브라질의 혈액투석수 미생물학적 품질에 대한 고찰 Ⅲ

브라질의 투석수에 관한 현행법

에 사용된 기준은투석 평가물은 치료를 받는 환자가 노출될 수 있는 잠재적 위험에 대한 관할 당국의 인식을 통해 발생했습니다(Faria, 2011).

CISTANCHE가 작동하는 데 얼마나 걸리나요?

대학 이사회(RDC) 결의안 제33/2008호는 브라질 보건 규제 기관의 혈액투석용 수처리 및 분배 시스템의 계획, 프로그래밍, 정교화, 평가 및 승인에 대한 기술 규정을 제공합니다(Anvisa, 2008) .

RDC n° 11/2014는 다음에 대한 모범 사례 요구 사항을 제공합니다.투석 서비스, 이는 교육 및 연구 활동 수행을 포함하여 공공, 민간, 자선, 민간, 군대 등 모든 투석 서비스에 적용됩니다. 또한 미생물학적 분석을 위한 샘플이 유통 루프의 반환 지점과 처리실의 지점 중 한 곳에서 최소한 한 달에 한 번씩 수집되는지 확인합니다. 또한, 발열성 발현, 균혈증 또는 패혈증 의심이 있을 때마다 수질 미생물학적 수질을 검증해야 한다고 결정합니다.투석중인 환자. 이 RDC 제11/2014호는 투석에 대한 수질 기준을 확립하며, 생물학적 및 미생물학적 속성은 표 1에 강조되어 있습니다(Anvisa, 2014).

표 I - 투석수의 생물학적, 미생물학적 품질 기준

국제표준화기구(ISO)는 표준 번호 13959:2014에서 다음을 제공합니다.혈액 투석수질 및 관련 치료법은 현지 법률에 따라 총 미생물 수를 100 CFU/mL 이하로 품질 표준으로 지정합니다. 또한 현지 법률에 따라 엔도톡신 수준을 0.25UE/mL 이하 또는 동등하게 미미한 수준으로 지정했습니다(국제 표준화 기구, 2014).

기존 및 대체 미생물학적 방법

종속 영양 박테리아 열거

이는 1610년 중반에 미생물학적 테스트의 초기 표시로 간주될 수 있으며, 1665년에는 갈릴레오 갈릴레이(Galileo Galilei)와 반 레이우엔훅(Van Leeuwenhoek)이 각각 현미경을 발명했습니다. 비록 Leeuwenhoek이 박테리아와 원생동물을 관찰한 최초의 사람은 아니었을지 모르지만, 관찰 내용을 그림과 설명과 함께 보고한 최초의 사람이었습니다. 이 중 그는 1675년에 물 속에 존재하는 생물을 묘사했다(Dias, 2018; Pelczar, Reid, Chan, 1980).

그러나 독일 과학자들은 삶은 감자에서 군집의 성장을 관찰했는데, 이는 미생물 재배 관행과 배양 배지 개발의 특징입니다. 고체배지에서 미생물 배양을 시작한 사람은 바로 코흐(Koch)였습니다. 그는 상온에서 응고될 수 있는 조류에서 추출한 물질을 한천이라고 명명했습니다. Richard Petri는 배양 배지를 담기 위한 유리판을 개발했습니다(Jay, 2001; Pelczar, Reid, Chan, 1996).

Leeuwenhoek, Louis Pasteur, Robert Koch, Theobald Smith 및 몇몇 다른 과학자들이 물 속에서 생명체를 발견한 지 200년이 지난 후 미세한 존재를 질병과 연관시켰습니다. 1878년 Joseph Lister는 액체 배지에서 연속 희석을 사용하여 최초의 순수 박테리아 배양물을 얻었습니다(Pelczar, Reid, Chan, 1980).

19세기 말에는 음용수의 수질을 분석하기 위한 재배기술이 채택되었습니다. 대장균 및 기타 대장균군 분석의 경우 MPN(최확수)을 통한 배양액이 주요 방법이 되었으며, 전체 수에 대한 Koch의 한천 배지 또는 고체 배지는 모두 몇 가지 수정을 거쳤습니다. 1950년에 박테리아 계수를 위한 막 필터의 사용이 도입되었습니다(Pelczar, Reid, Chan, 1996; Sartory, Watkins, 1999).

MNP는 간단하지만 더 긴 분석 시간(최대 5일)이 필요한 반면, 막 여과에서는 잠복기 3-5일 후에 추정 결과를 얻을 수 있습니다(Anvisa, 2019). 고체 배지의 경우 옵션 중 하나는 플라크 계수 한천(PCA), 영양분이 부족하고 물에서 이미 스트레스를 받는 박테리아 복구에 적합하지 않은 배지로 구성됩니다. 예를 들어, 영양학적으로 약한 배양 배지도 사용될 수 있는데, 그 이유는 더 많은 수의 박테리아를 회수할 수 있지만 생존 가능한 전체 개체군을 회수할 수는 없기 때문입니다(Sartory, Watkins, 1999). Reasoner의 2A Agar(R2A)는 영양학적으로 약한 배양 배지의 예이며 수질 미생물 분석에 가장 권장됩니다(USP, 2017).

현재 MNP 공정에 의한 플레이트법, 막여과, 다중튜브 등 기존의 미생물학적 방법이 많이 존재한다(Anvisa, 2019). 간단하고 효율적이며 경제적이지만 배양 배지의 낮은 선택성, 생물학적 반응의 가변성, 지연된 미생물 검출로 인해 환자의 부상을 줄이기 위한 예방 조치를 결정하는 데 시간이 걸리는 등 몇 가지 제한 사항이 있습니다(Anvisa , 2019).

이러한 한계를 최소화하기 위해 대체 미생물학적 방법이 개발되어 테스트에 더 높은 수준의 품질, 더 높은 민감도, 더 빠른 결과를 제공하여 시정 조치를 조기에 취할 수 있습니다(Anvisa, 2019)

세균 내독소

Theodor Billroth는 1865년에 열을 유발하는 물질을 지칭하기 위해 발열원이라는 용어를 사용했습니다(Kikkert, Groot, Aarden, 2008; Medical Staff Conference, 1978). Richard Pfeiffer의 1892년 콜레라에 대한 연구는 Robert Koch의 격려를 받아 그의 발견에 대한 내독소의 아버지로 그를 신성시했습니다(Rietschel, Cavaillon, 2003).

1942년에 생체 내 방법에 의한 발열원 시험이 미국 약전 12판에 추가되었습니다(Mc Closky et al., 1943). 이 테스트는 포함된 이후 비경구 약물의 발열원 오염을 평가하는 데 널리 사용되었습니다(Kikkert, Groot, Aarden, 2008). 그러나 이 시험은 1976년에야 브라질 약전에 포함되었습니다(Navega et al., 2015).

시험은 시험용액을 정맥주사한 후 토끼의 발열 반응 측정을 기반으로 하며, 결과 해석을 통해 생물학적 방제 특성을 파악한다(Anvisa, 2019). 그러나 동물 관리, 생물학적 다양성, 윤리적 문제 등 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 이러한 측면은 연구자들이 발열원의 생체 내 테스트를 위한 대체 방법을 개발하도록 장려했습니다(Kikkert, Groot, Aarden, 2008). Kikkert, Groot 및 Aarden(2008)이 인용한 Levin 및 Bang(1964)은 연구에서 Escherichia coli 내독소가 게 Limulus polyphemus의 혈림프에서 응고를 일으킨다는 사실을 관찰했습니다.

LAL(Limulus Amebocyte Lysate) 테스트는 1980년 미국 약전에 추가된 반면, 브라질 약전에는 1996년에만 포함되었습니다(Farmacopéia, 1996; USP, 1980). LAL 테스트에는 두 가지 유형이 있습니다. 첫 번째는 겔 형성을 기반으로 하는 반정량적 응고 테스트입니다. 두 번째는 광도계, 정량적 시험으로 발색에 기초한 발색법과 탁도 발현에 기초한 탁도법으로 나눌 수 있다(Anvisa, 2019).

그러나 LAL 테스트에는 분석 기술의 가변성, 사용된 기기에 내재된 오류 등 몇 가지 제한 사항이 있어 분석 품질이 저하되므로 이러한 제한 사항을 제거하는 대체 방법이 바람직합니다(Anvisa, 2019; Charles River, 2017) 렘그루버 외, 2011)

대체 미생물학적 방법

기존 방법의 한계를 극복하려는 경우 대체 미생물학적 방법이 바람직합니다. 다양한 개요서에서 대체 방법은 정성적, 정량적 또는 식별로 분류됩니다(Anvisa, 2019; PDA, 2013; USP, 2017).

브라질 약전은 생존 기반, 성장 기반, 세포 구성 요소 기반 등 주요 방법을 강조합니다(Anvisa, 2019). 대체 미생물학적 방법의 주요 유형과 해당 기술은 표 II에 설명되어 있습니다.

표 II - 대체 미생물학적 방법의 주요 유형 및 해당 기술

실시간 시정 조치 가능성뿐만 아니라 환자 안전 향상을 제공하기 위해 신속한 대체 방법을 사용하는 것이 중요함에도 불구하고 투석 처리수 분석 분야에서 적용 가능성을 입증하기 위한 연구는 거의 진행되지 않습니다(Anvisa, 2019) . Rieplet al. (2011)은 표면 형광 현미경으로 밝혀진 고체상 세포 계측법의 적용 가능성을 평가하고 기존 방법과 대체 방법 사이의 높은 상관 관계를 관찰했습니다.

투석수 미생물학적 분석에 고체상 세포계측법을 적용하는 것은 신뢰성이 있을 뿐만 아니라 분석 시간이 약 3시간에 불과해 빠른 방법이기 때문에 유망하며 수질뿐만 아니라 투석 과정도 모니터링하는 데 사용하는 것이 좋습니다. 유동적이다(Canaud, 2011; Riepl et al., 2011).

세포 계측법은 빠른 방법일 뿐만 아니라 생존 가능한 비배양 미생물을 검출할 수도 있습니다. 이러한 미생물은 실험실 실험과 실제 물 미생물군 사이의 결과 차이를 담당합니다. 그들은 활발한 대사 메커니즘을 가지고 있고 살아 남아 있음에도 불구하고 분열하고 군집을 형성할 수 없습니다. 많은 박테리아, 특히 그람 음성 박테리아가 이러한 능력을 가지고 있습니다. 마이코박테리움 종은 잠재적인 VNC로 강조될 수 있습니다(Anvisa, 2019; Joux, Lebaron, 2000; Díaz et al., 2010; Sandle, 2015).

16S rDNA PCR 분석과 같은 세포 성분 기반 기술은 배양과 무관하여 배양 불가능한 생존 가능한 미생물을 검출할 수 있기 때문에 유망한 기술이기도 합니다(Anvisa, 2019; Gomila et al., 2010; Gomila, Ramirez, Lalucat, 2007 ).