PART 2 에키나코사이드는 정맥 이완을 어떻게 유도합니까?

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논의

우리가 아는 한, 이것은 의 효과를 평가한 첫 번째 연구입니다.ECH쥐 폐동맥의 혈관 색조에. 우리는 그것을 발견했다ECH농도 의존적 ​​방식으로 NE로 미리 수축된 쥐 폐동맥의 혈관 이완을 유도하고, 이러한 효과는 온전한 내피 및 내피가 박탈된 고리 둘 다에서 관찰될 수 있습니다. 폐동맥에서 ECH는 세포 외 칼슘 유입과 세포 내 칼슘 방출, NO-cGMP 경로 및 K의 개방을 모두 약화시켰습니다.^{...을 더한}채널(큰 컨덕턴스 Ca^{2 플러스}-활성화된 K^{...을 더한}채널 및 내부 정류기 K^{...을 더한}채널)에서 역할을 하는 것으로 나타났습니다.ECH- 유도된 쥐 폐동맥 혈관 이완. 쥐 PASMC에서,ECH세포 내 칼슘 농도를 직접적으로 감소시킬 수 있습니다. 이전 연구에서도 다음과 같이 제안했습니다.ECHNO-cGMP 경로를 통해 쥐의 흉부 대동맥 고리에서 내피 의존성 혈관 확장 작용을 매개할 수 있습니다^[7].

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ECH-유도된 혈관 이완은 온전한 내피와 내피가 박탈된 고리 모두에서 관찰될 수 있습니다. 그러나 내피를 제거하면 최대 반응이 크게 감소하고 EC가 증가했습니다.₅₀손상되지 않은 내피 고리에 비해. NO-cGMP와 PGI가₂-cAMP 경로는 내피 의존성 혈관 이완을 조절하는 데 중요한 역할을 합니다.^[9]. 이 문제를 조사하기 위해 100μmol/L의L-NAME, 내피 세포로의 NO 합성 억제제. 결과는L-NAME은 다음의 혈관 확장을 유의하게 약화시켰습니다.ECH, 이는 NO가 혈관 이완에 역할을 할 가능성이 있음을 시사합니다.ECH. 우리는 또한 cyclo-oxygenase(핵심 PGI)의 억제제인 ​​IMT가₂synthetase)는 그러한 효과가 없었으며, 이는 PGI가₂ECH의 혈관이완에 관여할 가능성은 낮습니다. 따라서 ECH는 NO 생산을 향상시킬 수 있습니다.L-혈관 내피의 아르기닌과 구아닐산 사이클라제를 활성화하여 GTP에서 cGMP로의 전환을 촉매합니다. 실험 프로토콜 후, 고리는 NE(1μmol/L)에 의해 유도된 높은 수축률의 지속적인 안정기를 보여 주었으며, 이는 고리가 다음으로 전처리되었음을 나타냅니다.ECH(30 ~ 300 μmol/L)은 좋은 활성을 나타냈습니다(그림 2A 및 2B).

혈관의 긴장도는 세포 내 Ca에 의해 조절됩니다.^{2 플러스 [12]}. 우리는 ECH(100 및 300 μmol/L)가 Ca의 내피가 박탈된 폐동맥 고리에서 NE에 의해 유도된 위상 수축을 유의하게 감소시킨다는 것을 발견했습니다.^{2 플러스}-free KH 용액, 그리고 이 효과는 ECH의 농도가 높을수록(300μmol/L) 더 두드러졌으며, 이는 폐동맥 고리의 NE-유도 수축에 대한 ECH의 억제 효과가 IP3의 능력에 대한 간섭에 의해 매개됨을 나타냅니다. 세포 내 Ca의 방출을 촉진하기 위해^{2 플러스}. NE는 -수용체에 작용하여 혈관 수축을 매개하여 세포 내

G-단백질 결합 포스파티딜이노시톨 신호 전달 경로를 통한 Ca2 플러스 수준([Ca2 플러스 ]i)[13]. 활성화되면 포스포리파제 C[14]에 의해 유도된 두 번째 메신저 IP3와 디아실글리세롤의 형성이 유발됩니다. IP3는 근형질 세망에서 Ca2+를 빠르게 동원하고 방출하여 [Ca2+]I의 일시적인 증가를 유발할 수 있으며, 이는 Ca2+가 없는 배지에서 폐동맥 고리의 NE 유도 위상 수축과 관련될 수 있습니다. 세포외 칼슘 유입에 대한 ECH의 영향을 조사하기 위해 CaCl2(2.5mmol/L)를 Ca2+-free 조건에서 첨가하였다. ECH(30, 100 및 300 μmol/L)의 추가는 최대 수축을 상당히 감소시켰으며, 300 μmol/L ECH에서 가장 큰 효과가 관찰되었습니다. 이것은 ECH가 PASMC에서 세포 내 칼슘 방출 및 세포 외 칼슘 유입을 억제한다는 것을 시사했습니다. 그러나 ECH와 L 형 칼슘 채널 억제제 사이의 관계를 밝히기 위해서는 추가 연구가 필요합니다. 칼슘의 역할을 조사하기 위해 Fluo 4-AM을 사용하여 쥐 PASMC에서 세포 내 칼슘 농도를 결정했습니다. NE(1μmol/L)를 추가하면 혈관 링의 장력이 급격히 변화하기 때문에(그림 2), 쥐의 PASMC에 먼저 Fluo 4-AM을 로드한 다음 NE와 ECH를 추가했습니다. 결과는 1 μmol/L NE가 세포 내 칼슘 농도를 증가시킬 수 있음을 보여주었으며 이는 이전 연구와 일치했으며 평균 형광 강도는 NE 그룹보다 NE + ECH100 그룹에서 더 낮았습니다. 따라서, ECH는 NE로 전처리된 랫트 PASMC에서 세포내 칼슘 농도를 감소시킬 수 있다고 결론지었다. 실시간으로 세포내 칼슘 농도를 검출하는 것이 바람직하기 때문에 공초점 현미경을 이용하여 세포내 칼슘 농도의 실시간 변화를 관찰하기 위한 추가 연구가 진행되고 있다.

채널은 또한 혈관 색조를 조절하는 능력 때문에 심혈관 질환의 잠재적인 치료 표적으로 제안되었습니다[22, 23]. 우리는 BKCa 채널의 억제제인 ​​TEA가 농도-반응 곡선을 위로 이동시키고 EC50을 상당히 증가시킨다는 것을 발견했습니다. 우리는 또한 대조군과 비교하여 TEA(1mmol/L)로 처리한 후 고리에서 ECH의 최고 농도에서 ECH 유도 이완이 상당히 약하다는 것을 발견했습니다. NO 유발 혈관 확장은 부분적으로 BKCa 채널의 cGMP 의존성 단백질 키나제 G 매개 활성화에 기인합니다[24]. 따라서 우리는 ECH가 NO-cGMP-PKG-BKCa 채널을 통해 쥐 폐동맥 혈관 이완을 유도하여 세포 내 Ca2 플러스 수준의 감소와 PASMC의 이완을 유도한다고 가정했습니다. 흥미로운 관찰은 다른 농도의 ECH가 세포외 칼슘 유입에 의해 유도된 최대 수축을 감소시키고 지속적인 수축을 단축시켰으며, 이는 BKCa 채널의 개방과 관련될 수 있다는 것입니다.

KIR 채널은 막횡단 도메인이 2개뿐인 가장 단순한 채널입니다. 그들은 폐 혈관 내피 세포에서 칼슘 유입의 원동력을 조절하는 데 관여합니다. 따라서 그들은 혈관 투과성[25]과 전단 응력[26]에 대한 반응을 조절하는 것과 관련이 있습니다. 이 연구에서 우리는 KIR 억제제가 농도-반응 곡선을 위로 이동시키고 EC50을 유의하게 증가시켰고 ECH(300μmol/L)에 의해 유도된 이완이 대조군에 비해 유의하게 약하다는 것을 보여주었습니다. 이러한 모든 결과는 ECH가 KIR 채널을 통해 폐동맥에 혈관이완 효과가 있음을 나타냅니다. 그러나 혈관 긴장도를 조절하는 K 플러스 채널의 복잡한 역할을 고려할 때 이 문제를 설명하기 위해서는 추가 연구가 필요합니다. K 플러스 채널은 최근 세포 증식과 세포 사멸을 조절하여 혈관 리모델링에 참여하는 것으로 제안되었습니다[18]. 전체적인 저산소증은 높은 고도에서 발생하기 때문에 폐혈관 수축이나 혈관 재형성을 유발하고 폐혈관 저항을 증가시킨다[27]. 혈관 평활근 세포의 손상된 K 플러스 채널(KATP, KCa, VK 및 KIR)은 또한 K 플러스 채널의 저산소 억제의 발달과 관련되어 막 탈분극, 전압 의존성 Ca2 플러스(Cav) 채널의 활성화, 세포외 Ca2+유입, 세포내 Ca2+방출로 인해 [Ca2+]I가 증가하고 폐혈관 수축과 PASMC 증식이 뒤따릅니다. K 플러스 채널을 열면 저산소성 폐혈관 수축과 혈관 리모델링의 조절에 기여합니다. 따라서 ECH는 K 플러스 채널을 열어 저산소성 폐 혈관 수축을 약화시키고 혈관 리모델링을 감소시킬 수 있습니다. 고혈압[22, 28].

결론 ECH는 NE로 미리 수축된 쥐의 폐동맥에서 혈관이완을 유도하며, 이러한 효과는 온전한 내피와 내피가 박탈된 고리 모두에서 관찰될 수 있습니다. 이것은 NO-cGMP-PKG-BKCa 채널의 개방 및 세포 내 Ca2 플러스 수준의 감소와 관련이 있을 가능성이 가장 높아 PASMC를 이완시킵니다(그림 8).

감사의 말

Liang YANG과 그녀의 연구실(미토콘드리아 생물학 및 의학 센터, 교육부 생명의학 정보 공학 핵심 연구실, 생명 과학 기술 대학 및 프론티어 과학 기술 연구소, Xi'an Jiaotong University, Xi'an)에 감사드립니다. , 중국) 쥐 PASMC의 세포 내 칼슘 농도를 검출하는 데 도움을 준 덕분입니다. 이 프로젝트는 중국 중점 기초 연구 프로젝트에 대한 국가 프로그램(No 2012CB518200), 중국 국제 과학 기술 협력 프로그램(No 2011DFA32720), 중국 국가 자연 과학 재단(No 31160219), 핵심 연구소의 지원을 받습니다. 칭하이성 개발 프로그램(No 2013-Z-Y05, No 2014-ZY{10}}, No 2014-ZY{13}}), 칭하이-유타 공동 연구 키 고지대 의학 연구소, 중국 국립 자연 과학 재단(No 81160012), 중국 교육부 신세기 우수 인재 지원 프로그램(No NCET{16}}) 및 Qinghai 자연 과학 재단(No {{ 17}}Z{18}}Q).

에키나코사이드안에시스탄체신장 질환을 치료할 수 있습니다

저자 기여

Ri-li GE와 Xiang-Yun GAI가 연구를 설계했습니다. Xiang-Yun GAI, Yu-hai WEI, Ta-na WUREN, Ya-ping WANG, Zhan-Qiang LI 및 Yi ZHOU가 연구를 수행했습니다. Wei ZHANG과 Yu-hai WEI는 새로운 시약과 분석 도구에 기여했습니다. Xiang-yun GAI와 Shou LIU가 데이터를 분석했습니다. Xiang-Yun GAI가 논문을 작성했고 Lan MA와 Dian-Xiang LU가 논문을 수정했습니다.

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