 따라서 우리는 HSC의 치료 효능을 향상시키기 위해 안전하고 효과적이며 지속적이며 표적화된 항섬유증 약물을 찾아야 합니다. 나노입자 약물 전달 시스템은 높은 약물 로딩 용량과 긴 혈액 순환을 포함하는 장점 때문에 이러한 결함을 극복하기 위한 대안 전략을 제공합니다[11]. 그들은 간에 강한 친화력을 가지고 있으며 엔도사이토시스 및 융합을 통해 약물을 세포 내로 직접 전달할 수 있습니다. 변형되지 않은 리포솜은 세망내피계(RES)에 의해 발달된 조직이나 기관에 주로 분포하며 간을 수동적으로 표적화하는 기능을 갖는다[12]. 따라서, CPhG 리포솜은 항섬유증 효과를 제공하기 위해 막 분산 및 2차 캡슐화에 의해 제조되었다. 이 연구에서 우리는 HSC 증식, 세포 사멸 및 세포주기에 대한 CPhG 리포솜의 영향과 그 메커니즘을 조사하는 것을 목표로했습니다.

2. 결과

2.1. CPhG 리포솜의 물리적 특성

준비된 CPhG 리포솜의 물리적 특성은 다음과 같습니다. 입자 크기는 (216.7 ± 3.47) nm, 제타 전위는 (-55.6 ± 1.3) mV였습니다. 도 1에 도시된 바와 같이 입자는 원형이고 표면에 균일한 두께로 코팅되어 있으며 입자크기 분포가 균일하였다. CPhG 리포솜의 약물 로딩 및 캡슐화 효율은 (3.71 ± 0.32)퍼센트 및 (38.46±7.85)퍼센트였다.

2.2. CPhG 리포솜 및 CPhG에서 체외 방출

추정된 누적 방출 속도는 CPhG 리포솜 및 CPhG에 대한 시간의 함수로 계산되고 플로팅되었습니다(그림 2). 현재 연구에서; 12시간 후 CPhG의 방출 속도는 100%로 정규화되었지만 CPhG 리포솜의 방출 속도는 24시간 후 100%에 가까웠고 CPhG의 방출 속도는 시간이 지남에 따라 증가했습니다. 데이터는 0차, 1차 및 Higuchi 방정식을 포함하여 제어 방출 메커니즘에 대해 서로 다른 피팅 모델을 사용하여 분석되었습니다. 세 가지 릴리스 모델에 대한 적합 방정식 및 상관 계수는 표 1에 나와 있습니다.

CPhG 및 CPhG 리포솜에 가장 적합한 모델은 Higuchi 및 1차 방정식입니다. CPhG 리포솜의 시험관 내 방출 연구는 어떠한 폭발 효과도 나타내지 않았습니다. 용해 매개변수 T50(용해 50%)을 계산하기 위해 가장 적합한 분포 함수가 선택되었습니다. 결과는 CPhG 리포솜의 평균 체류 시간이 CPhG의 평균 체류 시간보다 길고 CPhG 리포솜의 T50이 9.39시간임을 보여줍니다. CPhG의 1.69시간과 비교하여, CPhG 리포솜은 명백한 지속 방출 효과를 나타냅니다(표 2).

우리는 먼저 시험관 내 MTT 분석으로 HSC에 대한 CPhG 리포솜의 세포 독성 효과를 조사했습니다. HSC는 24시간 동안 0에서 117.79μg/mL 범위의 다양한 농도의 CPhG 리포솜에 노출되었습니다. CPhG 리포솜은 HSC의 생존력을 용량 의존적으로 감소시켰고, IC50 값은 42.535(eg/mL. CPhG 리포솜(29.45, 14.72 및 7.36 μg/mL)이 24에서 세포에 미치는 영향, 48 및 72시간은 도 3에 나타내었다. CPhG 리포솜으로 처리한 후, HSC의 증식은 상이한 시점에서 유의하게 억제되었다(도 3).

HSC의 젖산 탈수소효소(LDH) 방출은 다른 농도의 CPhG 리포솜으로 처리한 지 24시간 후에 감지되었습니다. 결과는 표 3에 나와 있습니다. CPhG 리포솜으로 처리된 HSC는 LDH 방출에 큰 영향을 미치지 않았습니다.

2.4. CPhG 리포솜은 HSC의 세포자멸사를 유도하고 세포 주기를 정지시킵니다

HSC는 24시간 동안 CPhG 리포솜(29.45,14.72,7.36 ㎍/mL)에 노출되었고, annexin-V-FITC/PE 이중 염색을 수행하여 그림 4a와 같이 유세포 분석에 의해 세포자멸사를 검출했습니다. 세포의 총 아폽토시스는 대조군에 비해 통계적으로 증가했습니다(p < 0.05).="" 각="" 용량="" 그룹에="" 대한="" hsc에="" 대한="" 24시간="" 처리="" 후,="" cphg="" 리포솜(29.45="" μg/ml)은="" hsc의="" 후기="" 세포자멸사를="" 유도할="" 수="" 있었고="" 후기="" 세포자멸="" 세포의="" 백분율은="" 초기="" 세포자멸="" 세포의="" 비율보다="" 높았다.="" 초기="" 세포사멸="" 세포의="" 비율은="" cphg="" 리포솜(14.72="" 및="" 7.36="" |^g/ml)="" 처리군에서="" 후기="" 세포사멸="" 세포보다="" 훨씬="" 높았다.="" 이러한="" 결과는="" cphg="" 리포솜이="" 특히="" hsc의="" 후기="" 단계에서="" 간세포="" 사멸을="" 유도한다는="" 것을="" 분명히="" 나타냅니다.="" 또한,="" cphg="" 리포솜의="" 투여량에="" 따라="" 총="" 세포자멸사가="" 증가했습니다.="" 이러한="" 결과는="" cphg="" 리포솜이="" hsc의="" 세포자멸사를="" 유도함으로써="" hsc의="" 활성화="" 및="" 간="" 섬유화를="" 억제할="" 수="" 있음을="">

HSC의 세포 주기에 대한 CPhG 리포솜의 효과를 결정하기 위해 HSC를 24시간 동안 29.45, 14.72 및 7.36 μ/mL 농도의 CPhG 리포솜으로 처리하고 유세포 분석으로 분석했습니다(그림 4b). 그 결과 G0/G1기의 세포 비율이 유의하게 증가한 반면(p < {{1{12}}}}}.05),="" s기의="" 세포="" 비율은="" 유의하게="" 증가했습니다.="" 감소(p="">< 0.05).="" 또한,="" g2/m기의="" 세포="" 비율은="" 대조군과="" 비교할="" 때="" 유의하게=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. 체외에서 C PhG 리포솜의 작용 메커니즘에 대한 연구

2.5.1. CPhG 리포솜은 rrPDGF-BB 자극에 의해 HSC 증식을 억제합니다

HSC의 rrPDGF-BB에 의해 자극된 증식에 대한 CPhG 리포솜의 영향을 추가로 조사하기 위해 미리 설정된 농도의 CPhG 리포솜으로 24시간, 48시간 및 72시간 동안 처리된 HSC의 생존력을 측정하기 위해 MTT 분석을 수행했습니다. 그림 5).

rrPDGF-BB와 29.45, 14.721 및 7.36μ/mL의 CPhG 리포솜으로 자극된 HSC로 24시간 처리한 후, 각 용량 그룹에서 세포의 생존율은 각각 67.5%, 75.3% 및 89.2%였습니다. 48시간 후 생존율은 세포에서 각각 49.2%, 58.6%, 73.5%였다.
각 용량 그룹의. 72시간의 처리 후 각 투여군의 세포 생존율은 각각 45.3%, 59.2%, 79.2%였다. 결과는 CPhG 리포솜이 rrPDGF-BB에 의해 자극된 HSC에 상당한 억제 효과가 있음을 보여주었으며, 이러한 억제 효과는 용량이 증가함에 따라 더욱 분명해졌습니다. HSC에 대한 CPhG 리포솜의 억제 효과는 CPhGliposomo 항증식 활성에 기여하는 것으로 제안됩니다.

2.5.2. CPhG 리포솜은 시험관 내에서 HSC 활성화를 억제합니다

Disse 공간의 HSC는 콜라겐{0}},(s-SMA 및 콜라겐 III과 같은 ECM 구성요소를 생성합니다. MMP 및 TIMP와 같은 ECM의 발달을 조절하는 다른 요인도 HSC에서 생성됩니다[5]. HSC에서 rrPDGF-BB에 의해 유도된 메커니즘을 추가로 조사하기 위해 우리는 콜라겐-1, Cosma, 콜라겐 III, MMP-1 및 TIMP{{8}를 포함한 ECM 관련 단백질의 발현을 평가했습니다. }. 그림 6a는 CPhG 리포솜(29.45,14.72, 7.{15}}g/mL) 그룹이 콜라겐{16}}, a-SMA 및 TIMP{18} } 및 MMP{19}}의 mRNA 발현 수준을 rrPDGF-BB 그룹보다 더 증가시킵니다.

그림 6. CPhG 리포솜이 HSC에서 콜라겐-1, a-SMA, TIMP-1 및 MMP-1의 발현에 미치는 영향. (a) HSC에서 콜라겐-1, a-SMA, TIMP-1 및 MMP-1의 mRNA 발현(RT-PCR 분석). (b) 콜라겐{{10}} 및 a-SMA의 단백질 발현. A, 대조군; B, rrPDGF-BB 처리군; C, rrPDGF-BB + CPhG 리포솜 29.45g/mL 처리군; D, rrPDGF-BB + CPhG 리포솜 14.72(_ig/mL 처리군, E, rrPDGF-BB + CPhG 리포솜 7.{22}} 卩g/mL 처리군, 데이터 표시) 평균 土 SD . ** p < 0.01,="" rrpdgf-bb="" 활성화된="" hscs="" 그룹과="" 비교하여="" 유의하게="" 다릅니다.="" #="" p="">< 0.05,="" 대조군과="" 상당히="" 다릅니다.="" 6-액틴="" 내부="" 통제="" 수단으로="">

CPhG 리포솜은 또한 MMP의 mRNA 수준을 높였습니다{0}}. a-SMA 및 콜라겐-1의 수준은 rrPDGF-BB 활성화 HSC에서 높게 발현되었습니다. 대조적으로, CPhG 리포솜은 a-SMA와 콜라겐의 수준을 감소시켰습니다-1(그림 6b). 특히 고농도(29.45^g/mL)에서 CPhG 리포솜은 rrPDGF-BB를 통해 증가된 콜라겐과 a-SMA 발현을 감소시켰습니다.

2.53 CPhG 리포솜은 PI3K/Akt 신호 전달 경로를 억제합니다

PI3K/Akt는 티로신 키나제 수용체에 의해 매개되는 중요한 신호 전달 경로입니다. PI3K/Akt 신호전달 경로는 세포외 자극에 반응하는 센서 역할을 하고 세포 신호를 중재함으로써 다운스트림 이펙터 분자의 활성에 영향을 미쳐 세포 사멸 및 증식에 중요한 역할을 합니다[13]. PI3K/Akt 경로가 HSC에 대한 CPhG 리포솜의 항증식 효과에 참여하는지 확인하기 위해 PI3K/Akt의 발현 및 인산화 수준을 웨스턴 블롯 분석으로 조사하였다. 결과는 CPhG 리포솜으로 24시간 처리한 후 HSC에서 p-PI3K 및 p-Akt의 수준이 일관되게 감소함을 보여주었으며, 이는 HSC에 대한 CPhG 리포솜의 항증식 효과가 PI3K/Akt 경로의 비활성화와 관련이 있음을 나타냅니다. , 그림 7과 같이.

2.5.4. CPhG 리포솜은 rrPDGF-BB 매개 FAK 과발현 플라스미드의 HSC에서 PI3K/Akt 경로 단백질의 발현을 하향 조절할 수 있습니다

FAK는 PI3K/Akt 신호 전달 경로를 조절하는 중요한 유전자입니다. 활성화된 FAK는 PI3K를 인산화하여 Akt의 인산화를 추가로 유도합니다. FAK는 티로신-단백질 키나제 수용체, 인테그린 및 HSC 활성화 동안 여러 세포내 경로의 접합 및 허브인 세포에 대한 기타 경로의 신호 전달을 매개합니다. 그러므로 우리는 추측했다.

CPhG 리포솜이 FAK의 활성화를 손상시켜 PI3K/Akt 신호 전달 경로의 활성을 억제할 수 있다는 사실. 우리는 이후에 FAK 유전자의 과발현을 증명함으로써 이 가설을 확인했습니다.

(pEX{0}}NC) + CPhG 리포솜 29.45 Lg/mL 그룹은 유의하게 감소했습니다(p < 0.01).

특정 1차 항체를 사용한 estern blotting. ** p < 0.01,="" 와="" 크게="">

rrPDGF-BB 자극 + pEX{1}}FAK 그룹 더하기 p < 0.05,="" rrpdgf-bb="" 처리군과="" 비교하여="" 유의하게="" 다릅니다.="" &="" p="">< 0.01,="" rrpdgf-bb="" 자극과="" 비교하여="" 유의하게="">

플러스 pEX{0}}NC 그룹. -액틴은 내부 대조군으로 사용되었습니다.

cistanche는 암을 예방할 수 있습니다.

3. 토론

CPhG는 항염증 활성[14,15], 항골다공증 활성[16,17], 진정 효과[18], 항피로 활성[19], 신경 보호 효과[19] 등 다양한 생물학적 활성을 갖는 것으로 나타났습니다. 20], 간 보호 활성 [21,22]. Yang et al. 의 추출물을 발견했습니다.C. 튜불로사콜라겐 합성을 억제하고 산화 스트레스를 감소시켜 실험적인 화학적 간 섬유화의 진행을 상당히 지연시킬 수 있습니다[22]. 그러나 CPhGs의 효능은 다음과 같습니다.

열 보호제는 낮은 투과성과 낮은 생체 이용률로 인해 제한됩니다[23]. 따라서 이러한 장애를 극복하기 위한 효율적인 전달 시스템을 개발하여 CPhG의 적용을 확대할 필요가 있습니다.

최근 몇 년 동안 약물 연구와 임상 연구에서 나노 입자를 약물 담체로 사용하면 생체 내에서 약물 효능을 향상시킬 수 있음이 확인되었습니다. 리포솜은 가장 중요한 나노입자 중 일부입니다[24].

리포솜은 항염증제, 항암제, 항생제, 항진균제 및 기타 다른 범주의 약물을 성공적으로 전달하기 위한 약물 운반체로 사용될 수 있습니다[25]. 리포솜은 또한 약물 안정성을 개선하고 약물 용해도를 높이며 생체 적합성을 촉진할 수 있습니다[26]. 반면에 연구에 따르면 고체 나노입자의 약물 전달 시스템({3}} nm 범위)은 간에 약물 투여량의 80%를 집중시켜 약물이 체내로 들어갈 수 있도록 합니다. 간 세포 [27]. Jing Zhu et al. Galanin-liposome이 좋은 간 표적 효과를 가지고 있음을 발견했습니다[28]. 따라서 나노 한약의 수동적 표적화 효과는 간 질환이나 다른 질병의 치료에 사용될 수 있습니다. 본 연구에서 제조된 CPhG 리포솜의 입자 크기는 어느 정도 간을 표적으로 하는 것으로 (216.7 ± 3.47) nm입니다. 약물 방출 거동은 나노 약물 전달 시스템의 중요한 특성입니다. CPhG는 수용성이 좋기 때문에 PBS 완충용액(pH=6.{20}})을 방출 매질로 사용합니다. 방출 곡선으로부터 2시간 이전에 CPhG 리포솜의 방출 비율이 40% 미만이었고, 갑작스런 방출이 발생하지 않았으며, CPhG의 방출에 비해 일정한 서방 효과가 있음을 알 수 있다. 피팅된 방출 곡선 방정식에서 pH=6.0에서 인산염 완충 용액에서 CPhG 리포솜의 방출은 Higuchi 방정식과 일치합니다.

시스탄체~할 수 있다항아폽토시스

만성 간 질환에서 HSC의 지속적인 활성화는 간 섬유화를 유발합니다[29]. 따라서 HSC의 활성화, 증식 및 세포 주기를 억제하거나 HSC 세포자멸사를 유도하는 것이 간 섬유증의 표적 치료를 위한 새로운 출발점이 될 수 있습니다[30-33]. 많은 연구에서 apoptosis가 apoptosis를 촉진하여 간 섬유화를 역전시키는 열쇠임을 발견했습니다[34]. 간 섬유증의 발달은 HSC의 활성화에 달려 있으며, 이는 HSC 활성화를 억제하고 세포자멸사를 유도하여 간 섬유증을 예방하거나 치료할 수 있는 가능성을 제공할 수 있습니다[35,36]. LDH는 세포막이 손상될 때 배양 배지에서 방출되는 세포 세포질의 효소입니다. 이러한 이유로 우리는 CPhG 리포솜에 노출된 HSC의 세포 생존율, 세포 내 LDH 함량, 세포 사멸 및 세포 주기에 대한 시험관 내 연구를 수행했습니다. 결과는 CPhG 리포솜이 HSC의 생존력과 증식을 강력하게 억제하고 농도 의존적 ​​방식으로 세포사멸 세포의 비율을 증가시키는 것으로 나타났습니다. 또한, 세포 주기의 결과는 CPhG 리포솜이 G1 단계에서 세포 주기 정지를 유도할 수 있음을 나타냅니다. 결과는 간 섬유증을 예방하고 치료하는 CPhG 리포솜의 핵심이 세포 증식, 세포자멸사 및 세포 주기를 조절하는 것임을 보여줍니다. 블랭크 대조군과 비교하여, 각 그룹 간의 LDH 함량은 점차 증가하는 경향을 갖는다. 그러나 유의한 차이는 없었으며(p > 0.05), 이는 CPhG 리포솜에 의해 영향을 받는 HSC에 대한 활성이 감소하지만 대부분의 세포막은 손상되지 않은 채로 남아 있음을 나타냅니다. CPhG 리포솜에 의한 HSC의 증식 억제는 세포에 대한 약물의 독성 때문이 아닙니다.

PDGF는 HSC의 증식에 영향을 미치는 가장 중요한 인자입니다. PDGF-수용체(PDGF-Ra 및 -p)는 티로신 키나제 수용체 패밀리에 속합니다. PDGF-AA는 PDGF-Ra에만 결합하는 반면 PDGF-B 사슬은 PDGF-Ra 및 -p와 결합하여 이합체화합니다[37]. PDGF-R에 리간드가 결합한 후 수용체가 이량체화되고, 이는 후속적으로 내부 티로신 잔기의 인산화 및 여러 다운스트림 신호 전달 경로의 활성화를 초래하여 궁극적으로 활성화된 HSC의 증식 및 이동을 유도합니다. 이 과정은 콜라겐 및 기타 ECM의 과도한 생성 및 침착을 초래하여 간 섬유증의 발달 및 진행을 촉진합니다[38]. Breitkopf et al. PDGF-BB의 간 과발현은 HSC 증식과 간 섬유화를 초래한다는 것을 보여주었다[39]. 우리 연구에서 우리는 rrPDGF-BB를 HSC를 활성화시키는 자극제로 사용했으며, 각각의 투여된 CPhG 리포솜 그룹은 HSC의 증식을 억제하고 명백한 용량-효과 관계를 나타낼 수 있었습니다. HSC에 대한 CPhG 리포솜의 억제 효과는 CPhG 리포솜의 항증식 활성에 기여하는 것으로 제안된다.

HSC 활성화는 세포의 유전자 발현 패턴의 많은 변화와 관련이 있습니다. 특히, 콜라겐{0}} 및 a-SMA의 유전자 발현 변화는 활성화된 HSC의 섬유증 특성과 가장 관련이 있습니다[40]. MMP는 생리학적 및 병리학적 조건에서 모든 ECM 단백질 성분의 분해에 중요한 역할을 하는 아연 의존성 엔도펩티다제입니다. MMP와 TIMP는 각각 ECM의 합성과 분해를 매개합니다. MMP는 ECM 저하를 촉진할 수 있습니다. MMP와 TIMP 사이의 미묘한 균형이 간 섬유화의 발생을 결정합니다[29]. rrPDGF-BB 그룹과 비교하여 CPhG 리포솜 그룹에서 TIMP-1, a-SMA 및 콜라겐-1의 발현은 유의하게 증가한 반면 MMP-9의 발현은 감소했습니다. CPhG 리포솜 처리는 HSC에서 rrPDGF-BB에 의해 유도된 비정상적인 발현을 현저하게 역전시켰다. 이러한 데이터는 CPhG 리포솜이 MMP와 TIMP 사이의 균형을 회복함으로써 ECM의 생성을 억제할 가능성이 있음을 나타냅니다. 따라서 MMP 수준을 증가시키고 TIMP{12}}, a-SMA 및 콜라겐{14}} 및 잠재적으로 세포외 기질 분해를 촉진합니다.

FAK는 일종의 초점 접착 복합체입니다. PDGF는 또한 인테그린을 통해 ECM 단백질과 상호작용하여 FAK를 활성화할 수 있습니다[41]. 초점 접착 복합체는 세포 외 환경의 무결성에 대한 직접적인 센서를 제공합니다. FAK가 활성화되면 PI3K가 활성화됩니다. PI3K는 여러 세포 유형의 증식에 관여하는 것으로 나타났습니다[42]. HSC에서 그것의 중요한 역할은 PDGF 수용체 자가인산화에 영향을 미치지 않으면서 PDGF 유도 유사분열 및 화학주성을 차단하기 위해 PI3K 특이적 억제제 LY294002 및 wortmannin의 사용을 통해 보여졌습니다[43]. PI3K는 단백질 키나제 C(PKC), Akt 및 p70S6 키나제(p70S6K)를 활성화하는 이량체화된 인산화 PDGF 수용체로 모집됩니다[44]. 우성-음성 FAK(Ad-FAKCD)는 PDGF 처리 후 PDGF 및 HSCs 증식에 의해 유도된 FAK 활성을 차단하고 PI3K 활성화를 억제하는 데 사용되는 것으로 보고되었습니다[45]. 따라서 우리는 FAK/PI3K/Akt 경로가 CPhG 리포솜의 가능한 표적이라고 가정했습니다.

우리의 결과는 rrPDGF-BB 자극 + X{1}}FAK 그룹과 비교하여 FAK, 인산화된 PI3K 및 인산화된 Akt의 단백질 발현 수준이 rrPDGF-BB 자극 + X{4}}FAK에서 하향 조절되었음을 보여줍니다. 플러스 CPhG 리포솜 29.45Lg/mL 그룹. 이러한 결과는 CPhG 리포솜 29.45 Lg/mL 처리가 FAK 단백질 및 FAK의 인산화된 PI3K 및 Akt 단백질의 발현을 감소시킬 수 있음을 보여줍니다.

한약의 화학 및 약리학 연구가 심화됨에 따라 한약의 활성 성분이 점점 더 많이 발견되고 확인되었습니다. Paclitaxel, artemisinin 및 기타 약물은 전 세계적으로 관련 질병의 1차 치료제로 널리 인정받고 있습니다. 그러나 동시에 많은 한약 성분의 시험관 내 약리 효과는 매우 강력하지만 수용성이 낮고 반감기가 짧고 안정성이 낮고 생체 이용률이 낮고 독성 부작용이 많고 많은 의약 및 임상 적용을 심각하게 제한하는 기타 문제. 나노 약물 전달 시스템은 개발 잠재력이 큰 신약 전달 시스템으로 현대 약학 연구의 핫스팟입니다. 새로운 형태의 중약 연구 개발에 적용하면 중약의 전통적 형태를 개선할 뿐만 아니라 중약의 치료 효과를 어느 정도 향상시키고 생체 내에서 약물의 안정성을 증가시킵니다. 또한, 변형되지 않은 리포솜은 입자 크기, 표면 특성 및 기타 요인에 따라 대부분 RES에 흡수됩니다. 그들은 또한 간을 수동적으로 표적으로 삼습니다. 일반 리포솜의 간 표적화 효율을 향상시키기 위해 특정 리간드나 특정 작용기를 연결하여 표적 조직의 농도를 높일 수 있다.

따라서 향후 연구에서는 CPhG 추출 및 정제의 용해도, 안정성, 산도, 알칼리도와 같은 물리화학적 특성과 생물약제학 및 약동학 연구를 중시해야 합니다. CPhG에 대한 고유한 제형 설계 이론, 조제 기술 플랫폼 및 품질 평가 방법을 수립하고 CPhG에 대한 다양한 나노 약물 로딩 시스템을 개발하여 CPhG가 가능한 한 철저히 활용되도록 해야 합니다. 이러한 장점을 최대한 활용하는 것이 향후 연구의 방향이 될 것입니다.