Cistanche Tubulosa 추출물 적용 후 Echinacoside 및 Acteoside의 Phloridzin 민감성 수송 및 변경된 장 흡수 경로

자세한 정보:ali.ma@wecistanche.com

타니노 타다토시 외

추상목표

이 연구의 목적은 유익한 효과를 다루는 것이었습니다.Cistanche tubulosa 추출물에키나코사이드(ECH) 및 액테오사이드(ACT)의 낮은 장 투과성을 개선합니다.

행동 양식

ECH와 ACT의 흡수Cistanche tubulosa 추출물손상되지 않은 화합물이 있는 인간 장 Caco{0}} 세포 단층을 사용하여 특성화되었습니다. ECH 및 ACT의 포도당수송체 의존적 흡수는 장내 관류 기술에 의해 확인되었습니다.

중요한 발견들

겉보기 투과성(Papp)은 손상되지 않은 ECH와 손상되지 않은 ACT 간에 유의한 차이가 없었습니다. 플로리진이 있는 경우 고용량에서 ECH 및 ACT의 Papp은 각각의 비치료의 20%로 감소했지만 플로레틴과 베라파밀에 의해 변경되지는 않았습니다.Cistanche tubulosa 추출물저용량 및 고용량에서 ECH 및 ACT의 Papp이 향상되어(둘 다 3배) 나트륨 의존성 포도당 수송체-독립적 흡수에 크게 참여합니다. 낮은 농도에서 문맥혈의 동시 ECH 및 ACT 수준은 플로리진에 의해 유의하게 억제되었습니다.

결론

식이요법과 약Cistanche tubulosa 추출물ECH와 ACT의 장 흡수를 향상시키는 것은 인간의 건강을 더 잘 관리하는 데 도움이 될 수 있지만 플로리진에 민감한 수송의 관여는 감소되어야 합니다.

키워드악티오사이드; Caco{0}} 세포 단층;시탄케투불로사 추출물; 에키나코사이드;플로리진에 민감한 포도당 수송체

Cistanche tubulosa 추출물

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소개

Cistanche tubulosa의 뿌리는 전통적으로 약과 음식에 사용되었습니다.Cistanche tubulosa 추출물다양한 뇌질환, 노화방지, 지방대사, 모발성장에 약리효과가 있는 것으로 알려져 있다.[1-4]최근 이리도이드, 모노테르페노이드, 페닐에타노이드글리코사이드, 리그난 등이시스탄체 튜불로사.[5,6] 폴리페놀 화합물의 한 종류인 페닐에타노이드 배당체(Phenyletanoid glycosides)는 종에 따라 양이 다르지만[7] Cistanche 종의 주요 화학 성분입니다. Echinacoside(ECH; 그림 1)는 HerbaCistanchis의 주요 페닐에타노이드 배당체 중 하나입니다. 대장에서 박테리아 기원의 효소에 의해 악테오사이드(ACT, 베르바스코사이드라고도 함)로 가수분해됩니다.[8,9] ECH와 ACT는 설치류 동물에서 간 보호[10] 및 항염[11]의 유익한 활성을 가지고 있습니다. 놀랍게도 높은 수용성 ECH는 파킨슨병 마우스 모델에서 행동 및 신경화학적 결과를 개선하고 소뇌 과립 뉴런에서 카스파제 및 카스파제 활성화를 억제했습니다.[9] 혈액뇌장벽이 혈액에서 뇌로의 생체이물 유입 및 분포를 엄격하게 제한한다는 것은 잘 알려져 있습니다. Wu et al.[12] 또한 수용성 ACT가 쥐의 뇌 조직에 빠르게 분포한다는 것을 보여주었다. 따라서 ECH 및 ACT는 특정 시스템에 의해 뇌, 내장 및 간으로 수송될 수 있습니다.

의 소비를 시사하는 강력한 증거가 있음에도 불구하고Cistanche tubulosa 추출물8.4 ± 1.6 ug/ml의 정점 농도에서 Caco{0}} 세포 단층을 가로지르는 순수한 ECH의 투과성은 세포주위 ​​수송 마커만니톨의 투과성과 같거나 그 이하입니다.[13] 순수 ECH를 쥐에게 경구 투여했을 때(용량, 1{{10}}0 mg/kg), 흡수가 매우 빠르고(Tmax,15 min), 최대 혈청 농도가 매우 낮음 (Cmax, 0.61 ± 0.32ug/ml).[14] ECH의 절대 생체이용률은 0.83%에 불과합니다. 유사하게, Caco{15}} 세포가 올리브 공장 폐수에서 부분적으로 정제된 페놀성 분획과 함께 배양될 때 순수한 ACT 흡수는 3분 후에 발생하는 피크 축적과 0.1%의 총 축적 효율로 빠르게 세포내 수준을 제공합니다. pmol/mg 세포 단백질.[15] 쥐에서 순수 ACT의 최대 농도(0.13 ± 0.03 ug/ml)는 100 mg/kg을 경구 투여한 후 30분 이내에 도달했으며[12] 이는 빠른 장 흡수를 의미합니다. ECH뿐만 아니라 ACT의 경구 생체이용률은 상당히 낮아(0.12 ± 0.04%) 장관과 간에 초회통과 효과의 가능성을 시사합니다. 쥐의 담즙에서 ECH의 메틸화 및 글루쿠로나이드화 접합체가 주요 대사산물이지만[16], 간 대사의 정도는 아직 불분명합니다. 우리는 ECH와 ACT가 쥐의 장 점막과 인공 위산의 균질물에서 상당히 안정적이라는 것을 미리 발견했습니다(데이터는 표시되지 않음). Najar et al.[17] ACT는 P-gp 조절제를 암시하는 베라파밀(대표적인 P-gp 억제제)과 유사한 방식으로 P-당단백질(P-gp)-ATPase 활성을 억제한다는 것을 입증했습니다. 그러나 ACT가 P-gp 기질로 사용 가능한지는 확실하지 않습니다. 흥미롭게도 식이 플라보노이드-D-글루코사이드의 최근 발견은 다제 내성 단백질(MRP2)이 나트륨 의존성 포도당 수송체(SGLT) 매개된 케르세틴 4'-O{48}}포도당 흡수를 가리는 것으로 나타났습니다.[18 ,19] 흡수율이 매우 낮습니다. 그러나 포도당 운반체를 포함한 흡수성 운반체에 대한 폴리페놀 글루코사이드의 민감도에 대해서는 알려진 바가 거의 없습니다. 케르세틴 4'-글루코사이드 및 빠르게 혈액뇌장벽 투과성 ECH의 흡수 특성에 대한 정보는 식이 C에서 페닐에타노이드 글리코사이드의 운반체 민감성 흡수를 조사하게 했습니다. 세뇨관.

이 연구에서 우리는 인간의 장 Caco{1}} 세포 단층을 사용하여 온전한 ECH와 ACT의 포도당 전달체 매개 흡수를 조사했습니다. 동시에 ECH와 ACT의 흡수 수송Cistanche tubulosa 추출물간 첫 번째 통과 처리의 흡수 범위와 회피 사이를 쉽게 구별할 수 있는 문맥혈 샘플링이 있는 체외 모델 및 제자리 장 관류 시스템이 특징입니다.

재료 및 방법

재료

Intact ECH와 ACT는 EishinTrading Co., Ltd(일본 오사카)로부터 관대한 선물이었습니다. 플로리진 및 플로레틴은 Tokyo Kasei Co., Ltd.(Tokyo, Japan)에서 구입했습니다. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석을 위한 내부 표준으로 사용되는 Verapamil 및 p-coumaric acid는 Sigma-Aldrich(St Louis, MO)에서 구입했습니다. ,미국). 사용된 다른 모든 화학 물질은 분석 등급이었고 상업적으로 이용 가능했습니다.

식물 재료 및 에탄올 추출물의 제조

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)는 Salvadoraor Calotropis 종의 뿌리에서 자라는 다년생 기생 식물로 북아프리카, 아라비아 및 아시아 국가에 분포합니다. C. tubulosa의 말린 줄기를 분말화하고 3시간 동안 환류하에 메탄올로 3회 추출하였다. 감압하에 용매를 증발시켜 메탄올 추출물을 얻었다. 메탄올 추출물(상업 등급, 배치 번호 20070130, 등록 상표명, Sabaku Ninnjinn Kanka)은 Eishin Trading Co., Ltd에서 Muraoka and Morikawa(Kinki University, Japan)를 통해 관대하게 선물했으며 식물 식별은 Jia Xiaoguang 교수가 수행했습니다. Xinjiang Institute of Chinese and Ethnologic Medicines.

식물 추출물 분석: 크로마토그래피

우리는 ECH 및 ACT 내용을Cistanche tubulosa 추출물(Batch No. 20070130) 하기 기술된 HPLC 분석에 의해. 얻어진 데이터를 표 1에 나타내었다.

세포 배양

American Type CultureCollection(ATCC, Rockville, MD, USA)에서 구입한 Caco{0}} 세포를 계대 38-53에서 사용했습니다. 이들은 0.1mM 비필수 아미노산, 10% 열 비활성화 소 태아 혈청, 100%가 보충된 Dulbecco의 변형된 Eagle 배지(DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japan)로 구성된 배양 배지에서 성장했습니다. U/ml 페니실린 G, 및 0.1 mg/ml 스트렙토마이신 설페이트.

운송 연구

Caco{0}} 세포는 폴리카보네이트 필터에 6.4 × 103 cells/cm2의 밀도로 도금되었습니다. 단층은 파종 후 21-25일에 수송 실험에 사용되었습니다. 의 내용에 해당하는 온전한 ECH 및 ACTCistanche tubulosa 추출물 (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300Ω·cm2.

에키나코사이드Cistanche tubulosa 추출물

원위치 장 관류

수컷 Wistar 쥐(230-250g)는 SLCJapan(Hamamatsu, Japan)에서 구입했습니다. 동물을 사용 전 1주일 동안 12시간 명암 주기로 에어컨이 설치된 방에 수용했습니다. 래트에게 표준 실험용 식품(Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japan)을 임의로 물을 공급하고 시험 전에 밤새 금식시켰다. 제자리 순환 관류 연구는 Mihara 등의 수정된 절차에 따라 수행되었습니다.[20]간단히, 쥐는 혈압 감소를 피하기 위해 25% 우레탄 용액(1 mg/kg)으로 마취되었습니다. 복부 정중 절개를 하고 소장을 노출시켰다. 담관은 관류액으로의 담즙 분비를 피하기 위해 결찰되었습니다. 소장 전체(십이지장에서 회장까지)를 생리식염수로 37도에서 10분 동안 세척액이 깨끗해질 때까지 세척했습니다. 그런 다음 실리콘 튜브에 연결된 유리 튜브를 소장의 양쪽 끝에 캐뉼러로 삽입하고 봉합사로 고정했습니다. 그런 다음 복부에서 소장을 교체하고 캐뉼러를 연동 펌프에 연결했습니다. 문맥은 폴리에틸렌 튜빙(PE10)으로 삽관되었습니다.Cistanche tubulosa 추출물시중에서 구할 수 있는 Krebs-Henseleit bicarbonate buffer(pH 7.4)에 현탁하여 최종 농도가 4.5mg/ml이 되도록 하고 8{11}}00rpm에서 1{8}}분 동안 원심분리하여 불용성 성분을 제거했습니다. 플로리진(1mM)의 부재 또는 존재 하에 상청액을 저장소에 회수하였고, 이는 실험 과정 동안 37 ± 0.5도의 온도로 유지되었다. 표시된 시간에 문맥 캐뉼러를 통해 혈액을 채취했습니다. 혈액샘플을 원심분리한 후, 내부 표준물질을 함유한 아세토니트릴로 혈장을 탈단백질하고 3000rpm에서 원심분리하였다. 상층액을 증발시키고 잔류물을 아세토니트릴 및 0.5% 아세트산으로 구성된 이동상으로 분리하였다. 혼합 용액을 HPLC 컬럼에 적하하였다. 쥐는 일본 정부와 Kinki University에서 발행한 실험 동물의 관리 및 사용 지침에 따라 윤리적 절차에 따라 사용되었습니다.

HPLC 분석

HPLC 분석은 aShimadzu SPD{{0}}A, UV 검출기, Shimadzu LC{1}}A 펌프 및 Shimadzu C-R4A chromatopac integrator(Kyoto, Japan)가 장착된 시스템에서 수행되었습니다. ECH와 ACT는 Inertsil ODScolumn(5 μm, 4.6 × 15{13}} mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japan)을 사용하여 분리되었습니다. 15:85(v/v)의 비율로 아세토니트릴과 0.5% 아세트산의 이동상을 1.0ml/min의 유속으로 사용하였다. 검출은 334 nm에서 수행되었습니다.

운동 분석

겉보기 투과성 계수(Papp)는 Caco{0}} 세포 단층을 가로지르는 시간 경과에 따른 화합물 수송의 선형 부분의 기울기로부터 다음과 같이 추정되었습니다. P dQ dt AC app=( ) ( )

여기서 dQ/dt는 투과율, C{0}}는 도너 챔버 내 용질의 초기 농도, A는 멤브레인의 표면적(4.7cm2)입니다.

쥐의 in-situ 장 관류 연구에서 시간 0부터 마지막으로 측정된 문맥 정맥의 혈장 농도-시간 곡선 아래 면적(AUC{2}}-90)은 선형 사다리꼴 규칙에 따라 계산되었습니다.

액티오사이드Cistanche tubulosa 추출물

물리화학적 성질

화합물의 극성 표면적 및 비극성 표면적은 프로그램 SAS(버전 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , 노스캐롤라이나, 미국). 실험적으로 결정된 log P 및 pKa 값은 문헌에서 얻었습니다.

통계 분석

데이터는 Tukey의 사후 테스트가 뒤따르는 분산의 일원 분석으로 분석되었습니다. 5% 미만의 확률 값은 유의미한 것으로 간주되었습니다.

결과

Caco{0}} 세포 단층을 통한 에키나코사이드 및 액테오사이드의 흡수 수송

생쥐와 쥐에서 온전한 ECH[10,14]와 ACT[12,21]는 100-1000 mg/kg의 용량으로 경구 투여됩니다. 그만큼Cistanche tubulosa 추출물복용량당 약 3{14}}%의 ECH와 15%의 ACT가 사용되었습니다. 추출물은 배양 배지에서 삼투압과 pH를 변화시키기 때문에 경구 투여량을 기준으로 4.5 및 13.5 mg/ml의 농도를 결정했습니다(온전한 화합물: 2–20 mg/2{{2{31} }}} g 체중). 저용량(4.5mg/ml) 및 고용량(13.5mg/ml)의 추출물은 ECH에 대해 2.{33}} 및 1.{35}} 및 3.{39}} mg forACT 각각. 우리는 인간에서 보고된 ECH 및 ACT의 경구 투여량보다 훨씬 적은 C. tubulosa 추출물 양을 적용했습니다(추출물의 권장 식이 허용량: 15{41}} mg(ECH의 경우 약 45mg, ACT의 경우 22.5mg 포함). 저용량 및 고용량의 온전한 화합물에서 흡수 프로파일(그림 2)과 Papp은 ECH 등가물로서 ECH와 ACT 간에 크게 다르지 않았습니다(표 2). C. tubulosa 추출물을 13.5 mg/ml의 고용량으로 배지에 넣었을 때 Pappvalues(각각 1.27 ± 0.13 및 0.34 ± 0.03 × 10-6 cm/s) ECH 및 ACT 동시 사용의 비율은 손상되지 않은 ECH 및 ACT의 것(각각 0.38 ± 0.09 및 0.10 ± 0.03 x 10-6 cm/s)보다 3배 더 높았습니다(표 2). 추출물은 손상되지 않은 화합물과 달리 ECH와 ACT의 흡수 수송을 크게 향상시켰습니다.

플로리진, 플로레틴 및 베라파밀의 억제 효과

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3mM)의 플로레틴은 현저한 세포 독성 때문에 사용할 수 없습니다. 또한, P-gp는 약초와 임상적으로 중요한 P-gp기질 간의 상호작용을 담당하는 중요한 역할을 하는 것으로 확인되었습니다. Verapamil은 손상되지 않은 화합물의 흡수성 수송을 향상시키지 않았습니다(그림 3).

추출물(저용량)에서 ECH와 ACT의 흡수 수송은 phloridzin에 의해 유의하게 억제되었습니다(표 2 및 그림 4). 비록 온전한 ECH와 ACT의 수송이 플로리진에 더 민감했지만 고용량의 추출물은 플로리진-민감성 억제를 억제하였다(표 2).

현장 장 관류 연구

현장 연구에서 우리는 ECH와 ACT가Cistanche tubulosa 추출물소장의 정점 측에 위치한 SGLT1에 의해 수송되었다. 저용량(4.5 mg/ml)의 식이추출물을 관류했을 때, ECH와 ACT가 문맥혈에 빠르게 나타났습니다(그림 5). AUC는 ECH의 경우 2702.8 ± 384.1 μm·min, ACT의 경우 698.3 ± 197.2 μm·min으로 결정되었습니다. AUC가 다음의 내용으로 정규화된 후Cistanche tubulosa 추출물, 흡수량은 ECH와 ACT 간에 유의한 차이가 없었다. SGLT{0}}민감한 플로리진은 플로레틴과 달리 동시 ECH(AUC, 649.4 ± 248.2 μm·min) 및 ACT(검출되지 않음)의 흡수 수송을 유의하게 억제했습니다.

논의

일부 허브 성분은 간, 장, 뇌 및 신장에서 고도로 발현되는 P-gp의 기질입니다. P-gp는 St John'swort, curcumin, echinacea, 인삼, 은행나무, 생강을 포함한 약초 요법의 생체 내 생체 이용률, 처분 및 분포를 결정하는 요소입니다.[22,23]제니스테인의 생체 이용률{{5} } 플라보노이드 유도체인 글루코사이드는 또한 장내 MRP2 수송체에 의해 제한되었습니다.[24] 따라서 이 연구는 ECH와 ACT를 병용하는 식이 및 의약의 흡수 특성을 조사하기 위해 고안되었습니다.Cistanche tubulosa 추출물.

Polarized Caco{0}} 세포 단층과 장[25]은 P-gp, MRP 및 유방암 저항성 단백질과 같은 주요 장 약물 유출 수송체를 발현합니다.[26]식이 플라보노이드. 케르세틴[27]과 미리세틴[28]의 활성은 세포주와 동물 모델 모두에서 P-gp 매개 유출을 억제하는 것으로 나타났습니다. P-gp 억제제인 ​​Verapamil은 Caco{9}} 세포 단층에서 ACT 및 ECH의 투과성을 변경하지 않았으며(그림 3), 이는 온전한 ECH 및 ACT가 P-gp 유출 펌프에 의해 제한되지 않음을 나타냅니다. 우리의 이전 연구에서는 MRP2 단백질이 Caco{13}} 세포 단층에서 발현되지 않는 것으로 나타났습니다.[29] P-gp 및 MRP 매개 유출은 ECH 및 ACT 전송에서 제외될 수 있습니다. 친유성이 낮은 케르세틴의 일부 배당체는 케르세틴 자체보다 더 효율적으로 흡수되었습니다.[30] 당 부분이 있는 ACT가 뇌 조직에 빠르게 분포한다는 점에 주목하는 것도 중요합니다. 우리의 관심은 두 개의 포도당 수송체 inenterocytes의 결합된 작용에 집중되었습니다: 브러시 테두리 막의 SGLT 및 기저외측 막의 촉진된 확산 포도당 수송(GLUT). Caco{19}} 세포 배양은 플로레틴에 민감한 GLUT2, 플로리진에 민감한 SGLT1 및 2 수송체를 연구하기 위한 모델로 사용할 수 있습니다.[31–34]포도당은 정점에서 Caco{27}} 단층의 기저외측으로 수송됩니다. Pappof 36.8 ± 1.1×10−6 cm/s의 높은 속도로.[35] 그것은 세포간 수송 마커인 propranolol(23.4 ± 2.8 × 10-6 cm/s)보다 더 높은 Papp을 가지고 있습니다. 표 2에 나타난 바와 같이, 손상되지 않은 ECH 및 ACT는 글루코스 및 수동 프로프라놀롤에서 보고된 것보다 훨씬 낮은 Papp을 가졌다. 우리는 분배 계수(옥탄올-물)의 로그를 계산했는데, log P는 ECH와 ACT에 대해 각각 -2.32와 0.077로 계산되었습니다. 극성 친수성 화합물은 세포주위 ​​경로(밀접한 접합을 가로질러)를 통해 수송되는 것으로 믿어집니다. 만니톨과 같은 2개의 페닐에타노이드 배당체는 세포주위 ​​경로를 통해 운반되는 것으로 보입니다. 그러나 phloridzin은 온전한 ECH와 ACT의 흡수 투과성을 극적으로 감소시켰으며(표 2), 이는 apicalSGLT1이 온전한 ECH와 ACT의 장 흡수에 중요한 역할을 함을 시사합니다. 등가선량에서 더 높은 소수성 ACT 투과성은 ECH 투과성에 가깝습니다(그림 2 및 표 2). Yoshikawa et al.[36] 촉진 수송체(GLUT 1 및 2)와 플로리진에 민감한 SGLT1이 소장에서 집중적으로 발현된다는 것이 입증되었습니다. 화합물의 흡수량은 흡수와 제거 사이의 질량 균형을 기반으로 하므로 GLUT2의 참여를 평가했습니다. 포도당은 높은 친화력과 낮은 용량으로 SGLT1에 의해 장세포의 정점 막을 가로지르고 낮은 친화력과 높은 용량으로 GLUT2를 통해 기저외측 막을 가로질러 빠져나간다. Phloretin(GLUT2의 특정 억제제)은 손상되지 않은 ECH 및 ACT의 수송을 폐지하지 않았습니다(그림 3). Funes et al.[37] ACT는 인지질 막의 인산염 그룹과 강하게 상호 작용한다는 것을 보여주었습니다. ACT 구조에는 하이드록실 그룹이 풍부하기 때문에 이러한 그룹과 인지질의 글리세롤 극성 헤드 또는 포스페이트 그룹 사이의 수소 결합이 가장 가능성 있는 상호 작용입니다. 온전한 ECH 및 이에 상응하는 ACT를 Caco{62}} 단층과 함께 11시간 동안 배양했을 때 ACT의 세포 축적(0.24 ± 0.04nmol/cm2)은 ECH(0.07 ± 0.01nmol/cm2)의 세포 축적보다 3배 더 컸습니다. 우리는 SGLT{74}}민감한 ECH와 ACT가 장세포에서 혈류로 천천히 이동하여 lowPapp이 관찰될 수 있다고 생각했습니다. 높은 친수성 ECH와 비교하여 ACT의 낮은 투과성은 세포막에 삽입되기 때문일 수 있습니다.

Cistanche tubulosa 추출물

폴리페놀 화합물은 임상 적용 중에 허브 혼합물로 소비되며 식이 보충제로 상업적으로 이용 가능합니다. 체외 연구에서 페놀릭 에피카테킨의 흡수는 음료 식품 재료의 성분 조성에 영향을 받지 않는 것으로 나타났습니다.[38] 대조적으로, Hypericum perforatumL. 제품 매트릭스는 기질 식물화학적 구성 및 수송 특성, 즉 세포주위 ​​전달 및 운반체 매개 또는 활성 수송의 차이로 인해 Caco-2 세포를 가로질러 케르세틴글루코사이드(루틴 및 이소퀘르시트린) 및 과오사이드의 수송에 영향을 미칩니다.[39] 이 연구에서 C. tubulosa는 온전한 ECH 및 ACT보다 3배 더 높은 경상피 수송을 제공했습니다(그림 2 및 표 2). 우리는 구성 요소가Cistanche tubulosa 추출물플로리진-민감수송체를 활성화하고/하거나 세포내ECH 및 ACT의 제거를 가속화합니다.Cistanche tubulosa 추출물고용량에서 플로리진에 민감한 수송의 효능을 크게 가리는 것 같았습니다(표 2). 식이 탄수화물[40]과 단백질[41]은 위장관에서 일부 폴리페놀과 상호작용합니다. Morikawa et al.[10] 5개의 이리도이드인 kankanosides AD와 kankanol, monoterpene glycoside, kankanoside E, 2개의 phenylethanoid oligoglycosides, kankanosides F와 G, 그리고 아실화 올리고당인 kankanose가Cistanche tubulosa 추출물

현재 사용. 단백질을 비롯한 기타 성분은Cistanche tubulosa 추출물, 불분명하다. 위의 추측과 함께 다른 구성 요소가 SGLT1과 상호 작용하고 ECH 및 ACT의 흡수를 억제하는지 여부를 조사하도록 설계되었습니다.

생체 내 실험은 간을 통한 초회 통과 성향의 흡수 정도와 회피를 쉽게 구별할 수 없습니다. In-situ 장 관류 모델은 실험 매개변수를 쉽게 제어하고 다른 기관의 영향을 배제하고 장 혈액 공급을 그대로 유지하기 때문에 in-vivo 및 in-vitro 모델에 비해 이점이 있습니다.[22] phloridzin에 민감한 포도당 수송체의 관여는 장내 관류 시스템에서 평가되었습니다. 그림 5에서 볼 수 있듯이 ECH 및 ACT 동시 흡수량Cistanche tubulosa 추출물 (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10-6 cm/s는 사람에게 완전히 흡수되는 반면, 잘 흡수되지 않는 약물과 펩타이드(<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10-6 cm/s(표 2)는 동물과 인간에서 높은 경구 생체이용률을 나타냅니다. Crespy et al.[43] In-situ 장 관류 연구에서 유출이 플로리진과 플로레틴 간에 유의하게 다르지 않다는 것을 입증했습니다. 그들은 또한 SGLT1에 높은 감수성을 가진 플로리진의 경구 생체이용률이 쥐에서 10%에 불과하다는 것을 보여주었습니다. 향후 연구에서는 고용량의 식이 추출물을 경구 투여한 후 ECH 병용물의 생체이용률과 간 초회통과 효과를 평가할 필요가 있습니다. 현장 결과는 다음의 섭취를 의미합니다.Cistanche tubulosa 추출물온전한 ECH 및 ACT의 낮은 경구 흡수를 개선할 수 있습니다.

결론

식이요법과 약Cistanche tubulosa 추출물ECH와 ACT의 장 흡수를 향상시키는 것은 인간의 건강을 더 잘 관리하는 데 도움이 될 수 있지만, 플로리진에 민감한 수송의 관여는 감소되어야 합니다.

선언

이해 충돌

작성자는 공개할 이해 상충이 없음을 선언합니다.

자금 조달

이 작업은 Kinki University의 High-Tech ResearchCenter에서 부분적으로 지원되었습니다.

감사의 말

저자는 Osamu Muraoka(Kinki University, 일본 오사카)와 Toshio Morikawa(Kinki University, 일본 오사카)에게 감사의 말을 전합니다.Cistanche tubulosa 추출물그리고 순수한 성분. 연구 지원에 대해 Masahiro Iwaki(Kinki University)에게 깊은 감사를 드립니다.

Cistanche tubulosa 추출물제품

From: ' 에키나코사이드 및 액테오사이드의 플로리진-민감성 수송 및 이 약 적용 후 장 흡수 경로 변경Cistanche tubulosa 추출물' 에 의해타니노 타다토시 외

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, pp. 1457–1465,SGLT1에 의해 운반되는 페닐에타노이드 글루코사이드

참고문헌

1. Tanaka J et al. 의 효과Cistanche tubulosa 추출물다양한 뇌질환에 대해 음식 스타일 21 2008; 12:24~26.

2. Tanaka J et al. 안티에이징 기능Cistanche tubulosa 추출물. 음식 스타일 21 2008; 12:27~29.
3. Tanaka J et al. 미용 및 모발 성장 기능Cistanche tubulosa 추출물. 음식 스타일 21 2008; 12:29~32.
4. Tanaka J et al. 지방대사 효과Cistanche tubulosa 추출물. 음식 스타일 21 2008; 12:30~33.
5. Yoshizawa F et al. Cistanche tubulosa Schrenk (Hook) f.II. 새로운 페닐에타노이드 배당체와 새로운 네오리그난 배당체의 분리 및 구조 Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927-1930.
6. Yoshikawa M et al. Cistanche tubulosa의 혈관이완 활성이 있는 페닐에타노이드 올리고글리코사이드 및 아실화 올리고당. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF 외. RP-HPLC에 의한 Herba cistances의 페닐에타노이드 배당체 분석. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L et al. 개의 위장에서 Herba cistanches의 페닐에타노이드 배당체의 대사 조절. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432–435.
9. Geng X et al. 파킨슨 병의 마우스 MPTP 모델에서 echinacoside의 신경 보호 효과. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T et al. 사막 식물 Cistanche tubulosa에서 간 보호 활성을 갖는 Acylated phenylethanoid oligoglycosides. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882-1890.
11. Paola RD et al. 치주염의 설치류 모델에서 syringa Vulgaris 식물 세포 배양에 의해 생명공학적으로 정제된 verbascoside의 효과. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. 우 YT 외. LC-MS/MS를 사용한 Cistanche Deserticola 및 Boschniakia rossica의 악테오사이드 측정 및 자유롭게 움직이는 쥐의 약동학. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A et al. caco{1}} 세포 단층 모델을 사용한 에키네시아의 알킬아미드 및 카페인산 접합체의 투과성 연구. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7-13.
14. Jia C et al. 자외선 검출을 이용한 역상 고성능 액체 크로마토그래피에 의한 쥐 혈청의 에키나코사이드 측정 및 약동학 및 생체이용률에 대한 적용. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A et al. 올리브 제분소 물에서 추출한 버바스코사이드: 시험관 내 소화/카코{1}} 모델 시스템을 사용한 생체 접근성 및 장 흡수 평가. J 식품 과학 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C et al. 쥐에서 좋은 항산화제인 echinacoside의 대사: 담즙 대사 산물의 분리 및 식별. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431-438.
17. Najar IA et al. 일부 식물 성분에 의한 P-당단백질 ATPase 활성의 조절. Phytother 해상도 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA et al. 식이 플라보노이드 케르세틴 4'-베타-글루코시드가 인간의 장내 caco{4}} 세포 단층을 가로지르는 정점 다약제 내성 관련 단백질-2에 의한 유출. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA et al. 나트륨 의존성 포도당 수송체 SGLT1에 의한 식이 플라보노이드 케르세틴 4'-베타-글루코시다아제의 세포 흡수. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K et al. 쥐에서 에페리손의 장 1차 통과 대사. Pharm Res 2001; 18: 1131-1137.
21. Isacchi B et al. 두 가지 신경병증성 통증 모델에서 Verbascoside의 항통각과민 활성. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601.

22. Cook TJ et al. 쥐에서 단일 통과 장 관류 방법을 사용한 클로르피리포스의 장 투과성. 독성학 2003; 184: 125–133.

23. Kumar YS et al. P-당단백질 및 시토크롬 P-450-매개 약초 상호작용. 약물 대사 약물 상호 작용 2010; 25: 3-16.
24. Walle UK et al. 인간의 장 CACO-2 세포에 의한 제니스테인-7-글루코사이드 수송: MRP2의 잠재적 역할. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45-56.
25. Ito K et al. 약물 수송체의 정점/기저외측 표면 발현 및 벡터 약물 수송에서의 역할. Pharm Res 2005; 22: 1559-1577.
26. Laitinen L et al. 장 흡수 평가에서 Caco{1}} 세포 배양: 생물학적 매트릭스에서 일부 병용 약물 및 천연 화합물의 효과. (University of Helsinki, Finland, 2006) 학술 논문, pp. 1–66.
27. Scambia G et al. 케르세틴은 다제내성 MCF{2}} 인간 유방암 세포주에서 아드리아마이신의 효과를 강화합니다: 가능한 표적으로서 P-당단백질. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH et al. 쥐에서 항산화제인 미리세틴이 losartan과 활성 대사산물인 EXP-3174의 약동학에 미치는 영향: 사이토크롬 P450 3A4, 사이토크롬 P450 2C9 및 P-의 가능한 역할 미리세틴에 의한 당단백질 억제. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T et al. 파클리탁셀-2'-에틸카보네이트 전구약물은 P-당단백질 매개 세포 유출을 우회하여 약물 세포독성을 증가시킬 수 있습니다. 제약 해상도 2007; 24: 555-565.
30. Hollman PC et al. 건강한 회장루 지원자에서 식이 케르세틴 배당체와 케르세틴의 흡수. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276-1282.
31. Kellett GL et al. 장내 포도당 흡수의 확산 성분은 포도당에 의해 유도된 GLUT2의 브러시 보드 막으로의 동원에 의해 매개됩니다. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Matter K et al. 내인성 형질막 단백질의 분류는 배양된 인간 장 상피 세포(Caco-2)의 두 부위에서 발생합니다. 셀 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et al. 세포 성장 및 포도당 소비와 관련하여 Caco{6}} 세포 클론에서 SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 및 GLUT5 육탄당 수송체 mRNA의 존재 및 차등 발현. Biochem J 1994; 298: 629–633.

34. Mesonero J et al. Cac-2 세포에서 과당 수송체 GLUT 5의 당 의존적 발현. Biochem J 1995; 312: 757–762.

35. Walgren RA et al. 인간 장 상피 Caco{1}} 세포를 통한 케르세틴 및 그 글루코시드의 수송. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721-1727.
36. Yoshikawa T et al. 마우스 위장관 전체에 걸친 육탄당 수송체(SGLT1, GLUT1, GLUT2 및 GLUT5)의 비교 발현. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. 인지질 모델 막에 대한 레몬 버베나의 페닐프로파노이드 배당체인 버바스코사이드의 효과. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP et al. 초콜릿 매트릭스 구성이 코코아 플라반{1}} 생체외 생체접근성 및 인간 생체이용률에 미치는 영향. J 농업 식품 화학 2009; 57: 9418-9426.
39. Gao S et al. St. John's wort 제품의 페놀릭 함량은 매우 다양하기 때문에 인간의 장 Caco{1}} 세포 모델에서의 수송에 영향을 미칩니다. 제품 표준화를 위한 제약 및 생물약제학적 근거. J 농업 식품 화학 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et al. 코코아 플라바놀의 흡수 및 약동학에 대한 식품 효과. 생명 과학 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et al. 에탄올과 폴리페놀이 함유되지 않은 와인 매트릭스는 인간 장내 Caco{1}} 세포의 분화를 자극합니다. 프로시아니딘이 풍부한 포도씨 추출물과의 연관성의 영향. J 농업 식품 화학 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P et al. 인간의 경구 약물 흡수와 인간 내부 상피(Caco{1}}) 세포의 겉보기 약물 투과성 계수 간의 상관관계. Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V et al. 쥐에서 케르세틴, 플로레틴 및 이들의 글루코사이드의 장 흡수 비교. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V et al. 쥐에서 플로레틴과 플로리진의 생체이용률. J Nutr 2001b; 131: 3227-3230.