파트 1: Acteoside는 C-Fos 유도 및 NF-KB 경로를 억제하고 ROS 생산을 약화시켜 RANKL 매개 파골세포 생성을 억제합니다
Mar 05, 2022
연락처: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 이메일:audrey.hu@wecistanche.com
이승엽1,2., 이근수3.¤, 이세현2., 국성호, 이정채22,3*
추상적인
염증성 사이토카인은 파골세포 형성의 중요한 매개체로 과도한 골흡수와 골다공증을 유발한다는 연구 결과가 많이 보고되었습니다.시스탄체 허브의 악테오사이드, 한방 전통 의학에서 널리 사용되는 Rehmannia glutinosa의 주요 활성 화합물은 항염 및 항산화 잠재력을 가지고 있습니다. 이 연구에서 우리는악티오사이드핵 인자-카파B(NF-kB) 리간드(RANKL)의 수용체 활성화제에 의해 자극된 골수 대식세포(BMM) 및 RAW264.7 대식세포로부터 파골세포 분화 및 형성을 현저하게 억제했습니다.악티오사이드전처리는 또한 용량 의존적 방식으로 성숙한 파골세포에 의한 골 흡수를 방지했습니다. Acteoside(10mM)는 p38 키나아제, 세포외 신호 조절 키나아제 및 c-Jun N-말단 키나아제의 RANKL 자극 활성화를 약화시켰고, 또한 p65 소단위 및 억제제 kBa의 인산화를 억제하여 NF-kB 활성화를 억제했습니다. 또한, RANKL 매개 증가는 c-Fos 및 활성화된 T 세포의 핵 인자인 세포질 1(NFATc1)의 발현과 종양 괴사 인자-a, 인터루킨(IL)의 생성을 증가시킵니다.{15}}b , 및 IL{16}}은 acteoside 전처리에 의해 분명히 억제되었습니다. 또한, 구강악티오사이드감소된 난소 절제술로 인한 골 손실과 염증성 사이토카인 생성을 조절하여 수준을 조절합니다. 우리의 데이터는 acteoside가 미토겐 활성화 단백질 키나아제 및 NF-kB, c-Fos 및 NFATc1과 같은 전사 인자의 RANKL 유도 활성화를 억제함으로써 파골세포 전구체로부터 파골세포 분화 및 성숙을 억제함을 시사합니다. 종합적으로, 이러한 결과는 acteoside가 파골세포 활성화를 차단하여 골 손실을 줄이는 항흡수제로 작용할 수 있음을 시사합니다.
소개
뼈는 균형 잡힌 파골세포와 조골세포 활동에 의해 지속적으로 재형성됩니다[1]. 파골세포는 단핵구/대식세포 계통의 조혈 전구체 세포에서 발생하는 반면, 조골세포는 중간엽 계통에 속합니다[2]. 비정상적 파골세포 활성화 또는 골아세포 생성 감소는 골 항상성을 교란시켜 결국 골다공증, 관절염, 골암과 같은 질병을 유발할 수 있다[3,4]. 골다공증은 골절 위험을 증가시키는 흔한 뼈 질환입니다. 골다공증의 가장 흔한 형태는 폐경기 여성의 에스트로겐 결핍으로 인해 발생합니다. 코르티코스테로이드 및 항간질제와 같은 약물도 골 흡수와 형성 사이의 불균형을 일으켜 골다공증을 유발할 수 있습니다[5].
비스포스포네이트, 칼시토닌, 에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제를 비롯한 많은 항흡수 억제제가 골다공증 치료에 사용되어 왔습니다. 이러한 억제제는 파골세포 기능을 억제하여 골량을 유지합니다[6]. 에스트로겐 대체 요법은 폐경 후 골다공증의 예방 및 치료에 가장 널리 사용되는 치료법입니다. 그러나 장기간의 에스트로겐 대체 요법은 자궁내막암과 유방암의 위험을 증가시킬 수 있습니다. 따라서 많은 연구자들이 부작용이 없는 새로운 항흡수제 개발에 노력을 집중하고 있다[7-10]. 파골세포는 골흡수에 관여하기 때문에 특히 파골세포를 억제하는 것은 수많은 연구에서 주요 표적으로 간주되어 왔습니다.
파골세포는 조혈전구세포의 순차적인 증식, 분화 및 융합을 통해 단핵구/대식세포 계열의 단핵 전구세포에 의해 형성된 다핵 거대 세포이다[11]. 대식세포 집락자극인자(M-CSF)와 핵인자 수용체 활성제(NF)-kB(RANK) 리간드(RANKL)는 파골세포 분화에 필수적인 인자이다[12]. 또한, 종양 괴사 인자(TNF) 및 인터루킨(IL)-1b과 같은 여러 염증성 사이토카인은 RANKL, 골프로테게린 및 M-CSF의 유도를 조절하여 파골세포 생성에 기여합니다[7,13]. 세포 표면 RANK 수용체에 대한 RANKL 결합은 c-Jun N-말단 키나제(JNK), p38을 포함한 NF-kB 및 미토겐 활성화 단백질 키나제(MAPK)를 순차적으로 활성화하는 RANKL/RANK/TNFR 관련 인자(TRAF) 복합체를 생성합니다. 키나제 및 세포외 신호 관련 키나제(ERK) [14]. 이 활성화는 파골세포 분화, 활성화 및 생존을 매개하는 데 중요한 역할을 합니다. RANKL은 또한 파골세포 발달에 필수적인 활성화된 T 세포의 핵인자, 세포질 1(NFATc1), c-Fos와 같은 전사 인자의 발현을 활성화시킨다[7,9]. 따라서, RANKL 신호전달은 파골세포 활성화 및 골 손실을 억제하는 항흡수제의 주요 표적으로 간주된다.
악티오사이드한의학에서 널리 사용되는 Rehmannia glutinosa의 주요 활성 화합물이다[15,16]. Acteoside는 강력한 항산화제이며 항간독성, 항염증 및 항통각수용 활성을 갖는다[17-20]. 우리는 이전에 acteoside가 ERK 신호 전달을 조절함으로써 티로시나제 활성과 멜라닌 생합성을 감소시키고[21], 활성 산소종(ROS) 매개 치은 손상으로부터 보호하고[22], 진균 독소 매개 세포 손상을 억제한다는 것을 발견했습니다[23]. 이러한 효과는 ROS를 제거하고 MAPK 매개 신호를 조절하는 뉴클레오사이드의 능력과 밀접하게 관련되어 있습니다. 특히, ROS는 파골세포에서 RANKL 유도 신호 경로 및 세포 이벤트를 중재하는 것으로 제안됩니다. 항산화제 전처리는 RANKL에 의한 NF-kB, ERK, IkBa 활성화를 억제하여 파골세포 생성을 억제하였다[24]. 이러한 결과는 항염증 활성에 더하여 항산화 활성이 항흡수제에 중요하므로 악테오사이드가 RANKL 유도 파골세포 생성을 억제할 수 있음을 강력하게 시사한다.
현재 연구에서 우리는 악테오사이드가 골 손실에 치료 효과가 있는지 여부를 조사했습니다. 우리는 체외 및 생체 내 실험 시스템을 사용하여 파골 세포 분화 및 골 흡수 및 관련 세포 메커니즘에 대한 acteoside의 효과를 조사했습니다.
Cistanche acteoside는 RANKL 유도 파골세포 생성을 억제합니다
재료 및 방법
윤리 선언문
동물 관리 및 사용 관행은 전북대학교 실험동물 관리 및 사용에 관한 윤리위원회의 승인을 받았습니다(허가 번호 CBU 2010-0007). 이 연구의 모든 실험은 대학의 동물 관리 및 사용 위원회의 지침에 따라 수행되었습니다.
마우스, 화학 물질 및 실험실 용품
4주령 암컷 ICR 마우스를 Orient Bio Inc.(서울, 한국)에서 구입하여 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있는 12시간 명암 주기로 2261uC 및 5565% 습도에서 수용했습니다. Acteoside(3,{6}}dihydroxy-bphenethyl-Oa-rhamnopyranosyl-(1R3){14}}O-caffeoyl-bD-glucopyranoside; C29H36O15)(그림 S1)는 Rehmannia glutinosa의 잎에서 분리되었습니다. Acteoside를 사용하기 전에 PBS(phosphate-buffered saline)에 용해시켰다. RANKL, TNF-a, IL{25}}b, IL{26}} 및 M-CSF는 R & D Systems(미국 미네소타주 미니애폴리스)에서 구입했습니다. c-Fos, p65, p-p65, p-ERK, ERK, JNK, p-JNK, NFATc1, IkBa, p-IkBa 및 b-actin에 특이적인 항체는 Santa Cruz Biotechnology(Santa Cruz, CA, USA ). p-p38 및 p38에 대한 항체는 Cell Signaling Technology(Danvers, MA, USA)에서 구입했습니다. 칼슘 분석 및 오스테오칼신(OC) EIA 키트는 각각 BioAssay Systems(Hayward, CA, USA) 및 Biomedical Technologies(Stoughton, MA, USA)에서 구입하여 혈청 생화학적 매개변수를 결정했습니다. 마우스 tartrate-resistant acid phosphatase(TRAP) 분석 키트(Immunodiagnostic Systems, Scottsdale, AZ, USA)도 혈청 TRAP5b 수준을 측정하는 데 사용되었습니다. 달리 명시되지 않는 한, 추가 화학 물질은 Sigma Chemical Co.(St. Louis, MO, USA)에서 얻었고 실험실 용품은 SPL Life Sciences(Pochun, South Korea)에서 얻었습니다.
세포 배양
이전에 설명한 방법에 따라 6주령 암컷 ICR 마우스의 경골과 대퇴골에서 골수 세포를 얻었다[25]. 골수 현탁액을 50ng/ml M-CSF의 존재하에 100-mm 배양 접시에서 배양했습니다. 3일 후, 부착 세포를 골수 대식세포(BMM)로 사용하여 파골세포 분화를 유도하였다. 일부 골수 세포는 M-CSF 없이 48시간 동안 배양되었고, 부착 세포는 다른 곳에서 설명한 대로 조골 세포 분화 배지에서 배양되었습니다[25]. RAW264.7 대식세포를 10% 소태아혈청(FBS), 2mM L-글루타민 및 항생제가 보충된 둘베코의 변형된 독수리 배지(DMEM)에서 배양하였다. 이 세포는 파골세포 형성에 대한 악테오사이드의 효과를 조사하기 위해 BMM에 대한 대응 세포주로 사용되었습니다.
파골세포 분화 및 TRAP 염색
BMM은 다양한 농도(0–50mM)로 전처리되었습니다.악티오사이드100ng/ml RANKL로 자극하기 전에 2시간 동안. 배양 배지는 2일 및 5일에 새로운 배지로 교체되었습니다. 인큐베이션 7일 후, 배양물을 4% PBS-완충 파라포름알데히드에 고정하고 제조사의 지침에 따라 Sigma Aldrich 키트를 사용하여 TRAP로 염색했습니다. TRAP 양성 세포는 광학현미경을 이용하여 계수하였고, 3개 이상의 핵을 포함하는 세포를 파골세포로 간주하였다. RAW 264.7 세포도 2시간 동안 악테오사이드로 전처리한 후 100ng/ml RANKL에 노출되었고, 배양 7일 후에 TRAP 염색을 위해 세포를 처리하였다.
세포 생존율 측정
세포 생존율은 수용성 테트라졸륨염(WST){1}} 시약을 사용하여 결정되었습니다. 간단히 말해서, 10% FBS와 항생제를 포함하는 성장 배지에서 배양된 BMM 또는 RAW264.7 세포를 10mM 악티오사이드 또는 케르세틴, 루테올린, 아피게닌 또는 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와 같은 페놀 화합물로 처리했습니다. WST-8 시약은 48시간 배양 후 배양액에 추가되었습니다. 추가로 4시간 동안 배양한 후 마이크로플레이트 판독기(Packard Instrument Co., Downers Grove, IL, USA)를 사용하여 450nm에서 WST 고유 흡광도를 측정했습니다.
골 흡수 분석
BMM(16105개 세포/ml)을 50ng/ml M-CSF 및 100ng/ml RANKL을 함유하는 a-MEM에 현탁시킨 다음 인산칼슘 나노결정(OAAS{6} }; Osteoclast Activity Assay Substrate, Oscotec Inc., Chungnam, South Korea) 26104 cells/cm2의 밀도에서 acteoside 유무에 관계없이. 7일 동안 배양한 후 세포를 5% 차아염소산나트륨으로 플레이트에서 제거하고 광학 현미경으로 구덩이 형성을 관찰했습니다. 흡수된 면적도 이미지 분석기로 측정하여 대조군 값에 대한 백분율로 표시하였다.
웨스턴 블롯 분석
전체 단백질 용해물은 다른 곳에서 설명한 대로 용해 완충액에서 준비되었습니다[26]. 세포질 및 핵 단백질은 이전에 설명한 대로 준비되었습니다[25]. 동일한 양의 단백질 추출물을 12-15% SDS-PAGE로 분리하고 폴리비닐 디플루오라이드 막에 블롯팅했습니다. 블롯은 1시간 동안 차단 완충액에서 이차 항체와 함께 인큐베이션하기 전에 4uC에서 밤새 1차 항체로 프로브되었습니다. 얼룩은
향상된 화학 발광(Amersham Pharmacia Biotech Inc., Buckinghamshire, UK)으로 개발되고 X선 필름(Eastman-Kodak Co., Rochester, NY, USA)에 노출되었습니다.
MAPK 활성 분석
세포는 다음으로 전처리되었습니다.악티오사이드2시간 동안 RANKL로 추가{1}}분 자극합니다. MAPK 활성은 p-p38 키나제 분석 키트(Assay Designs, Inc., MI, USA), p-ERK 효소 분석 키트(Assay Designs) 및 p-SAPK/JNK 샌드위치 ELISA 키트와 같은 면역 측정 분석 키트를 사용하여 결정되었습니다. (Cell Signaling Technology, MA, USA). 모든 절차는 제조업체의 지침을 따랐으며 흡광도는 마이크로플레이트 판독기로 측정했습니다.
전기 영동 이동성 변화 분석(EMSA)
DNA-단백질 결합 반응은 1mg/ml BSA, 0.5mg/ml 폴리(dI-dC), 5% 글리세롤을 포함하는 20ml 완충액에서 10-15mg 단백질을 사용하여 실온에서 3{6}}분 동안 수행되었습니다. , 1mM DTT, 1mM PMSF, 10mM Tris-Cl(pH 7.5), 50mM NaCl, 30,{18}} cpm의 [a{19}}P] dCTP 표지 올리고뉴클레오티드 및 Klenow 단편 DNA 중합효소. 샘플을 6% 폴리아크릴아미드 겔에서 분리하고 건조시키고 270℃에서 12-24시간 동안 X선 필름(Eastman Kodak Co.)에 노출시켰다. NF-kB에 특이적인 올리고뉴클레오티드 프라이머 서열은 59-AAG GCC TGT GCT CCG GGA CTT TCC CTG GCC TGG A-39 및 39-GGA CAC GAG GCC CTG AAA GGG ACC GGA CCT GGA A -59.
NF-kB 루시퍼라제 분석
24-웰 플레이트의 RAW264.7 대식세포는 제조업체의 지침에 따라 2ml의 Lipofectamine 2000(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 사용하여 0.8mg kB-luciferase 리포터 벡터로 형질감염되었습니다. 형질감염 24시간 후, 세포를 24시간 동안 악테오사이드의 존재 및 부재하에 RANKL로 자극하였다. 세포를 100 ml 리포터 용해 완충액에 재현탁시켰다
(Promega, Madison, WI, USA). 동일한 양의 단백질 샘플을 96-웰 마이크로플레이트에 넣고 루시퍼라제 기질과 혼합했습니다. 마이크로플레이트 광도계(MicroLumat Plus LB 964, Berthold Technologies, Bad Wildbad, Germany)를 사용하여 발광성을 측정하였다. 이 실험에서는 투과성 NF-kB 억제제 펩타이드(BIOMOL, Butler Pike, PA, USA)를 양성 kB 억제제로 사용하였다.
사이토카인 측정
BMM 또는 RAW264.7 세포는 24-웰 배양 플레이트에서 악테오사이드가 존재하는 RANKL로 자극되었습니다. 48시간 배양 후 배양 상층액을 수집하고 제조업체의 지침에 따라 TNF-a-, IL{6}}b- 및 IL{8}}특이 OptEIATM 키트를 사용하여 ELISA로 평가했습니다.
실시간 역전사 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)
c-Fos, NFATc1 및 TNF-a와 같은 파골 세포 마커의 mRNA 발현은 실시간 RT-PCR에 의해 결정되었습니다. 간단히 말해서, 제조업체의 지침(Invitrogen)에 따라 Trizol 시약을 사용하여 대식세포에서 총 RNA를 추출했습니다. cDNA는 SuperScript Reverse Transcriptase II 및 프라이머(Invitrogen)를 사용하여 1mg의 총 RNA로 합성되었습니다. Power SYBR Green PCR Master Mix(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)는 ABI 7500 서열 검출 시스템(Applied Biosystems)으로 사이클링 동안 PCR 산물의 축적을 검출하는 데 사용되었습니다. 95℃에서 10분간 변성시킨 후 PCR
95uC에서 15초 동안 변성, 60uC에서 1초 어닐링, 72uC에서 30초 확장의 40{0}}단계 사이클을 사용하여 수행했습니다. 모든 PCR 반응은 적어도 3회 수행되었으며 발현 수준은 동일한 반응에서 하우스키핑 유전자 HPRT에 대해 정규화되었습니다. 이 연구는 다른 곳에서 설명한 것과 동일한 프라이머 시퀀스를 사용했습니다[7].
세포내 ROS 측정
29,{1}}디클로로디히드로플루오레세인-디아세테이트(DCFH-DA)(5{11}}mM; Calbiochem, Darmstadt, Germany)의 스톡 용액을 DMSO에서 제조하고 암실에서 220uC에 보관했습니다. 간단히 말해서, BMM({7}}웰 플레이트에서 106개 세포/ml)을 50ng/ml M-CSF와 함께 24시간 동안 배양한 다음 다양한 농도(0-10mM)로 처리했습니다.악티오사이드100ng/ml RANKL로 자극하기 2시간 전. 공동 인큐베이션 1시간 후, 이들 세포를 후속적으로 30분 동안 25mM DCFH-DA와 함께 인큐베이션하였다. 29,{8}}디클로로플루오레세인(DCF)의 녹색 형광은 FACS VantageH 시스템(Becton-Dickinson, San Jose, CA, USA)을 사용하여 515nm(FL 1)에서 기록되었으며 10,{13}} 이벤트는 샘플당 계산되었습니다.
난소절제술에 의한 골다공증 유도
암컷 ICR 마우스(6주령)가 이 연구에 사용되었습니다. 마우스는 마취 하에 가짜 수술(Sham, n =10) 또는 외과적 난소 절제술(OVX, n=20)을 받았습니다. 수술 1주일 후, OVX 마우스를 무작위로 각각 10마리씩 2그룹으로 나누었습니다: 양측 OVX 및 200ml가 보충된 양측 OVX
1mM 액테오사이드를 경구로 함유하는 PBS(AC 그룹). 경구용 악테오사이드는 수술 후 8주 동안 3일에 1회 투여하였고,
동일한 양의 PBS를 Sham 및 OVX 그룹에 투여했습니다. 마지막 투여 1일 후 마우스를 희생시킨 다음 혈청의 생화학적 매개변수와 3-차원적 뼈 구조를 분석했습니다.
혈청 생화학적 매개변수의 결정
혈액 샘플은 심장 천자를 통해 수집되었고 혈청은 원심분리에 의해 수집되었습니다. 혈청 샘플은 생화학적 매개변수 분석을 위해 280uC에 보관되었습니다. IL{1}}b 및 IL{2}}의 혈청 수준은 위에서 설명한 대로 ELISA 키트를 사용하여 추정되었으며, 알칼리성 인산분해효소(ALP) 활성은 p의 양을 측정하는 생화학적 비색 분석을 사용하여 결정되었습니다. - 다른 곳에서 기술된 바와 같이 p-니트로페놀 포스페이트 기질로부터 생성된 니트로페놀 [27]. 골 형성 및 흡수의 바이오마커를 추정하기 위해 혈청 OC, 칼슘 및 TRAP5b 수준도 제조업체의 지침에 따라 결정되었습니다.
뼈 구조 및 형태학적 매개변수 분석
생쥐(Sham, OVX 및 AC 그룹)의 대퇴골을 절개하고 기계적 테스트를 위해 생리 식염수로 채웠습니다. 대퇴골의 기계적 강도는 다른 곳에서 설명한 대로 측정되었습니다[28]. 골절하중은 우측 대퇴골의 중간축이 골절되는 지점에서 최대 힘(뉴턴)으로 기록하였다. 또한, 각 동물의 가벼운 대퇴골은 마이크로컴퓨터단층촬영(micro-CT) 시스템(SkyScan 1076 microfocus X-ray system, Kontich, Belgium)을 이용하여 조직형태학적으로 분석하였다. 간단히 말해서, 4% 포름알데히드 저장소에 보관된 뼈는 스캔 중 건조를 방지하기 위해 플라스틱 '클링 필름' 또는 파라필름으로 포장되기 전에 종이 티슈에서 표면적으로 건조되었습니다. 플라스틱으로 감싼 각 뼈를 1076 스캐너 샘플 챔버에 수직으로 수평으로 장착된 플라스틱/폴리스티렌 폼 튜브에 넣었습니다.
마이크로 CT 영상. 35mm 분해능으로 100kV 소스 전압 및 140mA 소스 전류를 사용하여 스캔을 수행했습니다.
대퇴골 소주골의 3차원 모델은 SkyScan CT Analyzer 버전 1.11을 사용하여 재구성되었습니다. 소주 골밀도(BMD, g/cm3), 골 부피 백분율(뼈 부피(BV)/조직 부피(TV), 백분율), 두께(Tb.Th, mm), 분리(Tb.Sp)와 같은 구조적 매개변수 , mm) 및 개수(Tb.N, 1/mm)를 측정했습니다.
골형성 분화 및 광물화 분석 {{{{1{26}}}}}웰 배양 플레이트에서 배양된 골수 세포를 DAG(10 nM 덱사메타손, 50 mM 아스코르브산 및 20 mM b-글리세로포스페이트)로 처리 10mM 악테오사이드의 존재. 분화 2주 후, 세포를 얼음처럼 차가운 70%(vol/vol) 에탄올로 1시간 동안 고정하고, 실온에서 30분 동안 증류수에 0.2% alizarin red S로 염색하였다. 세포를 탈색시키고 공기 건조시킨 후, 세포 배양 플레이트를 도립현미경(Nikon TS100, Japan)을 사용하여 광학현미경으로 평가하였다. 적색 염료의 양을 정량화하기 위해 10% 아세틸 피리디늄 클로라이드로 20분 동안 진탕하여 염색액을 용출시키고 560 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포층에 침착된 칼슘의 양은 제조업체의 지침에 따라 칼슘 C 키트(Wako Chemical Inc. Osaka, Japan)를 사용하여 측정되었습니다. 또한 runt-related transcription factor{20}}(Runx2), osterix, BSP(bone sialoprotein) 및 OC와 같은 뼈 특이적 mRNA 마커의 발현은 실시간 RT-PCR에 의해 결정되었습니다. 이러한 마커의 올리고뉴클레오티드 프라이머는 다른 곳에서 설명한 대로 Primer Express Software 3.0(Applied Biosystems)을 사용하여 200bp 미만의 제품 크기로 설계되었습니다[27].
cistanche acteoside는 뼈 형성을 촉진합니다.
결과
Acteoside는 용량 의존적 방식으로 대식세포에 의한 파골세포 형성을 억제합니다
파골세포로의 BMM 분화에 대한 악테오사이드의 효과를 확인하기 위해 50ng/ml M-CSF 및 100ng/ml 존재하에서 세포를 다양한 농도(0-20mM)의 악테오사이드로 7일 동안 배양했습니다. 랭클. Acteoside는 용량 의존적으로 파골세포의 수를 감소시켰습니다. 세포를 10mM 악테오사이드로 2시간 동안 전처리한 경우, 파골세포 수는 M-CSF 및 RANKL이 보충된 세포에 비해 43% 감소하였다(도 1A). 도 1B는 RANKL 매개 파골세포 분화 및 악테오사이드 병용 처리에 의한 억제를 나타낸다. 이 결과와 일치하게, 악테오사이드 전처리는 RAW264.7 세포의 RANKL 자극 분화 및 파골세포 형성을 감소시켰다(도 1C 및 D). BMM에 대한 acteoside의 항파골세포 전위를 동일한 농도(10mM)에서 여러 페놀계 화합물의 항파골세포 전위와 비교했을 때 루테올린이 가장 높은 활성을 나타냈다(그림 2A). 그러나 루테올린, 케르세틴 또는 아피제닌 자체는 세포의 생존력을 감소시켰다(그림 2B). 모든 화합물은 RAW264.7 대식세포에 의한 파골세포 분화를 다음과 같은 상대 활성으로 억제했습니다: 루테올린. 케르세틴=아피게닌 .
Cistanche acteoside는 파골세포를 억제합니다.