Cistanche Tubulosa의 항피로 및 생식 촉진 효과에 대한 예비 탐색과 신장 양 강장제 및 성기능 강화 활동 및 메커니즘의 스크리닝.

목표:

신장양결핍신장의 양과 기운이 쇠퇴하여 나타나는 감기 증상의 일종이다. 임상증상은 허리와 무릎이 아프고,성욕 상실. 무력등으로 인해 남성의 생식 기능이 저하됩니다.만성 피로 증후군그리고현대 의학의 남성 성기능 장애. 시스탄체스 헤르바하스위해 최초로 선택된 의약품 중 하나가 되었습니다.신장 강화그것 때문에신장양을 보양하는 기능그리고에센스와 혈액에 유익한. 또한 고대 중국의 근력 강화 처방에서 가장 자주 사용되는 전통 한약이기도 합니다. 현대 약리학 연구에 따르면시스탄체 튜불로사(Schenk) R. Wight(C. Tubulosa)는 시상하부-뇌하수체-표적선 축의 기능을 조절하여 체내 관련 호르몬의 방출을 촉진하고, 신체의 분비 항상성을 유지하며, 면역력과 피로를 향상시키고, 이후 면역력을 향상시킬 수 있습니다. 환자의 생식 능력. 따라서 본 실험은 신장양허증과 밀접한 관련이 있는 만성피로증후군과 남성의 성기능 장애로 시작됩니다. 두 종류의 중추 피로 모델과 스포츠 피로 모델, 쥐와 생쥐의 생식 손상 모델 구축을 통해 행동 관찰과 순환계 관련 호르몬 수치 검출을 결합하는 방법을 사용하여 C.올리고당의 약력학적 활성을 스크리닝했습니다. 튜불로사(올리고스), C. 튜불로사의 다당류(글리칸) 및 페닐 에탄올 배당체C. 투불로사(CPhG). 그리고 생체 내 및 시험관 내 실험과 결합하여 잠재적인 활성 메커니즘과 주요 활성 부분의 치료 특성을 초기에 탐색하여 생식을 촉진하고 C.fubulosa 공개 및 후속 약물 개발을 위한 실험적 기초를 제공합니다.

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행동 양식:

1. C. tubeulosa의 항피로 효능 부위 스크리닝

중심 피로 실험: 마우스를 대조군, 수면 부족(SD), 올리고당, 글리칸, CPhGs 그룹으로 무작위로 나누었습니다. 48시간 동안 수면 부족을 사용하여 중추 피로 모델을 준비한 후 8개 팔 미로 및 암흑 회피 실험을 통해 생쥐의 학습 및 기억 능력을 테스트했으며 방사성 면역 측정법을 사용하여 세로토닌 5- 하이드록시트립타민({ {3}}HT), 대뇌 피질 및 시상하부의 노르에피네프린(NE), 에피네프린(E)뿐만 아니라 혈장 부신피질 자극 호르몬(ACTH), 코르티코트로핀 방출 호르몬(CRH), 코르티솔(CORT) 수준. 운동 피로 실험: 마우스를 대조군, 강제 수영(FS), 올리고당, 글리칸 및 CPhGs 그룹으로 무작위로 나누었습니다. 9일간 강제 수영을 통해 운동 피로 모델을 제작한 후, 마우스의 체중 부하 수영 피로 실험을 통해 지구력을 평가하였으며, 간 내 글리코겐, 말론디알데히드(MDA), 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD)를 측정하였다. 근육 글리코겐, 숙신산 탈수소 효소(SDH), 젖산(LD), 혈액 요소 질소(BUN), 젖산 탈수소 효소(LDH), MDA 수준을 동시에 측정했습니다. 위의 방법을 바탕으로 C. tubeulosa의 세 가지 다른 추출 부분의 항피로 효과를 선별했습니다.

2. C. tubeulosa의 생식촉진효과부위 스크리닝

신장양결핍과 관련된 특성의 수집을 용이하게 하기 위해 쥐를 실험대상으로 사용하였다. 쥐를 대조군, 생식 손상 모델(모델), 올리고당, 글리칸 및 CPhGs 그룹으로 무작위로 나누었습니다. 생식 손상의 쥐 모델을 준비하기 위해 14일 동안 하이드로코르티손을 근육 주사하고, 발기 잠복기, 짝짓기 능력 지표(포획/사정 잠복기, 포획/사정 횟수), 장기 습윤 중량 및 정액 혈장 과당 함량을 측정합니다. 혈장 순환 아데노신 모노포스페이트/사이클릭 구아노신 모노포스페이트(cAMP/cGMP) 값, 혈청 성선 자극 호르몬 방출 호르몬(GnRH), 난포 자극 호르몬(FSH), 황체 형성 호르몬(LH), 에스트라디올(E2) 및 테스토스테론(T) 수준. 고환의 병리학적 변화를 관찰하기 위해 HE(Hematoxylin-eosin) 염색을 사용했습니다. 위의 방법을 바탕으로 C. tubeulosa 생식 손상의 세 가지 다른 추출 부분의 영향을 스크리닝했습니다.

3. 생식 촉진을 위한 다양한 용량의 CPhG의 유효성 평가

약물의 양을 절약하고 항체 종류의 포괄성을 고려하기 위해 마우스를 실험 대상으로 선정하였다. 마우스를 대조군, 모델, 양성 약물 테스토스테론 프로피오네이트(TP), 저용량 CPhGs(CPhGs-1), 중간 용량 CPhGs(CPhGs-m), 고용량 CPhGs( CPhGs-h) 그룹. 생식 손상 마우스 모델을 제작하기 위해 하이드로코르티손을 14일 동안 위내 투여하고 발기 잠복기, 교배 능력 지표(포획/사정 잠복기, 포획/사정 횟수), 장기의 습윤 중량, 혈청 호르몬 LH 및 수치를 검출했습니다. .그리고 HE염색을 통해 고환의 병리학적 변화를 관찰하였다. 위의 방법을 바탕으로 고환 형태와 마우스 생식 ​​기능 측면에서 저, 중, 고 수준의 CPhG 효능을 평가했습니다.

4. CPhG의 생체내 및 시험관 내 메커니즘 증가

T 수준 및 재생 촉진웨스턴 블롯(WB) 방법을 사용하여 T 합성에서 스테로이드성 급성 조절 단백질(StAR), 시토크롬 P450 콜레스테롤 측쇄 절단 효소(P450scc/CYP11A1) 및 3p-히드록시스테로이드 탈수소효소(3p-HSD) 발현 수준을 검출했습니다. 고환 조직의 경로. 면역형광 염색(IF)을 정성적 및 정량적 분석에 사용하여 고환에서 3B-HSD의 발현에 대한 CPhGs의 촉진 효과를 추가로 검증했으며, 동시에 시험관 내에서 형질감염된 siRNA로 구축된 CYP11A1 저발현 세포 모델에 다음과 같이 개입했습니다. 다양한 농도: CPhGs 용액(50, 100, 200 ug/mL)을 사용하여 WB로 CYP11A1 수준을 결정합니다. CPhG가 CYP11A1을 직접 조절하여 T 생합성을 촉진하는지 확인합니다.

결과:

1. C. tubeulosa의 항피로 효능 부위 스크리닝

C. tubeulosa의 세 가지 다른 추출 부분은 피로한 쥐의 학습 및 기억 능력에 특정 개선 효과가 있습니다. 그 중 Oligose는 잠복기를 크게 연장하고 어두운 회피 실험에서 오류 수를 줄일 수 있으며, 8개 팔 미로를 완료하는 시간을 단축하고 오류 수를 줄여 5-HT 수준을 만들 수 있습니다. 중추피로모델생쥐의 시상하부와 대뇌피질에서는 , NE, E가 SD군에 비해 낮았고, 혈액순환에서는 CRH, ACTH, CORT 수치가 정상 수준에 가깝다. 동시에 Oligose는 운동 피로 모델 쥐의 수영 피로 시간을 크게 연장할 수 있으며 혈장 대사 산물인 LD, BUN 및 MDA의 축적을 크게 줄일 수 있습니다. 또한 Oligose는 간 글리코겐 및 근육 글리코겐 보유량을 크게 증가시킬 수 있습니다. . 그러나 글리칸만으로는 스포츠 피로 지표 개선에 상당한 효과가 있으며, CPhG는 뚜렷한 효과가 없습니다. 따라서 위의 결과는 올리고스가 생쥐의 중추 피로와 운동 피로 개선에 가장 좋은 효과가 있음을 시사합니다.

2. C. tubeulosa의 생식촉진효과부위 스크리닝

C. tubeulosa의 세 가지 다른 추출 부분은 생식 손상 모델 쥐의 성적 행동과 혈액 생화학적 지수에 특정 영향을 미칩니다. CPhG가 가장 중요한 영향을 미칩니다. 구체적인 성능은 다음과 같습니다. CPhG는 신장양 결핍의 특징 중 하나인plasmcAMP/CGMP 값을 복원하여 발기를 크게 단축하고 포착 대기 시간을 단축하며 포착 횟수를 늘릴 수 있습니다. 고환과 정낭의 습윤 중량을 증가시키고, 정액 혈장 과당과 아연 함량을 증가시킵니다. 이는 혈청 내 T 수준을 크게 증가시키고 FHSGnRH, E2 및 LH 수준의 안정성을 유지하며 고환의 병리학적 형태를 크게 개선할 수 있습니다. 글리칸은 FSH, LH 및 E2 수준만 조절하는 반면 올리고당의 효과는 그다지 명확하지 않습니다. , 위의 실험 결과는 CPhG가 쥐의 생식 능력 향상에 가장 좋은 영향을 미친다는 것을 보여줍니다.

3. 생식 촉진을 위한 다양한 용량의 CPhG의 유효성 평가

CPhG의 두 가지 용량 수준(145, 289mg/kg)은발기 기능에 대한 특정 효과, 짝짓기 능력, 생식 손상 모델 마우스의 장기 습윤 중량, 혈청 호르몬 LH 및 T 수준 및 고환 병리학 적 형태 변화. 저용량 CPhG(72mg/kg)는 하이드로코르티손으로 인한 생식 손상에 대해 뚜렷한 보호 효과가 없습니다. 고용량 CPhG는 모델 쥐의 발기, 포획 및 사정 대기 시간을 효과적으로 단축하고 포획 및 사정 횟수를 증가시켰습니다. 동시에 고용량 CPhG는 고환, 부고환, 정낭 및 음경의 습윤 중량을 증가시키고 T 및 상류 호르몬 LH의 수준을 증가시켜 고환의 병리를 크게 개선할 수 있습니다. 양성 약물 TP는 생식 손상 모델 마우스의 성행위를 크게 향상시킬 수 있지만 마우스의 혈액 내 T 수준을 정상 수준을 훨씬 초과하여 급격히 증가시켰으며 하이드로코르티손으로 인한 LH 수준 감소에는 뚜렷한 개선 효과가 없었습니다. , 고환의 병리학적 손상 상태를 완화시킬 수도 없습니다. 위의 실험 결과는 CPhG가 T 수준을 증가시켜 생쥐의 생식 능력을 향상시킬 수 있으며 정량적으로 의존적임을 시사합니다. 고용량 효과가 가장 좋으며, 주요 증상은 생식 손상을 입은 생쥐에서 순환 T 수준의 적당한 증가이며 그 작용 메커니즘은 TP와 다릅니다.

4. T 수준을 증가시키고 생식을 촉진하는 CPhG의 생체 내 및 시험관 내 메커니즘

생체 내 실험에서 WB 결과는 CPhG가 고환 조직의 합성 경로에서 스테로이드 생성 효소 CYP11A1 및 탈수소효소 3P-HSD의 발현을 크게 증가시킬 수 있음을 보여 주었지만 양성 대조 약물인 수송 단백질 StARA에 대해서는 뚜렷한 효과가 없음을 보여주었습니다. TP는 CYP11A의 발현을 억제했습니다. IF는 3p-HSD 발현의 정성적 및 정량적 검출에 추가로 사용되었습니다. 결과는 WB에 표시된 결과와 일치했습니다. 고용량 CPhG 치료 후 3p-HSD의 발현이 유의하게 증가했습니다. 시험관 내 실험에서 WB 결과는 CPhGs(50ug/mL)가 정상 세포에서 CYPl1A1의 발현을 크게 증가시킬 수 있음을 보여주었습니다. 이에 비해 siRNA를 형질감염시킨 후 CPhG를 투여한 경우 CPhG는 여전히 CYP11Al의 발현을 크게 증가시킬 수 있지만 효과는 다소 감소합니다. 위의 결과는 돼지가 T 합성 경로의 주요 효소 CYP11A1을 직접 조절하여 하류 3-HSD의 발현을 촉진하여 T 수준을 증가시킬 수 있음을 나타냅니다.

결론:

항피로 및 생식 효과에 대한 동물 모델에서 올리고당, 글리칸 및 CPhG의 효능을 선별하고 평가합니다. 결과는 올리고스가 중추 신경전달물질의 방출을 조절하고, 시상하부-뇌하수체-부신 축과 관련된 혈액 호르몬의 안정적인 수준을 유지하며, 간 및 골격근 글리코겐 저장 능력을 향상시키고, 대사산물의 축적을 감소시킬 수 있음을 보여주었습니다. 또한 피로모델 쥐의 학습기억력과 운동능력을 향상시킨다. CPhG는 하이드로코르티손 손상으로부터 고환을 보호하고 고환 및 부속 성 기관의 습윤 중량을 증가시킬 수 있습니다. 시상하부-뇌하수체-생식선 축과 관련된 혈액 호르몬의 안정적인 수준을 유지합니다. T 합성 경로에서 CYP1lAI의 수준을 직접 조절함으로써 콜레스테롤이 미토콘드리아로 유입된 후 T 합성의 효소 반응에서 스테로이드 생성 효소 CYP11A1 및 탈수소효소 3p-HSD의 발현을 크게 증가시킵니다. T의 생합성을 촉진하여 생쥐의 생식능력을 향상시키고, 신장양을 강화시키는 역할을 한다.

키워드:페닐에타노이드 배당체, 다당류, 올리고당,피로 방지, 시스탄체 튜불로사, 신장양결핍, 생식손상

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